HIV實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP文件)

1、文件名稱 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（sop）文件類型sop生效日期（年/月/日）修改日期（年/月/日）文件號頁碼2012-02-102012-02-10hiv002 1目 錄lab/sop/01進(jìn)口680型酶標(biāo)儀儀器操作指南 lab/sop/02進(jìn)口680型酶標(biāo)儀軟件操作幫助 lab/sop/03進(jìn)口1575型洗板機(jī)簡易操作流程 lab/sop/04電熱恒溫箱使用規(guī)程 lab/sop/05離心機(jī)使用規(guī)程 lab/sop/06生物安全柜使用規(guī)程 lab/sop/07消毒劑的配制 lab/sop/08廢棄物品的消毒處理 lab/sop/09工作區(qū)的消毒 lab/sop/10實(shí)驗(yàn)室安全制度 lab/sop/11

2、實(shí)驗(yàn)室?guī)胛锲返陌踩髄ab/sop/12實(shí)驗(yàn)室?guī)С鑫锲钒踩?lab/sop/13實(shí)驗(yàn)室人員的管理和健康監(jiān)護(hù) lab/sop/14樣品的運(yùn)送和發(fā)放 lab/sop/15事故緊急處理 lab/sop/16潛在性感染材料的接收 lab/sop/17實(shí)驗(yàn)室安全操作要求 lab/sop/18實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序1 lab/sop/19實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序2 lab/sop/20實(shí)驗(yàn)室記錄的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 lab/sop/21保證數(shù)據(jù)完整性標(biāo)準(zhǔn)操作 lab/sop/22用電話、傳真、e-mail報(bào)告結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 lab/sop/23手提式電熱壓力蒸汽消毒器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 lab/sop/24樣品的采集

3、、登記、處理、保存和運(yùn)輸 編號：lab/sop/24樣品的采集、登記、處理、保存和運(yùn)輸1 樣品的采集和處理艾滋病檢測最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時(shí)也可作為測試樣品。1.1 血清樣品采集和處理1.1.1 用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置12h，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min，吸出血清備用。1.1.2 如用濾紙片采樣，則手指或耳垂局部嚴(yán)格按常規(guī)進(jìn)行消毒，在刺破皮膚后，迅速把濾紙片沾上，切勿讓血液滴落在其它物體表面造成污染。采血后要待血樣干燥后再包裝送檢。1.2 抗凝血樣品采集和處理1.2.1 用加有抗凝劑的真空采血

4、管（或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管），反復(fù)輕搖，分離血漿和血細(xì)胞備用。1.2.2 應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?，如cd4+/cd8+t淋巴細(xì)胞測定可選用k3edta、肝素或枸櫞酸鈉，hiv病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用k3edta或枸櫞酸鈉。1.2.3 用于核酸定性檢測時(shí)，采集的抗凝全血應(yīng)在48h內(nèi)分離pbmc和血漿，否則應(yīng)在2448h內(nèi)分離血漿和血細(xì)胞。1.3 采集樣品注意事項(xiàng)1.3.1 采集樣品原則上應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作（試劑盒說明書有特殊要求除外）。1.3.2 采集樣品時(shí)應(yīng)注意安全，建議采用真空采血管及蝶形針具，以避免直接接觸血液；直接接觸hiv感染者/艾滋病

5、（aids）病人血液/體液的操作,應(yīng)戴雙層手套。2 樣品的保存2.1 用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20以下，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測的樣品可存放于28。2.2 用于抗原和核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)凍存于-20以下，進(jìn)行病毒rna檢測的樣品如需保存3個(gè)月以上應(yīng)置于-80。2.3 用于cd4+/cd8+t淋巴細(xì)胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時(shí)間超過48h則不可檢測。3 樣品的運(yùn)送3.1 實(shí)驗(yàn)室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運(yùn)送全血。3.2 應(yīng)采用who提出的三級包裝系統(tǒng)3.2.1 第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品

6、的編號或受檢者姓名、種類和采集時(shí)間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置。3.2.2 第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。3.2.3 第三層容器：放在一個(gè)運(yùn)輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標(biāo)簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。3.3 血清和血漿樣品應(yīng)在28條件下由專人運(yùn)送。用于cd4+/cd8+t淋巴細(xì)胞測定的樣品應(yīng)在室溫下1823運(yùn)送。每一包裝的體積以不超過50ml為宜。3.4 運(yùn)送感染性材料必須有記錄。3.5 如分離血漿仍有困難，可直接將抗凝

