保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價課件

1、保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價1 保健食品安全性毒理學(xué)保健食品安全性毒理學(xué) 檢驗(yàn)及評價檢驗(yàn)及評價 仲 偉 鑒 上海市疾病預(yù)防控制中心 2009.11 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價2 第一部分第一部分 中國保健食品簡介中國保健食品簡介 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價3 保健食品定義保健食品定義 保健食品（保健食品（Functional FoodFunctional Food）系指具）系指具 有調(diào)節(jié)人體生理功能、適宜特定人群食用、有調(diào)節(jié)人體生理功能、適宜特定人群食用、 不以治療為目的的一類食品。不以治療為目的的一類食品。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價4 特特 點(diǎn)點(diǎn) q 具有特定的保健功能；具有

2、特定的保健功能； q 無毒副作用，食用安全；無毒副作用，食用安全； q 有別于食品和藥品；有別于食品和藥品； q 增強(qiáng)體質(zhì)、預(yù)防疾病為主；增強(qiáng)體質(zhì)、預(yù)防疾病為主； q 適用于特定人群。適用于特定人群。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價5 特特 定定 功功 能能 q 由國家管理部門指定由國家管理部門指定 q 允許申報的功能目前有允許申報的功能目前有27種種 q 27種以外的功能，生產(chǎn)企業(yè)在獲得足夠種以外的功能，生產(chǎn)企業(yè)在獲得足夠 的技術(shù)資料后（包括評價方案，試驗(yàn)數(shù)據(jù)的技術(shù)資料后（包括評價方案，試驗(yàn)數(shù)據(jù) 及結(jié)果）向有關(guān)管理部門提出受理申請，及結(jié)果）向有關(guān)管理部門提出受理申請， 接受評審。接受評審。

3、保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價6 特特 定定 人人 群群 q正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳 母、青少年、中老年、特殊工種的工作母、青少年、中老年、特殊工種的工作 者以及常見病病人者以及常見病病人 q對于營養(yǎng)保健有特殊的需要對于營養(yǎng)保健有特殊的需要 膳食結(jié)構(gòu)的不同膳食結(jié)構(gòu)的不同 營養(yǎng)素需求的不同營養(yǎng)素需求的不同 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價7 保健食品的發(fā)展歷程保健食品的發(fā)展歷程 第一代保健食品第一代保健食品：在：在保健食品的管理方法保健食品的管理方法頒布頒布 以前市場上已有的保健食品。以前市場上已有的保健食品。 第二代保健食品第二代保健食品：經(jīng)動物和人體

4、實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有某種：經(jīng)動物和人體實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有某種 生理調(diào)節(jié)功能的食品。生理調(diào)節(jié)功能的食品。 第三代保健食品第三代保健食品：不僅需要經(jīng)人體及動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)：不僅需要經(jīng)人體及動物實(shí)驗(yàn)證實(shí) 具有某種功能，而且需要研究提具有某種功能，而且需要研究提 供該功能因子、含量及其作用機(jī)供該功能因子、含量及其作用機(jī) 理。理。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價8 發(fā)發(fā) 展展 趨趨 勢勢 q根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功能根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功能 q根據(jù)新的養(yǎng)生保健概念，開發(fā)新的保健功能根據(jù)新的養(yǎng)生保健概念，開發(fā)新的保健功能 q根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)科學(xué)理論，開發(fā)新的膳食有效成分根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)科學(xué)理論，開

5、發(fā)新的膳食有效成分 q根據(jù)中醫(yī)藥理論，開發(fā)中藥類有效成分根據(jù)中醫(yī)藥理論，開發(fā)中藥類有效成分 q根據(jù)生命科學(xué)理論，開發(fā)新的人體所需營養(yǎng)素根據(jù)生命科學(xué)理論，開發(fā)新的人體所需營養(yǎng)素 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價9 保健食品開發(fā)中的注意點(diǎn)保健食品開發(fā)中的注意點(diǎn) q中草藥中草藥 q新資源新資源 q野生動植物及其產(chǎn)品野生動植物及其產(chǎn)品 q核酸類核酸類 q真菌類真菌類 q益生菌類益生菌類 q酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直 接以微生物發(fā)酵的接以微生物發(fā)酵的 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價10 中草藥類中草藥類 q 中草藥作為原料應(yīng)注意中草藥作為原料應(yīng)注意： 1.

6、1.不能采用有明顯毒副作用的中藥材、不能采用有明顯毒副作用的中藥材、 獲國家藥政管理部門批準(zhǔn)的中成藥、獲國家藥政管理部門批準(zhǔn)的中成藥、 受國家中藥保護(hù)的中藥成方受國家中藥保護(hù)的中藥成方 2.2.用量應(yīng)控制在臨床用量的用量應(yīng)控制在臨床用量的50%50%以下以下 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價11 新資源類新資源類 q 新資源作為原料時必須具備的有關(guān)資料新資源作為原料時必須具備的有關(guān)資料： q 名稱及國內(nèi)外研究利用情況；名稱及國內(nèi)外研究利用情況； q 名稱、配方及生產(chǎn)工藝；名稱、配方及生產(chǎn)工藝； q 產(chǎn)品成分（包括營養(yǎng)物質(zhì)、有生物效應(yīng)物質(zhì)及有毒產(chǎn)品成分（包括營養(yǎng)物質(zhì)、有生物效應(yīng)物質(zhì)及有毒 有害物質(zhì)

7、等）的分析報告；有害物質(zhì)等）的分析報告； q 安全性毒理學(xué)評價報告或有關(guān)文獻(xiàn)資料；安全性毒理學(xué)評價報告或有關(guān)文獻(xiàn)資料； q 個別地區(qū)有食用習(xí)慣的應(yīng)提供有關(guān)食用歷史的證明個別地區(qū)有食用習(xí)慣的應(yīng)提供有關(guān)食用歷史的證明 資料；資料； q 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價12 野生動植物及其產(chǎn)品類野生動植物及其產(chǎn)品類 q 以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制： q 受保護(hù)的野生動物。受保護(hù)的野生動物。 q 禁止使用自然的、人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家禁止使用自然的、人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家 一級和自然的二級保護(hù)野生動植物及其產(chǎn)品。一級和自然的

