染色體核型分析.docx

1、細(xì)胞遺傳學(xué)（染色體核型）分析克隆性染色體異常是診斷惡性血液病的重要依據(jù)。許多特異性染色體畸變和特定的惡性血液病亞型相聯(lián)系，因而成為惡性血液病診斷分型的重要指標(biāo)；診斷時(shí)的染色體核型對(duì)惡性血液病具有獨(dú)立的預(yù)后價(jià)值，對(duì)于治療方案的選擇具有指導(dǎo)意義；同時(shí)染色體畸變可作為監(jiān)測(cè)白血病緩解、復(fù)發(fā)及突變的重要參考指標(biāo)，也為分子學(xué)研究提供了重要線索。比如 t(9;22) 異常的急性淋巴細(xì)胞白血病、復(fù)雜染色體異常的白血病預(yù)后很不好，應(yīng)盡早進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植等。 WHO 制定的惡性血液病分型系統(tǒng)中，將染色體核型作為最重要的分型及診斷指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)重現(xiàn)性異常的染色體可提前作出 AML 的診斷。很多染色體異常導(dǎo)致特異

2、性的白血病融合基因。染色體分析除用于各類惡性血液病患者，如急、慢性白血病、MDS 、 MPNs 、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤(MM) 患者外，還可用于兒童遺傳性疾病、先天性畸形的染色體檢測(cè)，以及習(xí)慣性流產(chǎn)、不孕不育等疾病的診斷。但是染色體分裂相的制備和分析具有一定的難度，需要時(shí)間長(zhǎng)，因此導(dǎo)致臨床染色體的診斷缺乏及時(shí)性，往往發(fā)報(bào)告時(shí)間需要一個(gè)月甚至更長(zhǎng)的時(shí)間；染色體核型分析需要細(xì)胞分裂才能完成，因此需要細(xì)胞具有良好的分裂活性，部分患者的細(xì)胞不分裂就不能觀察到可供分析的中期分裂相（正常染色體分裂相，核型排列后如圖3 和圖 4 ），在一定程度上影響了患者的確診和治療。此外染色體一般只能分析20-30 個(gè)分

3、裂相細(xì)胞，敏感性只有百分之一，當(dāng)異常細(xì)胞比例較低時(shí)，也難以發(fā)現(xiàn)異常的染色體。異常染色體核型的判斷需要經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員，尤其對(duì)一些復(fù)雜染色體異常，或異常較小的染色體，往往難以正確判斷。采用染色體全自動(dòng)掃描暨自動(dòng)核型分析系統(tǒng)可以加快染色體檢測(cè)和發(fā)報(bào)告速度。通過(guò)加用一些促細(xì)胞分裂的試劑可增加可供分析的核型。圖 3 正常男性的染色體核型圖 4:正常女性核型 46,XX不同血液惡性腫瘤常見(jiàn)的染色體異常見(jiàn)表2 ，具體介紹如下。表 2 白血病和淋巴瘤常見(jiàn)的染色體易位和融合基因細(xì)胞類型疾病染色體異常融合基因髓細(xì)胞AML/M2t(8;21)(q22;q22)AML1/ETG8(ETO)AML/M2(M4)t(

4、6;9)(p23;q34)DEK/CANAML-M3t(15;17)(q22;q11-22)PML/RAR AML-M4inv(16)(p13;q22)CBFb/MYH11AMLt(6;11)(q27;q23)MLL/AF6AMLt(11;19)(q23;p13.1)MLL/ELLAMLt(11;17)(q23;q21)MLL/AF17AMLt(10;11)(p12;q23)MLL/AF10AMLdupMLL(11q23)dupMLLAMLt(16;21)(p11;q22)TLS/ERGAMLt(9;11)(p22;q23)MLL/AF9CMLt(9;22)(q34;q11)BCR/ABLHE

5、S;CELDel4qFIP1L1/PDGFRaB 細(xì)胞B- 淋巴瘤t(14;18)(q32;q21)BCL-2/IgHBurkitt 淋巴瘤t(8;14)(q24;q32)MYC/IgHT 細(xì)胞T-ALLt(8;14)(q24;q11)MYC/TCR T-ALLt(X;11)(q13;q23)MLL/AFXT-ALLt(1;11)(p32;q23)MLL/AF1pT-ALLt(11;19)(q23;p13.3)MLL/ENLT-ALLTAL1DSIL/TAL1T-ALLt(16;21)(p11;q22)TLS/ERGT-ALLt(11;14)(p15;q11)Rhom-1 ，TTG-1/TCR

