霍亂弧菌彎曲菌不發(fā)酵G桿菌

弧菌科一群菌體短小、彎曲成弧形或直桿狀的革蘭陰性細菌兼性厭氧，發(fā)酵葡萄糖，許多菌株生長需要2%~3%氯化鈉大多數(shù)菌株氧化酶陽性具有一端單一鞭毛、運動迅速弧菌科細菌廣泛分布于自然界，以水中最為多見。其中有一些種對人類致病。

當前第1頁\共有51頁\編于星期五\13點霍亂弧菌一、臨床意義是引起腸道烈性傳染病——霍亂的病原體。有兩個主要生物型：古典生物型、EL·Tor生物型。經(jīng)消化道傳染，通過霍亂腸毒素致病當前第2頁\共有51頁\編于星期五\13點小腸上皮細胞膜上激活腺苷酸環(huán)化酶細胞內(nèi)ATPCAMP（濃度升高）腸腺分泌大量液體和電介質(zhì)腔內(nèi)液體增多劇烈嘔吐，腹瀉，一“米泔樣”水、電介質(zhì)丟失休克、酸堿中毒霍亂腸毒素A1片段當前第3頁\共有51頁\編于星期五\13點二、微生物學特性

形態(tài)與染色

革蘭染色陰性弧形或逗點狀周身菌毛，有莢膜，無芽胞單鞭毛，運動活潑直接染色鏡檢，可見排列如“魚群”狀；懸滴觀察，可見穿梭運動當前第4頁\共有51頁\編于星期五\13點當前第5頁\共有51頁\編于星期五\13點培養(yǎng)兼性厭氧營養(yǎng)要求不高耐堿不耐酸喜pH8.0-9.0堿性環(huán)境pH8.4堿性蛋白胨水（選擇培養(yǎng)基）

生化反應發(fā)酵甘露醇及蔗糖，緩慢發(fā)酵乳糖霍亂紅反應陽性，不同生物型生化反應不同當前第6頁\共有51頁\編于星期五\13點三、微生物檢驗標本采集米泔樣排泄物涂片鏡檢觀察“魚群樣”運動分離培養(yǎng)堿性蛋白胨水當前第7頁\共有51頁\編于星期五\13點分解色氨酸還原硝酸鹽靛基質(zhì)亞硝酸鹽亞硝酸靛基質(zhì)加數(shù)滴濃硫酸紅色反應鑒別：●

霍亂紅反應當前第8頁\共有51頁\編于星期五\13點0.5%去氧膽酸鈉溶液霍亂弧菌混勻成濃懸液懸液由混變清，同時變粘稠用接種環(huán)挑取，有粘絲形成1分鐘●粘絲試驗當前第9頁\共有51頁\編于星期五\13點0/129敏感試驗:O1和非O1群敏感雞紅細胞凝集試驗：古典生物型陽性，EL·Tor生物型陰性多粘菌素B敏感試驗：古典生物型敏感，EL·Tor生物型不敏感第Ⅲ、Ⅴ組噬細菌體敏感試驗：古典生物型可被第Ⅳ組裂解，EL·Tor生物型可被第Ⅴ組裂解抗生素敏感試驗抗體檢測當前第10頁\共有51頁\編于星期五\13點當前第11頁\共有51頁\編于星期五\13點（一）臨床意義具有嗜鹽性（halophilic）存在于近海的海水、海底的沉淀物、魚蝦類和貝殼及鹽漬加工的海產(chǎn)品中主要引起食物中毒和急性腹瀉是我國沿海地區(qū)及海島食物中毒的最常見病原菌胃腸炎臨床表現(xiàn)有：惡心、嘔吐、腹痛、低熱、寒戰(zhàn)等。腹瀉呈水樣便，偶爾血性，恢復較快，病程2~3天，通常為自限性還可引起傷口感染和菌血癥副溶血性弧菌

