土壤外丹參部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量檢測(cè)

1、土壤外丹參部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量檢測(cè)關(guān)鍵詞：丹參; 丹酚酸B; 迷迭香酸; HPLC;Abstract：To develop a HPLC method for investigate the determination of the content of salvianolic acid B and rosmarinic acid in the aerial part of Salvia miltiorrhiza. Gradient elution in mobile phase methanol (A) -0.8% aqueous glacial acetic acid (B) ,

2、 flow rate 1 m L/min, column temperature 35 , detection wavelength 250 nm. The results showed that a good linearIity was obtained over 14.0700.0 μg/m L (r=1.000 0) for salvianolic acid B, 12600 μg/m L (r=0.999 6) for rosmarinic acid, respectively. The average recoveries of salvianolic acid B a

3、nd rosmarinic acid were 99.16% (RSD=0.735%) and 101.11% (RSD=2.11%) , respectively. The HPLC method was simple and easy to perform, and the analytical effect is good. The content of two water-soluble components, salvianolic acid B and rosmarinic acid, can be measured simultaneously.Keyword：Salvia mi

4、ltiorrhiza; salvianolic acid B; rosmarinic acid; HPLC;丹參 (Salvia miltiorrhiza Bge) 為唇形科多年生草本植物, 主產(chǎn)于陜西、山東、山西、河南、河北等地1, 以根入藥, 具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩等功效2, 是心腦血管病及多種炎癥的常用藥材。由于丹參地上部分約占全草的2/3, 而且每年均可采收, 有更豐富的資源, 但丹參地上部分大多被遺棄, 未得到有效利用, 造成藥用資源的浪費(fèi)和生態(tài)環(huán)境的污染3。研究表明4, 丹參地上部分含有豐富的丹酚酸類5、黃酮類6、三萜類等化學(xué)成分, 具有較強(qiáng)的抗氧化7、降血糖等活性, 并

5、能有效改善腦梗塞、腦缺血等癥狀8, 其中丹酚酸B和迷迭香酸等水溶性成分9在臨床上廣泛用于治療心血管系統(tǒng)疾病10。為了開發(fā)丹參地上部分藥用資源利用, 采用HPLC法對(duì)丹參地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量進(jìn)行了分析評(píng)價(jià)。1 、材料與方法1.1、 儀器與試劑Agilent 1200型高效液相色譜儀, 美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品;KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器, 昆山超聲儀器限公司產(chǎn)品;Sarturius BT 124S/BT 25S型電子天平。丹參地上部分由密山市康華中藥材種植專業(yè)合作社提供的2017年8月8日采集品;甲醇及其他試劑均為色譜分析純;水為娃哈哈純凈水;對(duì)照品丹酚酸B (98.51%, M

6、UTS-18040503) , 成都曼思特生物科技有限公司提供;迷迭香酸 (97%, J1613019) , 阿拉丁試劑有限公司提供。1.2 、試驗(yàn)方法1.2.1、 色譜條件色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18型 (4.6 mm×250 mm, 5 m) ;流動(dòng)相:甲醇 (A) -0.8%冰乙酸水溶液 (B) 梯度洗脫 (03 min, 30%A→31%A;353 min, 31%A→35%A, 5365 min, 35%A→40%A, V/V) ;流速1 m L/min, 進(jìn)樣量5μL, 柱溫35, 檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm。1.

7、2.2、 丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品溶液配制精密稱取丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品7.0 mg和6.0 mg, 分別置于10 m L容量瓶中, 加適量甲醇溶解并稀釋至刻度, 制得質(zhì)量濃度分別為0.70 mg/m L和0.60 mg/m L的對(duì)照品溶液。1.2.3、 供試品溶液配制取干燥至恒質(zhì)量的丹參地上部分, 精密稱取粉碎后的丹參地上部分粉末8.42 g, 置于帶有回流冷凝器的250 m L圓底燒瓶中, 每次加入80.0 m L甲醇, 加熱回流1.5 h, 回流提取3次, 過濾后合并濾液濃縮至恒質(zhì)量, 得丹參地上部分甲醇提取物。精密稱取上述醇提物, 配制成質(zhì)量濃度為5 mg/m L的供試品溶液, 用微

8、孔濾膜 (0.22μm) 濾過, 備用。1.2.4、 色譜分析精密吸取供試品溶液、丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品溶液各5μL, 在1.2.1;項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)行分析, 得供試品溶液色譜圖和丹酚酸B (DB) 和迷迭香酸 (MD) 的混合對(duì)照品溶液色譜圖。供試品溶液色譜圖見圖1, 迷迭香酸 (MD) 的混合對(duì)照品溶液色譜圖見圖2。圖1 供試品溶液色譜圖2 、結(jié)果與分析2.1、 線性關(guān)系及檢測(cè)限和定量限精密移取丹酚酸B (0.70 mg/m L) 和迷迭香酸 (0.60 mg/m L) 貯備液適量, 分別用甲醇稀釋至質(zhì)量濃度為14.0, 35.0, 70.0, 140.0, 700.0&mu