8、二級保護(hù)野生動植物及其產(chǎn)品。 q 人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家二級保護(hù)野生動植人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家二級保護(hù)野生動植 物及其產(chǎn)品，國家保護(hù)的有益的或者有重要經(jīng)濟(jì)、物及其產(chǎn)品，國家保護(hù)的有益的或者有重要經(jīng)濟(jì)、 科學(xué)研究價值的陸生野生動物及其產(chǎn)品應(yīng)提供省級科學(xué)研究價值的陸生野生動物及其產(chǎn)品應(yīng)提供省級 以上農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門的批準(zhǔn)文件。以上農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門的批準(zhǔn)文件。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價13 q 以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關(guān)限制： 中華人民共和國林業(yè)植物新品種保護(hù)名錄中植物及中華人民共和國林業(yè)植物新品種保護(hù)名錄中植物

9、及 其產(chǎn)品，如果該種植物已獲其產(chǎn)品，如果該種植物已獲“品種權(quán)品種權(quán)”，應(yīng)提供該，應(yīng)提供該 種植物品種權(quán)所有人許可使用的證明；如該種植物種植物品種權(quán)所有人許可使用的證明；如該種植物 尚未取得品種權(quán)，應(yīng)提供國務(wù)院林業(yè)主管部門出具尚未取得品種權(quán)，應(yīng)提供國務(wù)院林業(yè)主管部門出具 的該種品種尚未取得品種權(quán)的證明。的該種品種尚未取得品種權(quán)的證明。 q 進(jìn)口保健食品中使用進(jìn)口保健食品中使用瀕危野生動植物種國際貿(mào)易瀕危野生動植物種國際貿(mào)易 公約公約名錄中動植物及其產(chǎn)品的，應(yīng)提供國務(wù)院農(nóng)名錄中動植物及其產(chǎn)品的，應(yīng)提供國務(wù)院農(nóng) 業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門批準(zhǔn)文件、進(jìn)出口業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門批準(zhǔn)文件、進(jìn)出口

10、 許可證及海關(guān)的證明文件。許可證及海關(guān)的證明文件。 野生動植物及其產(chǎn)品類野生動植物及其產(chǎn)品類 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價14 核酸類核酸類 q 核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料： q 具體成份名稱、來源、含量；具體成份名稱、來源、含量； q 與所申報功能直接相關(guān)的科學(xué)文獻(xiàn)依據(jù)；與所申報功能直接相關(guān)的科學(xué)文獻(xiàn)依據(jù)； q 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)出核酸各成份的含量、純度和相應(yīng)的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)出核酸各成份的含量、純度和相應(yīng)的 定性、定量檢測方法以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；定性、定量檢測方法以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； q 詳細(xì)生產(chǎn)工藝（包括加工助劑名稱、用量）；詳細(xì)生產(chǎn)工藝（包括加工助劑名稱、用量

11、）； q 核酸原料純度的檢測報告。核酸原料純度的檢測報告。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價15 核酸類核酸類 q 核酸類保健食品申報時的注意事項(xiàng)核酸類保健食品申報時的注意事項(xiàng)： q 不得以單一的不得以單一的DNADNA或或RNARNA作為原料申報。作為原料申報。 q 單一原料純度應(yīng)大于單一原料純度應(yīng)大于8080。 q 功能申報范圍暫限定為免疫調(diào)節(jié)功能。如申報其他功能，功能申報范圍暫限定為免疫調(diào)節(jié)功能。如申報其他功能， 需向衛(wèi)生部提交申請并納入審批范圍后，方可申報。需向衛(wèi)生部提交申請并納入審批范圍后，方可申報。 q 核酸成份的每日推薦食用量為核酸成份的每日推薦食用量為0.6g-1.2g0.6g-

12、1.2g。 q 不得以不得以“核酸核酸”命名。命名。 q 說明書及標(biāo)簽中的說明書及標(biāo)簽中的“不適宜人群不適宜人群”除按保健食品相關(guān)規(guī)除按保健食品相關(guān)規(guī) 定標(biāo)注外，應(yīng)明確標(biāo)注出定標(biāo)注外，應(yīng)明確標(biāo)注出“痛風(fēng)患者痛風(fēng)患者”。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價16 真菌類真菌類 q 真菌類保健食品的部分規(guī)定真菌類保健食品的部分規(guī)定 ： q 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立有關(guān)的檔案資料。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立有關(guān)的檔案資料。 q 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的生產(chǎn)條件。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的生產(chǎn)條件。 q 對生產(chǎn)菌種及工藝變更的相應(yīng)規(guī)定。對生產(chǎn)菌種及工藝變更的相應(yīng)規(guī)定。 q 冠名規(guī)定。冠名規(guī)定。 q 發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效

13、成分發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分 的動植物及其它物質(zhì)。的動植物及其它物質(zhì)。 q 不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種。不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價17 益生菌類益生菌類 q 益生菌類保健食品的部分規(guī)定益生菌類保健食品的部分規(guī)定： q 生產(chǎn)用菌種應(yīng)滿足一定的條件。生產(chǎn)用菌種應(yīng)滿足一定的條件。 q 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備的一定條件。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備的一定條件。 q 菌種及生產(chǎn)工藝不得變更，否則產(chǎn)品必須重新申報。菌種及生產(chǎn)工藝不得變更，否則產(chǎn)品必須重新申報。 q 不提倡以液態(tài)形式生產(chǎn)活菌產(chǎn)品。不提倡以液態(tài)形式生產(chǎn)活菌產(chǎn)品。 q 在保存期內(nèi)活菌數(shù)目不得少于在保存期內(nèi)活菌數(shù)目

