實驗四 酶的特性實驗

1、說明：本實驗由四個小實驗組成，其中第一個實驗（酶的專一性）必做，其他三個小實驗選做（至少做一個）寫實驗報告時， 可以只寫需要做的實驗內容 ！實驗四 酶的特性實驗、實驗目的酶是生物催化劑， 生物體內化學反應基本上都是在酶的催化下進行的。 通過本實驗了解 酶催化的特異性、溫度對酶活力的影響、 PH 對酶活力的影響、激活劑和抑制劑對酶活力的 影響，對于進一步掌握代謝反應及其調控機理具有十分重要的意義。PH 對酶活力的影響、激活劑和抑制來說明酶的專一性。 淀粉和蔗糖無還原但不能催化蔗糖的水解。用班氏試二、實驗內容 本實驗由酶的專一性實驗、溫度對酶活力的影響、 劑對酶活力的影響 4 個小實驗組成。（一）

2、酶的專一性1、實驗原理 本實驗以唾液淀粉酶對淀粉和蔗糖的作用為例， 性， 唾液淀粉酶水解淀粉生成有還原性二糖的麥芽糖， 劑檢查糖的還原性。 班氏試劑為堿性硫酸銅， 能氧化具還原性的糖， 生成磚紅色沉淀氧化亞 銅。2、材料、儀器與試劑（1）材料：新鮮配制的唾液及其稀釋液（2）儀器：恒溫水??；沸水??；試管及試管架；（3）試劑：2% 蔗糖溶液； 溶于 0.3% NaCl 的 0.5%淀粉溶液； 班氏試劑。3、實驗操作（1）稀釋唾液的制備唾液的獲取用一次性杯取一定量的飲用水， 漱口以清潔口腔， 然后在嘴中含 10-20ml 飲用水， 輕漱 2min 左右時間，即可獲得唾液的原液，內含唾液淀粉酶。不同稀

3、釋度唾液的制備 （用大試管）本實驗需制備 1：1、1：5、1：20、1：50、1：200 等五個不同濃度的稀釋唾液。舉例說明：1:5指的是稀釋了 5倍的唾液，制備方法為 1份原液+4份蒸餾水。1: 20指的是稀釋了 20倍的唾液，制備方法為 1份1： 5的稀釋液+3分蒸餾水。（2 ）唾液淀粉酶最佳稀釋度的確定（嚴格按表1添加順序做實驗，用小試管做實驗）表1唾液淀粉酶稀釋度的確定AvV 口呂號1 (1: 1)2 (1： 5)3 (1: 20)4 (1: 50)5 (1: 200)0.5%淀粉溶液（滴）44444稀釋唾液（ml）1111137 C恒溫水浴中保溫 5分鐘班氏試劑（ml）11111沸水

4、浴23分鐘實驗結果（2 ）淀粉酶的專一性表2淀粉酶專一性實驗AvV 口呂號1234560.5%淀粉溶液（滴）4一4一4一2%蔗糖溶液（滴）一4一4一4最佳稀釋度唾液（ml）一一11煮沸過的最佳稀釋度唾液（ml）一一一一11蒸餾水（ml）11一一一一37 C恒溫水浴中保溫 5分鐘班氏試劑（ml）111111沸水浴23分鐘實驗結果（二）溫度對酶活力的影響1、實驗原理酶的催化作用受溫度的影響。 在最適溫度下，酶的反應速度最高。 淀粉和可溶性淀粉遇 碘呈藍色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈藍色、紫色、暗褐色或紅色。最簡單的糊精遇碘 不呈顏色，麥芽糖遇碘也不呈色， 在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可

5、由水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色來判斷。2、材料、儀器與試劑（1）材料：新鮮配制的唾液及其稀釋液（2 ）儀器：試管及試管架；恒溫水?。槐?；沸水??；（3）試劑：溶于0.3% NaCI的0.5%淀粉溶液；KI - I2碘溶液;3、實驗操作取4支干燥的試管，編號后按下表加入試劑：表3溫度對酶活力影響實驗加樣順序AvV 口呂號1230.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.5最佳稀釋度唾液（ml）11煮沸過的稀釋唾液（ml）1實驗結果搖勻后，將1、3號試管放入37C恒溫水浴中，2號試管放入冰水中。10分鐘后1、2、 3管均取出（將2號內液體分兩半），用KI 12溶液來檢驗1、2、3號管內淀粉被唾液淀粉 酶水

6、解的程度。記錄并解釋結果。將2號管剩下的一半溶液放入37C水浴中繼續(xù)保溫10分鐘后，再用KI 12液實驗，記錄實驗結果。（三）PH對酶活力的影響1、實驗原理酶的活力受環(huán)境 PH值的影響極為顯著。 不同酶的最適 PH不同。本實驗觀察 PH對唾 液淀粉酶活性的影響。唾液淀粉酶的最適PH約為6.8。2、材料、儀器與試劑（1 ）材料：新配制的 溶于0.3%NaCI的0.5%淀粉溶液（2 ）儀器：試管及試管架；吸管；滴管；恒溫水浴（3）試劑：PH為5.0、5.8、6.8、8.0的緩沖溶液；KI I2碘溶液；PH試紙3、實驗操作表4 PH對酶活性的影響實驗PH55. 86. 88.0緩沖液（ml）3333

7、0.5%淀粉溶液（ml）1111向第一個試管加入稀釋唾液后，置于37C的恒溫水浴；等待 1min后向第二個試管加入稀釋唾液，置于37C的恒溫水??；依次類推！最佳稀釋度的唾液（ml）1111檢查淀粉水解程度待向第四只試管加入唾液 2min后，每隔1分鐘從第3管中取出1滴反應液于白瓷板上，力口碘液檢查反應進行情況，直至反應液變?yōu)榈攸S色（顏色有點淡即可）。即可從第一只試管依次添加碘液，時間間隔也為1min。碘液（滴）12121212現(xiàn)象為了更好的理解表格內容，下面對實驗過程進行說明:各取緩沖液3ml，分別注入4支帶有號碼的試管，隨后于各個試管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀釋度的唾液 1ml。

8、向各試管中加入稀釋唾液的時間間隔為 1分鐘。將各試管 中物質混勻，并依次置于37C恒溫水浴中保溫。待向第4管加入唾液2ml后，每隔1分鐘由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴KI - 12溶液。添加KI - I2溶液，檢驗淀粉的水解程度。待混合變?yōu)榈攸S色（顏色有點淡即可） 后，向所有試管依次添加 1-2滴KI 12溶液。添加滴 KI - 12溶液的時間間 隔，從第1管起，亦均為1分鐘。觀察各試管中物質呈現(xiàn)的顏色，分析pH對唾液淀粉酶活性的影響。（四）唾液淀粉酶的活化及抑制1、實驗原理酶的活性受活化劑或抑制劑的影響，氯離子為唾液淀粉酶的活化劑，銅離子為其抑制劑。2、材料、儀器與試劑（1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀釋度的唾液（2 ）儀器：試管及試管架；恒溫水?。?）試劑：1% NaCI溶液；1% CuSO4溶液；KI - I2碘溶液；1%Na2SO4溶液3、 實驗操作（注意本實驗的淀粉溶液為無NaCI的淀粉溶液）表4唾液淀粉酶活化及抑制實驗AvV 口呂號12340.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.51.5最佳稀釋度唾液（ml）0.50.50.50.51% NaCI 溶液（ml）0.5一一一1% CuS04溶液（ml）一0.5一一1% Na2SO4溶液（ml）一一0.5一蒸餾水（ml）一一一0.537 C恒溫水浴中保溫 10分鐘KI I2