當前第12頁\共有51頁\編于星期五\13點（二）生物學特性1.形態(tài)革蘭陰性桿菌，有鞭毛（極單毛），無莢膜，無芽胞2.抗原結構耐熱的菌體（O）抗原，具有群特征性，副溶血性弧菌的O抗原有13種鞭毛抗原，不耐熱，無型特異性當前第13頁\共有51頁\編于星期五\13點（三）微生物檢驗當前第14頁\共有51頁\編于星期五\13點第十二章

彎曲菌及螺桿菌當前第15頁\共有51頁\編于星期五\13點第一節(jié)彎曲菌屬彎曲菌屬（Campylobacter）是一類呈逗點狀或S形的革蘭陰性菌，廣泛分布于動物界其中有些可引起動物與人類的腹瀉、胃腸炎和腸道外感染等疾病對人致病有空腸彎曲菌、大腸彎曲菌、胎兒彎曲菌等，其中空腸彎曲菌是腹瀉的常見病原菌當前第16頁\共有51頁\編于星期五\13點生物學特性革蘭陰性，菌體彎曲呈逗點、弧形、S形、螺旋形或典型的海鷗展翅（gullwing）形。陳舊培養(yǎng)物可呈球形或長絲狀。無芽胞?？乖煞钟芯w(O)抗原、熱不穩(wěn)定抗原(HL系統(tǒng))和鞭毛(H)抗原。最佳氣體環(huán)境為含5%氧氣、10%二氧化碳及85%氮氣抵抗力不強，室溫可迅速死亡。對熱敏感，標本在4℃冰箱可保存3周。當前第17頁\共有51頁\編于星期五\13點微生物檢驗當前第18頁\共有51頁\編于星期五\13點第二節(jié)螺桿菌屬螺桿菌屬（Helicobacter）：細菌有20余種，有9個種可從人體分離到能引起人類疾病菌種幽門螺桿菌(H.pylori)、H.fennelliae和H.cinaedi。幽門螺桿菌與萎縮性胃炎，胃、十二指腸潰瘍和胃癌等疾病相關其他螺桿菌也可感染胃粘膜，但少見。本章主要敘述幽門螺桿菌。當前第19頁\共有51頁\編于星期五\13點諾貝爾生理學和醫(yī)學獎1983年Marshall和Warren首先用微需氧技術從慢性胃炎、消化性潰瘍患者的胃粘膜分離出彎曲狀的細菌，并證明該細菌感染胃部會導致胃炎、胃潰瘍和十二指腸潰瘍，由此獲得了2005年諾貝爾生理學和醫(yī)學獎當前第20頁\共有51頁\編于星期五\13點一、分類最初因形態(tài)、分離培養(yǎng)方法與彎曲菌屬細菌相似，又僅從胃標本中分離到，被稱作胃彎曲菌樣細菌由于此菌在胃竇部多見，且形態(tài)、培養(yǎng)及某些生化特性與彎曲菌屬相似，DNAG+Gmol%也在彎曲菌屬范圍內(nèi)，故命名為幽門彎曲菌(campylobacterpylori)1989年Goodwin等根據(jù)該菌的超微結構、形態(tài)、菌體脂肪酸組成、生長特征和酶的活力、16SrRNA序列等，提出該菌不應歸于彎曲菌屬，后稱為幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,HP)當前第21頁\共有51頁\編于星期五\13點臨床意義HP感染非常普遍。該菌為一種高度適應或只能生活于胃粘膜的細菌，菌體周圍微環(huán)境的pH值為7.0。胃竇為其定植的最佳部位HP感染與慢性淺表性胃炎或萎縮性胃炎之間的病因關系已充分確立。