14、不得少于 106cfu/mL(g) 106cfu/mL(g) 。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價18 益生菌類益生菌類 q 益生菌類保健食品的部分規(guī)定益生菌類保健食品的部分規(guī)定： q 如需在特殊條件下保存，應(yīng)在標(biāo)簽和說明書中標(biāo)示如需在特殊條件下保存，應(yīng)在標(biāo)簽和說明書中標(biāo)示 q 所用菌種在其發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入所用菌種在其發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入 具有功效成分的動植物及其物質(zhì)具有功效成分的動植物及其物質(zhì) q 不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價19 其他類別其他類別 q 對酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及對酶制劑、氨基酸螯合

15、物、金屬硫蛋白以及 直接以微生物發(fā)酵為原料限制的部分規(guī)定直接以微生物發(fā)酵為原料限制的部分規(guī)定： q 未列入未列入食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或衛(wèi)生部公告或衛(wèi)生部公告 名單中的食品添加劑新品種的酶制劑不得用于保健名單中的食品添加劑新品種的酶制劑不得用于保健 食品的生產(chǎn)。食品的生產(chǎn)。 q 不再審批以金屬硫蛋白為原料生產(chǎn)的保健食品。不再審批以金屬硫蛋白為原料生產(chǎn)的保健食品。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價20 其他類別其他類別 q 使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提 供的特殊資料供的特殊資料： q 菌種來源及菌種檢定報告菌種來源及菌種檢定報告

16、 q 菌種的毒力試驗(yàn)報告及安全性評價報告菌種的毒力試驗(yàn)報告及安全性評價報告 q 國內(nèi)外該菌種使用于食品生產(chǎn)的文獻(xiàn)資料國內(nèi)外該菌種使用于食品生產(chǎn)的文獻(xiàn)資料 q 發(fā)酵終產(chǎn)物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（包括純度、雜質(zhì)成分及含發(fā)酵終產(chǎn)物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（包括純度、雜質(zhì)成分及含 量）量） 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價21 其他類別其他類別 q 使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供 的特殊資料的特殊資料： q 提供明確的化學(xué)結(jié)構(gòu)式、理化性質(zhì)，配體與金屬離提供明確的化學(xué)結(jié)構(gòu)式、理化性質(zhì)，配體與金屬離 子之比、游離元素和總元素之比。子之比、游離元素和總元素之比。 q 提供定性、定量的檢測方

17、法及驗(yàn)證報告。提供定性、定量的檢測方法及驗(yàn)證報告。 q 急性毒性試驗(yàn)加做停食急性毒性試驗(yàn)加做停食1616小時后空腹一次灌胃試驗(yàn)小時后空腹一次灌胃試驗(yàn) 和和3030天喂養(yǎng)試驗(yàn)的組織病理報告。天喂養(yǎng)試驗(yàn)的組織病理報告。 q 國內(nèi)外使用于食品生產(chǎn)的文獻(xiàn)資料。國內(nèi)外使用于食品生產(chǎn)的文獻(xiàn)資料。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價22 安全，無毒、副作用安全，無毒、副作用功能，保健功效功能，保健功效 理化、微生物特性：理化、微生物特性： 有害成分物質(zhì)和污染物有害成分物質(zhì)和污染物 毒理學(xué)特性：毒理學(xué)特性： 劑量反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系劑量反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系 保健食品質(zhì)量控制保健食品質(zhì)量控制 生物活性物質(zhì)生物活性物質(zhì) 功效

18、成分功效成分 通過檢驗(yàn)和評通過檢驗(yàn)和評 價，加以控制價，加以控制 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價23 第二部分第二部分 保健食品安全性毒理學(xué)保健食品安全性毒理學(xué) 檢驗(yàn)及評價檢驗(yàn)及評價 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價24 主主 要要 內(nèi)內(nèi) 容容 q 檢驗(yàn)評價依據(jù)檢驗(yàn)評價依據(jù) q 審評基本要求審評基本要求 q 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 q 實(shí)驗(yàn)動物的選擇實(shí)驗(yàn)動物的選擇 q 樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則 q 毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介紹毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介紹 q毒理學(xué)安全性評價時應(yīng)考慮的問題毒理學(xué)安全性評價時應(yīng)考慮的問題 q審評結(jié)論的判定審評結(jié)論的判定 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)

19、及評價25 毒性及功能檢驗(yàn)評價依據(jù)毒性及功能檢驗(yàn)評價依據(jù) 19961996年年3 3月衛(wèi)生部月衛(wèi)生部保健食品的管理方法保健食品的管理方法 保健食品的標(biāo)準(zhǔn)、功能評價、審批程序和監(jiān)督管理辦法保健食品的標(biāo)準(zhǔn)、功能評價、審批程序和監(jiān)督管理辦法 19961996年年7 7月月GB15193GB15193食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法 衛(wèi)生部衛(wèi)生部保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法 僅包含了僅包含了1212項(xiàng)功能檢驗(yàn)及評價方法項(xiàng)功能檢驗(yàn)及評價方法 20012001年年7 7月月 衛(wèi)生部衛(wèi)生部保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法保健食品功能學(xué)評價程序和

20、檢驗(yàn)方法 可受理和評價的功能調(diào)整到可受理和評價的功能調(diào)整到3131項(xiàng)項(xiàng) 20032003年年2 2月衛(wèi)生部月衛(wèi)生部保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范 將功能學(xué)、毒理學(xué)、功效成分及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)評價方法三者合一將功能學(xué)、毒理學(xué)、功效成分及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)評價方法三者合一 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價26 審評的基本要求審評的基本要求 1. 1. 配方配方 原（輔）料、用量、理化性質(zhì)原（輔）料、用量、理化性質(zhì) 2. 2. 劑量劑量 食用方法及用量食用方法及用量 3. 3. 工藝工藝 規(guī)格化產(chǎn)品規(guī)格化產(chǎn)品 符合配方、工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合配方、工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 4. 4. 批號批號 注意批號

