怎樣正確采集病原微生物標本要點教學(xué)課件

1、 解決方案解決方案 1.提高病原微生物的送檢率，強調(diào)在使用抗生素之 前采集標本； 2.提高送檢標本的質(zhì)量； 3.提高實驗室的檢測能力。 期待明年的耐藥數(shù)據(jù)能真正反映我院病原菌的分 布和耐藥情況，可以用作經(jīng)驗選藥的依據(jù)。 實驗結(jié)果的影響因素實驗結(jié)果的影響因素 檢驗前因素檢驗中因素 檢驗后因素 常見微生物標本的正確采集常見微生物標本的正確采集 血液和骨髓的采集; 痰標本的采集; 咽拭子標本的采集; 尿液標本的采集; 膿、創(chuàng)傷感染標本的采集; 穿刺液標本的采集; 糞便標本的采集; 血液和骨髓的采集血液和骨髓的采集 采血的時機？ 采血的方法？ 正確的采血量應(yīng)該是多少? 血培養(yǎng)陰/陽性有什么臨床意義？

2、什么情況需要做血培養(yǎng)什么情況需要做血培養(yǎng) 有不明原因的發(fā)熱、體溫過低等癥狀； 懷疑有菌血癥或膿毒癥如休克、寒顫等; 嚴重的局部感染； 呼吸頻率加快等。 采集血培養(yǎng)標本的最佳時間？采集血培養(yǎng)標本的最佳時間？ 1.有發(fā)熱等癥狀時； 2.在使用抗生素的情況下； 3.懷疑有亞急性心內(nèi)膜炎時。 病例:女性患者，懷疑為亞急性心內(nèi)膜炎入院， 入院后當天連續(xù)送三次血培養(yǎng)均為陰性，但臨 床上有明顯的膿毒血癥癥狀。微生物室注意到 三次血培養(yǎng)的抽血時間為4pm,6pm和9pm，與主 管醫(yī)生溝通后，建議兩小時內(nèi)連續(xù)送三次血培 養(yǎng)。結(jié)果第二批血培養(yǎng)中有二次為陽性，均培 養(yǎng)出草綠色鏈球菌。 亞急性心內(nèi)膜炎亞急性心內(nèi)膜炎

3、懷疑有亞急性心內(nèi)膜炎或?qū)Ч芟嚓P(guān)性菌血癥時： 12小時內(nèi)采集三份血標本 正確的采血方法正確的采血方法 采血時的皮膚消毒推薦采用三步消毒法： 1.首先用70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒鐘以上。 2.然后用一根碘酊或碘伏棉簽消毒皮膚（1%2%碘酊 30秒或10%碘伏消毒60秒），從穿刺點向外以 1.5cm2cm直徑畫圈進行消毒。 3.最后用70%酒精脫碘。 注意對碘過敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒 鐘，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。 血養(yǎng)瓶消毒程序： 1 用70%酒精或碘溶液(不要使用碘)消毒血培養(yǎng)瓶 橡皮塞子。 2 酒精作用約60秒。 3 在血液注入血培養(yǎng)瓶之前,用無菌紗布清除橡

4、皮 塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。 正確的采血量應(yīng)該是多少正確的采血量應(yīng)該是多少? ? 血培養(yǎng)應(yīng)采集多少次血培養(yǎng)應(yīng)采集多少次 1.推薦24h內(nèi)連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標本； 一次血培養(yǎng)約可以檢出72的血流感染，二次約可檢 出約93，三次約可檢出約97； 2.如果培養(yǎng)48h以后為陰性，若臨床懷疑為菌血癥的應(yīng)在 24h內(nèi)再連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標本； 3.不主張每天采集血培養(yǎng)標本。 血培養(yǎng)陽血培養(yǎng)陽/ /陰性的臨床意義陰性的臨床意義 1.培養(yǎng)出革蘭陰性菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌 等時，多數(shù)可以確認為病原菌； 2.培養(yǎng)出凝固酶陰性葡萄球菌、草綠色鏈球菌、 芽胞桿菌等時，感染？污染？ 解決方案解決方案 需多