7、血-20以下凍存，采用冰壺冷藏運(yùn)輸，避免凍融。3.6 特殊情況下如需對個(gè)別樣品進(jìn)行復(fù)測，可以用特快專遞形式投寄，但必須按三級包裝系統(tǒng)將盛樣品的試管包扎好，避免使用玻璃容器，以保證不會(huì)破碎和溢漏。4 樣品的接收4.1 含有感染性樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)由經(jīng)過培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣的工作人員打開，用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。4.2 核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時(shí)報(bào)告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專家。4.3 檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。如果污染過重或者認(rèn)為樣品不能被接受，則應(yīng)將樣品安全廢棄。并

8、要將樣品情況立即通知送樣人。4.4 打開標(biāo)本容器時(shí)要小心，以防內(nèi)容物潑濺。樣品處理時(shí)若內(nèi)容物有可能濺出，則應(yīng)在生物安全柜中戴手套進(jìn)行。同時(shí)應(yīng)戴口罩、防護(hù)眼鏡，以防皮膚或粘膜污染。4.5 因特殊臨床治療導(dǎo)致自發(fā)熒光的樣品不可用于熒光方法測試。4.6 接收樣品時(shí)應(yīng)填寫樣品接收單。艾滋病篩查檢測登記表 登記日期 年 月 日標(biāo)本編號(gb碼)姓 名性別年齡婚姻狀況人群特征通 訊 地 址采樣日期檢測日期檢測結(jié)果結(jié)果報(bào)告日期報(bào)告人確認(rèn)結(jié)果備注elisapa快速 文件名稱 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（sop）文件類型sop生效日期（年/月/日）修改日期（年/月/日）文件號頁碼2012-02-102012-02-10hiv

9、002 2 目 錄lab/sop/25檢測方法和步驟lab/sop/26生物診斷試劑使用記錄和保存記錄lab/sop/27實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制與質(zhì)量管理lab/sop/28檢驗(yàn)結(jié)果解釋與報(bào)告lab/sop/29保密lab/sop/30實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、文件記錄lab/sop/31實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)lab/sop/32不確定樣品追蹤和處理lab/sop/33實(shí)驗(yàn)室清理和消毒編號：lab/sop/25檢測方法和步驟1. 目的：為hiv實(shí)驗(yàn)室各技術(shù)人員統(tǒng)一實(shí)驗(yàn)操作程序，保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，特制定本程序。2. 適用范圍：適用于hiv實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。3. 規(guī)范性引用文件：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2004年版）。4 相關(guān)器材設(shè)備

10、：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法）hiv（1+2）。5 安全防護(hù)器材與措施：一次性乳膠手套、隔離衣、口罩、帽子，接收或取用試劑時(shí)應(yīng)把試劑視作感染性材料對待。首先穿好一次性隔離衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳膠手套后再接觸試劑。6 檢測方法與步驟6.1雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法6.1.1 試劑名稱：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒6.1.2試劑廠家：北京萬泰生物試劑有限公司6.1.3原理及用途：采用基因工程抗原gp41和gp36包被酶聯(lián)板，用基因工程hiv-1和hiv-2嵌合抗原env18標(biāo)記辣根過氧化物酶，與其他試劑組成試劑盒，應(yīng)用雙抗原夾心法檢測人血清或血漿中的人類免疫缺陷病毒抗

11、體，用于獻(xiàn)血員及高危人群中人類免疫缺陷病毒感染的篩查。6.1.4 試劑盒組成（96人份） 6.1.4.1.預(yù)包被板條 12孔8/8孔12 6.1.4.2.hiv酶標(biāo)記物12ml1瓶6.1.4.3.陰性對照1ml1瓶6.1.4.4.陽性對照1ml1瓶6.1.4.5.25倍濃縮洗液80ml1瓶用去離子水或蒸餾水稀釋 6.1.4.6.底物緩沖液8ml1瓶6.1.4.7.底物液8ml1瓶6.1.4.8.終止液7ml1瓶6.1.4.9.封口袋1個(gè)6.1.4.10.說明書1份6.1.5操作方法6.1.5.1. 加樣：將預(yù)包被板條固定于板架上。每次試驗(yàn)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔，分別加入陰、陽性對照100