21、是否一致注意批號是否一致, ,益生菌、奶制品等保質(zhì)期短的除外益生菌、奶制品等保質(zhì)期短的除外 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價27 1. 1. 毒理學(xué)評價的四個階段毒理學(xué)評價的四個階段 第一階段：急性毒性試驗(yàn)第一階段：急性毒性試驗(yàn) 經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)：經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)：LD50LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗(yàn)，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗(yàn) 第二階段：遺傳毒性試驗(yàn)，第二階段：遺傳毒性試驗(yàn)，3030天喂養(yǎng)試驗(yàn)，傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)天喂養(yǎng)試驗(yàn)，傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 遺傳毒性試驗(yàn)：原核細(xì)胞和真核細(xì)胞，體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)相結(jié)合遺傳毒性試驗(yàn)：原核細(xì)胞和真核細(xì)胞，體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)相結(jié)合 AmesAmes或基因突變

22、試驗(yàn)；微核試驗(yàn)或染色體畸變試驗(yàn)；精子畸變試驗(yàn)等或基因突變試驗(yàn)；微核試驗(yàn)或染色體畸變試驗(yàn)；精子畸變試驗(yàn)等 第三階段：亞慢性毒性試驗(yàn)第三階段：亞慢性毒性試驗(yàn) 9090天喂養(yǎng)試驗(yàn)、繁殖試驗(yàn)、代謝試驗(yàn)天喂養(yǎng)試驗(yàn)、繁殖試驗(yàn)、代謝試驗(yàn) 第四階段：慢性毒性試驗(yàn)（包括致癌試驗(yàn)）第四階段：慢性毒性試驗(yàn)（包括致癌試驗(yàn)） 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價28 2.2.一般無需進(jìn)行毒性試驗(yàn)的原料或成分一般無需進(jìn)行毒性試驗(yàn)的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)：屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)： q采用傳統(tǒng)的工藝及食用方式采用傳統(tǒng)的工藝及食用方式

23、q水提取物，常規(guī)服用量，無不安全性報道水提取物，常規(guī)服用量，無不安全性報道 q來源、工藝和質(zhì)量符合國家要求的營養(yǎng)強(qiáng)化劑來源、工藝和質(zhì)量符合國家要求的營養(yǎng)強(qiáng)化劑 或營養(yǎng)素補(bǔ)充劑或營養(yǎng)素補(bǔ)充劑 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價29 3. 3. 需進(jìn)行一階段和三項(xiàng)致突變毒性試驗(yàn)的原料或成分需進(jìn)行一階段和三項(xiàng)致突變毒性試驗(yàn)的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)且用水屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)且用水 提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的：提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的： （1 1）服用量與常規(guī)用量相同）服用量與常規(guī)用量相同 急性毒性、三項(xiàng)致

24、突變試驗(yàn)急性毒性、三項(xiàng)致突變試驗(yàn) （2 2）服用量大于常規(guī)用量）服用量大于常規(guī)用量 還需加做還需加做3030天喂養(yǎng)試驗(yàn)，必要時進(jìn)行傳統(tǒng)致畸試天喂養(yǎng)試驗(yàn)，必要時進(jìn)行傳統(tǒng)致畸試 驗(yàn)和第三階段毒性試驗(yàn)驗(yàn)和第三階段毒性試驗(yàn) 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價30 4.4.需進(jìn)行一、二階段毒性試驗(yàn)的原料或成分需進(jìn)行一、二階段毒性試驗(yàn)的原料或成分 q文獻(xiàn)顯示無危害，人群長期食用；文獻(xiàn)顯示無危害，人群長期食用； q具有國際性毒理學(xué)評價結(jié)果的已知的化學(xué)物質(zhì)，產(chǎn)具有國際性毒理學(xué)評價結(jié)果的已知的化學(xué)物質(zhì)，產(chǎn) 品質(zhì)量規(guī)格與國外產(chǎn)品一致；品質(zhì)量規(guī)格與國外產(chǎn)品一致； q國外

25、廣泛食用且能提供安全性評價資料；國外廣泛食用且能提供安全性評價資料； q衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動植物及其提取物或微生物。衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動植物及其提取物或微生物。 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價31 5.5.需進(jìn)行一至三階段毒性試驗(yàn)的情況：需進(jìn)行一至三階段毒性試驗(yàn)的情況： q一、二階段試驗(yàn)結(jié)果與國外產(chǎn)品不一致的一、二階段試驗(yàn)結(jié)果與國外產(chǎn)品不一致的 q國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分 q水提取物，大于常規(guī)服用量水提取物，大于常規(guī)服用量 q用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)

26、的，大于常規(guī)用量 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價32 6.6.需進(jìn)行一至四階段毒性試驗(yàn)的原料和成分需進(jìn)行一至四階段毒性試驗(yàn)的原料和成分 國內(nèi)外均無食用先例國內(nèi)外均無食用先例 7.7.敏感指標(biāo)及敏感試驗(yàn)的保健食品敏感指標(biāo)及敏感試驗(yàn)的保健食品 不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價33 8.8.保健食品新原料保健食品新原料 保健食品新原料（以下簡稱新原料）是指不在保健食品新原料（以下簡稱新原料）是指不在 國家食品藥品監(jiān)督管理局公布

27、的可用于保健食品、國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品、 衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)可以食用以及生產(chǎn)普通食品的范衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)可以食用以及生產(chǎn)普通食品的范 圍內(nèi)，擬用于保健食品的原料。圍內(nèi)，擬用于保健食品的原料。 國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家有關(guān)部門規(guī)定國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家有關(guān)部門規(guī)定 的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作 為新原料。為新原料。 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價34 在已批準(zhǔn)的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為在已批準(zhǔn)的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為 新資源食品的原料，

