分光光度計(jì)測(cè)定微量鐵

1、分光光度計(jì)測(cè)定微量鐵一、目的1、學(xué)習(xí)如何選擇吸咣光度分析的實(shí)驗(yàn)條件。2、掌握用吸光光度法測(cè)定鐵的原理及方法。3、掌握分光光度計(jì)的使用方法。二、原理1、光度法測(cè)定的條件：分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)應(yīng)注意的條 件主要是顯色反響的條件和測(cè)定吸光度的條件。 顯色反響的條件有顯 色劑的用量，介質(zhì)的酸度、 顯色時(shí)溫度、顯色時(shí)間及干擾物質(zhì)的消除 方法等；測(cè)量吸光度的條件包括入射光波長(zhǎng)的選擇、 吸光度范圍和參 比溶液等。2、二氮雜菲 -亞鐵絡(luò)合物： 鄰二氮雜菲是測(cè)定微量鐵的一種較好 的試劑。在pH=A 9的條件下Fe2+離子與鄰二氮雜菲生成穩(wěn)定的橘 紅色絡(luò)合物，此絡(luò)合物的IgK穩(wěn)=,摩爾吸光系數(shù) 510= x

2、104在顯色前，首先用鹽酸羥胺把Fe3+離子復(fù)原為Fe2+離子，其反 應(yīng)式如下：2Fe3+2NHOH HC22 Fe2+N+2HIO+4I+2CI-測(cè)定時(shí)，控制溶液酸度在 pH=5左右較為適宜。酸度過(guò)高，反響進(jìn)行較慢；酸度太低，那么Fe2+離子水解，影響顯色。Bi3+, Ccf, Hcg+, Ag+, Zn2+等離子與顯色劑生成沉淀，CaT, CcU+,Ni2+等離子與顯色劑形成有色絡(luò)合物。因此當(dāng)這些離子共存時(shí)，應(yīng)注 意它們的干擾作用。三、試劑10卩g/mL的鐵標(biāo)準(zhǔn)液；鹽酸羥胺固體及10%溶液因其不穩(wěn)定， 需臨時(shí)用時(shí)配； %鄰二氮雜菲新配制； 1mol/LNaAc 溶液。四、標(biāo)準(zhǔn)鐵的制備稱(chēng)取0

3、.7022g硫酸亞鐵銨FeNH42SO42?6H2O,置于燒杯中， 參加6mol/L HCL 20ml和少量水，溶解后定容 1L.溶于70ml硫酸溶 液中 , 滴加 L 的高錳酸鉀溶液至出現(xiàn)微紅色不變 , 用純水定容至 1000ml。此貯備溶液含鐵。五、指示劑的選擇原那么指示劑也有酸堿性， 指示劑一般是有機(jī)物， 酸堿濃度太大有可能 破壞指示劑少數(shù)，而且濃度太高你每一滴里的酸堿就多，不可能 恰好滴適宜的酸堿， 總是要多半滴， 濃度越高差的越多是根據(jù)所需要的PH值確實(shí)定的，其值在所選擇的指示劑的突越范圍內(nèi)。這樣溶液才能夠有顏色的變化，才能夠判斷終點(diǎn)六、步驟1 、吸收曲線的繪制準(zhǔn)確移取 10卩g/m

4、L鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL 于 50mL 容量瓶中，參加 10%鹽酸羥胺 1mL， 搖勻，稍冷，參加1mol/L NaAc溶液5mL和% 鄰二氮雜菲3mL,以水稀釋至刻度，在分光 光度計(jì)上，用 1cm 比色皿，以水為參比溶液， 用不同的波長(zhǎng)從430 nm開(kāi)始到570nm為止，每隔10nm或20nm測(cè)定一次吸光度。然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制吸收曲 線，從吸收曲線上確定該測(cè)定的適宜波長(zhǎng)。 2、鐵含量的測(cè)定 *1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取 50 mL 容量瓶或比色管 6 支，分別移取 2mL、 4mL、6mL 8mL鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液于5支容量瓶中，另一容量瓶中不加鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液配制空白溶 搖勻，經(jīng) 2min 后

5、，再各加 5ml 1mol/LNaAc 溶液及 3ml %鄰二氮雜菲，以水吸稀釋至刻 度，搖勻。在分光光度計(jì)上，用1cm比色皿， 在最大吸收波長(zhǎng)510nm處，測(cè)定各溶液 的吸光度。以鐵含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱 坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。液，作參比。然后各參加1mL10%酸羥胺，2未知液中鐵含量的測(cè)定：分別二次吸取10mL未知液代替標(biāo)準(zhǔn)溶液，其它步驟均同上， 測(cè)定吸光度。由未知液的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出10mL未知液中的鐵含量，然后以每毫升未知液中含鐵多少微克表示結(jié)果。3、繪制吸收曲線(一)對(duì)各項(xiàng)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析并作出結(jié)論：例如從吸收曲線可得出： 鄰二氮雜菲亞鐵絡(luò)合物在波長(zhǎng) 510nm處吸光度最大，因

6、此測(cè)定時(shí)宜選 用的波長(zhǎng)為510nm。1、吸收曲線的繪制波長(zhǎng)nm吸光度A570550530520510500490470450430(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與鐵含量的測(cè)定試標(biāo)準(zhǔn)溶液的總含鐵量吸光液編號(hào)量 V/mLmJ g)度A1002203404605806100未知液七、未知鐵量的測(cè)定測(cè)的各標(biāo)液的吸光度，畫(huà)標(biāo)準(zhǔn)曲線；再根據(jù)未知鐵液的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出對(duì)應(yīng)的鐵量，進(jìn)而求未知溶液中鐵的含量。八、分光光度計(jì)的使用分光光度法測(cè)量的理論依據(jù)是朗伯-比耳定律：當(dāng)一束單色光通過(guò)一定濃度的稀有色容液時(shí)，溶液對(duì)光的選擇吸收程度A與溶液的濃 度或液層成正比即A二kcL=logl。/1,式中：A為吸光度，表示光通

7、過(guò) 溶液時(shí)被吸收的強(qiáng)度；為有色溶液的濃度；Io為入射光強(qiáng)度；I為透 射光強(qiáng)度；L為液層的厚度；為k吸光系數(shù)，它與入射光的波長(zhǎng)及溶 液的性質(zhì)、溫度等有關(guān)，見(jiàn)右圖1所示。 ILI 0圖1光通過(guò)溶液L當(dāng)入射光強(qiáng)度丨0、吸光系數(shù)k和溶液厚度L不變時(shí)，透射光強(qiáng)度 I只隨溶液中物質(zhì)的量C而變化。因此，如果把通過(guò)溶液的光線通過(guò) 測(cè)光機(jī)構(gòu)中的光電轉(zhuǎn)換接受器，并轉(zhuǎn)換成電能，在微電計(jì)上就讀出相 應(yīng)的透光率，從而推算出溶液濃度，工作原理見(jiàn)圖 2所示。八、考前須知1、儀器預(yù)熱后，開(kāi)始測(cè)量前反復(fù)調(diào)透光率0%和透光率100%。2、 儀器連續(xù)使用不應(yīng)超過(guò) 2h,否那么，最好間歇后再使 用。3、比色皿洗滌必須干凈，拿取比色皿時(shí)，只能用手捏 住毛玻璃的兩面，裝待測(cè)液時(shí)，應(yīng)用待測(cè)液潤(rùn)洗 2-3 次，保 證待測(cè)液濃度不變， 倒入的溶液應(yīng)在 2/3-3/4 處而不要太滿， 放時(shí)應(yīng)將透光面