分子生物學知識點歸納

1、分子生物學1. dna勺一級結(jié)構(gòu)：指 dna分子中核甘酸的排列順序。2. dna勺二級結(jié)構(gòu)：指兩條dnaii鏈形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)、三股螺旋結(jié)構(gòu)以及四股螺旋結(jié)構(gòu)。3. dna勺三級結(jié)構(gòu)：雙鏈 dna進一步扭曲盤旋形成的超螺旋結(jié)構(gòu)。4. dna的甲基化：dna的一級結(jié)構(gòu)中，有一些堿基可以通過加上一個甲基而被修飾，稱為 dna的甲基化。甲基化修飾在原核生物dna中多為對一些酶切位點的修飾，其作用是對自身dna產(chǎn)生保護作用。真核生物中的dna甲基化則在基因表達調(diào)控中有重要作用。真核生物 dna 中，幾乎所有的甲基化都發(fā)生于二核苷酸序列 5 -cg-3 的 c 上，即 5 -mcg-3 .5. cg島：基

2、因組dnm大部分cg二核甘酸是高度甲基化的，但有些成簇的、穩(wěn)定的非甲基 化白cg小片段，稱為cg島，存在于整個基因組中。cg島特點是g+c含量高以及大部 分cg二核甘酸缺乏甲基化。6. dnaz螺旋結(jié)構(gòu)模型要點：(1) dna是反向平行的互補雙鏈結(jié)構(gòu)。(2) dna鏈是右手螺旋結(jié)構(gòu)。螺旋每旋轉(zhuǎn)一周包含了10對堿基，螺距為3.4nm. dna雙鏈說形成的螺旋直徑為 2 ns每個堿基旋轉(zhuǎn)角度為36度。dnaz螺旋分子表面存在一個大溝和一個小溝，目前認為這些溝狀結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)和dna間的識別有關(guān)。(3) 疏水力和氫鍵維系 dna雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。dna雙鏈結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定橫向依靠兩條鏈互補堿基間的氫鍵維系，

3、縱向則靠堿基平面間的疏水性堆積力維持。7. 核小體的組成：染色質(zhì)的基本組成單位被稱為核小體，由 dn解口 5種組蛋白h1,h2a,h2b,h3和h4共同 構(gòu)成。各兩分子的 h2a,h2b,h3和h4共同構(gòu)成八聚體的核心組蛋白， dna雙螺旋纏繞在 這一核心上形成核小體的核心顆粒。核小體的核心顆粒之間再由dna和組蛋白h1構(gòu)成的連接區(qū)連接起來形成串珠樣結(jié)構(gòu)。8. 順反子(cistron ):由結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄生成的rna序列亦稱為順反子。9. 單順反子( monocistron ) ：真核生物的一個結(jié)構(gòu)基因與相應的調(diào)控區(qū)組成一個完整的基因，即一個表達單位，轉(zhuǎn)錄物為一個單順反子。從一條mrnar能翻譯

4、出一條多肽鏈。10. 多順反子(polycistron):原核生物具有操縱子結(jié)構(gòu)，幾個結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄在一條mrna鏈上，因而轉(zhuǎn)錄物為多順反子。每個順反子分別翻譯出各自的蛋白質(zhì)。11. 原核生物 mrna吉構(gòu)的特點：(1)原核生物mrnafc往是多順反子白1即每分子mrna?有幾種蛋白質(zhì)的遺傳信息。(2) mrna 5端無帽子結(jié)構(gòu)，3 端無多聚a尾。(3) mrnar般沒有修飾堿基。(12) 核生物 mrna吉構(gòu)的特點：( 1 ) 5端有帽子結(jié)構(gòu)。即7 甲基鳥嘌呤三磷酸鳥苷m7gpppn。( 2 ) 3端大多數(shù)帶有多聚腺苷酸尾巴。( 3 )分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化。( 4 )分子中有編碼

5、區(qū)和非編碼區(qū)。14 trna 的結(jié)構(gòu)特點(1) trna是單鏈小分子。(2) trna含有很多稀有堿基。(3) 3) trna 的 5 端總是磷酸化，5末端核苷酸往往是pg.(4) trna的3 端是cca oh序列。是氨基酸的結(jié)合部位。(5) trna的二級結(jié)構(gòu)形狀類似于三葉草，含二氫尿喀咤環(huán)(d環(huán))、t環(huán)和反密碼子環(huán)。(6) trna的三級結(jié)構(gòu)是倒 l型。d環(huán)和t環(huán)在l的拐角上。15 rrna（1） rrna是細胞內(nèi)含量最豐富的rna它們與核糖體蛋白共同構(gòu)成核糖體，后者是蛋白質(zhì)合成的場所。（2）核糖體和rrna一般都用沉降系數(shù) s表示大小。原核生物核糖體白沉降系數(shù)為70s,由50s和30s

6、兩個大小亞基組成，30s小亞基含有16srrna和21種蛋白質(zhì)。50s大亞基含有23s和5srrna以及34種蛋白質(zhì)。真核生物沉降系數(shù)為80s,由大小亞基組成。40s小亞基含有 18srrna和30多種蛋白質(zhì)。60srrna含有5s、5.8s 和 28srrna 以及大約 45 種蛋白質(zhì)。16 .核酶（ribozyme ）:某些rna子能催化自身或其他rna分子進行化學反應，即具有酶樣的催化活性，這類具有催化活力的rn麗為核酶。核酶分為3類：（1）異體催化的剪切型。（ 2）自體催化的剪切型（ 3 ）內(nèi)含子的自我剪切型。17 .核內(nèi)不均一 rna（hnrna：真核生物轉(zhuǎn)錄生成的mrnatf體即為

7、hnrna這類 mrnatf體必須經(jīng)過一系列的加工處理才能變成成熟的mrna加工過程的主要環(huán)節(jié)包括：（1） 5 端加帽（ 2 ） 3 端加尾（ 3）內(nèi)含子的切除和外顯子的連接（ 4）分子內(nèi)部的甲基化修飾（ 5 ）核苷酸序列的編輯作用。18 . mirna是一種單鏈小分子 rna廣泛存在于真核生物中，是一組不編碼蛋白質(zhì)的短序列 rna其特點就是高度的保守性、時序性和組織特異性。研究表明mirna可能決定組織和 細胞的功能特異性，也可能參與了復雜的基因調(diào)控，對組織的發(fā)育起重要作用。19 . sirna:小干擾rna是人工合成白短的雙鏈rna它可抑制細胞內(nèi)特定基因的表達，導致轉(zhuǎn)錄后基因失活。 sir