28、符合以下情況的仍按新原料進(jìn)行管新資源食品的原料，符合以下情況的仍按新原料進(jìn)行管 理：理： q未列入國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食未列入國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食 品的物品名單；品的物品名單； q尚未列入衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)的食品新資源或新資源食尚未列入衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)的食品新資源或新資源食 品名單內(nèi)；品名單內(nèi)； q衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為食品新資源或新資源食品，但保健食衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為食品新資源或新資源食品，但保健食 品注冊申請人與食品新資源或新資源食品生產(chǎn)批件中載品注冊申請人與食品新資源或新資源食品生產(chǎn)批件中載 明的申報單位不一致。明的申報單位不一致。 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒

29、理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價35 新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 無食用史無食用史 需做四階段試驗(yàn)需做四階段試驗(yàn) 局部地區(qū)有食用史局部地區(qū)有食用史 需做三階段試驗(yàn)需做三階段試驗(yàn) 其中其中 ，100100倍倍 攝入量攝入量300300倍倍 需做第四階段試驗(yàn)需做第四階段試驗(yàn) 有食用史有食用史 需做二階段試驗(yàn)需做二階段試驗(yàn) 經(jīng)評價后經(jīng)評價后 下一階段試驗(yàn)下一階段試驗(yàn) 廣泛食用的原料廣泛食用的原料 二階段試驗(yàn)二階段試驗(yàn) （食用史包括地區(qū)、年代、人群、食用量、頻率等情況）（食用史包括地區(qū)、年代、人群、食用量、頻率等情況） 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選

30、擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價36 新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 已知化學(xué)物已知化學(xué)物: : -1 -1 可只做二階段實(shí)驗(yàn)的包括可只做二階段實(shí)驗(yàn)的包括 已有權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)的毒理學(xué)安全性評價已有權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)的毒理學(xué)安全性評價 有資料證明所用原料與其一致有資料證明所用原料與其一致 -2 -2 如試驗(yàn)結(jié)果與權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行的評價不一致，如試驗(yàn)結(jié)果與權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行的評價不一致， 需進(jìn)入下階段的試驗(yàn)需進(jìn)入下階段的試驗(yàn) 有新原料的保健食品有新原料的保健食品: : 根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果綜合分析。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果綜合分析。 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則選擇毒理學(xué)試驗(yàn)

31、的基本原則 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價37 對受試保健食品的要求對受試保健食品的要求 q 單一已知化學(xué)成分，應(yīng)提供物理和化學(xué)性質(zhì)單一已知化學(xué)成分，應(yīng)提供物理和化學(xué)性質(zhì) q 多種原料的配方產(chǎn)品，應(yīng)提供配方多種原料的配方產(chǎn)品，應(yīng)提供配方 q 配方產(chǎn)品，必要時還應(yīng)提供各組分，功效成分的配方產(chǎn)品，必要時還應(yīng)提供各組分，功效成分的 q 物理和化學(xué)性質(zhì)及其檢測報告物理和化學(xué)性質(zhì)及其檢測報告 q 提供原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使提供原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使 q 用說明書等有關(guān)資料用說明書等有關(guān)資料 q 受試物應(yīng)符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品受試物應(yīng)符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格

32、化產(chǎn)品 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價38 實(shí)驗(yàn)動物的選擇及給樣量實(shí)驗(yàn)動物的選擇及給樣量 1.1.根據(jù)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的具體要求，合理選擇實(shí)驗(yàn)動物根據(jù)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的具體要求，合理選擇實(shí)驗(yàn)動物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。 2.2.動物應(yīng)符合動物應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例 清潔級或清潔級以上清潔級或清潔級以上 動物合格證號及動物實(shí)驗(yàn)室合格證號動物合格證號及動物實(shí)驗(yàn)室合格證號 3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kg10 ml/kgBWBW（若以水為溶劑，推薦（若以水為溶劑，推薦 20 ml/kg20 ml/kgBWBW） 小鼠：小

33、鼠：20ml/kg20ml/kgBWBW 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價39 樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則 1.1.介質(zhì)的選擇介質(zhì)的選擇 應(yīng)選擇適合于受試動物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、應(yīng)選擇適合于受試動物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、 與受試物不發(fā)生反應(yīng)、穩(wěn)定性好。與受試物不發(fā)生反應(yīng)、穩(wěn)定性好。 常用的介質(zhì)有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基常用的介質(zhì)有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基 纖維素等。纖維素等。 2.2.液體類液體類 受試物濃縮倍數(shù)應(yīng)符合試驗(yàn)要求。受試物濃縮倍數(shù)應(yīng)符合試驗(yàn)要求。 濃縮方法不應(yīng)破壞其有效成份，常用的有濃縮方法不應(yīng)破壞其有效成份，常用的有6

34、0607070減壓或減壓或 常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。 按工藝要求。按工藝要求。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價40 樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則 3.3.袋泡茶類袋泡茶類 處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同 推薦用：推薦用：80-90 80-90 常壓用水浸泡常壓用水浸泡30min30min 水量為受試物的水量為受試物的1010倍，提取倍，提取2 2次，次，2 2次提取液合并濃縮至次提取液合并濃縮至 所需濃度所需濃度 標(biāo)明該濃縮液與受試物的比例標(biāo)明該濃縮液與受試物的比例 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價41 樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則 4.4.

