生物化學(xué)第二章蛋白質(zhì)化學(xué)下ppt課件

1、四 超二級(jí)構(gòu)造和構(gòu)造域 超二級(jí)構(gòu)造超二級(jí)構(gòu)造supersecondary structuresupersecondary structure是指在多肽鏈中彼是指在多肽鏈中彼此臨近的二級(jí)構(gòu)造在空間折疊時(shí)相互接近，相互作用，構(gòu)成了此臨近的二級(jí)構(gòu)造在空間折疊時(shí)相互接近，相互作用，構(gòu)成了一個(gè)有規(guī)那么的二級(jí)構(gòu)造聚集體，稱為超二級(jí)構(gòu)造。目前發(fā)現(xiàn)一個(gè)有規(guī)那么的二級(jí)構(gòu)造聚集體，稱為超二級(jí)構(gòu)造。目前發(fā)現(xiàn)的超二級(jí)構(gòu)造有的超二級(jí)構(gòu)造有螺旋組合螺旋組合、折疊組合折疊組合和和螺旋螺旋折疊組合折疊組合，其中以，其中以組合最為常見。組合最為常見。這些超二級(jí)構(gòu)造可以直接作為組成單位參與三級(jí)構(gòu)造或構(gòu)造域這些超二級(jí)構(gòu)造可以直接作

2、為組成單位參與三級(jí)構(gòu)造或構(gòu)造域的構(gòu)建，它是蛋白質(zhì)構(gòu)象中二級(jí)構(gòu)造與三級(jí)構(gòu)造之間的一個(gè)過的構(gòu)建，它是蛋白質(zhì)構(gòu)象中二級(jí)構(gòu)造與三級(jí)構(gòu)造之間的一個(gè)過渡層次，故稱超二級(jí)構(gòu)造。也稱為基元渡層次，故稱超二級(jí)構(gòu)造。也稱為基元(motif)(motif)或基序或模體?；蚧蚧蚰ｓw。 蛋白質(zhì)的超二級(jí)構(gòu)造是指由假設(shè)干相鄰的二級(jí)構(gòu)造單元組合蛋白質(zhì)的超二級(jí)構(gòu)造是指由假設(shè)干相鄰的二級(jí)構(gòu)造單元組合在一同，彼此相互作用，構(gòu)成有規(guī)那么在空間上可以識(shí)別的二在一同，彼此相互作用，構(gòu)成有規(guī)那么在空間上可以識(shí)別的二級(jí)構(gòu)造組合體，有三種根本組合方式級(jí)構(gòu)造組合體，有三種根本組合方式、。 構(gòu)造域構(gòu)造域Structural DomainStru

3、ctural Domain是介于二級(jí)和三級(jí)構(gòu)造之間的一是介于二級(jí)和三級(jí)構(gòu)造之間的一種構(gòu)造層次。是指蛋白質(zhì)亞基構(gòu)造中明顯分開的嚴(yán)密球狀構(gòu)造種構(gòu)造層次。是指蛋白質(zhì)亞基構(gòu)造中明顯分開的嚴(yán)密球狀構(gòu)造區(qū)域，是蛋白質(zhì)三級(jí)構(gòu)造內(nèi)的獨(dú)立折疊單元。構(gòu)造域通常都是區(qū)域，是蛋白質(zhì)三級(jí)構(gòu)造內(nèi)的獨(dú)立折疊單元。構(gòu)造域通常都是幾個(gè)超二級(jí)構(gòu)造單元的組合。幾個(gè)超二級(jí)構(gòu)造單元的組合。 構(gòu)造域與構(gòu)造域之間經(jīng)常有一段長短不等的肽鏈相連，構(gòu)成所構(gòu)造域與構(gòu)造域之間經(jīng)常有一段長短不等的肽鏈相連，構(gòu)成所謂鉸鏈區(qū)。不同蛋白質(zhì)分子中構(gòu)造域的數(shù)目不同，同一蛋白質(zhì)謂鉸鏈區(qū)。不同蛋白質(zhì)分子中構(gòu)造域的數(shù)目不同，同一蛋白質(zhì)分子中的幾個(gè)構(gòu)造域彼此類似或很不

