固定化酶在現(xiàn)代工業(yè)中的應(yīng)用

1、固定化酶在現(xiàn)代工業(yè)中的應(yīng)用姓名：胡艷芬 學(xué)號(hào)： 指導(dǎo)教師：張孟摘要 酶是一類有催化功能的蛋白質(zhì),具有反應(yīng)條件溫和, 底物專一性強(qiáng), 可在水溶液和中性pH 下操作等優(yōu)點(diǎn)。與游離酶相比，固定化酶在保持其高效專一及溫和的酶催化反應(yīng)特性的同時(shí)，又克服了游離酶的不足之處。本文簡(jiǎn)要介紹了固定化酶的概念、制備方法及其在生物、醫(yī)藥、環(huán)境保護(hù)等方面的廣泛應(yīng)用。重點(diǎn)介紹一些固定化酶在現(xiàn)代工業(yè)中的應(yīng)用，并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。關(guān)鍵詞 固定化酶 制備 工業(yè) 應(yīng)用 前景酶是一類由活細(xì)胞產(chǎn)生的具有生物催化功能的分子量適中的蛋白質(zhì),具有極高的催化效率、高度的特異性及控制的靈敏性。大多數(shù)酶是水溶性的。由于酶催化反應(yīng)具有底物

2、專一性、催化高效性、反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點(diǎn),符合綠色化學(xué)的要求,從而被大家高度重視,已在許多領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用1。酶的最大缺點(diǎn)是其不穩(wěn)定性,在酸、堿、熱及有機(jī)溶劑中易發(fā)生變性,活性降低或喪失;而且酶反應(yīng)后,會(huì)在溶液中殘留,造成酶反應(yīng)難以連續(xù)化、自動(dòng)化,同時(shí)也不利于終產(chǎn)品的分離提純,這些都大大阻礙了酶工業(yè)的發(fā)展,所以有必要采取酶工程技術(shù)改善這些缺點(diǎn)。酶工程技術(shù)措施較多,其中酶的固定化技術(shù)是重要舉措之一。酶的固定化是用人工方法把從生物體內(nèi)提取出來的酶固定在特定的載體上或使酶與酶相交聯(lián),酶被限定在一定區(qū)域內(nèi),但仍保持原有高效、專一、條件溫和的催化功能2。已固定化的酶像化學(xué)反應(yīng)所用的固體催化劑那樣, 既能

3、發(fā)揮它們的催化特性, 又能回收, 并能多次反復(fù)使用, 使整個(gè)生產(chǎn)工藝可以連續(xù)化、自動(dòng)化。近年來, 國(guó)內(nèi)外科技工作者在固定化酶在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用做了大量研究，并得到了廣泛的發(fā)展，本文將對(duì)這些成就做具體介紹。1 固定化酶的概念1916 年Nelson 和Griffin 最先發(fā)現(xiàn)了酶的固定化現(xiàn)象后, 科學(xué)家就開始了固定化酶的研究工作。1969 年日本一家制藥公司第1 次將固定化的酰化氨基酸水解酶用來從混合氨基酸中生產(chǎn)L-氨基酸, 開辟了固定化酶工業(yè)化應(yīng)用的新紀(jì)元。酶的固定化是用人工方法把從生物體內(nèi)提取出來的酶固定在特定的載體上或使酶與酶相交聯(lián),酶被限定在一定區(qū)域內(nèi),但仍保持原有高效、專一、條件溫和的

4、催化功能。通常酶是游離的,而經(jīng)過固定化以后,酶被束縛在一定區(qū)域內(nèi),因而這樣的酶被稱為固定化酶 3, 4 。與游離酶相比, 固定化酶在保持其高效專一及溫和的酶催化反應(yīng)特性的同時(shí), 又克服了游離酶的不足, 呈現(xiàn)貯存穩(wěn)定性高、分離回收容易、可多次重復(fù)使用、操作連續(xù)可控、工藝簡(jiǎn)便等一系列優(yōu)點(diǎn)。2 固定化酶的制備酶的固定化( enzyme immob ilization) 是指采用有機(jī)或無機(jī)固體材料作為載體( carrier or support),將酶包埋起來或束縛、限制于載體的表面和微孔中, 使其仍具有催化活性, 并可回收及重復(fù)使用的酶化學(xué)方法與技術(shù)。固定化酶的制備方法有物理法和化學(xué)法兩大類。物理方