35、含乙醇類含乙醇類 （1 1）不需濃縮的受試物）不需濃縮的受試物 乙醇濃度乙醇濃度151515 乙醇濃度應(yīng)調(diào)至乙醇濃度應(yīng)調(diào)至1515 （2 2）需濃縮的受試物）需濃縮的受試物 乙醇濃度乙醇濃度151515 濃縮后調(diào)至濃縮后調(diào)至1515乙醇濃度乙醇濃度 在進(jìn)行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基在進(jìn)行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價42 樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則 5.5.膨脹系數(shù)較高的受試物膨脹系數(shù)較高的受試物 選擇可溶性介質(zhì)選擇可溶性介質(zhì) 給受試物的方法：灌胃給受試物的方法：灌胃 其最高濃度最大灌胃量時達(dá)不到人體推薦量的其最高濃度最大灌胃量時達(dá)不到人體推薦量的100100

36、倍，倍， 按實(shí)際達(dá)到的倍數(shù)按實(shí)際達(dá)到的倍數(shù) 標(biāo)明受試物的膨脹系數(shù)標(biāo)明受試物的膨脹系數(shù) 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價43 樣品的預(yù)處理原則樣品的預(yù)處理原則 6.6.益生菌等微生物類保健食品益生菌等微生物類保健食品 在進(jìn)行在進(jìn)行 AmesAmes試驗(yàn)或體外細(xì)胞試驗(yàn)時需將受試物滅活。試驗(yàn)或體外細(xì)胞試驗(yàn)時需將受試物滅活。 需濃縮的應(yīng)采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方需濃縮的應(yīng)采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方 法、技術(shù)參數(shù)）。法、技術(shù)參數(shù)）。 7.7.以食品為載體的受試物以食品為載體的受試物 （1 1）有營養(yǎng)價值：按設(shè)計(jì)量進(jìn)行飼料的營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細(xì)的說）有營養(yǎng)價值：

37、按設(shè)計(jì)量進(jìn)行飼料的營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細(xì)的說 明。明。 （2 2）大豆蛋白、乳清蛋白）大豆蛋白、乳清蛋白 如質(zhì)量、工藝等符合食品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。如質(zhì)量、工藝等符合食品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。 如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學(xué)試驗(yàn)。如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學(xué)試驗(yàn)。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價44 毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介 紹紹 q 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) q 鼠傷寒沙門氏菌（鼠傷寒沙門氏菌（AmesAmes）試驗(yàn)）試驗(yàn) q 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) q 哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn) q 小鼠精子畸形試

38、驗(yàn)小鼠精子畸形試驗(yàn) q 小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn)小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn) q 3030天喂養(yǎng)試驗(yàn)天喂養(yǎng)試驗(yàn) 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價45 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 目的：目的：測定測定LDLD50 50，毒性分級。了解毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶 ，毒性分級。了解毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶 器官，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供劑量和觀察指標(biāo)的選擇依據(jù)。器官，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供劑量和觀察指標(biāo)的選擇依據(jù)。 原理：原理： 急性毒性：經(jīng)口一次性、急性毒性：經(jīng)口一次性、24h24h內(nèi)多次給予，短時間內(nèi)的毒性反內(nèi)多次給予，短時間內(nèi)的毒性反 應(yīng)。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量應(yīng)。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量LDL

39、D50 50表示。 表示。 急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相 加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計(jì)算和判定標(biāo)準(zhǔn)來加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計(jì)算和判定標(biāo)準(zhǔn)來 確定這三種不同的作用。確定這三種不同的作用。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價46 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 時間周期時間周期：一般為：一般為3 3周周 3-53-5天，大、小鼠適應(yīng)期天，大、小鼠適應(yīng)期 7-147-14天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀察期天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀察期 發(fā)生動物死亡時，應(yīng)進(jìn)行大體解剖發(fā)生動物死亡時，應(yīng)進(jìn)行大體解剖 觀察和評價指標(biāo)觀察和評

40、價指標(biāo)： 毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的反常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的反常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼 吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變 化化 死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。 大體尸檢結(jié)果：如果發(fā)生死亡動物大體尸檢結(jié)果：如果發(fā)生死亡動物 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價47 急性毒性（急性毒性（LDLD50 50）劑量分級表 ）劑量分級表 級級 別別 大鼠口服大鼠口服LD50， mg/kg 相當(dāng)于人的致死量相當(dāng)于人的致死量 mg/kgg/人人 極毒極毒

41、150005000002500 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價48 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 試驗(yàn)結(jié)果的判定：試驗(yàn)結(jié)果的判定： 1. LD501. LD50人可能攝入量的人可能攝入量的100100倍，放棄；反之繼續(xù)下倍，放棄；反之繼續(xù)下 一步試驗(yàn)。一步試驗(yàn)。 2. LD5010g/kgbw2. LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動 物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗(yàn)。物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗(yàn)。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價49 鼠傷寒沙門氏菌（鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn)）試驗(yàn) 目的：目的：檢測受試物的誘變性，預(yù)測其遺傳危害和潛在致癌作用的可檢

42、測受試物的誘變性，預(yù)測其遺傳危害和潛在致癌作用的可 能性。能性。 時間周期：時間周期：一般為一般為2 2周周 第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備 第二周，染毒，培養(yǎng)第二周，染毒，培養(yǎng)48h48h，讀平板，菌落計(jì)數(shù)，讀平板，菌落計(jì)數(shù) 劑量設(shè)計(jì)：劑量設(shè)計(jì)：決定受試物最高劑量的因素是對細(xì)菌的毒性及其溶解度。決定受試物最高劑量的因素是對細(xì)菌的毒性及其溶解度。 最低劑量為最低劑量為0.2ug/0.2ug/皿；最高劑量為皿；最高劑量為5mg/5mg/皿，或最大溶解劑量，最大皿，或最大溶解劑量，最大 飽和劑量以及最小毒性劑量。可設(shè)五個劑量組，組間距不超過飽和

43、劑量以及最小毒性劑量?？稍O(shè)五個劑量組，組間距不超過5 5倍。倍。 同時設(shè)：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。同時設(shè)：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價50 鼠傷寒沙門氏菌（鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn)）試驗(yàn) 觀察及評價指標(biāo)：觀察及評價指標(biāo)： 各受試物組及三個對照組的四種菌株（各受試物組及三個對照組的四種菌株（TA97aTA97a，TA98TA98， TA100TA100和和TA102TA102）分別在加和不加）分別在加和不加S9S9情況下的菌落計(jì)數(shù)。情況下的菌落計(jì)數(shù)。 結(jié)果評價（摻入法）：結(jié)果評價（摻入法）： 受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落

