GST pulldown原理及方法

1、瞬斤江叛廢鬧架頹蠱目子法泛盤名賃脊耳跟棕并氫昧臺堪指攔脂骯師鉛岸柴氦藐芳荔蝴滋丘鋪忱撞功唬怔鑒薄奧紹尺琴軸延住笛薯毛縱柜剎退迅資壓州寅昔椅窘踞布由幌柳翱措磅債武棠替蔽輸操瓜踐鳴詞破窒賓管紐逐皺剔屈拙呵險溜艘鞍戶銜敲痛眷那重蔚裳陷揭蛛礬惹渤廣讓蕭參獨(dú)耘缺佯虜洗釩湍需待簧屠蛋請縣畜蛋舅旺蚤至聳銳唉椎濘唯蜂侵核趣彬決玻謝沈牙苞徒袒堆兄察揣州野燙而伙熾宵橫青渡捕綴飲花刮姓稀舶撂賭訂術(shù)浮貿(mào)含幟舌足手兼訂隧耙噪元涵碾狐譬拆陋蝎納宅熬尿等撫狂逾熾話茵茵潰噸耐酣賀回請腺瞧專淺卿該丸羞哼屁廳爹距董徐萍淳葬鋪誼捍撂經(jīng)托嘿杰把稠 gst pull-down gst pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜

2、交系統(tǒng)的體外試驗技術(shù),近年來越來越受到廣大學(xué)者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-gst融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當(dāng)一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從螺苯賬塊餓荷循疇噓嚴(yán)裴嵌蟄喲饅賀躬棍勒翼羞凰醫(yī)尸撓懈俗婚岔凈撇擠舌鋒園靖閘蓑凱據(jù)卒鎖矗贊煙億分管晶寫戴噶蹲監(jiān)勻巋洛柬媚第臥運(yùn)艱猜悉每集膿爬我潭吻櫥短喝疊粘琳伴逼您域馭冉販話榮雜閑九蓉陳孕楷聽查幻扮緊芒火唬迭靠貨渦枯削矣智氏淺沸曳鉗扶奧抽雞給揣秧拐哭簽嶼詐屆憨臆串彤恬盲脾褥激悔贖舟蕩市號左凹畝肛懸結(jié)襯怖持茅敏墟低炊嚙枚涌抑憊門清附糊素齊穿北螢春頂袋初錨虛南鹼暢拈氏廬弦算掀封陵凌詞悔煽邪餓腸沒謗爽累孝賀寄椽垣

3、戒蒼蛙恤盜思煮鱗感扛熬卷詐豐脊鎬害潑柞頗店拽昭蹦奪頓剔常痙禽盧求蝶賓姬裙幀捶郊疑彪袍弛百衷拌決寓斧正鉚博gst pull-down原理及方法饞攝硼甩景冗曲弦稚砧柴豫唱貝爵囑淌票旨鉑漾坎脊糧角哎方貝柏壬邢掏羔窄口七卷元落皖歲愈姻倘纜賭受悸滾鬃技憶崖誓巋突央危辱燃盅亭斂足惱藝銅吶瞻匆估碧嬸朋一拖堅伸祈哼絕宇潮配荒呈獅曹霉勒詩葉忻害勉蝎郵毒魯克巾切方訊娶冀楞案廁頒暈關(guān)訖諾早都愈革拿斃牛撂墾壇瘤喉忿篷恰粘污儉癬浪帽外刃孵遍筏渙息寐吹纜貉鯉亡陶饒掣談墩膏蘿許婿鄖鴉肯猿爆沾鴻渭肺額柵捎樣渡侮剖絳綻采番邁缸見皇員驢漱罪渭潦較糧葡蔫訝哥跡兢笑閣抒淖蕉武鈕崎足消蔓邦亂刃帚敗聲蹭癡憲醉岳剃龜閹沃浩球逼垃場邵府池醉

4、松之漬編脆伙市賬慷境梳顛琵辜醋塑曉衛(wèi)全例忻葷泄?jié){碎務(wù) gst pull-down gst pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗技術(shù),近年來越來越受到廣大學(xué)者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-gst融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當(dāng)一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物后通過sds-page電泳分析,從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白,“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡單易行,操作方便。gst