5、法包括物理吸附法、包埋法等。物理法固定酶的優(yōu)點(diǎn)在于酶不參加化學(xué)反應(yīng),整體結(jié)構(gòu)保持不變,酶的催化活性得到很好保留?；瘜W(xué)法是將酶通過化學(xué)鍵連接到天然的或合成的高分子載體上,使用偶聯(lián)劑通過酶表面的基團(tuán)將酶交聯(lián)起來,而形成相對(duì)分子量更大、不溶性的固定化酶的方法。2.1 傳統(tǒng)的酶固定化方法傳統(tǒng)的酶固定化方法大致可分為4 類: 吸附法、交聯(lián)法、包埋法、共價(jià)結(jié)合法。吸附法是最早出現(xiàn)的酶固定化方法, 包括物理吸附和離子交換吸附。該法條件溫和, 酶的構(gòu)象變化較小或基本不變, 因此對(duì)酶的催化活性影響小, 但酶和載體之間結(jié)合力弱, 在不適pH、高鹽濃度、高溫等條件下, 酶易從載體脫落并污染催化反應(yīng)產(chǎn)物等。交聯(lián)法是利

6、用雙功能或多功能交聯(lián)試劑, 在酶分子和交聯(lián)試劑之間形成共價(jià)鍵, 采用不同的交聯(lián)條件和在交聯(lián)體系中添加不同的材料, 可以產(chǎn)生物理性質(zhì)各異的固定化酶。交聯(lián)法一般作為其它固定化方法的輔助手段5 。包埋法的基本原理是載體與酶溶液混合后, 借助引發(fā)劑進(jìn)行聚合反應(yīng), 通過物理作用將酶限定在載體的網(wǎng)格中, 從而實(shí)現(xiàn)酶固定化的方法。該法不涉及酶的構(gòu)象及酶分子的化學(xué)變化, 反應(yīng)條件溫和, 因而酶活力回收率較高。包埋法固定化酶易漏失, 常存在擴(kuò)散限制等問題, 催化反應(yīng)受傳質(zhì)阻力的影響, 不宜催化大分子底物的反應(yīng)。載體偶聯(lián)法是指酶分子的非必須基團(tuán)與載體表面的活性功能基團(tuán)通過形成化學(xué)共價(jià)健實(shí)現(xiàn)不可逆結(jié)合的酶固定方法,

7、 又稱共價(jià)結(jié)合法。載體偶聯(lián)法所得的固定化酶與載體連接牢固, 有良好的穩(wěn)定性及重復(fù)使用性,成為目前研究最為活躍的一類酶固定化方法。但該法較其它固定方法反應(yīng)劇烈, 固定化酶活性損失更加嚴(yán)重。2.2 傳統(tǒng)固定化技術(shù)的改進(jìn)保持各種傳統(tǒng)固定化方法的優(yōu)點(diǎn)并改進(jìn)其不足一直是固定化酶方面研究的重要內(nèi)容。改善酶固定化效果的途徑有: 改善表面積以及孔徑等物理結(jié)構(gòu),如采用分子篩或納米纖維微孔膜; 改善化學(xué)交聯(lián)的反應(yīng)及方式, 如輻照, 引發(fā)劑引發(fā)等; 改善結(jié)合的方向選擇性, 如采用定向固定化的方法; 其他手段, 如利用長(zhǎng)臂使酶遠(yuǎn)離載體表面, 使載體- 酶體系的溶解度隨溫度、pH 值等條件的改變而改變, 以便于產(chǎn)物的分

