知母總黃酮提取論文

1、知母總黃酮提取論文1儀器與試藥 1.1儀器精密天平BS224S（德國塞多利斯）；UV-4501S紫外分光光度計(jì)(天津市港東科技發(fā)展有限公司)；超聲清洗機(jī)SK8210LHC（上海科導(dǎo)超聲有限公司）。 1.2試藥知母（產(chǎn)地河北，河南，安徽）；芒果苷為對照品（中國生物制品檢驗(yàn)所，批號111607200301）；乙醇、甲醇均為分析純。 2方法與結(jié)果 2.1實(shí)驗(yàn)條件與方法的建立 2.1.1對照品的選擇很多文獻(xiàn)報(bào)道中藥制劑中總黃酮的含量測定多數(shù)采用蘆丁作為對照品。采用蘆丁作為對照品，解決了部分中藥或中藥制劑中本身缺少黃酮對照品的問題，在沒有合適的對照品情況下，也不失一種測量總黃酮的可行的方法。芒果苷是知母

2、中含量較高的黃酮類化合物，是其清熱作用的有效成分，同時還具有抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫抑制、利尿、預(yù)防肥胖等作用。因此，用知母中含量較高且具有抗病毒作用的專屬性活性成分作為對照品來測定知母總黃酮的含量更加有意義。 2.1.2最大吸收波長的選擇NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測定總黃酮的原理6，是黃酮母核所含有的游離羥基在NaNO2-Al（NO3）3存在的條件下與金屬鋁離子形成絡(luò)合物而顯色，在波長500nm左右有最大吸收。本實(shí)驗(yàn)中所用的對照品是知母中主要黃酮類成分芒果苷對知母總黃酮進(jìn)行含量測定。因此將芒果苷溶液及知母總黃酮提取液顯色后在200400nm處用可見-紫外分光光度計(jì)掃描，知

3、母總黃酮和芒果苷均在258nm有最大吸收波長，結(jié)果見圖1。故選擇含量測定的檢測波長為258nm。 知母總黃酮紫外吸收波譜圖芒果苷的紫外吸收波譜圖 圖1知母總黃酮、芒果苷的最大紫外吸收波譜圖 2.2對照品溶液的制備取芒果苷適量，于60減壓干燥至恒重，精密稱定，加70乙醇溶解，制成每毫升含32g溶液，即得。 2.3線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)精密吸取混合對照品溶液貯備液1，2，5，10，15，25ml，分別置于50ml量瓶中，加70乙醇稀釋到刻度，搖勻，即得。分別取上述溶液，進(jìn)行測定，以溶液濃度與吸收度比值進(jìn)行回歸，分別得到回歸方程為：芒果苷：Y=0.2309X-0.0031（r=0.9993），表明芒果苷在0.

4、263.57g/ml，范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，芒果苷線性關(guān)系見圖2。 圖2芒果苷線性關(guān)系圖 2.4提取方法的選擇 2.4.1回流提取法取知母粗粉1g，精密稱定，置100ml圓底燒瓶中，加甲醇80ml，水浴回流提取3h，濾過，用少量甲醇洗滌藥渣及容器，濾液置于同一100ml量瓶中，放冷，用甲醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，取溶液5ml，置于50ml量瓶中，加70乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。 2.4.2超聲提取法取知母粗粉1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)液5ml，置于50ml量瓶中，加70乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按“2.

5、3項(xiàng)下分別取上述溶液”起，依法操作，測定各供試品溶液的吸收度。結(jié)果見表1。表1不同提取方法對知母總黃酮含量的影響 表1表明以上兩種提取方法差別不大，回流提取法方法繁瑣，耗時，能耗大；而且知母含有較多的黏液質(zhì)，提取液較難過濾。而超聲提取法的方法更方便、簡單、快速，易于過濾。因此,選擇超聲提取法提取知母總黃酮。 2.5提取溶劑的考察按照上述優(yōu)選的方法，分別以甲醇和70乙醇作為提取溶劑，提取知母總黃酮，并進(jìn)行含量測定，（見表2）。表2表明甲醇、70乙醇提取知母總黃酮差別不大，由于甲醇有毒，對環(huán)境有污染，選擇70乙醇作為知母總黃酮提取溶劑。表2不同溶劑對知母總黃酮含量的影響 2.6提取時間的考察分別取