4、一樣。常見構(gòu)造域的氨基分子中的幾個(gè)構(gòu)造域彼此類似或很不一樣。常見構(gòu)造域的氨基酸殘基數(shù)在酸殘基數(shù)在100100400400個(gè)之間，最小的構(gòu)造域只需個(gè)之間，最小的構(gòu)造域只需40405050個(gè)氨基個(gè)氨基酸殘基，大的構(gòu)造域可超越酸殘基，大的構(gòu)造域可超越400400個(gè)氨基酸殘基。個(gè)氨基酸殘基。 構(gòu)造域普通都具有一定的功能構(gòu)造域普通都具有一定的功能 。也叫模體。也叫模體motifmotif或基序或基序-螺旋-轉(zhuǎn)角HTH模體構(gòu)造表示圖螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋模體由2個(gè)螺旋和1個(gè)轉(zhuǎn)角組成。HTH模體是DNA結(jié)合蛋白三維構(gòu)造中的一部分，每一DNA結(jié)合蛋白含一個(gè)HTH模體，位于分子外表。DNA結(jié)合蛋白常以二聚體方式存在，

5、兩個(gè)HTG模體相距3.4nm，與DNA的螺距相當(dāng)，分別結(jié)合于DNA分子中相鄰的兩個(gè)深溝中。HTH模體約由20個(gè)氨基酸殘基組成，第1個(gè)螺旋含7個(gè)氨基酸殘基， 轉(zhuǎn)角含4個(gè)氨基酸殘基，第2個(gè)螺旋含9個(gè)氨基酸殘基。第2個(gè)螺旋是DNA識(shí)別部位，結(jié)合于DNA分子的深溝中。螺旋螺旋轉(zhuǎn)角NC模體：在許多蛋白質(zhì)的分子中，常發(fā)現(xiàn)幾個(gè)多為23個(gè)具有二級(jí)構(gòu)造的肽段相互接近，構(gòu)成具有特定功能的空間構(gòu)象；或者僅是一個(gè)具有特定功能的很短的肽段。 模體motif五 球狀蛋白的三級(jí)構(gòu)造 由蛋白質(zhì)二級(jí)構(gòu)造、超二級(jí)構(gòu)造或構(gòu)造域相互銜接組由蛋白質(zhì)二級(jí)構(gòu)造、超二級(jí)構(gòu)造或構(gòu)造域相互銜接組合構(gòu)成的蛋白質(zhì)構(gòu)象構(gòu)造稱謂蛋白質(zhì)三級(jí)構(gòu)造。合構(gòu)成的

6、蛋白質(zhì)構(gòu)象構(gòu)造稱謂蛋白質(zhì)三級(jí)構(gòu)造。 具有三級(jí)構(gòu)造的多肽鏈稱謂亞基具有三級(jí)構(gòu)造的多肽鏈稱謂亞基subunit。單個(gè)。單個(gè)多肽鏈構(gòu)成的蛋白，具有三級(jí)構(gòu)造才干有活性。多條多肽鏈構(gòu)成的蛋白，具有三級(jí)構(gòu)造才干有活性。多條肽鏈構(gòu)成蛋白，需求亞基進(jìn)一步組合才干有活性。肽鏈構(gòu)成蛋白，需求亞基進(jìn)一步組合才干有活性。 親水基團(tuán)在外，疏水基團(tuán)在內(nèi)，構(gòu)成疏水中心。親水基團(tuán)在外，疏水基團(tuán)在內(nèi)，構(gòu)成疏水中心。維持蛋白質(zhì)三級(jí)構(gòu)造的化學(xué)鍵為非共價(jià)鍵氫鍵；鹽堿離子鍵；疏水鍵；范德華力；配位鍵；二硫鍵六 蛋白質(zhì)四級(jí)構(gòu)造 由兩條或以上的具有三級(jí)構(gòu)造的多肽鏈以非共價(jià)鍵方式組合在一同，構(gòu)成的構(gòu)造稱謂蛋白質(zhì)四級(jí)構(gòu)造。1221NCNC血紅