8、na 是 rnai 的重要工具。20 .反義rna堿基序列正文?和有意義mrnat補的rna稱為反義rna這類rna也是單鏈rna可與mrna1已對形成雙鏈，最終抑制mrna乍為模板進行翻譯，這是反義rnafe要的調(diào)控功能。21順式作用元件（ cis-acting element ） ：真核生物基因中的調(diào)控序列被稱為順式作用元件 , 包括：啟動子和上游啟動子元件，增強子，反應元件， poly（a） 加尾信號。22 .增強子（enhancer）：是一段短的 dna列，其中含有多個作用元件，可以特異性與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，增強基因的轉(zhuǎn)錄活性。增強子可以位于基因的任何位置，增強子的功能與其位置和方向無關(guān)。

9、23基因：是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位，是指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或rna序列信息及表達這些信息所必需的全部核苷酸序列。一個基因不僅僅包括編碼蛋白質(zhì)肽鏈或rna的核酸序列，還包括保證轉(zhuǎn)錄所必需的調(diào)控序列及位于編碼區(qū)5 端上游的非編碼序列，內(nèi)含子和位于編碼區(qū)3 端下游的非編碼序列。24基因組：泛指一個細胞或病毒的全部遺傳信息。在真核生物體中，基因組是指一套完整單倍體dn解口線粒體dna勺全部序列，既包括編碼序列，也包括非編碼序列。25 .病毒基因組包括：單鏈正股rna單鏈負股 rna雙鏈rna雙鏈dna單鏈正股 dna26 . sarsb狀病毒屬于：單鏈正股rnaw毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒屬于：單

10、鏈正股rnaw毒。27逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組包括三個結(jié)構(gòu)基因：gag、 pol 和 env 。分別編碼： 核心蛋白、逆轉(zhuǎn)錄酶和膜蛋白 。28操縱子（operon ） : 是指數(shù)個功能上相關(guān)聯(lián)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動子和操縱序列）和下游的轉(zhuǎn)錄終止信號所構(gòu)成的基因表達單位，所轉(zhuǎn)錄的rnw多順反子。29.質(zhì)粒：是存在于細菌染色體之外的、具有自主復制能力的環(huán)狀雙鏈dna分子。30質(zhì)粒的不相容性：具有相同復制起始位點和分配區(qū)的兩種質(zhì)粒不能共存于一個宿主菌，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒的不相容性。31 .轉(zhuǎn)座因子：既可移動的基因成分，是指能在一個dna子內(nèi)部或兩個 dn冊子之間移動 的

11、dnm段。原核生物的轉(zhuǎn)座因子包括：插入序列、轉(zhuǎn)座子和 mu噬菌體。32 插入序列: 是一類較小的沒有表型效應的轉(zhuǎn)座因子， 由一個轉(zhuǎn)位酶基因及兩側(cè)的反向重復序列組成。33轉(zhuǎn)座子：是一類較大的可移動成分，除有關(guān)轉(zhuǎn)座的基因外，至少帶有一個與轉(zhuǎn)座作用無關(guān)的并決定宿主菌遺傳性狀的基因 。34 斷裂基因：真核生物的結(jié)構(gòu)基因， 由若干個編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔而又連續(xù)鑲嵌而成，去除編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)這些基因稱為斷裂基因。35 . snrna:核內(nèi)小rna分子中尿喀咤含量最豐富。snrna和核內(nèi)蛋白質(zhì)組成小分子核糖核蛋白體，作為rn頌接的場所。36啟動子：能夠被rna 聚合酶

12、識別并結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列。典型的啟動子包括tata盒，caat盒和gc盒。37反應元件：一些信息分子的受體被細胞外信息分子激活后，能與特異的dna 序列結(jié)合，調(diào)控基因的表達。這些特異的dna序列實際上也是順式元件，由于能介導基因?qū)毎獾哪撤N信號產(chǎn)生反應，被稱為反應元件。38基因家族：指核苷酸序列或編碼產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)具有一定程度同源性的一組基因。39 .端粒dna1復序列：ttaggg微衛(wèi)星dna常見重復單位（ac）和（tg）。40 .衛(wèi)星dna是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重復序列。其特點是具有固定的重復序列，該重復 單位首尾相連形成重復序列片段，通常存在于間隔dn府口內(nèi)含子中。衛(wèi)星 dna可分

13、為大衛(wèi)星dna小衛(wèi)星dna微衛(wèi)星dna41 .端粒：以線性染色體形式存在的真核基因組dna勺末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)，端粒。該結(jié)構(gòu)是一段dna列和蛋白質(zhì)形成的一種復合體，僅在真核細胞染色體末端存在。端粒 的功能主要有：保護線性dna的完整復制，保護染色體末端及決定細胞的壽命等。42 alu 家族： 序列中有限制性內(nèi)切酶alu 的酶切位點。 重復單位是300bp. 屬短散在核元件，為靈長類基因組所特有。43假基因：是指與某些有功能的基因結(jié)構(gòu)相似，但不能表達基因產(chǎn)物的基因。44 .人類基因組的四張圖譜：遺傳圖、物理圖、序列圖和轉(zhuǎn)錄圖。遺傳圖指基因或 dna標記在染色體上以遺傳距離表示的相位置。物理圖

14、指基因或dna標記間的實際距離。序列圖指人類基因組的全部核苷酸序列，也是最詳盡的物理圖。轉(zhuǎn)錄圖指基因圖譜。45 .端粒酶：由三部分組成，端粒 rna端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶，端粒酶協(xié)同蛋白。端粒酶兼有提 供rna莫版和催化逆轉(zhuǎn)錄酶的功能。端粒酶通過一種爬行模型的機制維持染色體的完整。46 .半保留復制：子代細胞的dna 一股單鏈從親代完整的接受過來，另一股單鏈則完全重新合成，兩個子細胞的dnatb和親代dnam基序列一致，這種復制方式稱為半保留復制。47 . 半不連續(xù)復制： 順著解鏈方向生成的子鏈，復制是連續(xù)進行的，這股鏈稱為領(lǐng)頭鏈。另一股鏈因為復制方向與解鏈方向相反，不能順著解鏈方向連續(xù)延長，必須等模

15、板鏈解開至足夠長度，然后從5 -3 生成引物并復制子鏈。延長過程中，又要等待下一段有足夠長度的模板再次生成引物而延長。這股不連續(xù)復制的鏈稱為隨從鏈。領(lǐng)頭鏈連續(xù)復制而隨從鏈不連續(xù)復制，這就是復制的半不連續(xù)復制。48 . 岡崎片段： 隨從鏈的復制由于與解鏈方向相反， 必須待母鏈解開足夠長度后才開始生成 引物接著延長。復制中形成的不連續(xù)復制片斷就是岡崎片段。49 .滾環(huán)復制：是某些低等生物或染色體外的dna的復制形式。環(huán)狀dn做卜環(huán)打開，伸出環(huán)外作母鏈復制，內(nèi)環(huán)不打開一邊滾動一邊復制。最后，一個雙鏈環(huán)就滾動復制成兩個雙- 4 -鏈環(huán)。50 . tt二聚體：在紫外線照射下，相鄰的兩個dna分子上的喀咤

