第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析

1、第八章第八章 微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境第一節(jié) 環(huán)境污染的指示微生物第二節(jié) 污染物生物毒性的微生物學(xué)檢 測(cè)方法第三節(jié) 污染物致突變性的微生物檢測(cè) 方法第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析一、一般污染指示微生物v指示微生物：在常規(guī)環(huán)境監(jiān)測(cè)中，用以指示環(huán)境樣品污染性質(zhì)與指示微生物：在常規(guī)環(huán)境監(jiān)測(cè)中，用以指示環(huán)境樣品污染性質(zhì)與程度，并評(píng)價(jià)環(huán)境衛(wèi)生狀況的具有代表性的微生物。程度，并評(píng)價(jià)環(huán)境衛(wèi)生狀況的具有代表性的微生物。（一）細(xì)菌總數(shù)（一）細(xì)菌總數(shù)1 1、定義：環(huán)境中被測(cè)樣品在一定條件下培養(yǎng)后所得的、定義：環(huán)境中被測(cè)樣品在一定條件下培養(yǎng)后所得的1mL1mL或或1g1g檢樣中檢樣中所含有的細(xì)菌菌落總數(shù)。所含有的細(xì)菌

2、菌落總數(shù)。u反映環(huán)境中異養(yǎng)型細(xì)菌的污染從度，也間接反映一般營養(yǎng)性有機(jī)反映環(huán)境中異養(yǎng)型細(xì)菌的污染從度，也間接反映一般營養(yǎng)性有機(jī)物的污染程度。物的污染程度。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析2 2、方法、方法（1 1）液態(tài)與固態(tài)對(duì)象中的細(xì)菌總數(shù)）液態(tài)與固態(tài)對(duì)象中的細(xì)菌總數(shù)： 將經(jīng)過一定倍數(shù)稀釋的樣品懸液，定量接種將經(jīng)過一定倍數(shù)稀釋的樣品懸液，定量接種（傾注或圖布）于營養(yǎng)平板，有氧（傾注或圖布）于營養(yǎng)平板，有氧3737培養(yǎng)培養(yǎng)48h48h后觀察后觀察菌落。菌落。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析（2 2）空氣中的細(xì)菌總數(shù)：）空氣中的細(xì)菌總數(shù)：平板暴露沉降法采用直徑平板暴露沉降法采用直徑9cm9cm平平皿在皿在1.2m1

3、.2m高處暴露高處暴露5min5min，培養(yǎng)計(jì)，培養(yǎng)計(jì)數(shù)；數(shù)；奧氏公式：奧氏公式：5min5min內(nèi)落在內(nèi)落在100cm100cm2 2營營養(yǎng)瓊脂平板上的細(xì)菌數(shù)和養(yǎng)瓊脂平板上的細(xì)菌數(shù)和10L10L空空氣中所含的細(xì)菌數(shù)相同氣中所含的細(xì)菌數(shù)相同最小采樣量和最小沉降面積（為最小采樣量和最小沉降面積（為避免出現(xiàn)避免出現(xiàn)“0 0”粒的概率，確保結(jié)粒的概率，確保結(jié)果可靠性）。果可靠性）。儀器法采用固體撞擊式采樣器。儀器法采用固體撞擊式采樣器。C=100050NAtC空氣細(xì)菌數(shù)空氣細(xì)菌數(shù)A捕集面積，捕集面積，cm2t暴露時(shí)間，暴露時(shí)間，minN菌落數(shù)，個(gè)菌落數(shù)，個(gè)第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析菌落計(jì)算方法菌落計(jì)算

4、方法l有效菌落：無片狀菌落的平皿；若片狀菌落不到培養(yǎng)皿有效菌落：無片狀菌落的平皿；若片狀菌落不到培養(yǎng)皿一半，而另一半分布又均勻，可以半皿計(jì)數(shù)再乘一半，而另一半分布又均勻，可以半皿計(jì)數(shù)再乘2 2代表全代表全皿；皿；l選擇平均菌落數(shù)在選擇平均菌落數(shù)在3030300300之間進(jìn)行計(jì)算；之間進(jìn)行計(jì)算；l若有兩個(gè)稀釋度的平均符合，按兩者菌落總數(shù)之比來決若有兩個(gè)稀釋度的平均符合，按兩者菌落總數(shù)之比來決定，定，222則報(bào)告較少的菌落總數(shù)；則報(bào)告較少的菌落總數(shù)；l若均大于若均大于300300（小于（小于3030），按稀釋度最高（低）的平均），按稀釋度最高（低）的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)

5、告；l若所有稀釋度均不在若所有稀釋度均不在3030300300之間，則以最接近的報(bào)告。之間，則以最接近的報(bào)告。報(bào)告方式：報(bào)告方式：l100采用兩位有效數(shù)字，采用兩位有效數(shù)字，余者四舍五入；余者四舍五入；l無法計(jì)算時(shí)，注明稀釋倍數(shù)無法計(jì)算時(shí)，注明稀釋倍數(shù)第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析u結(jié)果：結(jié)果： cfu/mlcfu/ml或或cfu/gcfu/gu細(xì)菌總數(shù)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌總數(shù)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)生活飲用水生活飲用水100 cfu/ml100 cfu/ml室內(nèi)空氣室內(nèi)空氣5005001000 /m1000 /m3 3室內(nèi)空氣指示菌以咽喉正常菌叢中的綠色鏈球菌為最室內(nèi)空氣指示菌以咽喉正常菌叢中的綠色鏈球菌為最合適，在

6、上呼吸道和空氣中較易發(fā)現(xiàn)。合適，在上呼吸道和空氣中較易發(fā)現(xiàn)。u對(duì)方法的評(píng)價(jià)：相對(duì)性對(duì)方法的評(píng)價(jià)：相對(duì)性第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析 1mL 混合混合 1mL 混合混合 9mL 10mL 1 ： 10-1 10-1 ： 10-2 10-2 10-3 10-4 10-5得到不同得到不同稀釋度稀釋度 （10-x）菌液菌液第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析 10-2 10-3 10-4 10-5 第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析n細(xì)菌數(shù)量細(xì)菌數(shù)量=？n細(xì)菌數(shù)量細(xì)菌數(shù)量=數(shù)出的菌落數(shù)數(shù)出的菌落數(shù)/稀釋度稀釋度n例如：例如：10-5稀釋度時(shí)菌落數(shù)為稀釋度時(shí)菌落數(shù)為125個(gè)個(gè)n細(xì)菌數(shù)量細(xì)菌數(shù)量=125/10-5=1.25107個(gè)

7、個(gè)/mLn 平板計(jì)數(shù)法是采用最廣的一種活菌計(jì)數(shù)法平板計(jì)數(shù)法是采用最廣的一種活菌計(jì)數(shù)法n如國標(biāo)法水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定如國標(biāo)法水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定 。n注意：注意：作空白及取平行樣（作空白及取平行樣（2 23 3組）均值減小組）均值減小誤差誤差第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析（二）霉菌和酵母菌總數(shù)（二）霉菌和酵母菌總數(shù)u意義：偏酸性好氧條件，存活力強(qiáng)，有機(jī)營養(yǎng)物廣意義：偏酸性好氧條件，存活力強(qiáng)，有機(jī)營養(yǎng)物廣泛；反映環(huán)境的一般性污染。泛；反映環(huán)境的一般性污染。u方法：虎紅培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基等；傾注平板法；方法：虎紅培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基等；傾注平板法； 25-28 3-525-28 3-5天。天。u結(jié)果：結(jié)果： c

8、fu/mlcfu/ml或或cfu/gcfu/gu衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：u方法評(píng)價(jià)：主要適用于霉菌，酵母菌附帶生長，均方法評(píng)價(jià)：主要適用于霉菌，酵母菌附帶生長，均非環(huán)境中全部酵母菌。非環(huán)境中全部酵母菌。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析二、糞便污染指示菌二、糞便污染指示菌（一）糞便污染指示菌的理想條件：（一）糞便污染指示菌的理想條件：u是人畜糞便中的正常菌，且數(shù)量較糞便中其他菌為是人畜糞便中的正常菌，且數(shù)量較糞便中其他菌為多多u受人畜糞便污染的環(huán)境中可檢出，而未受污染環(huán)境受人畜糞便污染的環(huán)境中可檢出，而未受污染環(huán)境無該菌存在無該菌存在u排出至環(huán)境后，該菌存活時(shí)間與腸道致病菌相當(dāng)或排出至環(huán)境后，該菌存活時(shí)間與