44、數(shù)受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù) 22未處理對照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù)未處理對照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù) 的陽性反應(yīng)，即可判試驗(yàn)陽性。的陽性反應(yīng)，即可判試驗(yàn)陽性。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價51 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 目的目的： 檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率，以評檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率，以評 價受試物致突變的可能性。價受試物致突變的可能性。 原理原理： 微核是在細(xì)胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進(jìn)入子細(xì)胞微核是在細(xì)胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進(jìn)入子細(xì)胞 形成細(xì)胞核時，仍然留在細(xì)胞質(zhì)中的色單體或染色體的形成細(xì)胞核時

45、，仍然留在細(xì)胞質(zhì)中的色單體或染色體的 無著絲點(diǎn)斷片無著絲點(diǎn)斷片 。末期之后，單獨(dú)形成一個或幾個規(guī)則的。末期之后，單獨(dú)形成一個或幾個規(guī)則的 次核，被包含在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。次核，被包含在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價52 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 時間周期時間周期：一般為：一般為2 2周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口染毒，小鼠經(jīng)口染毒，30h30h給受試物法給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)計(jì)：至少設(shè)置：至少設(shè)置3 3個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴(yán)

46、重中個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴(yán)重中 毒表現(xiàn)和毒表現(xiàn)和/ /或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒 性反應(yīng)。一般取性反應(yīng)。一般取LD50LD50的的1/21/2、1/41/4、1/81/8作為三個劑量。當(dāng)受試作為三個劑量。當(dāng)受試 物的物的LD5010g/kg.bwLD5010g/kg.bw時，最高劑量通常采用時，最高劑量通常采用10g/kg.bw10g/kg.bw。同。同 時設(shè)陽性對照組和溶劑對照組。時設(shè)陽性對照組和溶劑對照組。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價53 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)： 每只動物計(jì)數(shù)

47、每只動物計(jì)數(shù)10001000個嗜多染紅細(xì)胞個嗜多染紅細(xì)胞 ，記錄含有微核的細(xì)，記錄含有微核的細(xì) 胞數(shù)，并計(jì)算微核千分率。觀察嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅胞數(shù)，并計(jì)算微核千分率。觀察嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅 細(xì)胞的比例。細(xì)胞的比例。 結(jié)果評價結(jié)果評價： 受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價54 哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn) 目的目的：檢測受試物對整體動物骨髓細(xì)胞染色體畸變的致：檢測受試物對整體動物骨髓細(xì)胞染色體畸變的致 突變

48、性，以評價其致突變的可能性。突變性，以評價其致突變的可能性。 原理原理：當(dāng)受試物作用于細(xì)胞周期：當(dāng)受試物作用于細(xì)胞周期G1G1期和期和S S期時，可誘發(fā)期時，可誘發(fā) 染色體型畸變，而作用于染色體型畸變，而作用于G2G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸期時則誘發(fā)染色體單體型畸 變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時紡錘體變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時紡錘體 的形成，增加中期分裂相細(xì)胞的比例，并使染色體絲縮的形成，增加中期分裂相細(xì)胞的比例，并使染色體絲縮 短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目 和形態(tài)。和形態(tài)。 保健食品安全性毒理學(xué)

49、檢驗(yàn)及評價55 哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn) 時間周期時間周期：一般為：一般為3 3周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒小鼠或大鼠經(jīng)口染毒2-42-4次，每次間隔次，每次間隔24h24h，在，在 末次染毒末次染毒18-24h18-24h進(jìn)行取材（取材前進(jìn)行取材（取材前2-4h2-4h，腹腔注射秋水，腹腔注射秋水 仙素）。仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價56 哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸

50、變試驗(yàn) 觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)： 每只動物分析每只動物分析100100個中期相細(xì)胞個中期相細(xì)胞 ，每個劑量組不少于，每個劑量組不少于 10001000個。記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變。個。記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果評價結(jié)果評價： 受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng) 關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價57 小鼠精子畸形試驗(yàn)小鼠精子畸形試驗(yàn) 目的目的： 檢測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體檢測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體 內(nèi)生殖

51、細(xì)胞的致突變作用。內(nèi)生殖細(xì)胞的致突變作用。 原理原理： 小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染 色體及色體及X X、Y Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主 要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的 基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及 其蛋白產(chǎn)物的改變。其蛋白產(chǎn)物的改變。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價58 小鼠精子畸形試驗(yàn)小鼠精子畸形試驗(yàn) 時間周期時間周期：一般為：一般為7 7

52、周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5 5天，于首次給樣后的天，于首次給樣后的3535 天處死動物天處死動物 取兩側(cè)附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢取兩側(cè)附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價59 小鼠精子畸形試驗(yàn)小鼠精子畸形試驗(yàn) 觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)： 每只動物檢查每只動物檢查10001000個精子個精子 ，記錄精子畸形數(shù)目及，記錄精子畸形數(shù)目及 類型。類型。 結(jié)果評價結(jié)果評價： 受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反

53、應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價60 小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn)小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn) 目的目的：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評 價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細(xì)胞的致突變性。價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細(xì)胞的致突變性。 原理原理：不同周期的雄性生殖細(xì)胞對化學(xué)物質(zhì)的敏感：不同周期的雄性生殖細(xì)胞對化學(xué)物質(zhì)的敏感 性不同，多數(shù)情況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必性不同，多數(shù)情況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必 須經(jīng)過須經(jīng)過DNADNA復(fù)制期，故在前細(xì)線期處理。第復(fù)制期，故在前細(xì)線期處理