16、堿基之間共價結(jié)合而成的。51 .著色性干皮?。菏怯捎赿na員傷修復有缺陷而造成的一種遺傳性疾病，患者有較高的皮膚癌發(fā)病傾向。對該病的研究，發(fā)現(xiàn)了一些與切除損傷部位有關(guān)的蛋白質(zhì)，稱為xp蛋白。52 .切除修復：dnafg傷修復的一種方式。通過切除損傷部位，剩下的空隙由 dna-pol i催 化dntp聚合而填補，最后由 dna連接酶結(jié)合裂隙。切除損傷在原核生物需uvr蛋白類，真核生物需xp蛋白類。53 .光修復：生物體內(nèi)有一種光修復酶，被光激活后能利用光所提供的能量使紫外線照射引 起的喀咤二聚體分開，恢復原來的非聚合狀態(tài)，稱為光修復。54 . dna損傷的修復類型：光修復、切除修復、重組修復和s

17、os啰復。55 .重組修復時，reca蛋白被激活，使得 lexa蛋白被水解。56 .突變的分子改變類型：(1)錯配：dna分子上的堿基配對又稱點突變。(2) 缺失，插入和框移：缺失和插入都可以導致框移突變?？蛞仆蛔兪侵溉?lián)體密碼的閱讀方式改變，造成蛋白質(zhì)氨基酸排列順序發(fā)生改變，其后果是翻譯出的蛋白質(zhì)可 能完全不同。(3)重排：dna分子中較大片斷的交換，稱為重組或重排。57 .點突變分為：轉(zhuǎn)換和顛換。轉(zhuǎn)換是指由一種喀咤變成另一種喀咤，或一種喋吟變成另一種喋吟。顛換是指由喀咤變成喋吟，或由喋吟換為喀咤。58 .突變的意義：(1) 突變是進化、分化的分子基礎。(2) 只有基因型改變的突變。(3)

18、致死性的突變。(4) 突變是某些疾病的發(fā)病基礎。59 . d 環(huán)復制：是線粒體 dna的復制形式。復制時需合成引物。mtdna為雙鏈，第一個引物以內(nèi)環(huán)為模板延伸。至第二個復制起始點時，又合成另一個反向引物，以外環(huán)為模板 進行反向的延伸，最后完成兩個雙鏈環(huán)狀dna勺復制。60 .逆轉(zhuǎn)錄酶有三種活性：(1)rna指導的dn臊合酶活性。(2)dna指導的dn臊合酶活性。(3)rna 酶 h (rnaseh 活性。61 . rna復制：是指某些病毒在宿主細胞中以自身rna為模板，以宿主細胞中的4種dntp為原料，按5 -3方向催化合成互補的 rnaat,此過程稱為 rnam制。62 .逆轉(zhuǎn)錄：是指以

19、rna為模板，利用宿主細胞中 4種dntp為原料，按5 -3方向催化 合成與rna互補的dna鏈的過程。63 .逆轉(zhuǎn)錄病毒復制過程：(1)逆轉(zhuǎn)錄酶以 rnw模板，催化 dntp聚合生成dna5補鏈，產(chǎn)物是 rna/dn賒化雙 鏈。(2)雜化雙鏈中的 rna被逆轉(zhuǎn)錄酶中有 rnab活性的組分如 rnaseh水解.(3) 利用單鏈dnw模板，由逆轉(zhuǎn)錄病毒催化合成第2條dna5補鏈。64. klenow 片斷具有：dna聚合酶活性和3 -5核酸外切酶活性。65. dna-pol i的功能：對復制中的錯誤進行較讀，對復制和修復中出現(xiàn)的空隙進行填補。66. dna復制的保真性依賴的機制：(1)遵守嚴格的

20、堿基配對規(guī)律。（ 2）聚合酶在復制延長中對堿基的選擇功能。（ 3）復制出錯時有即時的較讀功能。67 .引發(fā)體：解螺旋酶，dnac蛋白，引物酶和 dna起始復制區(qū)域組成。68 . 拓撲異構(gòu)酶作用：（1）拓撲酶i切斷dna雙鏈中的一股，使 dna解鏈旋轉(zhuǎn)中不致打結(jié)，適當時候又把切口封閉，使 dn儂為松弛狀態(tài)。反應不需atr（2）拓撲酶ii在無atp時，切斷處于正超螺旋的 dn酚子雙鏈某一部位，斷端通過切 口使超螺旋松弛；在利用 atp功能的情況下，松弛狀態(tài)的 dn取進入負超螺旋狀態(tài)，斷 端在同一酶催化下連接恢復。69復制和轉(zhuǎn)錄的異同：相似之處：（ 1 ）都是酶促的核苷酸聚合反應。（2）都以dna為

21、模板。（3）都需依賴dna的聚合酶。（ 4 ）聚合過程中都是核苷酸之間形成磷酸二酯鍵。（ 5）都從5 -3 方向延伸聚核苷酸鏈。（ 6 ）都遵從堿基配對規(guī)律。區(qū)別：（ 1 ）模板。復制：兩股鏈均復制。轉(zhuǎn)錄：不對稱轉(zhuǎn)錄。（2）原料。復制：dntr轉(zhuǎn)錄：ntr（3）酶。復制：dnam合酶。轉(zhuǎn)錄：rnam合酶。（4）產(chǎn)物。復制：子代雙鏈dna（半保留復制）。轉(zhuǎn)錄：mrna, rrna, trna.（5）堿基配對。復制： a-t, c-g。轉(zhuǎn)錄：a-u, g-c, t-a。.70 .真核生物rna聚合酶轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和對鵝膏蕈堿的反應。（ 1 ） rna-pol i ：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物： 45s-rrna 對鵝膏蕈

22、堿的反應：耐受。（ 2 ） rna-pol ii ： 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物： hnrna 對鵝膏蕈堿的反應: 極敏感。（ 3） rna-pol iii ： 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物： 5s-rna, trna ， snrna. 對鵝膏蕈堿的反應：中度敏感。71 .轉(zhuǎn)錄：以dna一條鏈為模板，以四種ntp為原料，在dna旨導的聚合酶作用下，按照堿基互補原則（a-u,t-a,g-c ）合成rnab1的過程。72 . 不對稱轉(zhuǎn)錄：轉(zhuǎn)錄時因為（1） dna 分子雙鏈一股鏈用作模板指引轉(zhuǎn)錄，另一股鏈不轉(zhuǎn)錄。（ 2 ） 模板鏈并非總是在同一條鏈上。故稱為不對稱轉(zhuǎn)錄。73 .原核生物聚合酶組成：由四種亞基組成a23 3 b五聚體的蛋白