8、離及酶的回收。針對(duì)不同的酶有不同的策略, 對(duì)于某些酶可能取向很重要, 而對(duì)于其他酶可能載體造成的環(huán)境重要一些, 因此, 每種酶固定的最佳條件目前還是特異的, 沒有統(tǒng)一的理論, 其原因可能是相互間的影響因素太多, 而酶又多由具有復(fù)雜組成和空間構(gòu)型的蛋白質(zhì)構(gòu)成, 不存在明顯的因果聯(lián)系。今后可望建立起適用的模型, 使用計(jì)算機(jī)得到最優(yōu)的固定策略。2.3 新型酶固定化方法開發(fā)新型酶固定化方法的原則是: 實(shí)現(xiàn)在較為溫和的條件下進(jìn)行酶的固定化, 盡量減少或避免酶活力的損失。通過輻射、光、等離子體、電子等新方法均可制備高活性固定化酶。Mohy 等 6 以137 Cs 為輻射源,通過C2射線引發(fā)將甲基丙烯酸甲酯

9、接枝共聚于尼龍膜表面, 經(jīng)進(jìn)一步活化, 用于青霉素?；傅墓潭?。光偶聯(lián)法是以光敏性單體聚合物包埋固定化酶或帶光敏性基團(tuán)的載體共價(jià)固定化酶, 由于條件溫和, 可獲得酶活力較高的固定化酶。Li等 7 利用含芳香疊氮基的光活性酯, 在遠(yuǎn)紫外光輻照下, 疊氮基光解生成氮烯與PES 膜表面的C- H 鍵間發(fā)生插入反應(yīng)形成仲胺, 將脲酶共價(jià)鍵合到PES 膜的表面。等離子體是高度激發(fā)的原子、分子、離子以及自由基的聚集體, 大量的等離子體常在室溫下存在。載體材料表面可以由等離子體進(jìn)行有用修飾 8, 9 , 從而引入活性基團(tuán)。Puleo 等將鈦合金T i26Al24V 表面用丙烯酸胺等離子體處理引入氨基, 然后

10、將含碳硝化甘油接枝于鈦合金表面, 或者將等離子體處理的鈦合金先由琥珀酸酐處理, 再用含碳硝化甘油接枝, 進(jìn)而將溶菌酶和骨形態(tài)蛋白進(jìn)行固定, 實(shí)現(xiàn)了生物分子在生物惰性金屬上的固定化。3 固定化酶在現(xiàn)代工業(yè)中的應(yīng)用3.1 酶蛋白工程在工業(yè)酶中的應(yīng)用目前酶蛋白質(zhì)工程主要集中在工業(yè)用酶的改造, 因?yàn)楣I(yè)用酶有較好的酶學(xué)和晶體學(xué)研究基礎(chǔ), 酶的發(fā)酵技術(shù)(包括誘變技術(shù)和篩選方法)也比較成熟, 而且其微生物的遺傳工程發(fā)展較好, 其次工業(yè)酶無須進(jìn)行醫(yī)學(xué)鑒定, 能很快地投入使用. 如用作洗衣粉添加酶的枯草桿菌蛋白酶, 是一種天然的絲氨酸蛋白酶, 它能夠分解蛋白質(zhì), 使衣服上的血跡和汗?jié)n等很容易洗掉. 但這種酶一

11、般比較脆弱, 在漂白劑的作用下容易被破壞而失去活性, 原因是222位的甲硫氨酸容易被氧化成砜或亞砜. 現(xiàn)在利用蛋白質(zhì)工程技術(shù), 用絲氨酸或丙氨酸替代后, 酶的抗氧化能力大大提高, 可在0. 5mol/L 的過氧化氫溶液中停留1小時(shí)而活性絲毫未損, 這樣便可與漂白劑混合使用. 可以預(yù)見生物工程技術(shù)的發(fā)展和酶固定化技術(shù)可以相互補(bǔ)充, 共同發(fā)展對(duì)酶在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用必將起到更大的推動(dòng)作用。3.2 固定化酶在食品工業(yè)中的應(yīng)用酶固定化在食品工業(yè)中的應(yīng)用是早期發(fā)展起來的一個(gè)傳統(tǒng)領(lǐng)域. 其中最有名的, 也是規(guī)模最大的過程, 就是采用固定化葡萄糖異構(gòu)酶, 從葡萄糖生產(chǎn)高果糖漿. 其它還包括采用固定化乳糖酶去除牛