9、;g/m L和12.0, 30.0, 60.0, 300.0, 600.0μg/m L的對(duì)照品溶液, 精密吸取上述溶液各5μL, 進(jìn)行高效液相色譜分析, 連續(xù)進(jìn)樣3次, 記錄峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo), 所對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo), 分別對(duì)丹酚酸B和迷迭香酸的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸分析, 得回歸方程分別為Y=1 177.1X+26.851, R2=1.0;Y=1 468.9X+112.21, R2=0.999 3。表明丹酚酸B的質(zhì)量濃度14.0700μg/m L, 迷迭香酸的質(zhì)量濃度12600μg/m L時(shí)有良好的線性關(guān)系。圖2 迷迭香酸 (MD) 的混合對(duì)照品溶液色譜圖經(jīng)H

10、PLC測(cè)定, 以信噪比 (S/N) 為3和10所對(duì)應(yīng)樣品中該物質(zhì)的質(zhì)量濃度分別計(jì)算檢限測(cè) (LOD) 和定量限 (LOQ) , 丹酚酸B和迷迭香酸的檢測(cè)限檢出限LOD (S/N=3) 分別為0.2, 0.3μg/m L;定量限LOQ (S/N=10) 分別為1.0, 1.0μg/m L。2.2 、精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液丹酚酸B和迷迭香酸5μL, 在1.2.1;項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)行分析, 連續(xù)進(jìn)樣3次, 記錄色譜峰面積。分析計(jì)算得丹酚酸B和迷迭香酸各峰面積的RSD分別為3.18%和1.99%, 精密度良好。2.3 、穩(wěn)定性試驗(yàn)分別精密吸取丹酚酸B和迷迭香酸對(duì)照品溶液5&mu

11、;L, 依次在0, 4, 8, 12, 16, 18, 24 h進(jìn)樣分析, 記錄各色譜峰面積, 計(jì)算得其RSD分別為3.42%和3.85%, 表明2種對(duì)照品在24 h內(nèi)都穩(wěn)定。2.4、 樣品含量測(cè)定精密吸取供試品溶液5μL, 在1.2.1;項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)行分析, 記錄色譜峰面積, 用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算丹參地上部分丹酚酸B和迷迭香酸含量分別為5.24%和0.59%。2.5 、重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品, 精密吸取供試品溶液5μL, 連續(xù)進(jìn)樣6次, 記錄各色譜峰面積, 測(cè)定丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別為5.23%和0.59%, 其RSD分別為1.32%和1.14%。表明該方法重復(fù)性好。2.6

12、 、加樣回收率試驗(yàn)精密稱取同一批已知對(duì)照樣品含量80%, 100%, 120%的丹參地上部分, 共9份, 每3份1組, 分別加入對(duì)照品丹酚酸B和迷迭香酸 (質(zhì)量濃度分別為0.12, 0.03 mg/m L) 1 m L進(jìn)樣分析, 記錄色譜峰面積。結(jié)果表明, 丹酚酸B和迷迭香酸的平均回收率分別為99.16%和101.11%, 其RSD分別為0.735%和2.11%。3 、結(jié)論丹參作為常用傳統(tǒng)中藥, 市場(chǎng)上已開發(fā)出多種制劑, 但均以根入藥, 資源更為豐富的地上部分并未得到有效利用, 隨著臨床應(yīng)用范圍的擴(kuò)大, 亟需尋找新藥源。據(jù)文獻(xiàn)11,12可知, 丹參根部中丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別在1.81%

13、11.55%和0.11%0.74%, 試驗(yàn)以丹參地上部分為研究對(duì)象, 經(jīng)HPLC法對(duì)由密山市康華中藥材種植專業(yè)合作社提供的丹參地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量進(jìn)行分析, 得丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別為5.24%和0.59%, 與根部含量相當(dāng), 表明丹參地上部分作為獲取丹酚酸類化學(xué)成分的新資源具有很好的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)1李生萍.丹參中有效成分的分離、提取、提純J.中國(guó)醫(yī)藥指南, 2013, 11 (4) :78-79.2肖禾, 宋民憲, 賴娟.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中丹參的質(zhì)量控制情況J.中國(guó)藥事, 2006, 20 (1) :57-59.3段金廒, 宿樹蘭, 郭盛, 等.中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程廢棄物的

14、產(chǎn)生及其利用策略與資源化模式J.中草藥, 2018, 20 (3) :298-300.4 孫國(guó)平, 徐亞莉, 司亞楠.丹參葉的研究進(jìn)展J.醫(yī)藥前沿, 2012 (2) :128-129.5沙秀秀, 宿樹蘭, 沈飛, 等.不同生長(zhǎng)期丹參莖葉及花序中丹酚酸類化學(xué)成分的分布與積累動(dòng)態(tài)分析評(píng)價(jià)J.中草藥, 2015, 46 (2) :3 414-3 419.6李欣, 薛治浦, 朱文學(xué).丹參不同部位總酚酸和總黃酮含量分析及其抗氧化活性研究J.食品科學(xué), 2011, 32 (3) :108-111.7 Matkowski A, Sylwia Zielinska, Jan Oszmianski, et al

15、.Antioxidant activity of extracts from leaves and roots of Salvia miltiorrhiza Bunge, S. przewalskii Maxim and S. verticillata L.J. Bioresour Technol, 2008 (16) :7 892-7 896.8張寒, 賈敏, 楊穎.丹參地上部分抗腦缺血活性部位篩選J.中藥藥理與臨床, 2013, 29 (3) :133-136.9刁保忠, 靳維榮, 張文周.正交試驗(yàn)優(yōu)選丹參莖葉中丹參素和丹酚酸B的提取工藝研究J.中華中醫(yī)藥雜志, 2013, 28 0:2