23、質(zhì)。其中a28 3亞基稱為核心酶。b因子辨認起始點。a決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄。3起催化作用。3起結(jié) 合dna莫板（開鏈）作用。74操縱子：轉(zhuǎn)錄是不連續(xù)、分區(qū)段進行的。每一轉(zhuǎn)錄區(qū)段可視為一個轉(zhuǎn)錄單位，稱為操縱子。操縱子包括若干個結(jié)構(gòu)基因及其上游的調(diào)控序列。調(diào)控序列中的啟動子是 rnam合酶結(jié)合模板dna勺部位，也是控制轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵部位。75 .電子顯微鏡下觀察到的羽毛狀的圖形說明：在同一 dna莫板上，有多個轉(zhuǎn)錄同時在進行。在rnab1上觀察到的小黑點是多聚核蛋白體。轉(zhuǎn)錄和翻譯都在高效率的進行。76 .轉(zhuǎn)錄空泡：由酶-dna-rna成的轉(zhuǎn)錄復合物。77 .依賴p因子的轉(zhuǎn)錄終止：p因子是由相同亞基組成的

24、六聚體，它是原核生物轉(zhuǎn)錄終止因子?？山Y(jié)合轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物rna3 端的多聚 c特殊序列，還有 atp酶和解螺旋酶活性。p因子與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物rna 3 端的多聚c結(jié)合后，p因子和rn咪合酶都發(fā)生構(gòu)象改變，從而使rna聚合酶停頓，解螺旋酶活性使dna和rna化雙鏈拆離，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物從轉(zhuǎn)錄復合物中釋放。78 .非依賴p因子的轉(zhuǎn)錄終止：rna 鏈延長至終止區(qū)時，轉(zhuǎn)錄出的堿基序列隨即形成莖環(huán)結(jié)構(gòu) 。這種二級結(jié)構(gòu)是阻止轉(zhuǎn)錄繼續(xù)向下游推進的關(guān)鍵。其機制有兩方面：一是莖環(huán)結(jié)構(gòu)在rna分子形成可能改變 rna聚合酶的構(gòu)象。由于酶構(gòu)象的改變導致酶一模板結(jié)合方式的改變，可使酶不再向下游移動，于是轉(zhuǎn)錄停頓。其二，轉(zhuǎn)錄復合物（酶 dn

25、a-rna上有局部的 rna/dn賒化 雙鏈。rna分子和dna分子都要形成自己的雙鏈，雜化鏈形成的機會不大，本來不穩(wěn)定 的雜化鏈更不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)錄復合物趨于解體。接著一串寡聚u是使rna鏈從模板脫落的促 進因素，因為所有白堿基配對中以u和a的配對最不穩(wěn)定。79 tfii 的功能：tfiid : tbp （tata吉合蛋白）結(jié)合 tata盒。taf （tbp輔助因子）輔助 tbp-dna吉合。tfiia ：穩(wěn)定iid-dna 復合物。tfiib ：促進rna-pol ii 結(jié)合及作為其他因子結(jié)合的橋梁。tfiif:解螺旋酶tfiie ： atpasetfiih:蛋白激酶活性。80轉(zhuǎn)錄起始前復合物（

26、pic） ： 是真核生物轉(zhuǎn)錄因子之間先互相辨認結(jié)合，然后以復合體的形式與rna聚合酶一同結(jié)合于轉(zhuǎn)錄起始前的dnak域而成。81 .真核生物mrna專錄終止及加尾修飾真核生物mrna專錄終止后，緊接著發(fā)生加尾修飾。過程如下：在模板鏈上轉(zhuǎn)錄終止點上游約百個或上千個核苷酸處常有一組共同的序列aataaa。 此序列后接著相當多的gt 序歹u。這些序列稱為轉(zhuǎn)錄終止的修飾點。轉(zhuǎn)錄越過修飾點后，mrna在修飾點被切斷，隨即加入poly a尾及帽子結(jié)構(gòu)。下游的 rnam然繼續(xù)轉(zhuǎn)錄，但很快被 rna降解。因此 有理由相信，帽子結(jié)構(gòu)是保護 rna免受降解的，因為修飾點以后的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無帽子結(jié)構(gòu)。82 .外顯子：在斷

27、裂基因及其初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上出現(xiàn)，并表達為成熟rna勺核酸序列。83內(nèi)含子：隔斷基因的線性表達而在剪接過程中被除去的核酸序列。84人類最龐大的一個基因是：抗肌萎縮蛋白基因 。85 .剪接體：是由snrnp與hnrna吉合，使內(nèi)含子形成套索并拉近上下游外顯子距離的復合 體。剪接體是 mrnai接的場所。剪接過程的化學反應稱為二次轉(zhuǎn)酯反應。86 . mrn編輯：通過對 mrnah勺加工，使遺傳信息在mrn冰平上發(fā)生改變。87 trna 的轉(zhuǎn)錄后加工：（ 1 ） trna 前體的剪接。先由核酸內(nèi)切酶進行催化進行剪切反應，再由連接酶將外顯子連接起來。（ 2 ）加上3 端cca-oh。（ 3 ）化學修飾。包

28、括：甲基化反應 ，使某些嘌呤變成甲基嘌呤。還原反應 ，使某些尿嘧啶還原成雙氫尿嘧啶（dhu） 。轉(zhuǎn)位反應，尿喀咤核昔轉(zhuǎn)變?yōu)榧倌蚩搴宋簦ǎＣ摪狈磻?，某些腺苷酸脫氨成為次黃嘌呤核苷酸（ i ） 。88. rrna的轉(zhuǎn)錄后加工 1） rrna前體的剪接。45s-rrna經(jīng)剪接后，分出屬于小亞基的18s rrna,余下的部分再剪接成5.8s,28s rrna 。 rrna 成熟后，就在核仁上裝配，與核蛋白體蛋白質(zhì)一起形成核蛋白體，輸出胞漿。 2） 2） 化學修飾. 主要是甲基化反應。89.開放閱讀框架（orf：從mrna 端起始密碼子 au由u 3端終止密碼子之間的核甘酸 序列，各個三聯(lián)體密碼連