12、乳中的乳糖、采用固定化脂肪酶通過轉(zhuǎn)酶反應(yīng)生產(chǎn)可可油替代品、采用固定化耐熱蛋白酶制造甜味劑2天冬甜精, 以及應(yīng)用固定化L2天冬酶從富馬酸銨生產(chǎn)天冬氨酸等 7 。1973 年,日本用聚丙烯酸酰胺為載體,用包埋法制成固定化天冬氨酸酶,用于工業(yè)化生產(chǎn)。固定化乳糖酶和固定化天門冬氨酸- 脫羧酶分別于1977 年和1982 年用于工業(yè)化生產(chǎn)。3.2.1 固定化酶在乳制品生產(chǎn)中的應(yīng)用牛奶中含有一定量的乳糖,有些人體內(nèi)缺乏乳糖酶,在飲用牛奶后常出現(xiàn)腹瀉、腹脹等癥狀;另外,由于乳糖難溶于水,常在煉乳、冰淇淋中呈沙樣結(jié)晶析出,影響風(fēng)味。乳糖酶可將乳糖分解為半乳糖和葡萄糖,如將牛奶用乳糖酶處理則可解決上述問題。Fe

13、rnandes等 6 研究用瓊脂糖作載體,固定來源于南極的冷適應(yīng)菌Pseudoalterom onas sp的- 半乳糖苷酶,并應(yīng)用于牛奶中乳糖的降解,生產(chǎn)低乳糖牛奶;Caterina等 7 運(yùn)用固定化技術(shù),研究牛奶中堿性磷酸酶的耐熱性;Mona等 8 研究用離子吸附法固定來源于B acillus licheniform is 5A1的牛奶凝結(jié)酶,并用于干酪生產(chǎn)。3.2.2 固定化酶在啤酒生產(chǎn)中應(yīng)用在啤酒生產(chǎn)中,需添加外源性的淀粉酶來補(bǔ)充天然酶的不足。此外,長(zhǎng)期放置的啤酒會(huì)由于多肽和多酚物質(zhì)發(fā)生聚合反應(yīng)而變得混濁,為防止出現(xiàn)混濁,目前主要采用添加蛋白酶來水解啤酒中的蛋白質(zhì)和多肽。溫燕梅等以化學(xué)

14、共沉淀法制得的磁性聚乙二醇膠體粒子為載體,固定胰蛋白酶,該磁性酶對(duì)啤酒澄清、防止冷渾濁有明顯效果; Stepanova等研究用DEAE-纖維素固定-葡萄糖苷酶和多聚半乳糖醛酸酶,用于櫻桃、李子的果酒生產(chǎn)。3.2.3 固定化酶在茶飲料生產(chǎn)中的應(yīng)用將固定化酶法應(yīng)用于茶飲料生產(chǎn)中,可去除異味,提高適口性,提高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。李平等 9 研究從黑曲霉(Aspergillus niger)發(fā)酵液中提取-葡萄糖苷酶酶液,用絲素蛋白將其固定,此固定化酶可應(yīng)用于茶汁的風(fēng)味改良; 蘇二正10 等以海藻酸鈉為載體,采用交聯(lián)-包埋-交聯(lián)的方法共固定化了單寧酶和-葡萄糖苷酶,可應(yīng)用于茶飲料的除渾和增香處理。3.3 固定化酶