6、 1. 伴有特異性遺傳學(xué)異常的AML在這一 AL 亞群中， WHO 確認(rèn)了以下四種特征明確的遺傳學(xué)異常，在原發(fā)性AML 中此類異常占30% ，這類 AML 有獨(dú)特的臨床表現(xiàn)。l t （8；21 ）（ q22 ；q22 ）和 /或 AML1-ETO 基因的 AML ，采用含大劑量阿糖胞苷的化療方案治療，臨床治愈率可達(dá) 50% ，被分類為低危險(xiǎn)性 AML （如圖 5）。圖 5多發(fā)于急性粒細(xì)胞白血病M2 型： 46,XX,t(8;21)(q22;q22)lt （ 15 ；17 ）（ q22 ；q12 ）和 /或PML-RAR融合基因及其變異型的APL ，用全反式維甲酸及砷劑療效好，采用化療+ 砷劑

7、+全反式維甲酸聯(lián)合方案治療，臨床治愈率可達(dá)70%-95%，被分類為低危險(xiǎn)性AML （如圖6）。圖 6急性早幼粒細(xì)胞白血?。?6,XX,t(15;17)(q22;q12)l染色體 inv （ 16 ）（ p13 ；q22 ）或 t （16 ； 16 ）（ p13 ； q22 ）和 /或 CBF - MYH 融合基因的AML ，常伴有嗜酸細(xì)胞增加。采用含大劑量阿糖胞苷方案的化療療效好，臨床治愈率可達(dá)50% 以上，被分類為低危險(xiǎn)性AML （如圖 7）。圖 7急性粒細(xì)胞白血病M4EO 型： 46,XX,inv(16)(p13q22)l伴有染色體11q23 和 /或 MLL 基因異常的AML ，預(yù)后較差

8、，尤其是MLL-AF4異常，被分類為高危險(xiǎn)性 AML （如圖 8）。圖 8:多發(fā)于急性粒細(xì)胞白血病M5 型： 46,XY,del(11q23)2. 急性淋巴細(xì)胞白血病 (ALL) 的染色體異常B-ALL系列常見(jiàn)的染色體異常有:?t(14;11)(q21;q23)見(jiàn)于 30%-60% 的新生兒和嬰兒ALL ，臨床上常有高白細(xì)胞計(jì)數(shù)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累，預(yù)后不良。?t(1;19)(q23;p13)見(jiàn)于 5%-6% 的兒童 ALL ，預(yù)后不良（圖9 ）。圖 9 急性 B 淋巴細(xì)胞白血病， 46,XX,t(1;19)(q12;p13)?t(9;22)(q34;q11)，見(jiàn)于 2%-5% 的兒童 ALL

9、和 15%-30% 的成人 ALL ，化療效果差，預(yù)后不良。? t(12;21)(p13;q22) 見(jiàn)于 12%-27% 的兒童 ALL ，為兒童 B 細(xì)胞 ALL 中最常見(jiàn)的畸變， CR 率高，復(fù)發(fā)少見(jiàn)，預(yù)后較好。T-ALL 系列的染色體斷裂點(diǎn)常涉及T 細(xì)胞抗原受體 (TCR) 基因所在位點(diǎn)，有：? t(11;14)(p13;q11)? t(10;14)(q24;q11)? t(1;14)(p32;q11)? t(8;14)(q24;q11)? t(11;14)(p15;q11)系列非特異性ALL?6q-常見(jiàn)于 4%-13% 的兒童 ALL ，成人 ALL 較少見(jiàn)，預(yù)后較好；?9p-見(jiàn)于 7