29、續(xù)排列編碼一個蛋白質(zhì)多肽鏈，稱為開放閱讀框架。90遺傳密碼的特點：（ 1） 連續(xù)性。編碼蛋白質(zhì)氨基酸序列的各個三聯(lián)體密碼連續(xù)閱讀。（ 2） 簡并性。除甲硫氨酸和色氨酸外，其他氨基酸都有 2個或多個密碼子為之編碼，密碼子中第三位堿基是可以不同的，這稱為密碼子的簡并性。（ 3） 通用性。蛋白質(zhì)生物合成的整套密碼，從原核生物到人類都通用。（ 4） 擺動性。反密碼與密碼之間不嚴格遵守常見的堿基配對規(guī)律，尤其是密碼子的第三位堿基對反密碼子的第一位堿基，即使不嚴格配對也能辨認配對，這種現(xiàn)象稱為 擺動配對。91原核生物翻譯起始復合物形成：（ 1 ）核蛋白體亞基分離。核蛋白體大小亞基分離。 if-1,if-3

30、 與小亞基結(jié)合，促進大小 亞基分離。（ 5） mrn施小亞基定位結(jié)合。原核生物mrnafc小亞基定位涉及兩種機制。其一，在各種原核mrn裾始auglk游約813核甘酸部位，存在49個核甘酸的一致序列， 富含喋吟堿基如 aggagg稱為s-d序列。而原核小亞基 16s rrna的3 端有一 段富含喀咤的段序列如uccucc通過與s-d序列堿基配對使 mrnaf小亞基結(jié)合。s-d序列又稱核蛋白體結(jié)合位點（rbs。其二，mrnah緊接s-d序列后的小核昔酸序列可被核蛋白體小亞基蛋白 rps-1 識別結(jié)合。（3）起始氨基酰trna的結(jié)合。起始fmet-trna i fmet和gtp結(jié)合的if-2 一起

31、，識別結(jié)合 對應小亞基p位白mrn裾始密碼aug起始時a位被if-1占據(jù)，不與任何氨基 酰trna結(jié)合。（4）核蛋白體大亞基結(jié)合。上述結(jié)合mrna、 fmet-trna ifmet 的小亞基再與核蛋白體大亞基結(jié)合，同時if2結(jié)合的gtp水解釋能，促使3種if釋放，形成由完整核蛋白 體、mrna起始氨基酰trna組成的翻譯起始復合物。此時，結(jié)合起始密碼aug的fmet-trna ifmet占據(jù)p位，而a位空留，對應 mrnat au斫的下一組三聯(lián)體密 碼，準備相應氨基酰trna 的進入。92肽鏈的延長。（1）進位。核糖體 a位上mrn福碼子所規(guī)定的氨酰trna進入核糖體a位上稱為進位。 這一過程

32、需延長因子ef t 的參與。 延長因子有三種：1 . ef-tu.功能：協(xié)助氨基酰trna進入核糖體。與氨基酰trna以及gtp吉合形成ef-tu-gtp-氨基酰-trna,將氨基酰-trna轉(zhuǎn)運到核糖體的 a位。2 ef-ts. 功能：促進ef-tu-gtp 的再生。 ef-tu-gtp 在參加一輪核糖體循環(huán)后轉(zhuǎn)變?yōu)閑f-tu-gdp, ef-ts使ef-tu-gdp再轉(zhuǎn)變成 ef-tu-gtp,后者可被再利用。3 . ef-g.功能：促進肽酰-trna移位。促進 mrna-t酰-trna由a位移到p位，促進 trna 的釋放。（2） 成肽。 在轉(zhuǎn)肽酶的催化下， p 位上的肽?；ca 位上的

33、氨基?；呻?， 成肽反應在a位進行，卸載的trna仍在p位。（3）轉(zhuǎn)位。在轉(zhuǎn)位酶的催化下，新生肽鏈-trna連同mrnm a位移到p位，而卸載的trna 移入 e 位。 a 位空留并對應下一組三聯(lián)體密碼。93 .終止因子：又稱釋放因子（rf）。其功能是識別 mrnak的終止密碼子，終止肽鏈的合成 并釋放出肽鏈。原核生物中釋放因子是rf-1,rf-2,rf-3. rf-1 識別密碼子uaa及uag rf-2能識別uaa及uga rf-3結(jié)合gtp并能促進 rf-1,rf-2與核糖體結(jié)合。94 .原核肽鏈終止過程：肽鏈延長到mrn貨止密碼在核蛋白體a位出現(xiàn)，終止密碼子不能被任何氨基酰-trna識別

34、進位。rf-1,rf-2進入a位，識別結(jié)合終止密碼。rf-1或 rf-2 任一釋放因子結(jié)合終止密碼后都可觸發(fā)核蛋白體構(gòu)象改變， 誘導轉(zhuǎn)肽酶轉(zhuǎn) 變?yōu)轷ッ富钚?。使新生肽鏈與結(jié)合在p位的trna間酯鍵水解，將合成的肽鏈釋出。再促使mrna卸載trna及rf從核蛋白體脫離。rf-3有g(shù)tpw活性，能介導rf-1,rf-2 與核蛋白體的相互作用。95分子伴侶：分子伴侶是細胞中的一類保守蛋白質(zhì)，可識別肽鏈的非天然構(gòu)象， 促進各功能域和整體蛋白質(zhì)的正確折疊。細胞中至少有兩類分子伴侶家族：熱休克蛋白和 伴侶素。96蛋白質(zhì)合成后的加工：（ 1） 新生肽鏈的折疊。（ 2） 一級結(jié)構(gòu)的修飾 。包括： 肽鏈 n 端的

35、修飾 ， 個別氨基酸的修飾， 多肽鏈的水解修飾。（ 3） 空間結(jié)構(gòu)的修飾 。包括： 亞基聚合 ， 輔基連接 ， 疏水脂鏈的共價連接。97 起始因子:（1） if-1.能促進if-2 、 if-3 的活化。（2） if-2. 促進fmet-trna ifmet與30s小亞基結(jié)合的作用，并具有g(shù)tp酶活性。（3） if-3.功能是使30s亞基從不具活性的核糖體釋放，輔助mrnaf小亞基結(jié)合，并阻止大小亞基重新聚合。98信號假說機制：這一假說認為，分泌性蛋白初級產(chǎn)物的n-端有信號肽結(jié)構(gòu)。在分泌性蛋白合成中，信號肽一出現(xiàn)， 就被信號肽識別粒子與其受體對接蛋白結(jié)合， 促使膜通道開放，信號肽帶 動合成中的