流行病學資料表明胃癌發(fā)病率在一些HP感染率高的人群中較高當前第22頁\共有51頁\編于星期五\13點生物學特性菌體細長彎曲呈螺形、S形或海鷗形。菌體一端或兩端可有多根帶鞘鞭毛，運動活潑。菌體長2.5~4.0μm，寬0.5~1.0μm。革蘭染色陰性，有動力。在胃粘膜上皮細胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。當前第23頁\共有51頁\編于星期五\13點固體培養(yǎng)基上生長時，除典型形態(tài)外，有時可出現(xiàn)桿狀或圓球狀。電鏡下菌體的一端可伸出2~6條帶鞘鞭毛。鞭毛長為菌體1~1.5倍，粗約30nm。鞭毛在運動中起推進器作用，在定居過程中起錨住作用。當前第24頁\共有51頁\編于星期五\13點為微需氧菌，在5%O2、10%CO2、85%N2的環(huán)境中生長良好。最適生長溫度為37℃。相對濕度在98%以上為宜營養(yǎng)要求較高，一般需含血液或血清才能生長，常用的培養(yǎng)基有哥倫比亞血瓊脂、心腦浸液血瓊脂、布氏菌血培養(yǎng)基等當前第25頁\共有51頁\編于星期五\13點HP生長緩慢，需經(jīng)48~72h才長出菌落圓形孤立的小菌落，無色半透明呈露滴狀，直徑約0.5~1mm，血平板上有輕度溶血。沿接種線擴散生長，融合成片，扁平，無色半透明HP生化反應不活躍，不能利用糖類；當前第26頁\共有51頁\編于星期五\13點具有大量高活力的胞外脲酶，產(chǎn)生的脲酶相當于普通變形桿菌的20~70倍。此外還產(chǎn)生氧化酶、觸酶、堿性磷酸酶、α-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和DNA酶等pH降至3.5以下時活力明顯減弱生理濃度的膽鹽可抑制HP生長當前第27頁\共有51頁\編于星期五\13點四、微生物檢驗當前第28頁\共有51頁\編于星期五\13點（二）微生物檢驗標本采集經(jīng)胃鏡用活檢鉗于近幽門部、胃竇部或病變鄰近處取材，最好采取多位點樣品應立即行床邊接種或放入20%葡萄糖運送液0.5ml內(nèi)，4℃中保存不超過5h受檢者術前應停服鉍劑或抗菌藥物一周當前第29頁\共有51頁\編于星期五\13點（三）標本直接檢查1.直接顯微鏡檢查涂片或懸滴觀察將活檢組織研碎，涂片或懸滴，置相差或暗視野顯微鏡下可見HP形態(tài)典型、運動活潑直接涂片染色鏡檢將活檢粘膜組織在玻片上涂抹后，經(jīng)革蘭染色或單染色后鏡檢，如發(fā)現(xiàn)典型形態(tài)的HP即可診斷當前第30頁\共有51頁\編于星期五\13點組織切片染色鏡檢組織塊經(jīng)福馬林固定、切片經(jīng)W-S銀染色、姬姆薩染色、HE染色和熒光染色等染色后鏡檢HP，以W-S銀染效果最好免疫組化用免疫組化法可檢出胃粘膜組織切片中的完整HP及破碎的菌體或抗原成分間接免疫熒光法（IIF）當前第31頁\共有51頁\編于星期五\13點2．快速脲酶試驗