7、蛋白的四級(jí)構(gòu)造成人血紅蛋白由2條鏈和2條鏈組成,各亞基分別含一個(gè)血紅素.第四節(jié) 蛋白質(zhì)構(gòu)造與功能關(guān)系自然規(guī)律：構(gòu)造決議功能，功能反響構(gòu)造自然規(guī)律：構(gòu)造決議功能，功能反響構(gòu)造一一 蛋白質(zhì)一級(jí)構(gòu)造決議高級(jí)構(gòu)造蛋白質(zhì)一級(jí)構(gòu)造決議高級(jí)構(gòu)造二二 構(gòu)造與功能構(gòu)造與功能 一級(jí)構(gòu)造一級(jí)構(gòu)造 類似蛋白序列類似；類似蛋白序列類似； 氨基酸變異呵斥功能喪失。氨基酸變異呵斥功能喪失?？臻g構(gòu)造與功能空間構(gòu)造與功能 構(gòu)象與功能構(gòu)象與功能鐮刀型貧血癥：鐮刀型貧血癥： 表中九種動(dòng)物之間胰島素分子一級(jí)構(gòu)造中存在的氨基酸殘基組成的差別不影響胰島素的生物活性。臨床上曾經(jīng)運(yùn)用豬和牛的胰島素治療人的糖尿病，獲得了顯著的療效。 胰島素分

8、子中氨基酸殘基的差別部分來 源氨基酸殘基的差別部分A8 A9 A10 B30人 Thr Ser Ile Thr豬 The Ser Ile Ala狗 Thr Ser Ile Ala兔 Thr Ser Ile Ser牛 Ala Ser Val Ala羊 Ala Gly Val Ala馬 Thr Gly Ile Ala抹香鯨 Thr Ser Ile Ala 鯨 Ala Ser Thr Ala 絲氨酸蛋白酶催化基團(tuán)絲氨酸周圍的固定氨基酸序列蛋白酶 催化基團(tuán)絲氨酸殘基周圍的固定氨基酸序列胰凝乳蛋白酶 AC A G A S G V S S C M G D S（195）G G P L V胰蛋白酶C A G

9、Y L E G G K D S C Q G D S（195）G G P V V胰彈性蛋白酶C A G G N G V R S G C Q G D S（195）G G P L H凝血酶C A G Y K P G E G K R G D A C E G D S（195）G G P F V凝血因子 XC A G Y D T Q P E D A C Q G D S（195）G G P H V纖維蛋白溶酶C A G H L A G G T D S C Q G D S（195）G G P L V血漿緩激肽C A G Y L P G G K D T C M G D S（195）G G P L I 絲氨酸蛋白

10、酶是活性中心含有絲(或蘇)氨酸的蛋白水解酶家族。從表中可見，其活性部位絲氨酸195附近的氨基酸殘基序列相似。表中藍(lán)色標(biāo)志的氨基酸為同源序列。絲氨酸蛋白酶具有類似的一級(jí)構(gòu)造和類似的三級(jí)構(gòu)造。 動(dòng)物體細(xì)胞色素C一級(jí)構(gòu)造的進(jìn)化樹圖中的數(shù)字表示該類動(dòng)物與其祖先相比細(xì)胞色素C一級(jí)構(gòu)造氨基酸殘基的差別數(shù)真菌植物蝗蟲蒼蠅蜜蜂蛾,天蛾海星七鰓鰻角鯊昆蟲類軟骨魚類響尾蛇龜企鵝雞、火雞鴕鳥鴯鹋鳥類和與爬行類鴿鴨蚯蚓牛蛙金槍魚鯉魚兩 類硬骨魚類河馬狗、海豹、蝙蝠馬、豬、羊、牛小鼠兔人類、猩猩猴袋鼠哺乳類513718169168239228973164618161111112161354231112229 0 1 0

11、 12 11 011 10 1 010 9 3 2 0 11 10 6 5 3 010 9 5 4 2 3 0 9 8 6 5 4 5 2 0 10 11 7 8 6 7 6 6 0 13 12 11 10 9 10 9 8 12 013 12 12 11 10 10 9 8 10 2 011 10 10 9 8 8 7 6 10 3 3 0 14 15 22 21 20 21 19 18 21 19 20 17 0 15 14 11 10 9 9 8 9 11 8 8 7 22 018 17 14 13 11 12 11 11 13 11 12 11 24 10 021 21 19 18 1