15、在化工領(lǐng)域中的應(yīng)用。水解蛋白酶固定化后可用于肽及有機(jī)化合物的酶促合成,如硅藻土固定化木瓜蛋白酶可在乙酸乙酯介質(zhì)中催化合成Leu - 腦啡肽前體Boc - Phe -Leu - OMe 、產(chǎn)率高達(dá)90 %以上;固定化嗜熱菌蛋白酶可高產(chǎn)率及專一性催化合成高甜度低熱量的二肽甜味劑Aspartame 的前體Z - L - Asp - L - Phe -OMe 、并可同時(shí)實(shí)現(xiàn)天冬甜精的生物合成與DL -苯丙氨酸甲酯的光學(xué)拆分11 。通過反相懸浮聚合制備的聚丙烯酰胺原位固定化堿性蛋白酶水凝膠球體可直接用于洗滌劑制備、且具有潛在的應(yīng)用前景。脂肪酶既能催化天然油脂及酯類的水解,也能在有機(jī)介質(zhì)中催化酯的合成、交

16、換、氨解及肽合成而具有重要工業(yè)價(jià)值, 故固定化脂肪酶的研究頗受重視。固定化酶在化學(xué)及化工領(lǐng)域中的應(yīng)用研究也是人們感興趣的課題,通過反相懸浮聚合制備的聚丙烯酰胺原位固定化堿性蛋白酶水凝膠球體可直接用于洗滌劑制備,且具有潛在的應(yīng)用前景。3.4 固定化酶在皮革工業(yè)中的應(yīng)用皮革工程是經(jīng)過一定的處理過程,將原料皮中的可溶性蛋白質(zhì)、毛、脂肪、彈性蛋白和網(wǎng)硬蛋白等非制革成分去除掉,加入所需要的鞣劑、復(fù)鞣劑、加脂劑等材料以提高其使用性能,滿足人們的各種需要的過程。由于酶具有較好的專一性、溫和性和高效性等生物催化特性,在制革的過程中已有許多工序(浸水、浸灰、脫脂和軟化等) 得到應(yīng)用,在高檔皮革的制造過程中則更為

17、如此。在皮革工業(yè)廢水的處理及固體廢棄物的資源化與有效利用方面,酶更是得到了廣泛的應(yīng)用12 。在皮革的生產(chǎn)中,在傳統(tǒng)的酶處理后應(yīng)盡快轉(zhuǎn)入下一道工序。例如,在浸水、浸灰、脫脂和軟化等達(dá)到預(yù)期的目的之后,都要盡快地轉(zhuǎn)入下一道工序。否則,其中的酶還存在一定的活性,還會(huì)對(duì)皮坯進(jìn)行作用,影響產(chǎn)品的質(zhì)量。如果在皮革的生產(chǎn)過程中采用磁性固定化酶技術(shù),在酶處理達(dá)到預(yù)期目的之后,將其中的酶完全回收。一方面,酶還可以繼續(xù)使用,有一定的經(jīng)濟(jì)效益;另一方面,皮革中已沒有酶,不會(huì)在沒有轉(zhuǎn)入下一工序之前繼續(xù)作用,影響皮革的質(zhì)量,有利于皮革產(chǎn)品質(zhì)量的控制。3.5 固定化酶在處理工業(yè)廢水中的應(yīng)用。在工業(yè)污水處理中,往往要用到生

18、物曝氣法。其原理是在生物細(xì)胞內(nèi)酶的催化作用下產(chǎn)生氧化分解作用。污水中溶解性的物質(zhì)透過細(xì)胞壁,在胞內(nèi)酶的催化作用下,迅速完成氧化、合成一系列生化反應(yīng);被吸附在細(xì)胞壁周圍的污水中的固體物質(zhì),則由細(xì)菌分泌出的胞外酶將其轉(zhuǎn)化成可溶性物質(zhì),再滲入細(xì)胞壁,由胞內(nèi)酶去進(jìn)行生化反應(yīng)。一部分有機(jī)物被氧化分解為二氧化碳、水、氨等,并放出能量,另一部分有機(jī)物則轉(zhuǎn)化為生物體所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),組成新的原生質(zhì),通過這一過程,污水中的COD、BOD、色度等都得到降低,污水得到凈化10。如果在皮革污水處理池中設(shè)置一固定化裝置,采用現(xiàn)代技術(shù)將處理污水所必需的生物酶固定在其表面上,在污水處理的過程中,隨著污水的運(yùn)動(dòng),這些酶就可以