9、腸道致病菌相當(dāng)或略長略長u對(duì)氯等消毒劑及其他不良因素的抵抗力略強(qiáng)于腸道對(duì)氯等消毒劑及其他不良因素的抵抗力略強(qiáng)于腸道致病菌致病菌u檢出與鑒定方法比較簡便迅速檢出與鑒定方法比較簡便迅速第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析（二）總大腸菌群（二）總大腸菌群v是一群能在是一群能在3737，24h24h內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧或內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧或兼性厭氧的兼性厭氧的G G- -無芽孢桿菌；無芽孢桿菌；v主要包括四個(gè)菌屬：埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、克主要包括四個(gè)菌屬：埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬；雷伯菌屬、腸桿菌屬；v方法：多管發(fā)酵法、濾膜法。方法：多管發(fā)酵法、濾膜法。不適于用大腸菌群作為糞便

10、污染指示菌的不適于用大腸菌群作為糞便污染指示菌的食品食品冷凍食品冷凍食品經(jīng)射線照射處理的食品經(jīng)射線照射處理的食品 pHpH較高的食品較高的食品 在上述食品中大腸菌群的細(xì)菌比許多在上述食品中大腸菌群的細(xì)菌比許多腸道病原微生物更易死亡腸道病原微生物更易死亡第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析1、多管發(fā)酵法、多管發(fā)酵法初發(fā)酵：在初發(fā)酵：在2 2個(gè)各裝有已滅菌的個(gè)各裝有已滅菌的50mL50mL濃乳糖蛋白胨的大濃乳糖蛋白胨的大發(fā)酵瓶中，無菌操作加入水樣發(fā)酵瓶中，無菌操作加入水樣100mL100mL；在；在1010只含只含5mL5mL培養(yǎng)培養(yǎng)基的發(fā)酵管中加水樣基的發(fā)酵管中加水樣10mL10mL，混勻后，混勻后3737

11、培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h；如無酸及氣體產(chǎn)生，為如無酸及氣體產(chǎn)生，為“”；如有酸和氣體，或無氣；如有酸和氣體，或無氣體但有酸產(chǎn)生，為體但有酸產(chǎn)生，為“”；如有氣體產(chǎn)生，但沒產(chǎn)酸，；如有氣體產(chǎn)生，但沒產(chǎn)酸，溶液也不渾濁，可能是操作技術(shù)溶液也不渾濁，可能是操作技術(shù) 問題，須重作檢驗(yàn)；問題，須重作檢驗(yàn)；平板分離：從陽性管中取液，分平板分離：從陽性管中取液，分 別接種在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或別接種在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，注意編號(hào)，伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，注意編號(hào)， 3737培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析多管發(fā)酵法多管發(fā)酵法如無細(xì)菌增殖現(xiàn)象，為如無細(xì)菌增殖現(xiàn)象，為“”；如僅發(fā)現(xiàn)芒狀、

12、霉?fàn)罨蚱渌麩o如僅發(fā)現(xiàn)芒狀、霉?fàn)罨蚱渌麩o關(guān)菌屬的菌落，為關(guān)菌屬的菌落，為“”；挑；挑取符合下列特征的菌落取符合下列特征的菌落1/31/3涂涂片、片、G G染色、鏡檢；染色、鏡檢；品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基：紫紅色，品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基：紫紅色，具金屬光澤；深紅色，不帶或具金屬光澤；深紅色，不帶或略帶金屬光澤；淡紅中心色較略帶金屬光澤；淡紅中心色較深；深；伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基：深紫黑色，伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基：深紫黑色，具金屬光澤；紫黑色，不帶或具金屬光澤；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤；淡紫紅色，中略帶金屬光澤；淡紫紅色，中心色較深。心色較深。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析多管發(fā)酵法多管發(fā)酵法復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：挑取鏡檢復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：挑取

13、鏡檢G G- -無芽孢桿菌的其余部分菌無芽孢桿菌的其余部分菌落，接種于含落，接種于含10mL10mL普通濃普通濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的發(fā)度乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的發(fā)酵管中，酵管中，3737培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h，觀，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣；察產(chǎn)酸產(chǎn)氣；根據(jù)復(fù)發(fā)酵結(jié)果，統(tǒng)計(jì)出根據(jù)復(fù)發(fā)酵結(jié)果，統(tǒng)計(jì)出陽性管及瓶數(shù)，查表得出陽性管及瓶數(shù)，查表得出總大腸菌群數(shù)?？偞竽c菌群數(shù)。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析多管發(fā)酵法多管發(fā)酵法v水源水檢驗(yàn)時(shí)水樣稀水源水檢驗(yàn)時(shí)水樣稀釋釋1010倍，預(yù)備倍，預(yù)備1515支發(fā)支發(fā)酵管，酵管，5 5支裝支裝5ml5ml濃培濃培養(yǎng)基，加水樣養(yǎng)基，加水樣10ml10ml；1010支裝支裝10ml10ml普通培

14、養(yǎng)普通培養(yǎng)基，基，5 5支加水樣支加水樣1ml1ml，5 5支加稀釋水樣支加稀釋水樣1ml1ml；以后檢測(cè)同飲用水，以后檢測(cè)同飲用水，根據(jù)存在的陽性管數(shù)根據(jù)存在的陽性管數(shù)查另外的檢數(shù)表。查另外的檢數(shù)表。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析濾膜法濾膜法比發(fā)酵法縮短時(shí)間，有可能在比發(fā)酵法縮短時(shí)間，有可能在24h24h內(nèi)完成。內(nèi)完成?？讖娇讖?.45-0.650.45-0.65mm，多孔性硝化纖維膜；，多孔性硝化纖維膜；濾膜滅菌：蒸餾水煮濾膜滅菌：蒸餾水煮15min15min3 3次；次；濾器滅菌：酒精棉球火焰滅菌或?yàn)V器滅菌：酒精棉球火焰滅菌或121 30min121 30min；過濾水樣：粗糙面向上，過濾水量

15、的確定以培養(yǎng)過濾水樣：粗糙面向上，過濾水量的確定以培養(yǎng)后濾膜上長出的菌落不多于后濾膜上長出的菌落不多于5050個(gè)為原則。個(gè)為原則。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析濾膜法濾膜法水樣過濾后，繼續(xù)抽氣水樣過濾后，繼續(xù)抽氣5s5s關(guān)閉，帶菌濾膜置于品紅亞關(guān)閉，帶菌濾膜置于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，二者之間不得留有氣泡，硫酸鈉培養(yǎng)基上，二者之間不得留有氣泡，3737培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h；挑取特征菌落染色鏡檢；挑取特征菌落染色鏡檢；G G- -無芽孢桿菌的穿刺接種到乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基無芽孢桿菌的穿刺接種到乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基（預(yù)先煮沸排氣），（預(yù)先煮沸排氣），3737培養(yǎng)培養(yǎng)6 68h8h，產(chǎn)氣者為，產(chǎn)氣者為“

16、”，培養(yǎng)基內(nèi)部形成龜裂狀，甚至部分上??；培養(yǎng)基內(nèi)部形成龜裂狀，甚至部分上??；第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析v結(jié)果與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)果與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：u大腸菌群數(shù)（個(gè)大腸菌群數(shù)（個(gè)/L/L或個(gè)或個(gè)/ml/ml）；飲用水標(biāo)準(zhǔn)：）；飲用水標(biāo)準(zhǔn)：0 0個(gè)個(gè)/100ml/100ml，土壤，土壤1001010-2-2v方法評(píng)價(jià)：發(fā)酵法耗時(shí)長、濾膜法不適于混濁度高方法評(píng)價(jià)：發(fā)酵法耗時(shí)長、濾膜法不適于混濁度高的水樣、結(jié)果可能不準(zhǔn)確、不能指示水中細(xì)菌；來的水樣、結(jié)果可能不準(zhǔn)確、不能指示水中細(xì)菌；來源不單一；不能指示病毒源不單一；不能指示病毒v新進(jìn)展：新進(jìn)展：“大腸菌群產(chǎn)色基質(zhì)試驗(yàn)大腸菌群產(chǎn)色基質(zhì)試驗(yàn)”兩個(gè)活性底物鄰硝基苯兩個(gè)