5、次多部位/ /天 采血。 24小時內(nèi)連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標本。 采集血培養(yǎng)標本方面存在的問題采集血培養(yǎng)標本方面存在的問題 1.采血的量不太準確，很多培養(yǎng)采血量遠遠超量； 2.采血的時機不夠準確，采血時機與體溫變化的關(guān)系 不太熟悉； 3.采集標本的次數(shù)和頻率不太準確，很多醫(yī)生喜歡每 天采集一次或僅采集一次； 什么情況需要采集骨髓標本什么情況需要采集骨髓標本 1.疑為細菌性或真菌性骨髓炎的患者； 2.疑為傷寒感染的患者； 痰標本的采集痰標本的采集 要求采集肺深部的痰液，不要唾液。 一般采用自然咳痰法，但以氣管鏡 采集法標本質(zhì)量最好。 自然咳痰法 ； 氣管鏡采集法； 小兒取痰法； 導(dǎo)管尖送檢； 下呼吸

6、道標本下呼吸道標本 所有病人的下呼吸道標本應(yīng)在采集后立即送至微 生物室，并于1小時內(nèi)接種 室溫下放置1h會降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿 菌的分離率而定植于上呼吸道的非致病菌則會 過度生長 下呼吸道標本勿放冰箱或運輸時勿置于冰塊中 痰涂片檢查是否標本合格痰涂片檢查是否標本合格 痰肉眼觀察: 記錄標本外觀 唾液、帶血、粘液樣、水樣、膿性的、粘液 膿性、膿性粘液樣 顯微鏡檢查：取膿性部分涂在玻片上 作革蘭染色. 低倍視野下看涂片，記錄5個視野下 平均細胞數(shù)。 痰涂片的判定痰涂片的判定 分類 WBC 鱗狀上皮細胞 6 25 25 25 10-25 3 25 25 2 10-25 25 1 25 分類中1

7、3類不做培養(yǎng)，要求重新留取標本； 4、5類為合格標本；6類為氣管穿刺液時，如未見白細胞， 而鱗狀上皮細胞10/低倍，亦應(yīng)重新留取標本。 痰標本采集存在的問題痰標本采集存在的問題 1.痰標本的合格程度偏低，一般痰標本的合格率不 到40%； 2.標本的轉(zhuǎn)運時間過長，很多標本送到實驗室已經(jīng) 超過2小時。 咽拭子標本的采集咽拭子標本的采集 標本采集應(yīng)在用藥前，最好在清晨，囑患者用清 水漱口，由檢查者將舌向外拉，使懸雍垂向外牽 引，將咽拭子超過舌根到達咽后壁或懸雍垂的后 側(cè)，在咽部肉眼見明顯發(fā)紅或有假膜處局部反復(fù) 涂抹棉拭(注意不要碰著口腔粘膜)，放入無菌試 管內(nèi)立即送檢。 尿液標本的采集尿液標本的采集

8、 中段尿采集法 導(dǎo)尿法 膀胱穿刺取尿法 留尿法 尿液標本采集存在的問題尿液標本采集存在的問題 1.隨機尿代替中段尿送檢，特別是門診病人； 2.部份標本存在污染情況； 3.部份插管患者采集了尿袋中的尿液； 4.標本中的轉(zhuǎn)運時間過長。 膿、創(chuàng)傷感染標本的采集膿、創(chuàng)傷感染標本的采集 首先用無菌生理鹽水拭凈病灶表面的污染雜菌。 對已破潰的膿腫用無菌的棉拭子取深部的膿液和 分泌物；未破潰的膿腫消毒皮膚后，用無菌注射 器抽取膿液及分泌物立即送檢。如深部膿腫在送 需氧培養(yǎng)的同時應(yīng)考慮送厭氧培養(yǎng)，厭氧培養(yǎng)標 本應(yīng)隔絕空氣立即送檢。當創(chuàng)傷出血時，敷用藥 物2h以內(nèi)及燒傷在12h內(nèi)不應(yīng)采集標本，此時獲得 陽性結(jié)果

9、的機會很少。 穿刺液標本的采集穿刺液標本的采集 應(yīng)在患者用藥之前或停藥1-2d后進行穿刺，標 本應(yīng)立即送檢或保存于4冰箱。腦脊液標本應(yīng) 保溫（25-37），抽2ml直接注入小兒瓶中,同 時再另抽1-2ml于無菌容器同時送檢并立即送檢。 糞便標本的采集糞便標本的采集 自然排便采集法自然排便采集法 直腸拭子采集法直腸拭子采集法 有腹瀉的病人，在送培養(yǎng)標本的同時可以送 細菌涂片檢查?？股叵嚓P(guān)性腹瀉性腹瀉，培養(yǎng) 是陰性，但涂片檢查卻可以看到細菌比例失調(diào)， 涂片臨床意義大于培養(yǎng)。 生殖道標本采集生殖道標本采集 （一）送檢指征 1. 男性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn) 尿急、尿頻、尿痛 尿道分泌物增多 會陰部疼痛及陰囊疼