12、ul；設(shè)空白對照1孔，不加樣品。其余孔加入待測樣品100ul。6.1.5.2. 溫育：置37溫育60分鐘。6.1.5.3. 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，將稀釋后的洗液注滿各孔，靜置3060秒，棄去孔內(nèi)洗液，扣干。重復(fù)洗5次。6.1.5.4. 加酶：空白對照孔不加酶，其余孔加入酶標(biāo)記物100ul。6.1.5.5. 溫育：置37溫育30分鐘。6.1.5.6. 洗滌：棄去孔內(nèi)酶標(biāo)記物，重復(fù)洗5次（同操作步驟3）。6.1.5.7. 顯色：每孔加入底物緩沖液50ul，再加入底物液50ul，振蕩混勻，置37溫育10分鐘。6.1.5.8. 終止：每孔加入終止液50ul，輕拍混勻。在單波長450nm或雙波長450nm

13、/630nm下，用空白孔校零，再讀取各孔o(hù)d值。6.1.6結(jié)果判讀 96.1.6.1. 要求： 陽性對照od值應(yīng) 0.80 陰性對照od值應(yīng) 0.08（空白校零后）6.1.6.2. 臨界值（c.o.）計(jì)算： 臨界值（c.o.） 陽性對照平均od值10% 備注：陽性對照od值大于2.5按2.5計(jì)算。6.1.6.3. 結(jié)果判定：樣品od值 臨界值（c.o.）為hiv抗體陽性樣品od值 臨界值（c.o.）為hiv抗體陰性初篩試驗(yàn)陽性者應(yīng)重新取樣進(jìn)行雙孔復(fù)試，按照全國艾滋病檢測工作規(guī)范需將血樣或重新采血送“hiv篩查中心實(shí)驗(yàn)室”進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。6.2.1試劑名稱：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒6.2.2

14、試劑廠家：英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司6.2.3原理及用途:本試劑盒采用雙抗原夾心兩部法檢測人血清或血漿樣本中(hiv 1/2)型抗體.采用多種hiv-1和hiv-2的特異性抗原制作預(yù)包被板及酶結(jié)合物.當(dāng)待檢樣本中存在hiv抗體時(shí),在反應(yīng)過程中形成“固相hiv抗原-hiv抗體-酶標(biāo)記hiv抗原”的免疫復(fù)合物,加入底物后形成顯色反應(yīng).適用于輔助診斷及獻(xiàn)血員篩查。6.2.4試劑盒組份6.2.4.1. 測抗-hiv酶聯(lián)板1塊 (96孔) 7. 顯色劑a 1瓶 (7ml)6.2.4.2. 測抗-hiv樣品稀釋液1瓶 (7ml) 8. 顯色劑b 1瓶(7ml)6.2.4.3. 測抗-hiv酶標(biāo)抗原1瓶

15、(13ml)9. 終止液 1瓶 (7ml)6.2.4.4. 抗-hiv陽性對照(已滅活)1瓶 (1ml)10.不干膠封片2張6.2.4.5. 抗-hiv陰性對照(已滅活)1瓶 (1ml)11.說明書1份6.2.4.6. 20洗滌液 1瓶 (50ml)12.密封袋、干燥劑1套6.2.5標(biāo)本要求 血清或血漿(可用枸櫞酸鈉、肝素等作抗凝劑)6.2.6儀器要求 酶標(biāo)儀 洗板機(jī) 恒溫箱 加液器等 6.2.7檢測程序6.2.7.1將各種試劑移到室溫（18-25）平衡半小時(shí)后，取一瓶20洗滌液，加蒸餾水至1000 ml，混勻后備用。6.2.7.2將酶聯(lián)板從密封袋中取出，每孔加入1000l酶標(biāo)抗體，設(shè)一個(gè)空白