17、活性底物鄰硝基苯-D-吡喃半乳糖苷及吡喃半乳糖苷及4甲基傘形酮基甲基傘形酮基-D葡萄糖醛酸，分別被大腸葡萄糖醛酸，分別被大腸菌群的菌群的半乳糖苷酶和大腸桿菌的半乳糖苷酶和大腸桿菌的葡萄葡萄糖醛酸酶分解產(chǎn)生黃色的鄰硝基苯和發(fā)熒光的糖醛酸酶分解產(chǎn)生黃色的鄰硝基苯和發(fā)熒光的化合物，化合物，24h即可完成即可完成第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析糞大腸菌群u能在能在44.5發(fā)酵乳糖的大腸菌群，亦稱發(fā)酵乳糖的大腸菌群，亦稱耐熱性大腸菌群。耐熱性大腸菌群。u糞大腸菌群與糞便中大腸桿菌數(shù)直接相糞大腸菌群與糞便中大腸桿菌數(shù)直接相關(guān)，且在外環(huán)境中不易繁殖，因此意義關(guān)，且在外環(huán)境中不易繁殖，因此意義更大。更大。u方法：多管

18、發(fā)酵法、濾膜法方法：多管發(fā)酵法、濾膜法EC培養(yǎng)基：三號(hào)膽鹽、胰蛋白胨、乳糖培養(yǎng)基：三號(hào)膽鹽、胰蛋白胨、乳糖M-TEC培養(yǎng)基：眎蛋白胨、酵母膏、乳培養(yǎng)基：眎蛋白胨、酵母膏、乳糖、十二烷基磺酸鈉、脫氧膽鹽鈉、溴糖、十二烷基磺酸鈉、脫氧膽鹽鈉、溴甲酚紫、溴酚紅等甲酚紫、溴酚紅等第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析糞大腸菌群u結(jié)果：同總大腸菌群結(jié)果：同總大腸菌群u衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：u方法評(píng)價(jià)：是種較好的水中腸道致病菌的指方法評(píng)價(jià)：是種較好的水中腸道致病菌的指示菌示菌第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析糞鏈球菌u意義：意義：在人糞便中數(shù)量僅次于大腸菌群細(xì)菌在人糞便中數(shù)量僅次于大腸菌群細(xì)菌在水中不會(huì)自行繁殖，但抵抗力弱于致在水

19、中不會(huì)自行繁殖，但抵抗力弱于致病菌病菌為水質(zhì)細(xì)菌學(xué)評(píng)價(jià)提供有意義的補(bǔ)充材為水質(zhì)細(xì)菌學(xué)評(píng)價(jià)提供有意義的補(bǔ)充材料料根據(jù)根據(jù)Fe/Fs（糞大腸菌群（糞大腸菌群/糞鏈球菌）糞鏈球菌）來來推測(cè)糞便污染的來源，僅適于新鮮污染推測(cè)糞便污染的來源，僅適于新鮮污染u方法：多管發(fā)酵法、濾膜法方法：多管發(fā)酵法、濾膜法lFe/Fs 4，認(rèn)為污染主要來自于人糞；，認(rèn)為污染主要來自于人糞；l0.7，主要來自溫血?jiǎng)游锛S便，主要來自溫血?jiǎng)游锛S便l2，混合污染以人糞為主，混合污染以人糞為主l0.7，混合污染以動(dòng)物糞便為主，混合污染以動(dòng)物糞便為主第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析v產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌u意義：存在于人及溫血?jiǎng)游锛S便中，

20、具有芽意義：存在于人及溫血?jiǎng)游锛S便中，具有芽孢的厭氧桿菌；具有較強(qiáng)抵抗力，特別適用孢的厭氧桿菌；具有較強(qiáng)抵抗力，特別適用于含有毒物質(zhì)的水體于含有毒物質(zhì)的水體u方法：多管發(fā)酵法、濾膜法、傾注法方法：多管發(fā)酵法、濾膜法、傾注法v蛭弧菌蛭弧菌u意義：天然寄生菌，對(duì)污染的指示滯后，其意義：天然寄生菌，對(duì)污染的指示滯后，其指示污染可彌補(bǔ)大腸菌群的不足。指示污染可彌補(bǔ)大腸菌群的不足。u方法：自來水雙層瓊脂平板法方法：自來水雙層瓊脂平板法產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌蛭弧菌蛭弧菌第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析第三節(jié) 其他指示微生物v致病菌的指示菌致病菌的指示菌u沙門氏菌沙門氏菌u志賀氏菌志賀氏菌u銅綠假單胞菌銅綠假單胞

21、菌u金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌u鏈球菌鏈球菌u破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌腸炎沙門氏菌腸炎沙門氏菌志賀氏菌志賀氏菌銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌產(chǎn)色素的銅綠假單胞菌產(chǎn)色素的銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌鏈球菌鏈球菌破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析v腸道病毒的指示微生物腸道病毒的指示微生物u脊髓灰質(zhì)炎病毒脊髓灰質(zhì)炎病毒v選用理由：脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗株對(duì)環(huán)境壓選用理由：脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗株對(duì)環(huán)境壓力相對(duì)穩(wěn)定，抵抗力較其它病毒強(qiáng)，操作相力相對(duì)穩(wěn)定，抵抗力較其它病毒強(qiáng)，操作相對(duì)安全，與其他病毒比較易從環(huán)境樣品中檢對(duì)安全，與其他病毒比較易從環(huán)境樣品中檢測(cè)到測(cè)到v濃縮方法：濾膜法、氫氧化鋁吸附沉

22、淀法、濃縮方法：濾膜法、氫氧化鋁吸附沉淀法、聚乙二醇脫水透析法聚乙二醇脫水透析法v檢測(cè)方法：蝕斑實(shí)驗(yàn)、免疫學(xué)法檢測(cè)方法：蝕斑實(shí)驗(yàn)、免疫學(xué)法第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析u噬菌體噬菌體f2v選用理由：與腸道病毒基本性狀相似，選用理由：與腸道病毒基本性狀相似，核酸均為核酸均為RNA，理化性質(zhì)相近；存在，理化性質(zhì)相近；存在于人類糞便中，在水和污水中存在的于人類糞便中，在水和污水中存在的數(shù)目多于腸道病毒；對(duì)外環(huán)境和氯的數(shù)目多于腸道病毒；對(duì)外環(huán)境和氯的耐受力與腸道病毒相似或稍強(qiáng)；檢測(cè)耐受力與腸道病毒相似或稍強(qiáng)；檢測(cè)方法簡單方法簡單v檢測(cè)方法：空斑定量測(cè)定法檢測(cè)方法：空斑定量測(cè)定法第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析v不足

23、之處：在人糞便中數(shù)量不多；不足之處：在人糞便中數(shù)量不多；DNA大腸大腸桿菌噬菌體在人類糞便中經(jīng)常存在，并可能桿菌噬菌體在人類糞便中經(jīng)常存在，并可能在水環(huán)境中繁殖，易掩蓋或混淆。在水環(huán)境中繁殖，易掩蓋或混淆。v作為腸道病毒污染指標(biāo)不理想，可作為消毒作為腸道病毒污染指標(biāo)不理想，可作為消毒效果評(píng)價(jià)指標(biāo)效果評(píng)價(jià)指標(biāo)第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析第二節(jié) 污染物生物毒性的微生物學(xué)檢測(cè)方法 第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析一、原核微生物檢測(cè)法v發(fā)光細(xì)菌發(fā)光細(xì)菌細(xì)菌生物發(fā)光抑制試驗(yàn)細(xì)菌生物發(fā)光抑制試驗(yàn)v細(xì)菌發(fā)光的生物學(xué)機(jī)制：細(xì)菌發(fā)光的生物學(xué)機(jī)制：NADH2FMN細(xì)胞色素細(xì)胞色素O2蟲熒光色素酶蟲熒光色素酶O2，醛，醛激活的