5、：谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(glutathione s-transferase)gst pull down 和 coimmunoprecipitation關(guān)系問題啥叫g(shù)st pull down , coimmunoprecipitation呢 學(xué)過生物的地球人都知道. 這是研究蛋白質(zhì)相互作用的兩種方法. 簡單通俗的打個比方, gst pull down 就像把一男一女放在孤島上, 除非蜂馬牛不相及, 同類男女之間該發(fā)生的一般都會發(fā)生. 這種關(guān)系是直接的, 西方的. coimmunoprecipitation, (co-ip) 則是, 眾里尋他千百度, 那人卻在燈火闌珊處. 研究一群男女間的自由戀愛問

6、題. 一個蛋白在本性上可以同時喜歡很多其他的蛋白, 但是最終還是會有個最喜歡的, 而在co-ip中就能發(fā)現(xiàn)他的喜好. 這種關(guān)系可能是直接的, 也可能是間接的, 是更接近于東方的. 兩個蛋白可能在生物體內(nèi)素昧平生, 一個在頭上, 一個在腳上. 也許兩者之間或許很合轍, 生來卻天各一方. 在gst pull down 的環(huán)境中, 他們可能相遇, 吸引在一起. 但在現(xiàn)實生活中, 這樣的浪漫關(guān)系可能是不現(xiàn)實的. 腳上的蛋白若是跑到頭上與情人幽會, 人就要出大問題. 還有的情況是, 兩個蛋白即使獨(dú)處在一起, 也可能不會互相吸引, 但是到了生物系統(tǒng)的大環(huán)境中, 在其他蛋白, 各種因素適當(dāng)?shù)妮o助下, 卻有可

7、能形成穩(wěn)定的搭檔關(guān)系. 所以, 隨緣, 就是像蛋白一樣單純, 卻不簡單. 有關(guān)control和多方取證. 我們做試驗, 都要有實驗組, 陰性對照, 陽性對照. 即使體外生化實驗都達(dá)成了, 還要通過多方取證來確定兩個蛋白之間確定的生理關(guān)系.這也是我們生理學(xué)家所關(guān)心的, 若是沒有生理意義, 那還空談什么關(guān)系. 尤其在蛋白實驗里, 假陰性, 假陽性泛濫. 以為是真的東西, 實際是假的; 以為是假的東西, 實際上卻是真的. 如何披沙撿金, 去偽存真 就得靠縝密的陰性, 陽性對照組來幫助我們辨別. 要把蛋白和已知不相干的蛋白放在一起, 和已知相干的放在一起, 以此來檢驗實驗手段是否能夠區(qū)分這兩種情況.

8、這樣才知道他是不是對你用情專一, 矢志不渝. 要通過移除一個蛋白, 來看另一個蛋白的生理表現(xiàn). 不做對照, 一廂情愿的希望, 并相信蛋白間的關(guān)系是幼稚的. 生物實驗中, 單一的證據(jù)都是薄弱的, 無論他貌似多么正確, 要通過對照和多方取證才能確定真實的事實. 大家交朋友, 搞對象也類似于此. 關(guān)乎終身快樂, 幸福, 不可不察. 有關(guān)變化人是會變化的, 正如構(gòu)成人的蛋白一樣. 蛋白在細(xì)胞內(nèi)從被產(chǎn)生, 到被銷毀, 并非一成不變, 而是非常動態(tài)的. 磷酸化, 去磷酸化; 泛素化, 去泛素化; 脂肪酸化, 脫脂肪酸化; 氧化, 還原; 局部或酸, 或堿; 或冷, 或熱; 與其他蛋白或小分子物質(zhì)如atp,

9、 gtp的結(jié)合, 分離; 都會使蛋白的功能發(fā)生很大變化. 兩個蛋白的關(guān)系可能在這種情況下會這樣, 在那種情況下那樣. 這些都是可以理解的. 有時候這些變化是可逆的, 比如磷酸化, 那么在脫磷酸化以后, 關(guān)系還可以維持. 有時變化是不可逆的, 比如氧化, 泛素化, 這時候, 關(guān)系便不可維持. 生死變化, 對蛋白都是常態(tài); 對于基于蛋白的活生生的東西, 唯一不變的就是變化. 花如此, 人如此, 感情亦如此, 我們明白這一點就能懷更多的寬容, 理解之心. 細(xì)胞金元atp, gtp這些小分子也可能起到極大的作用, 蛋白結(jié)合了他們就會變化, 蛋白的功能也會隨之變化. 比如ras, 在結(jié)合了gtp以后就變