12、7 18 17 17 18 17 18 17 26 18 15 027 26 22 22 22 21 22 21 24 23 24 22 29 24 22 24 031 30 29 28 27 25 27 26 28 28 27 27 31 28 29 32 14 0人,猩猩獼猴馬驢豬、牛、羊狗小灰鯨兔袋鼠雞、火雞企鵝北京鴨響尾蛇嚙龜牛蛙金槍魚螺旋蠅蠶蛾 蠶蛾螺旋蠅金槍魚牛蛙嚙龜響尾蛇北京鴨企鵝雞，火雞袋鼠兔 小灰鯨狗豬牛羊驢馬獼猴人，猩猩人與一些動(dòng)物細(xì)胞色素C一級(jí)構(gòu)造氨基酸差別的數(shù)量比較 磷酸丙糖異構(gòu)酶和丙酮酸激酶構(gòu)造域1空間構(gòu)象的類似性 磷酸丙糖異構(gòu)酶催化3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮的互變

13、，丙 酮酸激酶催化磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)移磷酸基生成ATP和烯醇式 丙酮酸，但其空間構(gòu)造具有類似性，其空間構(gòu)造的中心均是由 8個(gè)-折疊組成的-折疊桶，每個(gè)-折疊又被-螺旋所分隔磷酸丙糖異構(gòu)酶丙酮酸激酶構(gòu)造域1朊病毒與蛋白質(zhì)構(gòu)象病 朊病毒蛋白prion protein, PrP是正常存在于人體神經(jīng)原、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞的細(xì)胞膜上的糖蛋白。朊病毒prion,PrPsc是正常朊病毒蛋白PrPc的空間構(gòu)象由螺旋變成折疊所致。 朊病毒本身不能自我復(fù)制，但可以攻擊大腦的正常朊病毒蛋白，使之構(gòu)象改動(dòng)并與其結(jié)合，構(gòu)成朊病毒二聚體。此二聚表達(dá)再攻擊正常朊病毒蛋白，構(gòu)成朊病毒四聚體。周而復(fù)始，腦組織中朊病毒不斷積

14、存，呵斥腦組織發(fā)生退行性病變。 正常朊病毒蛋白與朊病毒空間構(gòu)造的差別 朊病毒PrPsc是蛋白質(zhì)，不含核酸。它是正常朊病毒蛋白PrPc的空間構(gòu)象由-螺旋變成-片層構(gòu)造所致。因此，這類疾病又稱蛋白質(zhì)構(gòu)象病。朊病毒本身不能復(fù)制，但它卻可以攻擊大腦的正常朊病毒蛋白，使其發(fā)生構(gòu)象改動(dòng)，并與其結(jié)合，成為致病的朊病毒二聚體。此二聚體再攻擊正常的朊病毒蛋白。這樣，腦組織中的朊病毒不斷積存，呵斥腦組織發(fā)生退行性變。 正常朊病毒蛋白構(gòu)造 顯示-螺旋 朊病毒構(gòu)造顯示-片層構(gòu)造詳細(xì)幾種蛋白的功能胰島素Insulin血紅蛋白Hemoglobin免疫球蛋白Immunoglobulin膜蛋白構(gòu)造前蛋白原的活化 人胰島素的一

15、級(jí)構(gòu)造胰島素由A、B兩條多肽鏈組成，A鏈含21個(gè)氨基酸殘基，B鏈含30個(gè)氨基酸殘基。A鏈內(nèi)有一個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，A與B之間有兩個(gè)鏈間二硫鍵。由于兩條鏈之間由共價(jià)鍵相銜接，所以胰島素沒有四級(jí)構(gòu)造。SerGlyIleValGluGlnCysCysThrIleCysSerLeuTyrGlnLeuGluAsnTyrCysAsnPheValAsnGlnHisLeuCysGlySerHisLeuValGluAlaLeuTyrLeuValCysGlyGlyGluArgPhePheTyrThrProLysThrNH215101520COOHA鏈NH2151015202530HOOCB鏈胞外區(qū)胞外區(qū)跨膜區(qū)跨膜區(qū)胞內(nèi)