10、%-12% 的 ALL ，預(yù)后不良；? 12p- 見(jiàn)于 10%-12% 的 ALL ，缺失或易位，預(yù)后較好；3. 慢性粒細(xì)胞白血病 (CML) 的染色體異常根據(jù) WHO 的建議，雖然根據(jù)臨床表現(xiàn)、肝脾明顯腫大的體征、血液粒細(xì)胞明顯升高、骨髓以成熟粒細(xì)胞增生為主的特征應(yīng)考慮CML 的診斷，但遺傳學(xué)或基因檢查確證是必需的，診斷CML 必須有t(9;22)(q34;q11)（如圖 10 ）、或其變異型染色體異常，和/或 BCR-ABL融合基因；如果僅有以上臨床、血液學(xué)及骨髓特征，只能診斷為不典型CML 。在 CML 加速期和急變期，20% 的患者保持原核型不變， 80% 的患者可發(fā)生核型演變，即出現(xiàn)

11、額外的染色體異常，常見(jiàn)的依次為：+Ph+ 、 +8、i（ 17q ）、+19 、+21 。因此，病程中定期的染色體檢查，有助于早期診斷CML 是否進(jìn)入加速期或急變期。典型的CML 患者對(duì)格列衛(wèi)治療的反應(yīng)好，大部分患者可達(dá)到細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)的緩解，即Ph+ 染色體和BCR-ABL融合基因消失。圖 10 ：慢性粒細(xì)胞白血病患者， 46,XY,t(9;22)(q34;q11)4. 慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL) 的染色體異常CLL 患者核型演變很少見(jiàn)，無(wú)核型異常者，預(yù)后較好；有核型異常者，均提示預(yù)后不良。12 號(hào)染色體三體（ +12 ）最為常見(jiàn)（如圖10 ），其次為3 號(hào)和 18 號(hào)染色體三體。

12、在結(jié)構(gòu)異常中，13q- 和 14q+ 較常見(jiàn)。圖 11: 慢性淋巴細(xì)胞白血病患者： 46,XX,+125. 骨髓增生異常綜合征 (MDS) 的染色體異常大約 40%-70% 的 MDS 有克隆性染色體改變。典型的異常為：+8 、-5、 del （5q ）、 -7 、 del （7q ）、del(11q) 、 del （11p ）、 del （17p ）、 del （20q ）（如圖 11 ）等等。 (5q31 、CEP7 、7q31 、 CEP8 、20q 、 CEPY 、 P53 也是容易累及的區(qū)域。)孤立的 5q-染色體異常的MDS 具有獨(dú)特的臨床、治療反應(yīng)及預(yù)后特征，故單獨(dú)分類。常有血小

13、板增多，雷利度胺（ lenolidomide ）或強(qiáng)化療治療可以達(dá)到完全細(xì)胞遺傳學(xué)緩解。圖 11: 骨髓增生異常綜合征 46,XY,del(20q)6. 淋巴瘤的染色體異常淋巴瘤常涉及t(14;18)(q32;q21)、 t(8;14) 、 t(11;14) 、t(11;18) 等染色體易位，涉及與IgH 基因相關(guān)的易位。7. 多發(fā)性骨髓瘤的染色體異常13q-/-13 和 14q+ 是多發(fā)性骨髓瘤最常見(jiàn)的異常，結(jié)構(gòu)上常發(fā)生下列易位：t(11;14)(q13;q32)、t(4;14)(p16;q32)、t(14;16)(q32;q23)、 t(8;14) 、t(6;14)(p25;q32)。法國(guó)

14、 MM 協(xié)作組報(bào)道，無(wú)IgH 易位者， del （13q ）發(fā)生率低，預(yù)后較好；而在t(4;14) 、t(14;16) 異常的患者， del （13q ）發(fā)生率高，且2微球蛋白增高，預(yù)后較差?！緲?biāo)本送檢方法和注意事項(xiàng)】l 送檢時(shí)間：周一至周五下午 4： 00 前接受標(biāo)本。本院提供含抗凝劑和細(xì)胞培養(yǎng)液的無(wú)菌標(biāo)本瓶。l 標(biāo)本要求：（1 ）血液病均送骨髓血（除慢淋可送靜脈血）；（ 2 ）先天性疾病可以送靜脈血。肝素抗凝。（ 3 ）淋巴瘤應(yīng)送活檢的淋巴結(jié)組織塊。（ 4 ）標(biāo)本量的要求：正常白細(xì)胞數(shù)的，送3-5ml 骨髓和或靜脈血。白細(xì)胞數(shù) 50.0X109/L 時(shí)，送 2-3ml 骨髓和 /或靜脈血。按無(wú)