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1、胰島素和腎上腺素對(duì)血糖的調(diào)節(jié)(葡萄糖氧化酶法)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解血糖濃度測(cè)定的原理和方法。2.了解并驗(yàn)證胰島素和腎上腺素對(duì)血糖的調(diào)節(jié)。3.在實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖黠L(fēng)和準(zhǔn)確進(jìn)行實(shí)際操作的能力,提高分析問題的能力。實(shí)驗(yàn)原理:胰島素和腎上腺素是體內(nèi)對(duì)血糖調(diào)節(jié)的激素, 胰島素是唯一降低血糖的激素。 通過對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別注射不同的激素,了解激素對(duì)血糖的調(diào)節(jié)影響。測(cè)定血糖的原理:在條件下 ,葡萄糖氧化酶可催化葡萄糖生成葡萄糖酸和H2O2,后者在H O 酶的作用下與苯酚、4-氨基安替吡啉生成紅色醌類物質(zhì),在505nm 處有最大吸收峰 ,吸22光度與葡萄糖含量成正比。實(shí)驗(yàn)器材:器材 : 10mm 100mm 試管、
2、試管架、恒溫水浴、沸水浴、冰浴、蠟筆、721-分光光度計(jì)、兔臺(tái)、注射器、手術(shù)刀片。試劑 1.酶酚混合試劑主要成分:葡萄糖氧化酶H2O2 酶苯酚4-氨基安替吡啉2.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液(100mmol/L )3.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(5mmol/L )取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5ml ,置于 100ml 容量瓶中,加苯甲酸溶液至刻度。4.胰島素注射液5.腎上腺素注射液實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法:一、注射藥物并取血:1.分別取2 只兔子,稱量體重,從耳緣靜脈采血2ML。只兔子按體重分別注射腎上腺素和胰島素,從注射藥物時(shí)開始計(jì)時(shí),每隔一次,一共取血 4 次,每次 2ML。30 分鐘取血二、血糖的測(cè)定1取 16 150mm 試管 3 支按下表進(jìn)行操作:試劑( ml )測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清或血漿葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液蒸餾水酶酚混合試劑2將上述各管混勻放入37水浴中加熱15 分鐘,用波長(zhǎng) 505nm 分光光度計(jì)進(jìn)行比色,空白管調(diào)零點(diǎn)讀取測(cè)定管與標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。3計(jì)算測(cè)定管吸光血糖( mmol/L ) =標(biāo)準(zhǔn)管吸光標(biāo)準(zhǔn)管濃度4計(jì)算注射藥物前后血糖變化情況。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):血清加量要準(zhǔn),否則會(huì)影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
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