19、與其中的有機(jī)物進(jìn)行廣泛的接觸而發(fā)生所需要的生物化學(xué)反應(yīng),達(dá)到凈化污水的目的。在處理的過程中,固定化酶還可以一直使用下去,而其活性也不會(huì)降低。漆酶作為一種高效，綠色的催化劑，隨著固定化技術(shù)的不斷發(fā)展，擴(kuò)大了漆酶的工業(yè)應(yīng)用范圍和前景，固定化酶在廢水處理中有著重要的應(yīng)用價(jià)值。工業(yè)廢水中含有大量的難降解的酚類物質(zhì)，如氯酚等，國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者已經(jīng)對(duì)固定化酶降解有毒的酚類物質(zhì)進(jìn)行了大量的研究，張樹江等用固定化漆酶去處廢水中的2 ,4- 2 二氯酚的去除率可達(dá)99.5 %以上，且不產(chǎn)生二次污染，催化效率高13 。隨著染料工業(yè)的發(fā)展，染料結(jié)構(gòu)復(fù)雜且不易降解，固定化漆酶對(duì)染料的降解也有獨(dú)特的作用，且可以回收重復(fù)使

20、用，降低成本。4 固定化酶在其它領(lǐng)域的應(yīng)用及展望 4.1 固定化酶在生化制藥中的應(yīng)用固定化酶的另一個(gè)巨大市場(chǎng)是用來生產(chǎn)工業(yè)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的一些純度要求較高的制劑, 這其中有最早生產(chǎn)的氨基酸, 還有抗生素、核酸、蛋白質(zhì)抗體、高純度的蛋白酶等。科研人員首先于1973 年用固定化的青霉素?；干a(chǎn)制造各種半合成的青霉素和頭孢霉素, 后來,我國(guó)的科學(xué)家也不斷地嘗試各種固定化方法, 有的直接用戊二醛交聯(lián)產(chǎn)該酶的大腸桿菌, 也有用ABSE- 交聯(lián)瓊脂糖與青霉素酰化酶直接偶聯(lián), 還有的利用三醋酸纖維素包埋和戊二醛交聯(lián)相結(jié)合固定青霉素?；父弋a(chǎn)菌, 這些試驗(yàn)的結(jié)果都顯示各種固定化方法均可在很大程度上提高酶的穩(wěn)定

21、性、增加酶的轉(zhuǎn)化率14 。4.2 固定化酶在生物傳感器和環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用生物傳感器是由生物活性物質(zhì)與換能器組成的分析系統(tǒng), 可以簡(jiǎn)便、快速地測(cè)定各種特異性很強(qiáng)的物質(zhì),在臨床分析、工業(yè)監(jiān)測(cè)等方面有著重要的意義。固定化葡萄糖氧化酶?jìng)鞲衅魇瞧渲袘?yīng)用最為廣泛的一種。制藥廠將葡萄糖氧化酶、過氧化氫酶和一種顯色劑一起固定在試紙上, 制成檢驗(yàn)婦女是否妊娠的試紙, 只要將該試紙浸入被檢尿樣中幾秒鐘就可以馬上檢測(cè)出尿樣的葡萄糖是否超標(biāo), 從而斷定該婦女是有血糖、尿糖還是妊娠14 。固定化酶不僅在化學(xué)、生物學(xué)及生物工程、醫(yī)學(xué)及生命科學(xué)等學(xué)科領(lǐng)域的研究異?；钴S,得到迅速發(fā)展和廣泛的應(yīng)用,而且因?yàn)榫哂泄?jié)省資源與能源、