24、蟲熒光色素酶激活的蟲熒光色素酶蟲熒光色素酶蟲熒光色素酶+光光第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析（一）細(xì)菌生物發(fā)光抑制試驗(yàn)v試驗(yàn)原理試驗(yàn)原理u環(huán)境條件不良或有毒物存在時(shí)，因細(xì)菌熒光環(huán)境條件不良或有毒物存在時(shí)，因細(xì)菌熒光素酶活性或細(xì)胞呼吸受到抑制，發(fā)光能力受素酶活性或細(xì)胞呼吸受到抑制，發(fā)光能力受影響而減弱，其減弱程度與毒物的毒性大小影響而減弱，其減弱程度與毒物的毒性大小和濃度成一定比例關(guān)系和濃度成一定比例關(guān)系u常用明亮發(fā)光桿菌常用明亮發(fā)光桿菌u“Microtox”法，是目前國際通用、使用最為法，是目前國際通用、使用最為廣泛的污染物毒性微生物學(xué)檢測(cè)方法廣泛的污染物毒性微生物學(xué)檢測(cè)方法第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析細(xì)

25、菌生物發(fā)光抑制試驗(yàn)v試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法u菌種復(fù)蘇：加入菌種復(fù)蘇：加入2NaCl，穩(wěn)定，穩(wěn)定12hu樣品處理：樣品稀釋并調(diào)樣品處理：樣品稀釋并調(diào)pH68，同時(shí)調(diào)，同時(shí)調(diào)溶液的滲透壓使之含溶液的滲透壓使之含2NaCl。u毒性測(cè)定：定量加入菌液和樣品，毒性測(cè)定：定量加入菌液和樣品，15培培養(yǎng)養(yǎng)5或或10min，直接讀出光量抑制百分率，直接讀出光量抑制百分率 求不同劑量及其求不同劑量及其IR之間的回歸方程，計(jì)算之間的回歸方程，計(jì)算IC50凍干菌種：白色粉末狀，含凍干菌種：白色粉末狀，含4發(fā)光發(fā)光菌細(xì)胞，菌細(xì)胞，2NaCl，保護(hù)劑和緩沖物，保護(hù)劑和緩沖物質(zhì)，質(zhì)，2025備用，有效期一備用，有效期一年年IR

26、陰性對(duì)準(zhǔn)組指標(biāo)值實(shí)驗(yàn)組指標(biāo)值陰性對(duì)準(zhǔn)組指標(biāo)值實(shí)驗(yàn)組指標(biāo)值陰性對(duì)準(zhǔn)組指標(biāo)值陰性對(duì)準(zhǔn)組指標(biāo)值100陽性有機(jī)對(duì)照苯酚陽性有機(jī)對(duì)照苯酚陽性無機(jī)對(duì)照陽性無機(jī)對(duì)照Zn2+陰性對(duì)照蒸餾水陰性對(duì)照蒸餾水第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析細(xì)菌生物發(fā)光抑制試驗(yàn)u質(zhì)量控制質(zhì)量控制v同一劑量平行測(cè)定管間的發(fā)光強(qiáng)度差異值應(yīng)同一劑量平行測(cè)定管間的發(fā)光強(qiáng)度差異值應(yīng)20v100mg/L苯酚的苯酚的IC50,5min應(yīng)為應(yīng)為1326mg/Lv100mg/L ZnSO47H2O的的IC50,15min應(yīng)為應(yīng)為310mg/L第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析細(xì)菌生物發(fā)光抑制試驗(yàn)v方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)u與傳統(tǒng)魚類與傳統(tǒng)魚類96h毒性試驗(yàn)有良好的一致性毒性試

27、驗(yàn)有良好的一致性u(píng)靈敏、快速，自動(dòng)化程度高靈敏、快速，自動(dòng)化程度高u各實(shí)驗(yàn)室間重現(xiàn)性好，變異系數(shù)各實(shí)驗(yàn)室間重現(xiàn)性好，變異系數(shù)1020，明顯好于傳統(tǒng)魚類明顯好于傳統(tǒng)魚類96h毒性試驗(yàn)毒性試驗(yàn)u目前目前“Microtox”已有效地應(yīng)用于化學(xué)物質(zhì)的已有效地應(yīng)用于化學(xué)物質(zhì)的定量構(gòu)效關(guān)系研究定量構(gòu)效關(guān)系研究第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析（二）硝化細(xì)菌硝化作用抑制試驗(yàn)v試驗(yàn)原理試驗(yàn)原理u毒物抑制硝化作用的酶類導(dǎo)致亞硝化或硝化毒物抑制硝化作用的酶類導(dǎo)致亞硝化或硝化細(xì)菌對(duì)底物的利用能力或產(chǎn)物生產(chǎn)量下降。細(xì)菌對(duì)底物的利用能力或產(chǎn)物生產(chǎn)量下降。通過測(cè)量底物或產(chǎn)物的變化來檢測(cè)污染物毒通過測(cè)量底物或產(chǎn)物的變化來檢測(cè)污染物毒

28、性作用的程度性作用的程度v試驗(yàn)方法：試驗(yàn)方法：v方法評(píng)價(jià)：靈敏度與方法評(píng)價(jià)：靈敏度與“Microtox”相當(dāng)，但結(jié)相當(dāng)，但結(jié)果相關(guān)性較差果相關(guān)性較差l菌種增至108個(gè)/mll定量加入菌液、NaNO2溶液、不同濃度樣品，蒸餾水做對(duì)照l30培養(yǎng)4h，定時(shí)取樣分析NO2-含量隨時(shí)間變化，得出硝化作用強(qiáng)度l比較樣品組與對(duì)照組，可得IC50第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析二、真核微生物檢測(cè)法（一）藻類（一）藻類生長抑制試驗(yàn)生長抑制試驗(yàn)u試驗(yàn)原理：常用硅藻、柵藻、小球藻等，生試驗(yàn)原理：常用硅藻、柵藻、小球藻等，生長迅速，對(duì)水質(zhì)變化敏感，通過測(cè)定其生長長迅速，對(duì)水質(zhì)變化敏感，通過測(cè)定其生長量來反應(yīng)水質(zhì)污染情況或物質(zhì)

29、毒性程度量來反應(yīng)水質(zhì)污染情況或物質(zhì)毒性程度u試驗(yàn)方法：藻體生長量；釋出氧量；攝取試驗(yàn)方法：藻體生長量；釋出氧量；攝取14C量；細(xì)胞量；細(xì)胞DNA及及ATP測(cè)定測(cè)定u結(jié)果評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)：藻細(xì)胞最大生長速率與對(duì)結(jié)果評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)：藻細(xì)胞最大生長速率與對(duì)照相比降至照相比降至50以下，且呈劑量反應(yīng)關(guān)系以下，且呈劑量反應(yīng)關(guān)系時(shí)，即可認(rèn)為受試物有毒性作用時(shí)，即可認(rèn)為受試物有毒性作用第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析（二）原生動(dòng)物微尺度群落級(jí)毒性試驗(yàn)u試驗(yàn)原理：在正常條件下自然界水環(huán)境的微試驗(yàn)原理：在正常條件下自然界水環(huán)境的微型生物群落種類、分布與構(gòu)成均有一定規(guī)律。型生物群落種類、分布與構(gòu)成均有一定規(guī)律。在外界環(huán)境因素的干擾

30、下，群落的平衡被破在外界環(huán)境因素的干擾下，群落的平衡被破壞，結(jié)構(gòu)特征也隨之變化。通過分析相關(guān)的壞，結(jié)構(gòu)特征也隨之變化。通過分析相關(guān)的微型生物群落結(jié)構(gòu)參數(shù)，即可判斷水環(huán)境的微型生物群落結(jié)構(gòu)參數(shù)，即可判斷水環(huán)境的質(zhì)量狀況或污染物質(zhì)的毒性特征。具有很強(qiáng)質(zhì)量狀況或污染物質(zhì)的毒性特征。具有很強(qiáng)的生態(tài)學(xué)意義。的生態(tài)學(xué)意義。第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析原生動(dòng)物微尺度群落級(jí)毒性試驗(yàn)u聚氨酯泡沫塑料塊（聚氨酯泡沫塑料塊（PFU）法）法v作為微型動(dòng)物的生態(tài)島，其上原生動(dòng)作為微型動(dòng)物的生態(tài)島，其上原生動(dòng)物群集速度隨種類上升而下降，兩者物群集速度隨種類上升而下降，兩者交叉點(diǎn)及為平衡點(diǎn)，達(dá)到平衡時(shí)間取交叉點(diǎn)及為平衡點(diǎn)，達(dá)到

