專(zhuān)題-2課題1《微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)》導(dǎo)學(xué)案

1、專(zhuān)題-2課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)導(dǎo)學(xué)案班級(jí)：_ _ 組 姓名_ 教師評(píng)價(jià)_專(zhuān)題 2課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)【課程標(biāo)準(zhǔn)】具體內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)：進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng)活動(dòng)建議： 用大腸桿菌為材料進(jìn)行平面培養(yǎng)，分離菌落【學(xué)習(xí)目標(biāo)】知識(shí)目標(biāo)：1.舉例說(shuō)明有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)2.概述無(wú)菌操作技術(shù)包括的主要內(nèi)容能力目標(biāo)：掌握純化大腸桿菌的基本操作【學(xué)習(xí)重難點(diǎn)】重點(diǎn)：說(shuō)出有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí) 難點(diǎn)：微生物培養(yǎng)中的有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作【自主探究案】一、整體感知 （一）培養(yǎng)基1.按照配置成的狀態(tài),培養(yǎng)基的種類(lèi)包括 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基等。2.培養(yǎng)基的化學(xué)成分一般都含有 、 、 、 四類(lèi)營(yíng)養(yǎng)成分。3.在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)

2、上，培養(yǎng)基還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì) 、 _ 以及 等的要求。例如：培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加 ；培養(yǎng)霉菌時(shí)需要將培養(yǎng)基的PH調(diào)至 ；培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要將培養(yǎng)基的PH調(diào)至 ；培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供_的條件。（二）無(wú)菌技術(shù)1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 。避免雜菌污染的方法主要包括以下四個(gè)內(nèi)容：對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的 、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和 。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 。 為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在_附近進(jìn)行。 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與_相接觸。 2.消毒和滅菌（1）消毒是指使用_僅殺死物體表面或_的部分微生物（不包括_和_）。常用的消毒方法有

3、、 。此外，人們也常使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用 、 等。此外，實(shí)驗(yàn)室里還用 進(jìn)行消毒。（2）滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體_的微生物，包括芽孢和孢子。常用的滅菌方法有 、 、 ，二、實(shí)驗(yàn)操作： 1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 倒平板,往往在滅菌前還需要_2.純化大腸桿菌微生物接種的方法中最常用的是 和 。（1）平板劃線法是指接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面_的操作，將聚集的菌種_到培養(yǎng)基的表面。(2)稀釋涂布平板法是指將菌液進(jìn)行一系列的_，然后將不同_的菌液分別涂布在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度 的菌液時(shí)，聚集在一起的微生物將被分散成_，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的_，它在生態(tài)學(xué)上屬

4、于什么單位？_.三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.如果接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落顏色形狀大小基本一致，說(shuō)明接種符合要求。2.若培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中_未達(dá)到要求。3._(作為對(duì)照的培養(yǎng)基)，在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)了菌落，則說(shuō)明培養(yǎng)基_不徹底，實(shí)驗(yàn)失敗。四、菌種的保存1.對(duì)于頻繁使用的菌種，我們可以采用 法；利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保 存在4冰箱中，每36個(gè)月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)_。2.對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用 法；溫度為_(kāi)。【深入學(xué)習(xí)】探究一：消毒與滅菌1、無(wú)菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是什么？2、利用干熱滅菌箱對(duì)玻璃器皿滅菌時(shí)物品不能擺得太擠，目的是什么？3、在制

5、備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的稱(chēng)量操作中，動(dòng)作要迅速，原因是什么？4、溶化操作中需要不斷用玻璃棒攪拌的目的是什么？探究二：有關(guān)“倒平板”操作1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到500C左右，才能用來(lái)倒平板。你用什么方法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？探究三：有關(guān)“平板劃線法”操作1. 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？3.在作

6、第二次以及其后的劃線操作是為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？探究四：有關(guān)“稀釋涂布平板法”操作1、 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行，結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，涂布平板操作的第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？2、培養(yǎng)12h和24h后的菌落大?。烤浞植嘉恢?？原因？3、在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落是什么原因？【遷移應(yīng)用】1.下列措施中不屬于消毒的是（ ）A.酒精擦拭雙手 B.向水中通入少量Cl2 C.皮膚受傷處涂紫藥水 D.灼燒接種環(huán)2.有關(guān)平板劃線操作的敘述，正確的是（ ）A.使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過(guò)程中不再滅菌B.打開(kāi)含菌種的試管需通過(guò)火焰滅菌，取出菌種