16、區(qū)胞內(nèi)區(qū)第五節(jié) 蛋白質(zhì)性質(zhì)一一 蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)膠體性質(zhì) 親水膠體親水膠體(1-100nm的的)粒子，具有膠體溶液性質(zhì)真粒子，具有膠體溶液性質(zhì)真溶液溶液 丁達(dá)爾景象；布朗運(yùn)動(dòng)；不透過半透膜；穩(wěn)定膠體溶丁達(dá)爾景象；布朗運(yùn)動(dòng)；不透過半透膜；穩(wěn)定膠體溶液真溶液。液真溶液。透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋經(jīng)過透析，小分子通透透析袋，分布于透析液中，大分子量的蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)過透析被分別除去。構(gòu)成穩(wěn)定膠體溶液的要素：水化膜和同性電荷蛋白質(zhì)所帶電荷和其周圍包繞的水化膜是維持蛋白質(zhì)在水溶液中穩(wěn)定的兩大要素。脫水和中和電荷可以導(dǎo)致蛋

17、白質(zhì)的沉淀。水化膜正電荷+H+OH-OH-OH-H+H+脫水脫水脫水蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的親水膠體帶負(fù)電荷的親水膠體蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)帶正電荷的親水膠體帶正電荷的疏水膠體不帶電的疏水膠體 極易沉淀帶負(fù)電的疏水膠體負(fù)電荷二 兩性解離和等電點(diǎn)pIpHpH 三 蛋白量變性作用和復(fù)性 牛胰核糖核酸酶分子的變性與復(fù)性變性是指蛋白質(zhì)在一些理化要素的作用下，其正常的空間構(gòu)象遭到破壞，主要是次級(jí)鍵或二硫鍵發(fā)生破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)的改動(dòng)如溶解度下降、粘度添加和生物學(xué)活性的喪失。蛋白質(zhì)的變性不影響其一級(jí)構(gòu)造。 12684726511058124126HS9540HS40SH58SH72HSHS84S

18、H95110SH1241264058657284951101248mol/L 尿素 -巰基乙醇透析除去尿素和 -巰基乙醇除去 -巰基乙醇天然RNase變性失活的RNase“ 錯(cuò)亂” RNase除去尿素痕量 -巰基乙醇三三 蛋白量變性作用和復(fù)性蛋白量變性作用和復(fù)性變性物理要素：加熱、紫外線照射、超聲、猛烈震蕩等化學(xué)要素：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、重金屬鹽等沉淀改動(dòng)pH至pI破壞水溶液中蛋白質(zhì)的水化膜和中和電荷變性蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)未變性凝固加熱加熱變性，不再溶解變性不一定沉淀沉淀不一定變性凝固均變性并不溶解加熱加熱蛋白量變性蛋白量變性Denaturation蛋白質(zhì)復(fù)性蛋白質(zhì)復(fù)性Renaturation)四

19、四 蛋白質(zhì)沉淀蛋白質(zhì)沉淀sedimentation作用作用precipitation沉淀；沉淀； Aggregation凝集凝集1 中性鹽法中性鹽法 鹽析鹽析salting-out；分段鹽析；分段鹽析grading salting-out 重金屬鹽重金屬鹽2 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 乙醇；丙酮乙醇；丙酮3 生物堿生物堿 單寧酸；苦味酸單寧酸；苦味酸4 有機(jī)酸有機(jī)酸 三氯乙酸三氯乙酸第六節(jié) 蛋白質(zhì)分別純化與測定一一 普通原那么步驟普通原那么步驟資料獲得與破碎機(jī)械、浸透、凍融、超聲和酶解等資料獲得與破碎機(jī)械、浸透、凍融、超聲和酶解等蛋白抽提蛋白抽提蛋白粗體沉淀蛋白粗體沉淀蛋白質(zhì)分別精純化蛋白質(zhì)分別精純化

20、測定：濃度；純度；分子量；性質(zhì)功能鑒定等測定：濃度；純度；分子量；性質(zhì)功能鑒定等 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與常用的純化方法 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 常用的純化方法分子質(zhì)量 離心 凝膠過濾 透析、超濾電荷 離子交換層析 電泳 等電聚焦溶解度 調(diào)整 pH 調(diào)整離子強(qiáng)度 降低介電常數(shù)特異結(jié)合部位 親和層析 親和洗脫其他性質(zhì) 吸附層析 液相層析 氣相層析二二 蛋白質(zhì)的提取與純化原理蛋白質(zhì)的提取與純化原理一改動(dòng)蛋白質(zhì)的溶解度鹽析： 高濃度中性鹽使蛋白質(zhì)從溶液中析出有機(jī)溶劑沉淀： 降低溶液的介電常數(shù)，使蛋白質(zhì)分子間 相互吸引而沉淀二根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的分別方法離心(centrifugation)： 利用機(jī)械的快速旋