31、平衡時(shí)間取決于環(huán)境條件決于環(huán)境條件v據(jù)報(bào)道：孔徑據(jù)報(bào)道：孔徑100150 m，厚度，厚度5cm，規(guī)格，規(guī)格56.57.5cm3為好，可為好，可依靠垂墜物懸掛在任何水層依靠垂墜物懸掛在任何水層v據(jù)報(bào)道：其擠出液可見到水體中大約據(jù)報(bào)道：其擠出液可見到水體中大約85的原生動(dòng)物種類，可以反映整個(gè)的原生動(dòng)物種類，可以反映整個(gè)群落動(dòng)態(tài)變化的全過程和基本趨勢(shì)群落動(dòng)態(tài)變化的全過程和基本趨勢(shì)第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析原生動(dòng)物微尺度群落級(jí)毒性試驗(yàn)u試驗(yàn)方法與評(píng)價(jià)：一般情況下，隨著污染程試驗(yàn)方法與評(píng)價(jià)：一般情況下，隨著污染程度的升高，原生動(dòng)物種類數(shù)（度的升高，原生動(dòng)物種類數(shù)（S）會(huì)減少，多）會(huì)減少，多樣性指數(shù)（樣性指

32、數(shù)（d）會(huì)降低，）會(huì)降低，Seq會(huì)下降；在一個(gè)會(huì)下降；在一個(gè)以異養(yǎng)型生物為主的水體中，異養(yǎng)型指數(shù)以異養(yǎng)型生物為主的水體中，異養(yǎng)型指數(shù)（HI）高，表示存在有機(jī)污染，此時(shí)群集速）高，表示存在有機(jī)污染，此時(shí)群集速度常數(shù)（度常數(shù)（G）會(huì)增大，）會(huì)增大，T90會(huì)縮短會(huì)縮短第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析三、活性污泥毒性檢測(cè)法v脫氫酶活性試驗(yàn)脫氫酶活性試驗(yàn)u試驗(yàn)原理：活性污泥中微生物的脫氫酶類能試驗(yàn)原理：活性污泥中微生物的脫氫酶類能使被氧化有機(jī)質(zhì)的氫原子活化并傳遞給特定使被氧化有機(jī)質(zhì)的氫原子活化并傳遞給特定的氫受體，反映活性污泥對(duì)污水中有機(jī)質(zhì)的的氫受體，反映活性污泥對(duì)污水中有機(jī)質(zhì)的氧化分解能力。毒性物質(zhì)的存在會(huì)抑

33、制脫氫氧化分解能力。毒性物質(zhì)的存在會(huì)抑制脫氫酶的活性，可通過指示劑的還原變色速度來酶的活性，可通過指示劑的還原變色速度來確定脫氫酶的活性，以判斷毒性物質(zhì)的作用確定脫氫酶的活性，以判斷毒性物質(zhì)的作用強(qiáng)度。常用指示劑為強(qiáng)度。常用指示劑為TTC（氯化三苯基四氮（氯化三苯基四氮唑），它受氫后變?yōu)榧t色唑），它受氫后變?yōu)榧t色TF（三苯基甲臜）（三苯基甲臜）（485nm）第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析脫氫酶活性試驗(yàn)v試驗(yàn)方法：試驗(yàn)方法：uTF標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作u馴化的活性污泥經(jīng)離心洗滌制成懸浮液馴化的活性污泥經(jīng)離心洗滌制成懸浮液u在測(cè)定管中定量加入懸浮液、在測(cè)定管中定量加入懸浮液、Tris-HCl緩沖緩

34、沖液、樣品、液、樣品、TTC等，以蒸餾水做對(duì)照等，以蒸餾水做對(duì)照u37水浴避光反應(yīng)顯色，加濃硫酸終止水浴避光反應(yīng)顯色，加濃硫酸終止u加入丙酮萃取加入丙酮萃取TF，離心上清液，離心上清液485nm比色，比色，得得TF產(chǎn)生量，計(jì)算脫氫酶活性產(chǎn)生量，計(jì)算脫氫酶活性酶活：指酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力，衡量標(biāo)酶活：指酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力，衡量標(biāo)準(zhǔn)是酶促反應(yīng)速度的大小，用單位時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)是酶促反應(yīng)速度的大小，用單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量或產(chǎn)生生成量來表示底物的消耗量或產(chǎn)生生成量來表示第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析呼吸抑制試驗(yàn)u試驗(yàn)原理：廢水中有毒物質(zhì)可以抑制微生物試驗(yàn)原理：廢水中有毒物質(zhì)可以抑制微生物的呼吸，使其耗氧量和的呼

35、吸，使其耗氧量和CO2產(chǎn)生量下降，下產(chǎn)生量下降，下降的程度與毒性物質(zhì)的濃度和強(qiáng)度有關(guān)降的程度與毒性物質(zhì)的濃度和強(qiáng)度有關(guān)u試驗(yàn)方法：傳統(tǒng)的瓦勃氏呼吸儀法和目前的試驗(yàn)方法：傳統(tǒng)的瓦勃氏呼吸儀法和目前的直接測(cè)定直接測(cè)定DO法法u結(jié)果評(píng)價(jià)：結(jié)果評(píng)價(jià)：相對(duì)好氧速率相對(duì)好氧速率污泥的呼吸耗氧速率污泥的呼吸耗氧速率內(nèi)源性呼吸耗氧速率內(nèi)源性呼吸耗氧速率100第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析四、微生物學(xué)檢測(cè)法評(píng)價(jià)v簡便簡便v靈敏靈敏v快速快速v經(jīng)濟(jì)經(jīng)濟(jì)v結(jié)果的差異性結(jié)果的差異性v結(jié)果的變異性結(jié)果的變異性v與哺乳動(dòng)物試驗(yàn)互為補(bǔ)充與哺乳動(dòng)物試驗(yàn)互為補(bǔ)充第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析第三節(jié) 污染物致突變性的微生物檢測(cè)方法v一、基因

36、突變?cè)囼?yàn)v二、DNA損傷修復(fù)試驗(yàn)v三、DNA重組試驗(yàn)v四、微生物致突變?cè)囼?yàn)與致癌物的確定第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析一、 基因突變?cè)囼?yàn)v鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u應(yīng)用與評(píng)價(jià)：應(yīng)用與評(píng)價(jià)：v良好的環(huán)境致突變物與潛在致癌物初篩報(bào)警良好的環(huán)境致突變物與潛在致癌物初篩報(bào)警vAmes試驗(yàn)已被我國食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程試驗(yàn)已被我國食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序、農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法、新藥（西藥）序、農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法、新藥（西藥）毒理學(xué)研究指導(dǎo)原則、化妝品安全性評(píng)價(jià)程毒理學(xué)研究指導(dǎo)原則、化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法、食品功能毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)

37、序和方法、食品功能毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法等列為評(píng)價(jià)致突變性的必做試驗(yàn)方法等列為評(píng)價(jià)致突變性的必做試驗(yàn)第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u原理：原理： v人工誘變的鼠傷寒沙門氏菌株，又稱人工誘變的鼠傷寒沙門氏菌株，又稱TA（his）菌株，是組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，在）菌株，是組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，在致突變物的作用下，能發(fā)生回復(fù)突變?yōu)橐吧峦蛔兾锏淖饔孟?，能發(fā)生回復(fù)突變?yōu)橐吧托蛌根據(jù)該菌在特殊培養(yǎng)基上的生長能力，判斷根據(jù)該菌在特殊培養(yǎng)基上的生長能力，判斷受試物是否具有致突變性受試物是否具有致突變性v哺乳動(dòng)物肝勻漿