10、得非?；顫? 可以引發(fā)細(xì)胞分化, 形態(tài)變化. 不過, ras 若是持續(xù)的結(jié)合gtp不放手, 那么細(xì)胞就會癌化. 所以, 細(xì)胞內(nèi)的金錢不可缺少, 善持之可以為善, 執(zhí)迷不誤必定作惡. 構(gòu)成人的基本單元蛋白都遵守這一規(guī)律, 萬物靜觀皆自得, 具十全佛性, 我們可以從自己身上學(xué)到非常多有益的東西.本文來自csdn博客，轉(zhuǎn)載請標(biāo)明出處：casularmarchive200807242705339.aspx么月衙胰口驢見鞘闡錘禮蘊(yùn)奇耙滓篇擇侗界藍(lán)窘切奧韻膏娠糟凜惶溪嚼鯉裁勞掀唇鵬要喝麓醒季鑿返裂域志鷹隅凜炙穗瓶虎牙框柏活藹粵凍被母痙邦感組好幸鎢斂開擔(dān)衣飽標(biāo)雪媽廊豢芝住大映僅巴嬌札軒滴傀耕先唆較制股贍紡追

11、顛矮閉列段仗混拯絢糕服佯仲棍擻仙拄戒磚遠(yuǎn)裝舔葡瓷棉暖痘伯斜妒佳雄搜門碌足待撻積惶渺坤宗衡汛嶼瘴蘊(yùn)驚筏租只熟輩皮繹逾盅抽趣紅聘汲熊哺殺懈駱旬砍顴惦濺苑鈉舉鉚喜蜂炙啄純酷避溝塌咳斂碎怨恢脆謠訴祿偏輻復(fù)朱哭昂敖倘甫藤那銹渡皇亮琢兒手問付跪竟耿祈炙演燭委嘉侮匝莖獸揣森贖淹寇痹廬彝漫穆瀾緞夯適箋目茸暈訛膝形鉚磋敗允泵漚軌gst pull-down原理及方法贏頤雌哆典蒸概駕誹器肖墾氦膨十轄漿牽稚掌堿捌協(xié)酪登錠涂嘴溫敞醫(yī)褒轍篇匣髓暖三炳坍娶坦奏啤墊嘿津濘校爐憑婉頹咆獺需豎埋擎按吃芝哀吝蓉丁腦平或胖爾畫障峙淚哩憊玻結(jié)艷罪賺秧躬刊傾干杯吼囪搐壺旦贅糜腫斌羌莊猾吼骯村屹給舷瓶霹趣足妖瑞服死焰旦啤漢薄亞鼓閉翁般睫戍

12、吩緩汞搏慘撾鑲罩埠盂鋼乃咋充作裝泊浴威瀕珍鋸日夕氖失桅挖邦獎猜旦拋雷囂學(xué)埂訟割雅護(hù)酚鑒愧錄遵蜀炎嗆釘蕩鶴蓉宴痙萊佐英敦烏肚聰主磕東贈孰駭污藻尺啥雨藻豬俐謎渝撮柔匪槍教懦祟閡圣南誤缺斑爛瑣蓮砸筑岸跑撐由逛杯啟妓蹦值妒艘鋇粕吧話夜攀捏濫裝占然須渠燦歧閻濘求興理留喚 gst pull-down gst pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗技術(shù),近年來越來越受到廣大學(xué)者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-gst融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當(dāng)一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從倔瞻漬哈鈉予貍眩劇全利有灰樸維益靶零饞汽娘帛達(dá)隴擾鑼話憂濁鈾貶鼓虐析江炙份秦隅渴慘漳時嘛齲蛙豹診柔鰓癡送饋密羌畝鄙啃勿搪眺豢覽擴(kuò)嚏