16、對照孔，兩個(gè)陽性對照孔，兩個(gè)陰性對照孔。取陽性對照和陰性對照分別充分混勻后各20l 加入對照孔中，其余每個(gè)孔加待檢血清20l，充分混勻，將酶聯(lián)反應(yīng)板置微板振蕩器上混合510秒，用不干膠封片封蓋反應(yīng)板。未用完的板條在密封袋中保存。6.2.7.3酶聯(lián)板置37溫育60分鐘, 小心吸干孔中血清，用洗滌液洗5次，然后在吸水紙上拍干。6.2.7.4每孔加顯色劑a 50l ，顯色劑b 50l ，輕輕振蕩后置37暗處顯色30分鐘，每孔加終止液50l。6.2.7.5選擇酶標(biāo)儀測定波長450nm，用空白孔調(diào)零點(diǎn)，測定各孔o(hù)d值。也可選擇630 nm作為參考波長，用雙波長測定。6.2.8結(jié)果判定6.2.8.1cut

17、off值0.12n（陰性對照的平均值）6.2.8.2陰性對照od值大于等于0.10。6.2.8.3陽性對照od值大于等于0.80，陰性對照od值大于0.1，則實(shí)驗(yàn)不成立，全部實(shí)驗(yàn)重做。6.2.8.4標(biāo)本od值小于cutoff值為陰性，大于等于cutoff值為陽性。6.2.8.5陽性者須重新取樣雙孔復(fù)試，復(fù)試陽性者應(yīng)按全國hiv管理規(guī)范，送hiv篩查中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。6.2.9注意事項(xiàng)6.2.9.1. 本試劑的使用單位必須是經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的hiv初篩實(shí)驗(yàn)室。6.2.9.2. 整個(gè)hiv檢測必須符合全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉感染。操作時(shí)必須戴手套、穿工作服，嚴(yán)格

18、健全和執(zhí)行消毒隔離制度。6.2.9.3. hiv-1/hiv-2抗體測定結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。6.2.9.4. 樣品及各種試劑應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。6.2.9.5. 洗滌時(shí)各孔均需加滿洗液，防止孔口有游離酶不能洗凈。6.2.9.6. 所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。6.2.9.7. 微孔板條從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡方可使用，未用完者須放入有干燥劑的密封袋中保存。6.2.9.8. 用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。6.2.9.9. 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/l次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。6.2.9.10.

19、 若倍濃縮洗液出現(xiàn)結(jié)晶，請放置37至溶解。6.2.9.11. 結(jié)果判讀請?jiān)?5分鐘內(nèi)完成。6.2.9.12. 不同批號的試劑組份不可混用。6.3.1 試劑名稱：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒6.3.2試劑廠家：珠海麗珠試劑有限公司6.3.3原理及用途：本品系用純化基因工程人類免疫缺陷病毒型和型（hiv-1/hiv-2）抗原（合成肽或基因重組蛋白）包被的微孔板和酶標(biāo)記的hiv-1/hiv-2抗原及其他試劑組成，應(yīng)用雙抗原夾心法原理（sandwich elisa）檢測人血清或血漿中的hiv-1/hiv-2抗體。6.3.4.1.hiv抗原包被板 12孔8/8孔12 6.3.4.2.hiv酶標(biāo)記物7m

20、l1瓶6.3.4.3.陰性對照1ml1瓶6.3.4.4.陽性對照1ml1瓶6.3.4.5.20倍濃縮洗液50ml1瓶用去離子水或蒸餾水稀釋至1000ml 6.3.4.6.底物緩沖液7ml1瓶6.3.4.7.底物液7ml1瓶6.3.4.8.終止液7ml1瓶6.3.4.9.封口袋1個(gè)6.3.4.10.說明書1份6.3.5操作方法6.3.5.1. 將試劑盒平衡至室溫，取出所需的條板，剩余的即時(shí)封存。6.3.5.2. 用去離子水和蒸餾水20倍稀釋濃縮洗滌液。6.3.5.3.將所需數(shù)量的條板固定于支架，按順序編號，設(shè)置樣品孔、空白對照孔、陽性對照孔和陰性對照孔（每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)空白對照1孔，陽性對照2孔，陰