6、知母粗粉1g，精密稱定，置于100ml量瓶中，加70乙醇，稀釋到刻度，分別超聲20，30，40min，分別按“2.4.2項(xiàng)下放冷處理”起，依法操作,分別制備供試品溶液，并分別測定（見表3）。表3表明超聲30min，知母總黃酮含量不再提高，因此，選擇超聲提取時間為30min。 表3超聲時間對知母總黃酮的影響 時間t/min吸收度A202.0076302.1388402.1387 n3 2.7供試品溶液的制備按照上述優(yōu)選的工藝參數(shù)制備供試品溶液，取知母粗粉1g，精密稱定，置100ml圓底燒瓶中，加70乙醇至刻度，超聲提取30min，放冷，用70乙醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)液5ml，置于50ml

7、量瓶中，加70乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。 2.8精密度實(shí)驗(yàn)取“2.7”項(xiàng)下溶液，在258nm波長下，連續(xù)測定5次，其吸收度的RSD=0.09，表明儀器精密度良好。 2.9樣品溶液穩(wěn)定性考查取“2.7”項(xiàng)下溶液，每隔2h測定1次，測定5次，其吸收度的RSD=0.09，表明溶液穩(wěn)定性良好。 2.10重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批的知母粉末5份，分別按“2.7”項(xiàng)下制備樣品溶液，并按樣品測定方法，測定5次，芒果苷含量9.57mg/g，RSD=1.72%，表明樣品重現(xiàn)性良好。 2.11加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的供試品5份，分別精密加芒果苷一定量，依法制備供試品溶液，照含量測定法測定，加樣回收率為101.0

8、1，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.27%。結(jié)果見表4。表4芒果苷回收率實(shí)驗(yàn) 2.12樣品的測定按上述方法，對3個不同產(chǎn)地知母藥材進(jìn)行了總黃酮的含量測定。結(jié)果見表5。表5不同知母總黃酮的含量測定 從表2可以看出，不同的產(chǎn)地知母總黃酮含量有較大的差異，其功效也必然有一定的差別，河北知母是道地藥材，其功效差別是由于內(nèi)在的化學(xué)成分引起的，通過該實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了河北知母的有效成分含量較高。 3討論 在研究知母總黃酮含量測定方法時，最初選用蘆丁為對照品，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不好，而且未見文獻(xiàn)報(bào)道知母中含有蘆丁。由于知母中黃酮類成分較多，同時芒果苷是知母中含量較高的一種黃酮類化合物，且芒果苷紫外吸收波譜圖和知母總黃酮的紫外吸收波譜圖

9、呈現(xiàn)一致性，因此用其作為知母藥材中總黃酮含量測定的對照品更有意義，同時也更能真實(shí)反應(yīng)總黃酮的含量。在知母總黃酮和芒果苷最大紫外吸收波譜圖，二者最大吸收波長分別在240，258nm呈一致性。原則上，二者均可作為知母總黃酮最大吸收波長，但是由于波長越長，其他雜質(zhì)干擾就越小，故本次最大吸收波長選定為258nm。在知母總黃酮的提取方法上，還考察了以甲醇為溶劑，索氏提取知母總黃酮，結(jié)果其提取效果和超聲提取相差不大，但是其耗時、方法也很繁瑣。因此，所選定的知母總黃酮的提取方法具有簡便、快速、準(zhǔn)確，可以作為知母總黃酮的提取方法及含量測定方法。 【參考文獻(xiàn)】 1中國藥典委員會.中國藥典，部S.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005：148. 2廖洪利,王偉新,趙福勝,等.知母化學(xué)成分研究進(jìn)展J.藥學(xué)實(shí)踐雜志,2005,23(1):12. 3陳萬生,李力,喬傳卓,等.不同產(chǎn)地知母中芒果甙、新芒果甙的含量測定J.中國中藥雜志,2000,25(2):87. 4倪梁紅,秦民堅(jiān).知母資源化學(xué)及藥理研究進(jìn)展J.中國野生植物資源,2005,24(4):16. 5徐冬英,謝崇源,韋袞政.知母的研究進(jìn)展J廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1999,16(4):93. 6郭亞健,范莉,王曉強(qiáng),等.關(guān)于NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測定總黃酮方法的探討J.藥物分析雜志,2002,22(2):97. 【摘要】目的建立知