10、痛 性功能障礙 泌尿生殖器畸形和缺損 女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn) 分泌物增多及性狀異常 尿道口搔癢及膿性分泌物流暢 下腹疼痛 月經(jīng)失調(diào) 陰道出血 外陰搔癢 外陰或陰道疼痛 性功能障礙 （二）標本采集 生殖器官標本包括子宮頸、陰道、前列腺； 男性及女性外生殖器的分泌物及經(jīng)血等。應(yīng)根 據(jù)感染的部位和可能的病原體決定用于病原學(xué) 診斷的標本種類、采集部位和采集方法等。陰 道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集， 收集于無菌試管內(nèi)送檢。 尿道分泌物尿道分泌物 1.女性尿道：患者排尿1小時后采集，首先拭去尿道 口的滲出物；再用拭子通過陰道，靠著恥骨聯(lián) 合，按摩尿道，采集分泌物；如未獲得分泌物， 清洗

11、外尿道，用滅菌紗布或棉球擦拭，用泌尿 生殖道拭子插入尿道24cm，旋轉(zhuǎn)拭子2秒。 2. 男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm， 旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。 陰道分泌物陰道分泌物 擦除過多的分泌物和排出液，用無菌棉拭子采 取陰道口內(nèi)4厘米內(nèi)側(cè)壁或后穹窿處分泌物，如 果需要涂片，需再用一個拭子。 男性前列腺男性前列腺 用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口， 沖洗尿道膀胱，從肛門用手指按摩前列腺，使前 列腺液溢出，用無菌容器收集。無肉眼可見膿液 時，可用滅菌拭子輕輕伸入前尿道內(nèi)，旋轉(zhuǎn)拭子 采集標本。 注意事項注意事項 1.生殖器是開放性器官，標本采集過程中應(yīng)嚴格遵 循無菌操

12、作規(guī)程以減少雜菌污染。 2.由于陰道正常菌群的存在而使細菌的分離鑒定 受到干擾，所以在采集女性生殖道標本時應(yīng)注意盡 量減少或避免正常菌群的污染。 3.疑有宮腔感染，如遇產(chǎn)婦需行剖宮產(chǎn)，待胎兒 娩出后取宮腔分泌物，并同時取嬰兒耳拭子一同送 檢。 4.沙眼衣原體和病毒均在宿主細胞內(nèi)繁殖，取材 時拭子應(yīng)在病變部位（移行上皮處稍內(nèi)）停留十幾 秒鐘，并采集盡可能多的上皮細胞。 5. 生殖道感染厭氧菌也較多見，疑有厭氧菌感染 時，標本采集和運送應(yīng)避免與氧氣接觸，最佳方法 是床邊采樣，直接接種至厭氧裝置內(nèi)。 6. 淋病奈瑟菌檢查時，取材的深度一定要夠，因 為淋球菌好發(fā)于柱狀上皮細胞而不是復(fù)層鱗狀上皮 細胞。不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道 及子宮頸3cm深轉(zhuǎn)動并停留10-30s取樣送檢。 7. 淋病奈瑟菌抵抗力低，對外環(huán)境變化頗為敏感， 對寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有 足夠的成功率，取材后要盡快送檢，立即接種，標 本離體時間越短越好。 微生物培養(yǎng)還應(yīng)注意的問題微生物培養(yǎng)還應(yīng)注意的問題 1.培養(yǎng)陽性的分離菌不一定是真的病原菌，特 別從有菌部位來的，如痰標本； 2.無菌部位培養(yǎng)出來的病原菌應(yīng)當連續(xù)監(jiān)測， 若病原菌發(fā)生改變或治療效果不佳時應(yīng)考慮 更換抗生素； 3.細菌的耐藥性在治療過程中可以會發(fā)生改變， 要注意觀察是否有耐藥性的變遷。 醫(yī)院感