潰瘍性結(jié)腸炎模型管理論文

1、潰瘍性結(jié)腸炎模型管理論文 【摘要】目的考察口服硫酸亞鐵（FeSO4）對三硝基苯磺酸（TNBS）誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎（UC）模型大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響。方法采用TNBS乙醇溶液復(fù)制UC大鼠模型，雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對照組、模型對照組、FeSO4對照組（100mgkg-1d-1）和FeSO4低劑量組（50mgkg-1d-1）、中劑量組（100mgkg-1d-1）和高劑量組（300mgkg-1d-1），給藥2周后分別觀察大鼠的一般狀態(tài)、組織病理學(xué)變化、組織及血清超氧化物歧化酶（SOD）與丙二醛（MDA）水平。結(jié)果FeSO4中、高劑量組大鼠體質(zhì)量減輕，腹瀉動(dòng)物數(shù)增加，

2、結(jié)腸組織損傷加重，血清與結(jié)腸組織SOD活性降低、MDA水平升高（P 【關(guān)鍵詞】硫酸亞鐵;潰瘍性結(jié)腸炎;三硝基苯磺酸;氧化應(yīng)激;大鼠 潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerativecolitis，UC）是一種病因不明的直腸和結(jié)腸慢性非特異性炎癥，臨床主要表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉及黏液膿血便，重癥或病情持續(xù)活動(dòng)的患者可出現(xiàn)缺鐵性貧血。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，給予UC患者口服鐵劑不能很好地被耐受，甚至?xí)又匚改c道癥狀或促進(jìn)疾病活動(dòng)1。硫酸亞鐵（ferroussulfate，F(xiàn)eSO4）是臨床最為常用的鐵劑之一，同時(shí)也是一種強(qiáng)氧化劑，可能會(huì)因產(chǎn)生自由基（oxygen-derivedfreeradicals，OFR）而加重

3、組織損傷2。本實(shí)驗(yàn)利用三硝基苯磺酸（2，4，6-trinitrobenzenesulfonicacid，TN-BS）復(fù)制UC模型，觀察FeSO4對UC模型大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響，為臨床治療提供依據(jù)。 1材料和方法 1.1藥物和試劑 TNBS購于Sigma公司，5%（W/V）水溶液，批號為P2297;FeSO4，上海黃浦制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號為050606，輕輕把FeSO4片研碎，稱取一定量的粉末，加入蒸餾水配成100mgml-1的混懸液備用;丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、考馬斯亮蘭蛋白檢測試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號為20060323。 1.2動(dòng)物 雄性SD大鼠

4、60只，體質(zhì)量200220g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，普通級。 1.3儀器 756MC紫外分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司），TGL-16H高速離心機(jī)（珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司），可控式硅恒溫水浴鍋（上海錦屏儀器儀表有限公司），QL-901漩渦混合器（江蘇海門麒麟醫(yī)用儀表廠），電子分析天平（上海天平儀器廠），DIAX-900內(nèi)切式組織勻漿機(jī)（德國Heidolph公司）。 1.4大鼠UC模型制備3 健康大鼠60只，隨機(jī)分為6組。留2組作正常對照組與FeSO4對照組，余4組均制備模型，禁食不禁水24h后，腹腔注射3%戊巴比妥鈉（1mlkg-1）使大鼠輕微麻醉后，將直徑2mm的乳膠管經(jīng)肛

5、門輕輕插入大鼠體內(nèi)大約8cm處，將TNBS（125mgkg-1）的50%乙醇溶液緩緩注入到大鼠腸腔內(nèi)，提起大鼠尾部，倒置30s，使造模劑充分滲入大鼠腸腔。 1.5分組及給藥 將正常大鼠隨機(jī)分為正常對照組與FeSO4對照組，每組10只;將造模大鼠隨機(jī)分為模型對照組，F(xiàn)e-SO4給藥高、中、低劑量組，每組10只。FeSO4對照組大鼠，按照100mgkg-1d-1灌胃FeSO4混懸液;Fe-SO4高、中、低劑量組大鼠，分別按照300mgkg-1d-1、100mgkg-1d-1、50mgkg-1d-1灌胃FeSO4混懸液;正常對照組及模型對照組大鼠每天灌胃同體積生理鹽水，各組大鼠均在造模后6h開始給藥

6、，連續(xù)給藥2周。 1.6癥狀觀察 每天對各組大鼠進(jìn)行稱重，觀察體質(zhì)量變化并記錄;觀察大鼠糞便形狀，記錄大鼠發(fā)生腹瀉、血便的數(shù)量。 1.7結(jié)腸黏膜組織損傷評分 各組大鼠給藥2周后，3%戊巴比妥鈉過量麻醉，腹主動(dòng)脈取血2ml，離心后置-80冰箱保存?zhèn)溆?。將肛門以上10cm腸段取出，沿腸系膜縱行切開，用冰生理鹽水沖洗，并稱量。將黏膜向上展開，觀察黏膜損傷并按照Wallace和Keenan1990年的評分標(biāo)準(zhǔn)4進(jìn)行評分:0分為無炎癥和潰瘍;1分為局部充血但無潰瘍;2分為有潰瘍但無充血;3分為有1處潰瘍及炎癥;4分為有2處或2處以上潰瘍及炎癥;5分為潰瘍延伸超過2cm。同時(shí)取少量炎癥腸組織，迅速放置液氮