54、。第121214d14d 采樣，以觀察作用于前細(xì)線期引起的精母細(xì)胞染色采樣，以觀察作用于前細(xì)線期引起的精母細(xì)胞染色 體畸變效應(yīng)。體畸變效應(yīng)。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價61 小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn)小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn) 時間周期時間周期：一般為：一般為7 7周周 3-53-5天適應(yīng)期天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5 5天，與首次給樣后天，與首次給樣后 的的12-1412-14天處死動物取材，（取材前天處死動物取材，（取材前6h6h，腹腔注，腹腔注 射射 秋水仙素）。取兩側(cè)睪丸，收集生殖細(xì)胞，滴片，秋水仙素）。取兩側(cè)睪丸，收集生殖細(xì)胞，滴片， 染色，鏡檢染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)

55、計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價62 小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn)小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn) 觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)： 每只動物分析每只動物分析100100個中期相細(xì)胞個中期相細(xì)胞 ，記錄染色體數(shù)目，記錄染色體數(shù)目 及結(jié)構(gòu)的改變（包括斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常及結(jié)構(gòu)的改變（包括斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常 染色體單價體、性染色體單價體等）。染色體單價體、性染色體單價體等）。 結(jié)果評價結(jié)果評價： 受試物組與對照組的斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常受試物組與對照組的斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常 染色體單價體、性染色體單價體等差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意染色體單價體、性染色體單價體等差

56、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價63 遺傳毒性試驗(yàn)組合遺傳毒性試驗(yàn)組合 試驗(yàn)結(jié)果的判定試驗(yàn)結(jié)果的判定： 如三項(xiàng)致突變試驗(yàn)（如三項(xiàng)致突變試驗(yàn)（AmesAmes試驗(yàn)，微核或骨髓細(xì)胞染試驗(yàn)，微核或骨髓細(xì)胞染 色體畸變試驗(yàn)，精子畸形或睪丸染色體畸變試驗(yàn)）色體畸變試驗(yàn)，精子畸形或睪丸染色體畸變試驗(yàn)） 中，體外或體內(nèi)有一項(xiàng)或以上陽性，一般應(yīng)放棄該中，體外或體內(nèi)有一項(xiàng)或以上陽性，一般應(yīng)放棄該 受試物用于保健食品。受試物用于保健食品。 如三項(xiàng)試驗(yàn)均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性如三項(xiàng)試驗(yàn)均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性 試驗(yàn)。試驗(yàn)。 保健食品安全性毒理

57、學(xué)檢驗(yàn)及評價64 30天喂養(yǎng)試驗(yàn)天喂養(yǎng)試驗(yàn) 目的目的：急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，此試驗(yàn)可進(jìn)一步了：急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，此試驗(yàn)可進(jìn)一步了 解毒性作用，特別是觀察對生長發(fā)育的影響，并可解毒性作用，特別是觀察對生長發(fā)育的影響，并可 初步估計(jì)最大觀察到的無作用劑量，估計(jì)亞慢性攝初步估計(jì)最大觀察到的無作用劑量，估計(jì)亞慢性攝 入的危害性。入的危害性。 原理原理： 以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實(shí)驗(yàn)以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實(shí)驗(yàn) 動物，連續(xù)動物，連續(xù)3030天。染毒期間每日密切觀察動物的毒天。染毒期間每日密切觀察動物的毒 性反應(yīng)，染毒結(jié)束后進(jìn)行大體解剖、血生化及病理性反應(yīng)，染毒結(jié)束后進(jìn)行大體解剖、血生

58、化及病理 檢查，以此觀察重復(fù)喂食不同劑量的受試物對動物檢查，以此觀察重復(fù)喂食不同劑量的受試物對動物 引起的有害作用。引起的有害作用。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價65 30天喂養(yǎng)試驗(yàn)天喂養(yǎng)試驗(yàn) 時間周期時間周期：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為2 2月月 3-53-5天，大鼠適應(yīng)期天，大鼠適應(yīng)期 3030天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀察期天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀察期 再進(jìn)行大體解剖、血液、生化、器官病再進(jìn)行大體解剖、血液、生化、器官病 理檢查。理檢查。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價66 30天喂養(yǎng)試驗(yàn)天喂養(yǎng)試驗(yàn) 劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)計(jì)：至少設(shè)三個劑量組和一個對照組。高劑量應(yīng)：至少設(shè)三個劑

59、量組和一個對照組。高劑量應(yīng) 能引起動物明顯毒效應(yīng)但不造成動物死亡。低劑量應(yīng)不能引起動物明顯毒效應(yīng)但不造成動物死亡。低劑量應(yīng)不 出現(xiàn)任何毒作用，同時在這二劑量之間設(shè)幾個中間劑量出現(xiàn)任何毒作用，同時在這二劑量之間設(shè)幾個中間劑量 組。組。 對于能獲得對于能獲得LD50LD50的受試物的受試物：最高劑量為：最高劑量為10102525 的的LD50LD50，最低劑量組至少為人可能攝入量的，最低劑量組至少為人可能攝入量的3 3倍。倍。 對于不能獲得對于不能獲得LD50LD50的受試物的受試物：最高劑量為人可能攝：最高劑量為人可能攝 入量的入量的100100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻倍，或按最大

60、灌胃劑量或在飼料中的最大摻 入量。入量。 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評價67 30天喂養(yǎng)試驗(yàn)天喂養(yǎng)試驗(yàn) 觀察及評價指標(biāo)觀察及評價指標(biāo)： 一般情況觀察一般情況觀察：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每周：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每周 1 1次體重及次體重及2 2次食物攝入量，計(jì)算食物利用率。次食物攝入量，計(jì)算食物利用率。 血液學(xué)指標(biāo)血液學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測定血紅蛋白、紅和白細(xì)胞總數(shù)及：喂養(yǎng)結(jié)束后測定血紅蛋白、紅和白細(xì)胞總數(shù)及 分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)。分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)。 生化學(xué)指標(biāo)生化學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿：喂養(yǎng)結(jié)束