實(shí)驗(yàn)8原生質(zhì)體游離與體細(xì)胞融合

1、融合前融合中peg帶微弱極性的負(fù)電荷，能與水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等具有正電荷基團(tuán)的分子形成氫鍵。當(dāng)peg分子鏈足夠大時(shí)，在鄰近原生質(zhì)體表面之間起著分子橋的作用，引起原生質(zhì)體緊緊粘連成團(tuán)。ca2+在蛋白質(zhì)或磷脂負(fù)電荷基團(tuán)和peg之間形成橋梁，加強(qiáng)原生質(zhì)體之間的粘連作用。在洗滌過(guò)程中，直接或間接與質(zhì)膜結(jié)合的peg分子從原生質(zhì)體表面洗脫，并隨著ph值的降低，導(dǎo)致膜電荷的不平衡和發(fā)生重新分布。質(zhì)膜緊密接觸區(qū)域的電荷重新分布使一個(gè)原生質(zhì)體的某些正電荷基團(tuán)與另一個(gè)原生質(zhì)體的負(fù)電荷基團(tuán)聯(lián)結(jié)，反之亦然，最后導(dǎo)致原生質(zhì)體發(fā)生融合。融合細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中再生細(xì)胞壁、分裂生長(zhǎng)形成愈傷組織和再生植株，產(chǎn)生體細(xì)胞雜種植株

2、。1.儀器： 離心機(jī)、搖床、分析天平、ph計(jì)、80m細(xì)胞篩、鑷子、燒杯、膠頭吸管、移液槍、雙目顯微鏡、注射器、三角瓶2.材料： 菠菜葉片3.試劑：u1液液：0.16m cacl2，0.1% mes，ph5.7u2液液：0.24m cacl2，ph5.7u3液液：22% 蔗糖，蔗糖，ph5.7u4液液：0.65m 甘露醇，甘露醇，0.05m cacl2，0.1% mes，ph5.7ua液液：8mmol/lcacl2，30% peg，0.7mmol/l kh2po4，0.2mol/l甘露醇，甘露醇，ph 5.7ub液液： 100mmol/lcacl2， 0.7mmol/l kh2po4，ph 10

3、 1.原生質(zhì)體的分離與純化u酶液：2%纖維素酶，1%果膠酶，以10ml 4液溶解定容，4000rpm 離心6min，上清液置于三角瓶中，u取菠菜葉片撕去下表皮，每小組0.2g切成小塊放到10ml酶液中，在26下，避光酶解45小時(shí)u酶解產(chǎn)物以80目細(xì)胞篩過(guò)濾，吸取4ml過(guò)濾液置于離心管中，700rpm，5min，棄上清u以1液重新懸浮沉淀，定容至4ml。另取離心管內(nèi)注入6ml 3液，將4ml 懸浮原生質(zhì)體，輕緩鋪于蔗糖溶液上，1000rpm，510minu以20ul 槍吸出中間層置于2ml離心管中，勿觸及下層蔗糖溶液，以 2液 800rpm，3min，離心清洗，棄上清，定容至2ml 1液中，以膠頭滴管吸取置于載玻片上鏡檢本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求