7、后需馬上塞上棉塞C.把皿蓋打開(kāi)，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D.最后將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3.下列有關(guān)平板劃線接種法的操作錯(cuò)誤的是（ ）A.將接種環(huán)放在火焰上燃燒 B.將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液 C.蘸取菌液和劃線要在火焰旁進(jìn)行 D. 接種環(huán)劃線要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連4.關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯(cuò)誤的是（ ）A.操作順序?yàn)橛?jì)算、稱(chēng)量、溶化、倒平板、滅菌 B.將稱(chēng)好的牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同放入燒杯C.等培養(yǎng)基冷卻至500C左右時(shí)進(jìn)行倒平板 D.將平板冷卻凝固5-10分鐘后將平板倒過(guò)來(lái)放置5.細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程分別采用了高壓蒸汽、酒精、

8、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌（ ）A. 接種環(huán)、手、培養(yǎng)基 B.高壓鍋、手、接種環(huán) C.培養(yǎng)基、手、接種環(huán) D.接種環(huán)、手、高壓鍋6.有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述錯(cuò)誤的是()A.首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋 B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C.適宜條件下培養(yǎng) D.結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落7.為了保持菌種的純凈需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是()A.對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法 B.臨時(shí)保藏的菌種一般接種到試管的斜面培養(yǎng)基上 C.臨時(shí)保藏的菌種容易被污染或產(chǎn)生變異 D.對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用低溫-4

9、0C保藏的方法8.（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。（2）在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行 處理（消毒、滅菌），其中對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌常用的方法是；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗。（3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的。（4）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是 。（6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)

10、處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。9.炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對(duì)炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的宿主專(zhuān)一性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確診。（1）細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。（2）細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程如下圖所示。對(duì)配制的液體培養(yǎng)基等需采取 方法滅菌；實(shí)驗(yàn)所用液體培養(yǎng)基的碳源為 （填“無(wú)機(jī)碳”或“有機(jī)碳”）。挑選可疑菌落制片后，用 觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。接種可疑菌后，35培養(yǎng)24小時(shí)，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是 。對(duì)照組試管中應(yīng)加入 ，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6小時(shí)后，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組 （填“高”或“低”）

11、，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。對(duì)排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，與產(chǎn)生抗體相關(guān)的細(xì)胞除T細(xì)胞、B細(xì)胞外，還有 。專(zhuān)題 2課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)導(dǎo)學(xué)案答案：【自主探究案】一、（一）1、液體 固體 2、水 碳源 氮源 無(wú)機(jī)鹽 3、PH 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 氧氣 維生素 酸性 中性或微堿性 無(wú)氧（二）1、防止外來(lái)雜菌的污染 空間 消毒 滅菌 酒精燈火焰 周?chē)奈锲?2.較為溫和的物理或化學(xué)方法 內(nèi)部 芽孢 孢子 煮沸消毒法 巴氏消毒法 酒精擦拭雙手 氯氣消毒水源 紫外線 內(nèi)外所有 灼燒滅菌 干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌 二、1、計(jì)算稱(chēng)量溶化滅菌 調(diào)PH2、平

12、板劃線法 稀釋涂布平板法 連續(xù)劃線 逐步稀釋分散 梯度稀釋 稀釋度 足夠高 單個(gè)細(xì)胞 菌落 種群 三、 無(wú)菌操作 未接種的培養(yǎng)基 滅菌四、臨時(shí)保藏 保存時(shí)間較短，容易發(fā)生污染和變異 甘油管藏 -20【合作探究案】一、1、防止感染實(shí)驗(yàn)操作者 。2、避免妨礙熱空氣流通。3、防止牛肉膏吸收空氣中水分。防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。二、1、可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2、通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3、平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4、不能?？諝庵须s菌會(huì)在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基。三、1、消滅接種環(huán)上的微生物；消滅接種環(huán)上殘留菌種防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作者2、防止高溫殺死菌種3、劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。四、1、應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周?chē)坏鹊取?、大小不同；菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長(zhǎng)，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