免疫組化染色中防脫片的技術(shù)改進

1、免疫組化染色中防脫片的技術(shù)改進沈陽醫(yī)學(xué)院journalofshenyangmedicalcohege第9卷第2期2007年6月免疫組化染色中防脫片的技術(shù)改進吳瑤,吳鵬(沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖學(xué)教研室,遼寧沈陽110034)關(guān)鍵詞免疫組織化學(xué);抗原修復(fù);防脫片中圖分類號r446.6文獻標識碼b文章編號10082344(2007)020113一o1應(yīng)用抗原修復(fù)技術(shù)暴露被封閉的組織抗原決定簇,是免疫組織化學(xué)技術(shù)中的關(guān)鍵步驟.微波抗原修復(fù)技術(shù)是一種有效的抗原修復(fù)方法1j,目前該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于病理切片的免疫組織化學(xué)染色操作中.它利用高溫效應(yīng)和微波的直接作用,打開蛋白問的交聯(lián)鍵,暴露組織固定時被封

2、閉的抗原決定簇.但是在微波加熱處理組織切片的過程中,常發(fā)生脫片現(xiàn)象而導(dǎo)致實驗失敗.為了克服這個缺點,我們經(jīng)反復(fù)實踐摸索,使用簡單的材料設(shè)計了一種可行的方法,較好地防止了脫片現(xiàn)象的發(fā)生.1材料與方法1.1材料手術(shù)取得的肺癌組織標本15例,來自于沈陽醫(yī)學(xué)院奉天醫(yī)院.顯微鏡擦鏡紙,微波爐(中國海爾,720w),多聚賴氨酸(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司提供),其他試劑均為國產(chǎn).1.2方法載玻片經(jīng)多聚賴氨酸防脫片處理后,每例組織塊切2張,切片厚度為5tma,切片面積約1.5cm1.2cm.將切片分常規(guī)處理組和改進方法組,每組15張切片.常規(guī)處理組將組織切片直接放人裝有檸檬酸鹽緩沖液(ph6.0)的保鮮盒中,

3、以720w的微波爐中中火進行抗原修復(fù)18rain;改進方法組于抗原修復(fù)前在切片組織處鋪置已被上述緩沖液浸濕的顯微鏡擦鏡紙,紙的大小應(yīng)蓋過組織,長度延長至載玻片的背面,然后放在耐高溫的切片架上置于檸檬酸鹽緩沖液中,最后將切片于微波爐做間斷修復(fù).即微波中火加熱3次(jjh熱至沸騰95100),每次5min,中途間歇2min,用鑷子把擦鏡紙拿掉后,再加熱1min,待降至常溫后常規(guī)s-p法染色.1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用卡方檢驗.規(guī)組切片有不同程度脫片13張,未脫片2張,改進組脫片1張,未脫片14張,結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析p<0.01.觀察兩組的免疫組化染色情況,常規(guī)組和改進組染色效果基本一致.3討論免疫組

4、化染色技術(shù)作為常規(guī)的檢測手段之一,目前已廣泛應(yīng)用于臨床病理診斷和鑒別診斷等形態(tài)學(xué)研究中.免疫組化染色的關(guān)鍵步驟是抗原修復(fù),其目的在于充分暴露抗原決定簇,抗體與抗原結(jié)合充分,使組化染色有一個滿意的結(jié)果.但目前抗原修復(fù)的常規(guī)方法是采用微波加熱方法,此方法既方便又有效,但由于加熱過程中破壞了賴氨酸與切片的粘附性3,常常造成切片部分或全部從載玻片上脫落現(xiàn)象(特別是當(dāng)切片面積大于1.5cmx1.2cm時),影響染色結(jié)果的觀察而造成人力和物力的損失.本文介紹的方法,既可以使樣品與修復(fù)液充分接觸,同時又能防止加熱狀態(tài)下離子對切片的沖擊,緩解了液體的流動波,進而達到防止脫片的目的.在抗原修復(fù)完成剝掉擦鏡紙之后,應(yīng)采用微火處理切片lmin,目的是使切片上粘附的紙纖維去掉,防止影響染色的效果.事實上采用本方法防止脫片操作簡單,經(jīng)濟可行,不需添加任何試劑和設(shè)備,同時又能保證抗原的修復(fù)而達到染色目的.本文同時比較常規(guī)組和改進組的免疫組化染色效果,結(jié)果基本一致.綜上所述,間歇性微波抗原修復(fù)方法,既可達到抗原決定簇完整修復(fù),又不影響組化染色效果,同時能防止切片的脫落.參考文獻:1王曉秋.免疫組化染色前抗原修復(fù)方法的合理選擇j.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2006,22(3):367.2結(jié)果2楊軍,楊元華.臨床實驗診斷中抗原修復(fù)的生化機制j.中國醫(yī)師雜志,2oo4,6(2):286287.常