36、蛋白質(zhì)沿通道穿過膜， 信號肽在沿通道折回膜內(nèi)時， 被位于膜外側(cè)的信號肽 酶切斷，使成熟的蛋白質(zhì)釋放到細胞外。99抗生素類作用位點：四環(huán)素類：作用于核蛋白體小亞基，抑制氨基酰-trna 與小亞基結(jié)合。鏈霉素、卡那霉素：作用與核蛋白體小亞基，改變構(gòu)象引起讀碼錯誤。氯霉素：作用與核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，阻斷延長。紅霉素：作用與核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，妨礙轉(zhuǎn)位。放線菌酮：作用與真核核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，阻斷延長。嘌呤霉素：作用與真核、原核核蛋白體。屬氨基酰-trna 類似物，進位后引起未成熟肽鏈脫落。 100 白喉毒素作用機制 ：可使真核生物延長因子eef-2發(fā)生adp糖基化而失活。干擾

37、素作用機理：（ 1）誘導特異蛋白激酶活化，該活化的激酶使真核主要的起始因子eif2 磷酸化失活，從而抑制病毒蛋白質(zhì)的合成。（2）干擾素與雙鏈 rn砍同活化2 -5 a合成酶，2 -5 a可活化核酸內(nèi)切酶rnasel后者使病毒mrna條解，阻斷病毒蛋白質(zhì)合成。101. 管家基因：有些基因產(chǎn)物對生命全過程都是必不可少的。這類基因在一個生物個體的幾乎所有細胞中持續(xù)表達，通常稱為管家基因。管家基因的表達水平受環(huán)境因素影響很小，而是在個體各個生長階段的大多數(shù)、或幾乎全部組織中持續(xù)表達，或變化很小。這類基因表達稱為 基本（或組成性）基因表達。102誘導：可誘導基因在一定環(huán)境中表達增強的過程稱為誘導。阻遏：

38、可阻遏基因表達產(chǎn)物水平降低的過程稱為阻遏。103基因表達調(diào)控的生物學意義：（ 1）適應環(huán)境、維持生長和增殖。（ 2）維持個體發(fā)育與分化。104原核生物轉(zhuǎn)錄的影響因素：（ 1）啟動子。啟動子決定轉(zhuǎn)錄的效率和方向。（ 2） （t因子。（ 3）阻遏蛋白具有負調(diào)控作用。（ 4）正調(diào)控蛋白促進基因的轉(zhuǎn)錄。（ 5）倒位蛋白通過 dna組倒位而調(diào)節(jié)基因表達。倒位蛋白是一種位點特異性的重組酶。（6） rn咪合酶抑制物可與 rna吉合并抑制轉(zhuǎn)錄。（ 7）衰減子。105.衰減子（attenuator ）:細菌中mrna專錄和翻譯是偶聯(lián)在一起的。這一特點使細菌中 的一些操縱子的特殊序列可以在轉(zhuǎn)錄過程中控制轉(zhuǎn)錄水平。

39、 這些特殊序列稱為衰減子。106乳糖操縱子（ 1）乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)：含有z、y、a三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼3-半乳糖甘酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶。此外，含有一個操縱基因o, 一個啟動序列 p, 一個cap結(jié)合位點和一個基因i。i基因編碼一種阻遏蛋白，與操縱基因o結(jié)合。啟動序列 p、操縱序列o和cap吉合位點組成乳糖操縱子的調(diào)控區(qū)。（ 2）阻遏蛋白的負性調(diào)控作用：1 .當有乳糖存在時，乳糖通過3 -半乳糖甘酶變?yōu)榘肴樘?，再?jīng)透酶進入細胞內(nèi)。真正的誘導劑是半乳糖而不是乳糖。乳糖可與阻遏蛋白結(jié)合，導致阻遏蛋白與操縱序列o解離，啟動基因轉(zhuǎn)錄。2 .當沒有乳糖存在時，沒有誘導劑與阻遏蛋白結(jié)合，阻遏蛋白與操縱序

40、列 o結(jié)合，發(fā)揮負性調(diào)控作用，基因不轉(zhuǎn)錄。（3） cap的正性調(diào)控作用：1 .當沒有葡萄糖及 cam瞰度較高時，camp和cap吉合緊密，此時cap結(jié)合在cap 結(jié)合位點，刺激rna專錄活性。2 .當有葡萄糖存在及 cam限度較低時，camp和cap結(jié)合受阻，因此lac操縱子 表達下降。（ 4）協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：1 當葡萄糖存在，乳糖存在時：盡管乳糖作為誘導劑和阻遏蛋白結(jié)合，使阻遏蛋白與操縱序列 o解離。但由于cam限度較低，cam林口 cap吉合受阻，基因處于關(guān)閉 狀態(tài)。2 .當葡萄糖存在，乳糖不存在時：此時無誘導劑存在，阻遏蛋白與dna結(jié)合。而且由于葡萄糖的存在，cap也不能發(fā)揮正性調(diào)控作用，基因

41、處于關(guān)閉狀態(tài)。3 .當葡萄糖和乳糖都不存在時：cap可以發(fā)揮正性調(diào)控作用，但由于沒有誘導劑，阻遏蛋白的負調(diào)控作用使基因仍處于關(guān)閉狀態(tài)。4 .當葡萄糖不存在，乳糖存在時：此時cap可以發(fā)揮正性調(diào)控作用，阻遏蛋白由于誘導劑的存在而失去復調(diào)控作用，基因被打開，啟動轉(zhuǎn)錄。107色氨酸操縱子調(diào)控機制：（1） 當細胞內(nèi)色氨酸增多時，結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄受到抑制。衰減子轉(zhuǎn)錄物有4 段特殊序- 11 -歹u。片段1和2, 2和3, 3和4能配對形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，形成發(fā)夾能力的強弱依次為片 段1/2片段2/3片段3/4。片段3/4所形成的發(fā)夾結(jié)構(gòu)之后緊接著寡尿喀咤，是不依 賴p因子的轉(zhuǎn)錄終止信號。(2)當細胞內(nèi)有色氨酸存在

42、時，形成色氨酰trna,核糖體編譯可通過片段1并通過片段2,核糖體在到達片段 3之前就從mrna兌落。在這種情況下，片段 1/2和片段 2/3都不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，只有片段 3/4形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，即形成轉(zhuǎn)錄終止信號，從而 導致rnam合酶作用停止。(3)當細胞內(nèi)沒有色氨酸存在時，色氨酰 trna缺乏，核糖體停留在兩個相鄰的色 氨酸密碼子的位置上， 片段1/2不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，片段2/3之間形成形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)， 則片段3/4之間就不能形成轉(zhuǎn)錄終止信號，后面的基因得以轉(zhuǎn)錄。108 . sd序列：mrn裾始密碼子前的一段富含喋吟核甘酸的核糖體結(jié)合位點。109 .原核翻譯水平的調(diào)控：(1) sd序列是影響翻