38、中含微粒體混合功能氧化酶，哺乳動(dòng)物肝勻漿中含微粒體混合功能氧化酶，對(duì)間接致突變物有生物活化作用對(duì)間接致突變物有生物活化作用第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u常用菌株：常用菌株：TA97、TA98、TA100、TA102組氨酸依賴性，組氨酸依賴性，+ +表示需要表示需要 深粗糙型脂多糖屏障丟失，深粗糙型脂多糖屏障丟失，+ +表示表示缺失，有抑菌缺失，有抑菌紫外線損傷修復(fù)基因缺陷，紫外線損傷修復(fù)基因缺陷，+ +表示缺失，無修復(fù)能力表示缺失，無修復(fù)能力抗氨芐青霉素因子，抗氨芐青霉素因子，+ +表示有表示有 抗四環(huán)素

39、質(zhì)粒，抗四環(huán)素質(zhì)粒，+ +表示有表示有第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：v菌株選擇：菌株選擇： TA97、TA98、TA100、TA102v溶劑選擇：根據(jù)受試物的理化性質(zhì)，水溶性溶劑選擇：根據(jù)受試物的理化性質(zhì)，水溶性的最好用滅菌雙蒸水，非水溶的一般常用二的最好用滅菌雙蒸水，非水溶的一般常用二甲基亞砜（甲基亞砜（DMSO），每皿有機(jī)溶劑用量不），每皿有機(jī)溶劑用量不得超過得超過0.1ml第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試

40、驗(yàn)）試驗(yàn)）v劑量選擇：在劑量選擇：在0.2500 g/皿之間選擇皿之間選擇2或或3個(gè)個(gè)劑量，常用為劑量，常用為0.2、2、20、500 g/皿。有殺皿。有殺菌作用的包括一個(gè)最低殺菌濃度，有沉淀的菌作用的包括一個(gè)最低殺菌濃度，有沉淀的包括一個(gè)最小沉淀濃度，誘變陰性的包括一包括一個(gè)最小沉淀濃度，誘變陰性的包括一個(gè)最大溶解濃度，無殺菌作用的最高檢測(cè)濃個(gè)最大溶解濃度，無殺菌作用的最高檢測(cè)濃度至少應(yīng)為度至少應(yīng)為500 g/皿。受試溶液應(yīng)新鮮配制皿。受試溶液應(yīng)新鮮配制v陽性對(duì)照物的選擇：必須同時(shí)做陽性對(duì)照，陽性對(duì)照物的選擇：必須同時(shí)做陽性對(duì)照，用以檢定菌株的回變性和特異性以及用以檢定菌株的回變性和特異性以

41、及S-9混合混合液的效果液的效果第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）v試驗(yàn)設(shè)計(jì)的嚴(yán)密性：受試物最少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑試驗(yàn)設(shè)計(jì)的嚴(yán)密性：受試物最少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量，以便觀察劑量反應(yīng)關(guān)系，同時(shí)設(shè)陽性對(duì)量，以便觀察劑量反應(yīng)關(guān)系，同時(shí)設(shè)陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和溶劑對(duì)照。陰性對(duì)照可反應(yīng)照、陰性對(duì)照和溶劑對(duì)照。陰性對(duì)照可反應(yīng)菌株的自發(fā)回變情況，溶劑對(duì)照可排除溶劑菌株的自發(fā)回變情況，溶劑對(duì)照可排除溶劑引起突變的可能性。同一樣品必須做加引起突變的可能性。同一樣品必須做加S-9混混合液和不加合液和不加S-9混合液的試驗(yàn)。試驗(yàn)時(shí)，每份混合液的試驗(yàn)。

42、試驗(yàn)時(shí)，每份樣品（包括對(duì)照）均應(yīng)做三個(gè)平行樣，至少樣品（包括對(duì)照）均應(yīng)做三個(gè)平行樣，至少應(yīng)做應(yīng)做2次重復(fù)試驗(yàn)，方可正式報(bào)告結(jié)果次重復(fù)試驗(yàn)，方可正式報(bào)告結(jié)果第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：vS-9液取材：選用液取材：選用200g左右、健康雄性左右、健康雄性Sprague-Dawley系大鼠或系大鼠或150g左右、健康雄左右、健康雄性性Wister大鼠。大鼠。v營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（增菌用）：含牛肉膏、蛋白營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（增菌用）：含牛肉膏、蛋白胨胨vVogel-Bonner氏液：含多種無機(jī)鹽氏液：含

43、多種無機(jī)鹽v底層瓊脂（供細(xì)菌生長）：含底層瓊脂（供細(xì)菌生長）：含V-B液、葡萄糖液、葡萄糖v頂層瓊脂（致突變?cè)囼?yàn)）：含生物素、組氨酸頂層瓊脂（致突變?cè)囼?yàn)）：含生物素、組氨酸第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）v營養(yǎng)瓊脂（鑒定菌株特性）營養(yǎng)瓊脂（鑒定菌株特性）v氨芐青霉素平皿（鑒定氨芐青霉素平皿（鑒定R因子）：含因子）：含V-B液、葡萄糖、生物素、組氨酸、氨芐青液、葡萄糖、生物素、組氨酸、氨芐青霉素霉素v組氨酸組氨酸/生物素平皿（鑒定生物素平皿（鑒定His）：含）：含V-B液、葡萄糖、生物素、組氨酸液、葡萄糖、生物

44、素、組氨酸vMaster平板（短期保存菌種）：含平板（短期保存菌種）：含V-B液、葡萄糖、生物素、組氨酸、氨芐青液、葡萄糖、生物素、組氨酸、氨芐青霉素霉素第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u試驗(yàn)方法：試驗(yàn)方法： v紙片點(diǎn)試法：定性試驗(yàn)紙片點(diǎn)試法：定性試驗(yàn)p結(jié)果評(píng)價(jià)：如果僅在平板上出現(xiàn)少量的散的結(jié)果評(píng)價(jià)：如果僅在平板上出現(xiàn)少量的散的菌落認(rèn)為是陰性致突變物。如果浸有受試物菌落認(rèn)為是陰性致突變物。如果浸有受試物的紙片周圍長出較多密集的回變菌落與空白的紙片周圍長出較多密集的回變菌落與空白對(duì)照有明顯區(qū)別者，可判定該受試物

45、為陽性對(duì)照有明顯區(qū)別者，可判定該受試物為陽性致突變物致突變物紙片周圍回變菌落數(shù)紙片周圍回變菌落數(shù)20，為，為“-”紙片周圍回變菌落數(shù)紙片周圍回變菌落數(shù)100，為，為“+”紙片周圍回變菌落數(shù)紙片周圍回變菌落數(shù)200，為，為“+”紙片周圍回變菌落數(shù)紙片周圍回變菌落數(shù)500，為，為“+”第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u平皿滲入法：定量試驗(yàn)平皿滲入法：定量試驗(yàn)v結(jié)果評(píng)價(jià)：結(jié)果評(píng)價(jià)：p陽性結(jié)果的判斷：陽性結(jié)果的判斷： 滲入試驗(yàn)必須同時(shí)滲入試驗(yàn)必須同時(shí)獲得下列結(jié)果，才能確定測(cè)試物為陽獲得下列結(jié)果，才能確定測(cè)試物為陽性致

46、突變物性致突變物v背景菌落生長良好背景菌落生長良好v測(cè)試皿回變菌落數(shù)比對(duì)照皿回變菌落測(cè)試皿回變菌落數(shù)比對(duì)照皿回變菌落數(shù)增加數(shù)增加2倍以上倍以上v有劑量反應(yīng)關(guān)系有劑量反應(yīng)關(guān)系v試驗(yàn)結(jié)果有重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果有重現(xiàn)性第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）p陰性結(jié)果的判斷：滲入試驗(yàn)必須同時(shí)獲得下陰性結(jié)果的判斷：滲入試驗(yàn)必須同時(shí)獲得下列結(jié)果，才能確定測(cè)試物為陰性致突變物列結(jié)果，才能確定測(cè)試物為陰性致突變物v對(duì)于純化學(xué)受試物，當(dāng)試驗(yàn)濃度達(dá)對(duì)于純化學(xué)受試物，當(dāng)試驗(yàn)濃度達(dá)500g/皿皿（或?qū)y(cè)試菌株最大無抑制用劑量）仍未見（或?qū)y(cè)試菌