21、性對照3孔。）。在樣品孔中加入50ul待測樣品， 空白孔不加任何液體，陰性、陽性對照孔分別加入50ul陰性或陽性對照，輕拍混勻。6.3.5.4.置37溫育30分鐘。6.3.5.5. 將孔內(nèi)液體甩干，置洗板機(jī)用洗滌液充分洗滌6遍，扣干。（注：洗滌時(shí)各孔要加滿洗液，勿使孔間交叉污染。采用洗板機(jī)時(shí)應(yīng)設(shè)定每遍有60秒的浸泡時(shí)間。）6.3.5.6. 每孔加入50ul酶標(biāo)記物（空白孔除外），輕拍混勻。6.3.5.7. 置37溫育30分鐘。6.3.5.8. 將孔內(nèi)液體甩干，置洗板機(jī)用洗滌液充分洗滌6遍，扣干。（注：洗滌時(shí)各孔要加滿洗液，勿使孔間交叉污染。采用洗板機(jī)時(shí)應(yīng)設(shè)定每遍有60秒的浸泡時(shí)間。）。6.3.

22、5.9. 每孔加入50ul底物緩沖液和50ul底物液，輕拍混勻，置37避光溫育30分鐘。6.3.5.10. 每孔加入50ul終止液終止顯色反應(yīng).6.3.5.11. 用酶標(biāo)儀單波長450nm（需設(shè)空白對照孔，并以空白對照孔調(diào)零）或雙波長450nm/630nm測定各孔a值。6.3.6結(jié)果判定 6.3.6.1. 臨界值（cutoff）0.15陰性對照的平均a值6.3.6.2樣品的a值cut off值為hiv抗體反應(yīng)陽性。6.3.6.3樣品的a值cut off值為hiv抗體反應(yīng)陰性。6.3.6.4. 正常時(shí)，陰性對照a值應(yīng)0.12，陽性對照a值應(yīng)0.80，陰性對照值若小于0.08以0.08計(jì)算。 6.

23、3.6.5. 若陽性對照a值孔間之差大于30%，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。6.3.6.6. 初次實(shí)驗(yàn)陽性者應(yīng)重新取樣進(jìn)行雙孔復(fù)試，按全國hiv檢測管理規(guī)范的要求，須將血樣或重新采血送hiv確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)報(bào)告陰性者，血可以發(fā)放使用；凡確認(rèn)實(shí)驗(yàn)陽性和可疑者，血不能發(fā)放使用，統(tǒng)一送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室處理。6.3.7注意事項(xiàng)6.3.7.1. 本試劑的使用單位必須是經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的hiv初篩實(shí)驗(yàn)室。6.3.7.2. 整個(gè)hiv檢測必須符合全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉感染。操作時(shí)必須戴手套、穿工作服，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。6.3.7.3. hiv-1/hiv-2抗體測定結(jié)果的判

24、定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。6.3.7.4. 樣品及各種試劑應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。6.3.7.5. 洗滌時(shí)各孔均需加滿洗液，防止孔口有游離酶不能洗凈。6.3.7.6. 所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。6.3.7.7. 微孔板條從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡方可使用，未用完者須放入有干燥劑的密封袋中保存。6.3.7.8. 用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。6.3.7.9. 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/l次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。6.3.7.10. 不同批號的試劑組份不可混用。6.4.1試劑名稱：人類免疫缺陷病毒(hiv1/2

25、)抗體診斷試劑（乳膠層析法）6.4.2試劑廠家：艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司6.4.3實(shí)驗(yàn)原理：本品系用特異性重組hiv1/2抗原gp41和gp36及兔抗hiv1/2多克隆抗體包被硝酸纖維素膜,配以紅色乳膠標(biāo)記重組hiv1/2抗原pg41和pg36及其他試劑制成,應(yīng)用雙抗原夾心反應(yīng)原理,定性檢測血清/血漿標(biāo)本忠hiv1/2抗體,用于無償獻(xiàn)血的現(xiàn)場篩查.6.3.4.試劑組成6.3.4.1.說明書1份6.3.4.2. 艾康人類免疫缺陷病毒(hiv1/2)抗體診斷試劑（乳膠層析法）6.3.4.3. 一次性吸管.6.3.5 試驗(yàn)方法:6.3.5.1. 本試劑使用人血清或血漿。檢測時(shí)應(yīng)盡量使用新鮮的樣本