43、譯的重要因素。(2) mrna勺穩(wěn)定性是調(diào)控翻譯的方式之一。(3)翻譯產(chǎn)物也可以對相應mrna勺翻譯進行調(diào)控。(4)小分子rnam以抑制特定mrna勺翻譯。110 .真核生物基因表達在 dna/k平的調(diào)控主要通過下列幾種方式：(1)染色質(zhì)丟失。(2)基因擴增。(3)基因重排。(4) dna甲基化。(5)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)可影響基因表達。111 .反式作用因子：真核細胞內(nèi)有大量的序列特異的dna結(jié)合蛋白，其中一些蛋白的主要功能是使基因開放或關(guān)閉，稱為反式作用因子。112 .轉(zhuǎn)錄起始復合物形成的步驟：(1) tfiid 結(jié)合 tata盒。(2) rna- pol識別并結(jié)合 tfiid dnam合物。(3)

44、其他轉(zhuǎn)錄因子與 rna- pol結(jié)合，轉(zhuǎn)錄起始部位的 dnas鏈，形成轉(zhuǎn)錄起始復合物。 113.反式作用因子的特點：(1) 一般具有三個功能結(jié)構(gòu)域：dna吉構(gòu)域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié),其他蛋白的結(jié)合域。(2)能識別并結(jié)合基因調(diào)控區(qū)中的順式作用元件。(3)對基因表達有正性和負性調(diào)控作用，即激活和阻遏基因的表達。114 .鋅指結(jié)構(gòu)：是指在結(jié)合dna吉構(gòu)域中含有較多的半胱氨酸 (cys)和組氨酸(his)的區(qū)域， 借肽鏈的彎曲使2個cys和2個his或4個cys與一個鋅離子絡合成的指狀結(jié)構(gòu)。115 .同源結(jié)構(gòu)域：許多反式作用因子結(jié)合dna的結(jié)構(gòu)域中有一段相同的保守序列。是由 60個左右的氨基酸組成的螺旋一

45、回折一螺旋結(jié)構(gòu)的區(qū)域，稱為同源結(jié)構(gòu)域。116 .亮氨酸拉鏈：有些反式作用因子結(jié)合 dna吉構(gòu)域中有一段約 30個氨基酸組成的核心序 歹u,每隔6個氨基酸有規(guī)律的出現(xiàn) 1個亮氨酸殘基，能形成兩性“-螺旋。在螺旋的一 側(cè)是排列成行的亮氨酸，具有疏水性，稱為亮氨酸拉鏈區(qū)。兩個亮氨酸拉鏈區(qū)的單體 以疏水作用形成亮氨酸拉鏈。117 .反式作用因子 dna結(jié)合域的結(jié)構(gòu)模式：(1)鋅指結(jié)構(gòu)。(2)同源結(jié)構(gòu)域。(3)亮氨酸拉鏈。(4)螺旋一環(huán)螺旋結(jié)構(gòu)。(5)堿性a 螺旋。118 .轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)模型：(1)酸性a 螺旋結(jié)構(gòu)域(2)富含谷氨酰胺結(jié)構(gòu)域(3)富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域。119 . mrna勺選擇性剪接方

46、式(1)外顯子選擇方式可保留或部分保留外顯子。(2)內(nèi)含子選擇方式可刪除或部分刪除內(nèi)含子。(3)互斥外顯子是指兩個外顯子不能同時被保留。(4)內(nèi)部剪切位點造成內(nèi)含子或外顯子的部分序列被切除或保留。120 .翻譯起始的調(diào)控(1)阻遏蛋白的調(diào)控作用。(2)翻譯起始因子的功能調(diào)控。(3) 5 aug寸翻譯的調(diào)控作用。(4) mrnae編碼區(qū)長度對翻譯的影響。121 .翻譯后水平的調(diào)控(1)新生肽鏈的水解。(2)肽鏈中氨基酸的共價修飾。(3)通過信號肽分揀、運輸、定位。122 .同源重組：是指發(fā)生在同源序列間的重組，它通過鏈的斷裂和再連接，在兩個dna分子同源序列之間進行單鏈或雙鏈片段的交換。又稱基本

47、重組。123 . holliday 模型：(1)兩個同源染色體dnme列整齊(2) 一個dna的一條鏈斷裂，并與另一個dna對應的鏈連接，形成 holliday 中間體。(3)通過分支移動產(chǎn)生異源雙鏈dna(4) holliday 中間體切開并修復，形成兩個雙鏈重組dna即片段重組體和拼接重組體。124 .細菌的基因轉(zhuǎn)移：細菌中，可以通過接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導和細胞融合 四種方式，在不同dna分子間發(fā)生共價連接，即基因轉(zhuǎn)移。125 .接合作用：當細胞或細菌通過菌毛相互接觸時，質(zhì)粒dna可以從一個細胞(細菌)轉(zhuǎn)移導另一個細胞(細菌)，這種類型的dna專移稱為接合作用。126 .轉(zhuǎn)化作用：通過自動獲取或

48、人為的供給外源dna使細胞或培養(yǎng)的受體細胞獲得新的遺傳表型，這就是轉(zhuǎn)化作用。127 .轉(zhuǎn)導作用：當病毒從被感染的細胞(供體)釋放出來，再次感染另一細胞(受體)時， 發(fā)生在供體細胞和受體細胞之間的dna轉(zhuǎn)移及基因重組即為轉(zhuǎn)導作用。自然界常見的例子就是噬菌體感染宿主時伴隨發(fā)生的基因轉(zhuǎn)移。當噬菌體感染宿主時會有兩種結(jié)局，一是搭菌生長途徑，二是溶噂菌生長途徑。128 .特異位點重組：由整合酶催化，在兩個dna序列的特異位點之間發(fā)生的整合稱為位點特異的重組。129 .重組dna常用的工具酶1 .限制性核酸內(nèi)切酶：識別特異序列，切割 dna2 . dna1接酶3 . dna聚合酶i。具有完整的5 -3聚合

49、，3 -5外切活性，以及5 -3外切活性。 用枯草桿菌蛋白酶可將 dnam合酶i裂解成兩個片段，大片段稱為klenow片段。具有5 -3聚合，3 -5外切活性，無 5 -3外切活性。 klenow片段用途：(1)在cdna克隆中，第二股鏈的合成。(2) dn附列分析。(3)補齊雙鏈dna勺3端。(4)通過補齊3端，使3端標記。4 .逆轉(zhuǎn)錄酶。5 .堿性磷酸酶。能去除末端磷酸基。6 .末端轉(zhuǎn)移酶。在 3/羥基末端進行同聚物加尾。7 .多聚核甘酸激酶。催化多聚核甘酸5羥基磷酸化，或標記探針。130 .限制性核酸內(nèi)切酶：就是識別dna的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈dna的一類內(nèi)切酶。131