21、轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，將不同密 度的物質(zhì)進(jìn)展分別 根據(jù)轉(zhuǎn)速分類：常用離心機(jī) 50 000 rpm 相對離心力g= 1.119 105 rpm2 r 根據(jù)運(yùn)用分類：分析型離心機(jī) 制備型離心機(jī)g: gravity, rpm: revolution per minut, r: 離心半徑勻漿沉淀上清1 000g,5min上清上清上清上清沉淀沉淀沉淀沉淀沉淀4 000g,10min15 000g,20min30 000g,30min100 000g,90min100 000g,180min未破壞的 真核細(xì)胞細(xì)胞膜碎片，細(xì)胞核線粒體， 細(xì)菌溶酶體， 菌體碎片微粒體核糖核蛋白體胞液 亞細(xì)胞成分的差速離心分別差速

22、離心法是沉降速度離心的一種，采用離心力由小到大的分階段離心的方法，將密度不同的物質(zhì)分步驟地逐一別分開來。亞細(xì)胞構(gòu)造的分別就是其中最好的例子。差速離心法 幾種蛋白質(zhì)的分子量與沉降系數(shù)的關(guān)系 蛋白質(zhì)分子 分子量沉降系數(shù)（S） 核糖核酸酶 12 900185 細(xì)胞色素 C 15 600190 肌紅蛋白 17 200204 胃蛋白酶 37 00033 -乳球蛋白 41 500312 卵白蛋白 44 000355 馬血紅蛋白 68 000441 人血清白蛋白 69 00046 血纖維蛋白原 330 00079 脲酶 480 000186 豬甲狀腺球蛋白 630 000192s =dxdt在單位力場下，溶

23、質(zhì)分子的沉降速度與離心角速度、離心半徑呈正比，其比例常數(shù)為沉降系數(shù)，用S表示，單位為秒。= s 2 普通蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)為10131012秒，故人們以Svedberg(S)單位來表示沉降系數(shù)，即1S = 1013秒。沉降系數(shù)的大小與蛋白質(zhì)的密度和外形相關(guān)。透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋經(jīng)過透析，小分子通透透析袋，分布于透析液中，大分子量的蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)過透析被分別除去。超濾ultrafiltration: 在一定的壓力下，使蛋白質(zhì)溶液在經(jīng)過一定孔徑的超濾膜時(shí)，小分子量物質(zhì)濾過，而大分子量的蛋白質(zhì)被截留，從而到達(dá)分別純

24、化的目的。這種方法既可以純化蛋白質(zhì)，又可到達(dá)濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。 磁力攪拌器待超濾的蛋白質(zhì)溶液加壓的氮?dú)獬瑸V膜凝膠過濾gel filtration： 凝膠過濾又稱分子篩層析，在層析柱內(nèi)填充惰性的微孔膠粒如交聯(lián)葡聚糖，將蛋白質(zhì)溶液參與柱上部后，小分子物質(zhì)經(jīng)過膠粒的微孔進(jìn)入膠粒，向下流動(dòng)的途徑加長，挪動(dòng)緩慢；大分子物質(zhì)不能或很難進(jìn)入膠粒內(nèi)部，經(jīng)過膠粒間的空隙向下流動(dòng)，其流動(dòng)的途徑短，挪動(dòng)速度較快，從而到達(dá)按不同分子量將溶液中各組分分開的目的 洗脫液膠粒樣品小分子大分子蛋白濃度洗脫體積各試管進(jìn)展延續(xù)搜集試管走行方向 凝膠過濾分別蛋白質(zhì)表示圖凝膠過濾洗脫洗脫洗脫樣品凝膠顆粒大分子先洗脫下來小分子后洗脫下來 凝膠過濾分別蛋白質(zhì)表示圖根據(jù)各種蛋白質(zhì)在一定的pH環(huán)境下所帶電荷種類與數(shù)量不同的特點(diǎn)，將不同蛋白質(zhì)予以分別。常用的方法有：離子交換層析電泳等電聚焦。 三根據(jù)蛋白質(zhì)電荷性質(zhì)的分別方法低鹽濃度 洗脫液高鹽濃度 洗