26、；樣本出現(xiàn)渾濁時(shí)，通過離心或過濾取上清檢測。6.3.5.2. 不能檢測含有懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣品。6.3.5.3. 樣品中應(yīng)無微生物，無菌分離的樣品可以再2-8儲存1周，長期儲存應(yīng)于-20或更底溫度條件，避免反復(fù)凍融。6.3.5.4. 使用前請將樣品室溫平衡30分鐘以上，冷凍樣品實(shí)驗(yàn)前需混勻。6.3.5.5. 不能使用放置時(shí)間過常、長菌、發(fā)臭的標(biāo)本，這樣避免因標(biāo)本污染而造成的非特異反應(yīng)。6.3.6 實(shí)驗(yàn)方法：在加樣處滴加樣品80ul，平置于室溫，30分鐘內(nèi)看結(jié)果，9.6.3.7結(jié)果判定 6.3.7.1. 在30分鐘后的結(jié)果無效。6.3.7.2. 樣品視為傳染品，注意安全操作。6.

27、3.7.3. 測試卡上顯示兩條紅線時(shí)，即可判為初篩實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果。6.3.7.4. 測試卡從包裝中取出后，應(yīng)在60分鐘內(nèi)使用，潮濕空氣中暴露時(shí)間過長將影響檢測結(jié)果。如測試卡儲存于冰箱（2-8），取出后，應(yīng)平衡至室溫再開口使用。6.3.7. 注意事項(xiàng)6.3.7.1. 檢測為陽性的標(biāo)本藥注意保藏，并需要進(jìn)一步確正。6.3.7.2. 檢測為陽性的樣品，需要進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢為陽性的樣品，應(yīng)按全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范送hiv確證實(shí)驗(yàn)。6.3.7.3.測試卡應(yīng)在hiv初篩實(shí)驗(yàn)室由經(jīng)過hiv檢測技術(shù)培訓(xùn)的人員進(jìn)行操作使用。7 附錄7.1 北京萬泰雙抗原夾心法試劑盒使用說明書7.2 英可新創(chuàng)雙抗原夾心法試劑盒使用說

28、明書7.3 珠海麗珠雙抗原夾心法試劑盒使用說明書7.4人類免疫缺陷病毒(hiv1/2)抗體診斷試劑（乳膠層析法）使用說明書編號：lab/sop/26生物診斷試劑使用記錄和保存記錄 使用記錄：試劑名稱使用日期主要性狀使用者備注 保存記錄編號試劑名稱數(shù)量供貨單位保藏方式存放地點(diǎn)到貨日期有效期編號：lab/sop/27實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制與質(zhì)量管理1. 目的：為hiv實(shí)驗(yàn)室各技術(shù)人員統(tǒng)一實(shí)驗(yàn)操作程序，保證實(shí)驗(yàn)檢測質(zhì)量，特制定本程序。2. 適用范圍：適用于hiv實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。3. 規(guī)范性引用文件：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2004年版）。4. 相關(guān)器材設(shè)備：酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、標(biāo)準(zhǔn)血清。5. 安全防護(hù)器材與措施：

29、一次性乳膠手套、隔離衣、口罩、帽子，取用試劑時(shí)應(yīng)把試劑視作感染性材料對待。首先穿好一次性隔離衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳膠手套后再接觸試劑進(jìn)行試驗(yàn)。6. 操作步驟：在每次實(shí)驗(yàn)中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須按照試劑盒使用說明書使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一套對照血清，包括強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（cut-off）的23倍為宜。6.1

30、質(zhì)控血清的制備和保存（以elisa試驗(yàn)檢測hiv抗體為例）6.1.1 外部對照質(zhì)控血清的制備hiv抗體陽性和陰性血清，56 30min滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照可以用hiv抗體陰性血清梯度稀釋hiv抗體強(qiáng)陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測結(jié)果的防腐劑）用0.2m濾膜過濾除菌。6.1.2 外部對照質(zhì)控血清的保存6.1.2.1 按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20凍存于非自動(dòng)除霜冰箱中。6.1.2.2 外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放28，供一周內(nèi)使用。6.1.3 外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控

31、實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。6.1.4 外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv20%），并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響elisa反應(yīng)的防腐劑。6.2 質(zhì)控圖的建立及應(yīng)用（以elisa試驗(yàn)檢測hiv抗體為例）最常用的質(zhì)控圖是levey-jennings質(zhì)控圖，使用累計(jì)和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形可提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。6.2.1 建立質(zhì)控圖參數(shù)外部對照質(zhì)控物的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量