47、株最大無抑制用劑量）仍未見陽性結(jié)果者，陽性結(jié)果者，v S-9試驗(yàn)結(jié)果陰性試驗(yàn)結(jié)果陰性v不同菌株試驗(yàn)結(jié)果均為陰性不同菌株試驗(yàn)結(jié)果均為陰性v重復(fù)檢驗(yàn)也均為陰性重復(fù)檢驗(yàn)也均為陰性第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)v無菌操作。本試驗(yàn)全部操作必須嚴(yán)格無菌，無菌操作。本試驗(yàn)全部操作必須嚴(yán)格無菌，所使用的溶液、培養(yǎng)基、器材等必須經(jīng)過所使用的溶液、培養(yǎng)基、器材等必須經(jīng)過滅菌，以防其它細(xì)菌或霉菌污染滅菌，以防其它細(xì)菌或霉菌污染v測(cè)試菌株的菌液必須是新培養(yǎng)的新鮮菌液，測(cè)試菌株的菌液必須是新培養(yǎng)的新鮮菌液，每每ml

48、活菌數(shù)不得少于活菌數(shù)不得少于2 108個(gè)。菌株在個(gè)。菌株在使用前應(yīng)進(jìn)行鑒定使用前應(yīng)進(jìn)行鑒定v試驗(yàn)中所用的陽性對(duì)照物對(duì)人體有害，操試驗(yàn)中所用的陽性對(duì)照物對(duì)人體有害，操作時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)作時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)v應(yīng)有良好的、具通風(fēng)換氣設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有良好的、具通風(fēng)換氣設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)（酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）試驗(yàn)）u注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)v一切帶有測(cè)試菌的器皿，用后立即高壓滅菌，若一切帶有測(cè)試菌的器皿，用后立即高壓滅菌，若來不及滅菌則放在加蓋容器內(nèi)，嚴(yán)防任何小動(dòng)物來不及滅菌則放在加蓋容器內(nèi)，嚴(yán)防任何小動(dòng)物特別是老鼠接觸特別是

49、老鼠接觸v所用有機(jī)溶液必須重新蒸餾。低溫蒸餾必須用水所用有機(jī)溶液必須重新蒸餾。低溫蒸餾必須用水浴及專用蒸餾器，并在通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)防明火浴及專用蒸餾器，并在通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)防明火接觸，以免發(fā)生火災(zāi)接觸，以免發(fā)生火災(zāi)v使用的蒸餾水必須是重蒸水。配試劑及培養(yǎng)基要使用的蒸餾水必須是重蒸水。配試劑及培養(yǎng)基要用新蒸的蒸餾水，保證一切溶劑無致突變物污染。用新蒸的蒸餾水，保證一切溶劑無致突變物污染。所有器皿最后也應(yīng)用新蒸出的蒸餾水洗凈所有器皿最后也應(yīng)用新蒸出的蒸餾水洗凈第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析v發(fā)光細(xì)菌試驗(yàn)發(fā)光細(xì)菌試驗(yàn)u原理：發(fā)光細(xì)菌的自發(fā)暗變異株與致突變物原理：發(fā)光細(xì)菌的自發(fā)暗變異株與致突變物接觸后，可恢

50、復(fù)一定強(qiáng)度的發(fā)光能力。接觸后，可恢復(fù)一定強(qiáng)度的發(fā)光能力。u應(yīng)用與評(píng)價(jià)：與應(yīng)用與評(píng)價(jià)：與Ames試驗(yàn)檢測(cè)遺傳毒性物試驗(yàn)檢測(cè)遺傳毒性物質(zhì)所反應(yīng)的遺傳毒性水平具有較好的一致性；質(zhì)所反應(yīng)的遺傳毒性水平具有較好的一致性；美國美國Microbics公司標(biāo)準(zhǔn)化方法公司標(biāo)準(zhǔn)化方法“Mutatox”第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析發(fā)光細(xì)菌試驗(yàn)發(fā)光細(xì)菌試驗(yàn)u方法：方法：v步驟：菌株復(fù)蘇步驟：菌株復(fù)蘇增菌增菌分裝分裝20振蕩振蕩24h開始測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度（每隔開始測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度（每隔34h）v結(jié)果判定：結(jié)果判定：p待測(cè)樣品管發(fā)光強(qiáng)度是對(duì)照管待測(cè)樣品管發(fā)光強(qiáng)度是對(duì)照管3 3倍為陽倍為陽性結(jié)果；性結(jié)果；p樣品管樣品管5 5個(gè)平行系列

51、中陽性結(jié)果個(gè)平行系列中陽性結(jié)果3，待，待測(cè)物具致突變性；不足測(cè)物具致突變性；不足3個(gè)為可疑；無個(gè)為可疑；無陽性結(jié)果可認(rèn)為不具有致突變性陽性結(jié)果可認(rèn)為不具有致突變性第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析v其他基因突變?cè)囼?yàn)其他基因突變?cè)囼?yàn)u營養(yǎng)缺陷型菌株回復(fù)突變?cè)囼?yàn)：類似于營養(yǎng)缺陷型菌株回復(fù)突變?cè)囼?yàn)：類似于Ames試驗(yàn)試驗(yàn)u細(xì)菌的正向突變?cè)囼?yàn)：正向突變比回復(fù)突變細(xì)菌的正向突變?cè)囼?yàn)：正向突變比回復(fù)突變的的DNA有更多位點(diǎn)可以發(fā)生突變，可以檢測(cè)有更多位點(diǎn)可以發(fā)生突變，可以檢測(cè)更為廣泛的化合物更為廣泛的化合物u粗糙脈孢菌的正向突變?cè)囼?yàn)：真核真菌，用粗糙脈孢菌的正向突變?cè)囼?yàn)：真核真菌，用于檢測(cè)基因的正向和回復(fù)突變于檢測(cè)

52、基因的正向和回復(fù)突變u構(gòu)巢曲霉的突變?cè)囼?yàn)：構(gòu)巢曲霉的突變?cè)囼?yàn)：第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析第二節(jié) DNA損傷修復(fù)試驗(yàn)vSOS顯色試驗(yàn)顯色試驗(yàn)uSOS修復(fù)：修復(fù)：“易錯(cuò)性易錯(cuò)性DNA修復(fù)修復(fù)”，靠，靠這種修復(fù)形成的這種修復(fù)形成的DNA聚合酶由于識(shí)別聚合酶由于識(shí)別堿基的精確性低，易造成復(fù)制的差錯(cuò)，堿基的精確性低，易造成復(fù)制的差錯(cuò)，進(jìn)而引起突變進(jìn)而引起突變u原理：致突變因素作用于原理：致突變因素作用于DNA產(chǎn)生的產(chǎn)生的某些損傷可誘導(dǎo)細(xì)菌某些損傷可誘導(dǎo)細(xì)菌SOS修復(fù)系統(tǒng)的修復(fù)系統(tǒng)的反應(yīng)，通過檢測(cè)反應(yīng)，通過檢測(cè)SOS修復(fù)的能力來查修復(fù)的能力來查明理化因素是否具有致突變、致癌的明理化因素是否具有致突變、致癌的

53、特性；可用特定菌株分解特定物質(zhì)產(chǎn)特性；可用特定菌株分解特定物質(zhì)產(chǎn)生色素來反應(yīng)其中酶的合成水平生色素來反應(yīng)其中酶的合成水平-半乳糖苷酶分解半乳糖苷酶分解Xgal(5-Xgal(5-溴溴-4-4-氯氯-3-3-吲哚吲哚- -D-半乳糖苷半乳糖苷) )和和ONPG（鄰硝基苯（鄰硝基苯-D-半乳糖苷），半乳糖苷），分別產(chǎn)生藍(lán)色不溶性色素和黃色可分別產(chǎn)生藍(lán)色不溶性色素和黃色可溶性色素溶性色素第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析SOS顯色試驗(yàn)顯色試驗(yàn)u方法：檢測(cè)細(xì)菌細(xì)胞原發(fā)直接的方法：檢測(cè)細(xì)菌細(xì)胞原發(fā)直接的SOS反應(yīng)，反應(yīng)，即用產(chǎn)色底物來監(jiān)測(cè)大腸桿菌即用產(chǎn)色底物來監(jiān)測(cè)大腸桿菌SOS修復(fù)反應(yīng)；修復(fù)反應(yīng)；紙片法定性，液體