7、罐中備用。 1.8病理組織切片觀察 取肛門以上8cm腸段卷起，置10%中性甲醛液中固定，石蠟包埋，行4m厚連續(xù)切片，HE染色觀察組織學(xué)變化。 1.9生化指標(biāo)測定 血清及結(jié)腸組織MDA、SOD均按照檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。 1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量指標(biāo)以x-s表示，多組間比較行方差分析，各組間兩兩比較行LSD檢驗(yàn)，采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 2結(jié)果 2.1一般狀態(tài)及大便性狀的變化 見表1。正常組與FeSO4對照組大鼠活動(dòng)如常，反應(yīng)機(jī)警，毛發(fā)有光澤，飲食正常，體質(zhì)量增長較多，無腹瀉及便血;制模大鼠精神萎靡，毛發(fā)無光澤，飲食減少，均出現(xiàn)不同程度的腹瀉、便血。正常對照組與FeSO4對照組

8、大鼠體質(zhì)量增加、腹瀉及便血無顯著性差異;與正常對照組比較，模型對照組大鼠體質(zhì)量增加明顯減少（P 2.2結(jié)腸損傷評分及生化指標(biāo)改變 見表2。觀察大鼠結(jié)腸外觀及黏膜表面發(fā)現(xiàn)，正常對照組與FeSO4對照組大鼠結(jié)腸黏膜無明顯充血水腫，未見糜爛及潰瘍灶;模型對照組大鼠的結(jié)腸多數(shù)與相鄰臟器有輕度的粘連，結(jié)腸充血水腫，在距肛門8cm的腸段有較大的潰瘍病灶，病灶處結(jié)腸壁增厚，腸黏膜表面發(fā)生潰瘍糜爛壞死，與正常對照組大鼠相比，結(jié)腸明顯變短，結(jié)腸質(zhì)量增加;FeSO4各劑量組大鼠結(jié)腸水腫、糜爛等炎性癥狀明顯加重，潰瘍面積增大。模型組結(jié)腸病理損傷評分、結(jié)腸組織和血清MDA水平均高于正常對照組（P0.05）。表2各組大

9、鼠結(jié)腸損傷以及生化指標(biāo)的影響（略） 2.3結(jié)腸組織病理學(xué)變化 見圖1。正常大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)清晰，黏膜完整，腸腺豐富，排列緊密（圖1A）;TNBS造模后，大鼠結(jié)腸組織黏膜壞死脫落，潰瘍形成，大量中性粒細(xì)胞浸潤，腺體消失（圖1B）;FeSO4對照組大鼠結(jié)腸組織粘膜結(jié)構(gòu)完整，未見潰瘍形成（圖1C）;FeSO4低、中、高劑量組大鼠結(jié)腸組織腸黏膜上皮脫落缺損加重、潰瘍區(qū)域明顯增大，黏膜周圍上皮增生修復(fù)減慢，炎細(xì)胞增加（圖1DF）。 3討論 TNBS是一種半抗原，其誘導(dǎo)產(chǎn)生的大鼠模型除發(fā)生腹瀉、便血、體質(zhì)量減輕等臨床癥狀外，還可以誘發(fā)大鼠腸道炎癥，腸黏膜發(fā)生潰瘍、水腫、糜爛、大量炎性細(xì)胞浸潤等組織病理學(xué)改

10、變，類似于人類的UC，由于制備簡單省時(shí)而被廣泛應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)，氧自由基在UC的發(fā)病中起重要作用，氧自由基對自身組織產(chǎn)生攻擊作用，參與并通過脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)生炎癥介質(zhì)（白三烯、前列腺素等）活化炎癥反應(yīng)5。MDA是氧自由基觸發(fā)細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，其含量反應(yīng)了組織過氧化損傷程度，它能使腸粘膜組織損害進(jìn)一步加重。MDA水平的高低又間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。SOD是重要的過氧化物分解酶，能有效清除氧自由基從而抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并能穩(wěn)定細(xì)胞膜，SOD水平的高低間接反應(yīng)了機(jī)體抗氧化能力。Aghdassi等6報(bào)道，給予UC模型大鼠腹腔注射右旋糖苷鐵，可以加重其結(jié)腸損

11、傷，加劇其粘膜氧化應(yīng)激狀態(tài)。 本研究中，F(xiàn)eSO4中、高劑量組給藥均可以惡化TN-BS造模導(dǎo)致大鼠的腹瀉、體質(zhì)量減輕等癥狀，加重UC模型大鼠結(jié)腸的組織學(xué)損傷，降低結(jié)腸組織及血清SOD的活力，升高結(jié)腸組織及血清MDA水平，對UC模型大鼠的氧化應(yīng)激狀態(tài)表現(xiàn)出明顯的加劇作用;但在給予正常大鼠同等劑量FeSO4時(shí)未見上述情況發(fā)生。 綜上所述，UC大鼠機(jī)體抗氧化能力減弱，處于氧化應(yīng)激狀態(tài);當(dāng)給予口服一定劑量FeSO4時(shí)，可能通過Fe2+作用產(chǎn)生大量氧自由基，導(dǎo)致機(jī)體的氧化應(yīng)激進(jìn)一步惡化，從而加劇機(jī)體的氧化損傷。因此，對于UC合并貧血補(bǔ)鐵治療時(shí)，應(yīng)選擇正確的補(bǔ)鐵方式（如非離子鐵），合理的營養(yǎng)干預(yù)，提高機(jī)體

12、抗氧化能力，對于預(yù)防口服補(bǔ)鐵引起的氧化應(yīng)激，減輕氧化損傷，減少并發(fā)癥的發(fā)生有重要意義。 【參考文獻(xiàn)】 1OldenburgB，KoningsbergerJC，VanBergeHenegouwenGP，etal.IronandinflammatoryboweldiseaseJ.AlimentPharmacolTher，2001，15（4）:429-438. 2AustSD，MorehouseLA，ThomasCE.RoleofmetalsinoxygenradicalreactionsJ.JFreeRadicBiolMed，1985，1（1）:3-25. 3HibiT，OgataH，Sakura

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