32、批次的檢測，也至少做5個(gè)批次的檢測，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控物測定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。6.2.1.1 算術(shù)平均值 ( )： 代表一組s/co值的平均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清s/co值結(jié)果計(jì)算出平均值。6.2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)差(s)：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)，是與對照質(zhì)控血清s/co值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組s/co值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。6.2.1.3 變異系數(shù)(cv)：是反映各次s/co值相對于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。6.2.1

33、.4 控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對質(zhì)控物檢測結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如12s質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照s/co平均值加減2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差；13s質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照s/co平均值加減3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。計(jì)算公式為： x = n s 計(jì)算公式為： ( xn - )2 s = n-1 cv 計(jì)算公式為： s cv = - x 100 % 6.2.2 繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計(jì)算出的）“控制限”進(jìn)行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并按時(shí)間順序點(diǎn)入本實(shí)驗(yàn)室每次試驗(yàn)質(zhì)控血清的測定值。質(zhì)控圖的繪制步驟：6.2.2.1 在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得

34、一組s/co值，求均數(shù)()和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。6.2.2.2 將均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以s/co值作縱座標(biāo)(y軸)，每一次(天)試驗(yàn)作橫座標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。6.2.2.3 從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。6.2.3 質(zhì)控規(guī)則及使用實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果之前必須評價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12s和13s規(guī)則。6.2.3.1 告警（12s）：當(dāng)外部對照的s/co值超出+2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需

35、要進(jìn)一步觀察。若將12s做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。6.2.3.2 失控（13s）：當(dāng)外部對照的s/co值超出+3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部對照滴度下降造成。6.2.3.3 位移：連續(xù)幾次（35次）外部對照s/co值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化。6.2.3.4 趨勢：連續(xù)幾次（57次）外部對照s/co值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時(shí)應(yīng)具有較低的假失控概率。考察試驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方

36、案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點(diǎn)為：出現(xiàn)一次2s范圍的變化時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列情況時(shí)，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。6.2.4 質(zhì)控圖的分析及失控處理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計(jì)劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時(shí)，要求可靠的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計(jì)算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)進(jìn)行如重復(fù)質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解除

37、故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。6.2.5 繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn)6.2.5.1 要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用s/co比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20個(gè)數(shù)據(jù)，求均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。6.2.5.2 由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會(huì)，討論本月的質(zhì)量控制情況。6.2.5.3 建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。 6.2.5.4 發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原

38、因并決定是否發(fā)出檢測報(bào)告。6.2.5.5 使用新批次的外部對照質(zhì)控物時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20，表示外部對照處于穩(wěn)定狀態(tài)。6.3 “即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下：6.3.1 將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3xn(x1為最小值，xn為最大值)。6.3.2 計(jì)算 和s。6.3.3 計(jì)算si上限值 和si下限值。si上限=x最大值-ssi下限=-x最小值s6.3.4 將si上限、si下限與si值表（表7）中的數(shù)字比較。表7 si值表nn3sn2snn3sn2s31.161.1

39、5122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56（1）當(dāng)si上限和si下限 n3s值時(shí)說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)值處于“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，需重新測定該質(zhì)控血清和病人樣品。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它測定值仍可繼續(xù)使用。6.4注意事項(xiàng)： 出現(xiàn)一次2s范圍的變化時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是

40、否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列情況時(shí)，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)十次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。6.5繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn)：（1）要在最佳條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)。（2）用s/co比值繪制質(zhì)控圖。（3）由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會(huì)，討論本月的質(zhì)量控制情況。每次檢測之前都應(yīng)了解質(zhì)控結(jié)果。（4）建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒。（5）更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒如結(jié)果偏離較大也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)

41、控圖上注明使用日期。 （6）如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控值劇烈位移或失控，應(yīng)填寫報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報(bào)告。（7）使用新批次的外部對照質(zhì)控血清時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。（8）發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控hiv實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制記錄表質(zhì)控次數(shù)樣品編號質(zhì)控日期外部對照od值cut-off值s/co值實(shí)驗(yàn)者復(fù)核者編號：lab/sop/28檢驗(yàn)結(jié)果解釋與報(bào)告1. 目的：為hiv實(shí)驗(yàn)室各技術(shù)人員統(tǒng)一實(shí)驗(yàn)操作程序，保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，特制定本程序。2. 適用范圍：適用于hiv實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。3. 規(guī)范性引用文件：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2004年版）。4. 相關(guān)器材設(shè)備：計(jì)算機(jī)。5. 操作步驟：5.1.1 初篩試驗(yàn)結(jié)果