50、 .回文結(jié)構(gòu)：大部分ii類限制性核酸內(nèi)切酶識別 dna位點的核甘酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對稱， 通常稱這種特殊結(jié)構(gòu)順序為回文結(jié)構(gòu)。132 . c值：基因組的大小常以其 dna含量表示。單倍體基因組中的全部dnas稱為c值。133 .作為克隆載體的質(zhì)粒應具備：(1)分子量相對較小，能在細菌中穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)。(2)具有一個以上的遺傳標志。(3)具有多個限制性內(nèi)切酶的單一切點，便于外源基因的插入。134 .常用作克隆的載體：質(zhì)粒、入噬菌體、m13噬菌體、粘性質(zhì)粒、病毒載體、酵母人工染色體和細菌人工染色體。135 . dna克?。簯妹笇W的方法，在體外將各種來源的遺傳物質(zhì)與載體結(jié)合成一具有自我 復制

51、能力的dna分子一一復制子，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細胞，篩選出含有目的基 因的轉(zhuǎn)化子細胞，再進行擴增、提取獲得大量同一dna分子，即dna克隆。又稱基因克隆。實現(xiàn)基因克隆所采用的方法及相關(guān)工作稱為基因工程或重組dna技術(shù)。136 .基因克隆的步驟：(1)目的基因的獲取。1 .化學合成法。2 .基因組dn成庫。3 . cdnac庫。4 . pcr(2)克隆載體的選擇和構(gòu)建。(3)外源基因和載體的連接。1 .粘性末端連接。2 .平端連接。3 .同聚物加尾連接。4 .人工街頭連接。(4)重組dna導入受體細胞。1 .轉(zhuǎn)化：是指將質(zhì)?；蚱渌庠?dnat入處于感受態(tài)的宿主菌，并使其獲得新的表型的過程。

52、2 .感染：入噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細胞病毒為載體的重組dna分子，在體外包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒，然后才能感染適當?shù)募毎?，并在細胞?nèi)擴增。3 .轉(zhuǎn)染：轉(zhuǎn)染是轉(zhuǎn)化和感染兩個詞構(gòu)成的新詞，指真核細胞主動攝取或被動導入外源 dna片段而獲得新的遺傳表型的過程。常用方法有：電穿孔法、磷酸鈣共沉淀法和脂質(zhì)體融入法等。(5)重組體的篩選。1 .遺傳學方法2 .免疫學方法3 .核酸雜交法4 . pc破術(shù)5 .酶切鑒定(6)克隆基因的表達137.真核細胞轉(zhuǎn)染的方法：(1)磷酸鈣共沉淀法(2) 電穿孔法(3) dea3葡聚糖法(4) 脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)染(5) 顯微注射法138 .重組 dna術(shù)應用

53、(1)疾病基因的發(fā)現(xiàn)和克隆(2)生物制藥(3)基因診斷(4)基因治療(5)遺傳病的預防139 .細胞間信息物質(zhì)(第一信使)：凡由細胞分泌的調(diào)節(jié)靶細胞生命活動的化學物質(zhì)統(tǒng)稱細 胞間信息物質(zhì)。包括：神經(jīng)遞質(zhì)、內(nèi)分泌激素、局部化學介質(zhì)和氣體信號。140 .細胞內(nèi)信息物質(zhì)：在細胞內(nèi)傳遞細胞調(diào)控信號的化學物質(zhì)稱為細胞內(nèi)化學物質(zhì)。141 .第二信使：通常將 ca2+、camr cgmp dag ip3、cer、花生四烯酸及其代謝產(chǎn)物這類 在細胞內(nèi)傳遞信息的小分子化合物稱為第二信使。142 .第三信使：負責細胞核內(nèi)外信息傳遞的物質(zhì)稱為第三信使。是一類可與靶基因特異序列結(jié)合的核蛋白，能調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，因此又稱

54、為dna結(jié)合蛋白。143 .膜受體分為： 環(huán)狀受體、g蛋白偶聯(lián)受體、單次跨膜“螺旋受體 和具有鳥甘酸環(huán)化酶 活性的受體。144 .胞內(nèi)受體包括四個區(qū)域：高度可變區(qū)、dna吉合區(qū)、錢鏈區(qū)和激素結(jié)合區(qū)。145 .受體與配體結(jié)合的特點：高度專一性、高度親和力、可飽和性、可逆性和特定的作用模式。146 .膜受體介導的信息轉(zhuǎn)導途徑(1)camp蛋白激酶途徑。1. camp的生成與降解。一些激素如腎上腺素、胰高血糖素等作用于相應的受體后，活化相應的受體，活化的受體可催化 gs的gd叫g(shù)t汽換，導致gs的a亞基與3 丫解離， 釋放出 as gtp，as gtp可導致ac活化，使得 atp轉(zhuǎn)變?yōu)閏amr細胞內(nèi)

55、cam限度升高。camp在細胞內(nèi)的濃度除與 ac活性相關(guān)，還和磷酸二酯酶活性有關(guān)。2. camp的作用機制。camp對細胞的調(diào)節(jié)作用是通過激活 camp依賴性蛋白激酶系統(tǒng)來實現(xiàn) 的。pka是一種由四聚體組成的別構(gòu)酶( gr).其中c為催化亞基，r為調(diào)節(jié)亞基。每個調(diào) 節(jié)亞基上有兩個camp吉合位點，催化亞基有催化底物蛋白質(zhì)特定絲 /蘇氨酸殘基磷酸化的功 能。調(diào)節(jié)亞基與催化亞基結(jié)合時， pka呈無活性狀態(tài)。當 4分子camp與兩分子調(diào)節(jié)亞基結(jié) 合后，調(diào)節(jié)亞基脫落，游離的催化亞基具有蛋白激酶活性。3. pka的作用。pka被camp敷活后，能在atp存在的情況下使許多蛋白質(zhì)特定的絲/蘇氨酸 -15 -殘基磷酸化，從而調(diào)節(jié)細胞的物質(zhì)代謝和基因表達。對代謝的調(diào)節(jié)作用 ：腎上腺素調(diào)節(jié)糖原分解的級聯(lián)反應。腎上腺素與質(zhì)膜上的受體結(jié)合后，通過激動型g蛋白使ac活化，ac激活atp生成camp后者進一步激活 pka pka一方面使 無活性的磷酸化酶激酶b 磷酸化為有活性的磷酸化酶激酶b， 后者能催化磷酸化酶b 成為有活性的磷酸化酶 a.磷酸化酶a經(jīng)磷