22、減少或防治污染的生態(tài)環(huán)境效應(yīng)而符合可持續(xù)發(fā)展的戰(zhàn)略要求15 。固定化酶一個(gè)很大的用途是處理廢水中一些有毒有害物質(zhì), 防止污染，從而有效的保護(hù)了生活環(huán)境。五 結(jié)語酶作為一種生物催化劑對(duì)人類的生產(chǎn)生活起到了極其重要的作用，而酶的固定化技術(shù)的產(chǎn)生與發(fā)展更使得酶的功能在工業(yè)生產(chǎn)的各個(gè)領(lǐng)域得到了體現(xiàn)。近年來酶的固定化及應(yīng)用研究已得到長(zhǎng)足進(jìn)展, 并且不停的開發(fā)新型固定化技術(shù)、改進(jìn)傳統(tǒng)固定化方法。一些生物技術(shù), 特別是蛋白質(zhì)工程和基因重組等分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和酶固定化技術(shù)可以相互補(bǔ)充, 必將對(duì)固定化酶在環(huán)境保護(hù)、食品工業(yè)、生物傳感器、有機(jī)合成等領(lǐng)域的應(yīng)用起到更大的推動(dòng)作用。而在不停進(jìn)步的現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)中固定

23、化酶更將繼續(xù)發(fā)揮其不可取代的作用，特別是新技術(shù)的開發(fā)利用使得固定化酶在工業(yè)生產(chǎn)中更具廣闊的發(fā)展前景。 參考文獻(xiàn) 1 馬建標(biāo). 高分子對(duì)酶、抗體、DNA 的修飾、固定化及其生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用J . 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào),1997 ,18 (7) :1127. 2 李彥鋒,李軍榮,伏蓮娣1 固定化酶的制備及應(yīng)用J 1 高分子通報(bào),2001 :13 - 231 3 彭志英1 食品酶學(xué)導(dǎo)論M 1 北京: 中國(guó)輕工業(yè)出版社, 20021 4 羅貴民,曹淑桂,張今1酶工程M 1北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2002 5 楊昌英, 潘家榮, 鐘珩等. 醋酸纖維素固定化脂肪酶催化豬油合成單甘酯 J . 湖北化工, 2002,

24、 (6) : 20 21. 6 Mohy M Y, Ben civenga U, Rossi S, et al . Charact erizat ion theact ivity of pen icillin G acyl as e immobilized on to nylon membranesgraft ed with different acrylic monomers by means of C2radiation J . J ou rnal of Molecular Cat alysis B: E nzymat ic, 2000: 2332 244. 7 吳國(guó)琪,凌達(dá)仁,王忱,等.

25、 固定化谷氨酸脫羧酶性能的研究J . 離子交換與吸附,1999 ,15 (1) :71. 8 Mona A E, Yannick C B1 Immobilization of Bacilluslicheniformis 5A1 milk- clotting enzyme and characterization of itsenzyme p roperties J 1 World Journal of Microbiology andBiotechnology, 2006, 22 (3) : 1972001 9 Kalia V , Goyal L , Pundir C S. 烷基胺玻璃固定化葡

26、萄糖氧化酶測(cè)定血糖J . 生物工程學(xué)報(bào), 1998 , 14 (3) : 336. 10 徐暉,王燕,魏密蘇. 環(huán)境工程中固定化酶與固定化微生物的應(yīng)用J . 滄州師范專科學(xué)校學(xué)報(bào),2002 ,18 (3) :42. 11 Dinelli D. Process Biochem J . Process Bio chem, 1972, 7(8) : 9 14. 12 岳振峰, 彭志英, 徐建祥等. 殼聚糖固定化葡萄糖苷酶的研究 J . 食品與發(fā)酵工業(yè), 2001, 27 (4) : 20 24. 13 陳雄. 固定化糖化酶的研究 J . 中國(guó)釀造, 2001, ( 2) :19 20. 14 唐芳瓊, 孟憲偉, 陳東, 冉均國(guó), 茍立, 鄭昌瓊. 納米顆粒增強(qiáng)的葡萄糖生物傳感器 J , 中國(guó)科學(xué)B 輯, 2000,30 (2) : 119 124. 15 馬秀