42、的報(bào)告對hiv抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)者可出具“hiv抗體陰性”報(bào)告（附表1）；對初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報(bào)告，可出具“hiv抗體待復(fù)查”報(bào)告（附表1）。5.1.2 初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送如需送上級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“hiv抗體復(fù)檢化驗(yàn)單”（附表2），經(jīng)1名檢驗(yàn)人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。送艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室。5.1.3 對篩查陰性和陽性者，均需做好檢測后咨詢。5.2 hiv抗體確認(rèn)試驗(yàn)及確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告確認(rèn)試驗(yàn)由確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室根據(jù)檢測結(jié)果出具“hiv抗體確認(rèn)檢測報(bào)告單”（附表3），報(bào)告hiv抗體陽性（+）、hiv抗體陰性（-）及hiv抗體不確定（）。6

43、 附件 6.1 hiv抗體篩查報(bào)告單 6.2 hiv抗體復(fù)檢化驗(yàn)單 6.3 hiv抗體確認(rèn)報(bào)告單6.4 hiv抗體篩查陽性送檢登記表hiv抗體篩查報(bào)告report of hiv antibody screening testing秘密secret 編號no送檢單位from送檢日期date年 月 日 year month day送檢標(biāo)本specimen送檢人群population姓名name性別sex年齡age職 業(yè)occupation國籍或民族nationality地址address檢測方法methods日 期date檢測結(jié)果resultselisapa快速結(jié)論 conclusion檢測者op

44、erator簽發(fā)者h(yuǎn)ead報(bào)告日期date年 月 日 year month day 篩查單位或?qū)嶒?yàn)室（公章）institution orlaboratory備注 note中國疾病預(yù)防控制中心制訂printed by chinese center for disease control and prevention編號：lab/sop/29保 密1. 目的：為hiv實(shí)驗(yàn)室各技術(shù)人員保護(hù)檢測患者隱私，保證不對無關(guān)人員泄露患者檢驗(yàn)結(jié)果和檢驗(yàn)信息，特制定本程序。2. 適用范圍：適用于hiv實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。3. 規(guī)范性引用文件：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2004年版）4. 操作程序：4.1 建立嚴(yán)格的保密

45、制度并定期檢查4.2艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室所有人員應(yīng)具有高度的保密意識。4.3艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室要指定專人妥善保存各種實(shí)驗(yàn)記錄和檔案,不得擅自修改和銷毀。4.4不可對無關(guān)人員透露檢測結(jié)果。4.5保密制度納入年度考核，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)處理并根據(jù)情況修訂保密制度。4.6職業(yè)暴露的保密，無論職業(yè)暴露、重大事故或小型事故，對涉及的職業(yè)暴露者，均應(yīng)注意做好保密工作。4.7每一個(gè)得到信息的機(jī)構(gòu)或個(gè)人均應(yīng)做好保密工作。4.8違反上述規(guī)定引起法律糾紛者，應(yīng)承擔(dān)法律責(zé)任。編號：lab/sop/30實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、文件記錄1. 目的：為hiv實(shí)驗(yàn)室各技術(shù)人員保護(hù)檢測患者隱私，保證不對無關(guān)人員泄露患者檢驗(yàn)結(jié)果和檢驗(yàn)信息，特制定本程序。2. 適用范圍：適用于hiv實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。3. 規(guī)范性引用文件：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2004年版）4. 相關(guān)器材設(shè)備:計(jì)算機(jī).5. 檢測數(shù)據(jù)記錄5.1 實(shí)驗(yàn)預(yù)備記錄每次試驗(yàn)前應(yīng)按實(shí)驗(yàn)要求，在原始記錄表注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。檢查血清編號,標(biāo)明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員加樣。5.2. 試驗(yàn)結(jié)果記錄試驗(yàn)完成后要將試驗(yàn)結(jié)果連同酶標(biāo)儀記錄及時(shí)記錄在原