54、法定量紙片法定性，液體法定量u應(yīng)用與評(píng)價(jià)：與應(yīng)用與評(píng)價(jià)：與Ames的敏感性、準(zhǔn)確性相的敏感性、準(zhǔn)確性相當(dāng)，且操作簡單、快速、經(jīng)濟(jì)、方便、不受當(dāng)，且操作簡單、快速、經(jīng)濟(jì)、方便、不受測(cè)試菌株存活數(shù)的影響；可將二者互為補(bǔ)充測(cè)試菌株存活數(shù)的影響；可將二者互為補(bǔ)充共同作為研究遺傳毒物的初篩試驗(yàn)共同作為研究遺傳毒物的初篩試驗(yàn)第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析聚合酶缺陷型菌株試驗(yàn)v原理：多數(shù)致癌物質(zhì)可與原理：多數(shù)致癌物質(zhì)可與DNA結(jié)合使之發(fā)生結(jié)合使之發(fā)生一定的改變和損傷，而微生物具有修復(fù)一定的改變和損傷，而微生物具有修復(fù)DNA的功能；將同一受試物作用于具有修復(fù)能力的功能；將同一受試物作用于具有修復(fù)能力的野生型菌株和缺

55、乏修復(fù)能力的變異株，則的野生型菌株和缺乏修復(fù)能力的變異株，則微生物的生長可能出現(xiàn)差異；聚合酶缺陷型微生物的生長可能出現(xiàn)差異；聚合酶缺陷型菌株菌株DNA受損后即不能修復(fù)，細(xì)菌無法生存受損后即不能修復(fù)，細(xì)菌無法生存第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析聚合酶缺陷型菌株試驗(yàn)v菌株：菌株：E.coli P3478（polA-）和）和E.coli W3110（polA+）v方法：點(diǎn)試法比較抑菌圈或劃線接種帶方法：點(diǎn)試法比較抑菌圈或劃線接種帶v應(yīng)用與評(píng)價(jià)：應(yīng)用與評(píng)價(jià)：u只對(duì)具有直接致突變作用的烷化物較為敏感只對(duì)具有直接致突變作用的烷化物較為敏感u對(duì)需要代謝活化的化合物如芳香胺、多環(huán)烴等對(duì)需要代謝活化的化合物如芳香胺、多

56、環(huán)烴等不敏感，加肝勻漿活化系統(tǒng)亦效果不佳不敏感，加肝勻漿活化系統(tǒng)亦效果不佳u在液體培養(yǎng)基中測(cè)定對(duì)某些原致癌物檢出率有在液體培養(yǎng)基中測(cè)定對(duì)某些原致癌物檢出率有所提高所提高第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析重組缺陷型菌株試驗(yàn)v原理：利用檢驗(yàn)重組修復(fù)能力來判斷致突變?cè)恚豪脵z驗(yàn)重組修復(fù)能力來判斷致突變性性v菌株：枯草芽孢桿菌重組缺陷型菌株菌株：枯草芽孢桿菌重組缺陷型菌株Bac.subtilis M45（recA-）和對(duì)照菌株）和對(duì)照菌株Bac.subtilis H17（recA+）v方法：點(diǎn)試法比較抑菌圈或劃線接種帶方法：點(diǎn)試法比較抑菌圈或劃線接種帶v應(yīng)用與評(píng)價(jià)：應(yīng)用與評(píng)價(jià)：u在無代謝活化條件下比在無代謝活

57、化條件下比Ames敏感敏感u在有代謝活化條件下檢出率比在有代謝活化條件下檢出率比Ames低低第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析溶源性細(xì)菌試驗(yàn)v原理：溶源性細(xì)菌細(xì)胞受到某些誘變劑作原理：溶源性細(xì)菌細(xì)胞受到某些誘變劑作用時(shí)，產(chǎn)生用時(shí)，產(chǎn)生SOS修復(fù)，使菌體內(nèi)原噬菌體修復(fù)，使菌體內(nèi)原噬菌體活躍起來，在菌體內(nèi)大量繁殖，使細(xì)菌發(fā)活躍起來，在菌體內(nèi)大量繁殖，使細(xì)菌發(fā)生裂解而釋放；在固體培養(yǎng)基上裂解非溶生裂解而釋放；在固體培養(yǎng)基上裂解非溶源性細(xì)菌形成噬菌斑源性細(xì)菌形成噬菌斑v菌株：溶源性菌株：溶源性E.coli K12（）和非溶源性）和非溶源性E.coli K12（S）v方法：將兩種菌液按一定比例同時(shí)接種于方法：將兩

58、種菌液按一定比例同時(shí)接種于一個(gè)平板，放入受試物過夜培養(yǎng)觀察一個(gè)平板，放入受試物過夜培養(yǎng)觀察v應(yīng)用與評(píng)價(jià)：可用于測(cè)定復(fù)雜混合物的潛應(yīng)用與評(píng)價(jià)：可用于測(cè)定復(fù)雜混合物的潛在遺傳毒性在遺傳毒性第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析第三節(jié) DNA重組試驗(yàn)v釀酒酵母的有絲分裂基因轉(zhuǎn)變可測(cè)定致突變釀酒酵母的有絲分裂基因轉(zhuǎn)變可測(cè)定致突變物質(zhì)所致的缺陷型等位基因的轉(zhuǎn)變物質(zhì)所致的缺陷型等位基因的轉(zhuǎn)變v異點(diǎn)等位基因二倍體的酵母菌株在其同一基異點(diǎn)等位基因二倍體的酵母菌株在其同一基因座位有兩個(gè)不同的缺陷型等位基因，其存因座位有兩個(gè)不同的缺陷型等位基因，其存在導(dǎo)致一定的營養(yǎng)要求在導(dǎo)致一定的營養(yǎng)要求v在致突變物損傷在致突變物損傷DNA，

59、導(dǎo)致整個(gè)基因組的有，導(dǎo)致整個(gè)基因組的有絲分裂重組增強(qiáng)，基因轉(zhuǎn)變隨之發(fā)生，一個(gè)絲分裂重組增強(qiáng)，基因轉(zhuǎn)變隨之發(fā)生，一個(gè)突變型整段轉(zhuǎn)移取代另一突變型等位基因中突變型整段轉(zhuǎn)移取代另一突變型等位基因中有缺陷的核苷酸順序，將其中一個(gè)基因恢復(fù)有缺陷的核苷酸順序，將其中一個(gè)基因恢復(fù)成野生型等位基因成野生型等位基因第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析第四節(jié) 微生物致突變?cè)囼?yàn)與致癌物的確定vICPEMC于于1983年提出致突變?cè)囼?yàn)的遺傳學(xué)年提出致突變?cè)囼?yàn)的遺傳學(xué)終點(diǎn)分為終點(diǎn)分為5類類uDNA完整性的改變完整性的改變uDNA重排或交換重排或交換uDNA堿基序列改變堿基序列改變u染色體完整性改變?nèi)旧w完整性改變u染色體分離改變?nèi)?/p>

60、色體分離改變第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析v目前沒有一種致突變?cè)囼?yàn)?zāi)芎w所有的遺傳目前沒有一種致突變?cè)囼?yàn)?zāi)芎w所有的遺傳學(xué)終點(diǎn)。學(xué)終點(diǎn)。ICPEMC認(rèn)為需選用一組試驗(yàn)配套認(rèn)為需選用一組試驗(yàn)配套進(jìn)行檢測(cè)，包括進(jìn)行檢測(cè)，包括5種遺傳學(xué)終點(diǎn)。如選用種遺傳學(xué)終點(diǎn)。如選用Ames試驗(yàn)、微核試驗(yàn)、枯草桿菌試驗(yàn)、微核試驗(yàn)、枯草桿菌DNA修復(fù)修復(fù)試驗(yàn)和外周血淋巴細(xì)胞姊妹染色單體互換試驗(yàn)和外周血淋巴細(xì)胞姊妹染色單體互換（SCE）試驗(yàn)）試驗(yàn)4個(gè)項(xiàng)目即可滿足要求個(gè)項(xiàng)目即可滿足要求第八章微生物監(jiān)測(cè)環(huán)境解析第十九章 微生物監(jiān)測(cè)技術(shù)的新發(fā)展v第一節(jié) 分子生物學(xué)技術(shù)在環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用v第二節(jié) 微生物傳感器在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用