Christensen尿素培養(yǎng)基將小塊的活檢組織塊放入裝有培養(yǎng)基的瓶內(nèi)，如培養(yǎng)基由黃變?yōu)榧t色為陽性。提示由該菌產(chǎn)生的高活性的脲酶已將尿素分解，結果常在幾分鐘至24小時內(nèi)得到當前第32頁\共有51頁\編于星期五\13點3．核酸檢測

現(xiàn)有的方法是從克隆的HP染色體DNA的特異性片段中構建引物從HP脲酶A基因序列中構建引物用PCR擴增結合限制性內(nèi)切酶多態(tài)性分析技術鑒別HP可檢測出不能分離培養(yǎng)的HP當前第33頁\共有51頁\編于星期五\13點4．糞便標本抗原檢測

可采用ELISA方法直接測定糞便標本中的抗原。適用于不能進行13C或14C標記尿素呼吸試驗或胃鏡檢查的患者當前第34頁\共有51頁\編于星期五\13點（四）分離培養(yǎng)與鑒定

分離培養(yǎng)宜用新鮮配制的選擇培養(yǎng)基。將標本的粘膜面在平板上反復涂擦，或?qū)吮狙兴楹笥醚心グ粽喝∵m量勻漿接種將接種后的平板放入微需氧和98%以上濕度的環(huán)境培養(yǎng)當前第35頁\共有51頁\編于星期五\13點鑒定主要根據(jù)菌落特征、形態(tài)和染色性；37℃生長；氧化酶和觸酶均陽性、脲酶強陽性；對萘啶酸耐藥、頭孢噻吩敏感；在1%甘油和1%膽鹽中均不生長。當前第36頁\共有51頁\編于星期五\13點（五）抗體檢測用血清學方法檢測患者體內(nèi)的抗HP抗體（IgG、IgM和IgA）系最常用的無創(chuàng)傷性診斷HP感染的方法目前已有補體結合試驗、膠乳凝集試驗及ELISA等，而以ELISA應用最為廣泛，現(xiàn)有商品化的ELISA、膠乳凝集試驗試劑盒用于檢測患者血清中HP的菌體抗體或脲酶抗體當前第37頁\共有51頁\編于星期五\13點（六）13C或14C標記尿素呼吸試驗基本方法是患者禁食一夜，進食用13C或14C標記的尿素，HP產(chǎn)生的脲酶分解尿素釋放帶有同位素的CO2，因此可測定患者呼氣中釋放帶有同位素的CO2量，如CO2含量超過標準，提示有HP存在。該方法敏感性與特異性均很好，只是需要特殊的同位素測定儀。當前第38頁\共有51頁\編于星期五\13點第九章非發(fā)酵革蘭陰性桿菌概念：一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌。這一章節(jié)中講述的細菌大多為條件致病菌，某些菌種是引起醫(yī)院感染的病原體，如：銅綠假單胞菌不動桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬黃桿菌屬軍團菌屬（人類的致病菌）當前第39頁\共有51頁\編于星期五\13點假單胞菌屬分布廣泛，人類不發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70％～80％，主要為銅綠假單胞菌，其他較為常見的菌種有嗜麥芽窄食單胞菌、鮑曼不動桿菌等

第一節(jié)假單胞菌屬(Pseudomonas)當前第40頁\共有51頁\編于星期五\13點微生物特性革蘭陰性、無芽胞、專性需氧有端鞭毛或叢鞭毛生長溫度范圍廣，最適生長溫度為35℃產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素、膿玉紅素、熒光素、膿褐素對理化因素耐受性較強，對多種抗生素耐藥

當前第41頁\共有51頁\編于星期五\13點二、銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)1.臨床意義：銅綠假單胞菌在自然界分布較為廣泛，因此很容易污染器械而造成感染機會

當前第42頁\共有51頁\編于星期五\13點2.生物學特性革蘭陰性，長短不一單鞭毛生長溫度25～42℃氧化酶陽性還原硝酸鹽、分解尿素、精氨酸酶陽性當前第43頁\共有51頁\編于星期五\13點銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)血平板上毛玻璃樣，金屬光澤，生姜味可產(chǎn)生多種色素：熒光素與綠膿素當前第44頁\共有51頁\編于星期五\13點銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)綠膿素當前第45頁\共有51頁\編于星期五\13點1.肉浸湯2.胰化酪蛋白大豆肉湯37℃培養(yǎng)18－24h挑選菌落鑒定分型血清學噬菌體綠膿素初步鑒定菌落特征、色素、綠膿素：+涂片、革蘭染色、氧化酶：+最后鑒定生化反應腦脊液、胸（腹）水、膿液、分泌物、痰、尿液、十二指腸引流液血液、環(huán)境用品分離培養(yǎng)：直接涂片革蘭染色糞便血瓊脂平板SS、麥康凱分離培養(yǎng)：37℃如生長銅綠假單胞菌檢驗程序當前第46頁\共有51頁\編于星期五\13點

分類軍團菌屬(Legionella)屬于軍團菌科（Legionellaceae）常見的與人類疾病有關的軍團菌：嗜肺軍團菌（Legionellapneumophila）米克戴德軍團菌（L.mic