高效液相色譜法測定阿莫西林顆粒中的高分子雜質

1、高效液相色譜法測定阿莫西林顆粒中的高分子雜質摘 要：目的：采用高效液相色譜法去測定阿莫 西林顆粒中高分子雜質的方法。方法：在測定的過程 中采用的是高效液相色譜的方法。色譜柱是當前比較 常見的凝膠柱，流動相 A 是濃度為 0.1mol/L，PH 值 為 7.0 的磷酸鹽緩沖液。流動相 B 為水，流動相的流 速為 0.6-0.9ml/min ，在測定中檢測的波長為 254nm。 結果：阿莫西林顆粒中的雜質含量在 0.1%以內。結論： 高效液相色譜法在測定阿莫西林中雜質含量使具有靈 活性高，準確性強和操作簡便等多項優(yōu)勢，這種方法 也值得大力的推廣和應用。關鍵詞：高效液相色譜法；阿莫西林顆粒；高分 子

2、雜質阿莫西林是一種半合成廣譜青霉素，這種藥物本 身的酸性非常強，同時抗菌效果非常好，在臨床上有 著非常好的應用效果，所以也得到了廣泛應用，和其 他類型的抗生素相同，在阿莫西林應用的過程中，過 敏反應是非常關鍵的一個問題，在研究中發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)過 敏反應是阿莫西林制劑當中含有非常多的雜質，所以 要想減少過敏反應的影響，就一定要對產(chǎn)品當中的高 分子雜質進行有效的控制，本文主要采用高效液相色 譜法對雜質進行測定。1 儀器與試藥儀器： WatersHlLC 儀（美國 Waters）， 1525泵， 2487UV 檢測器，色譜工作站（ WatersBreeze）。試藥：阿莫西林對照品（中國藥品生物制品檢定 所

3、，含量為86.2010）;水為重蒸餾水；阿莫西林顆粒 （商品名為再林，批號為 031202、031203、031204， 海南先聲藥業(yè)有限公司） ；藍色葡聚糖 2000（Pharmacia 公司）：其他試劑均為分析純。2 方法與結果2.1 色譜條件色譜柱：SephadexG-1C凝膠柱（不銹鋼色譜柱， 300mmx10mm）,內填 SephadexG-10凝膠，安瑪西亞 生物技術（上海）有限公司提供。流動相：以 pH 值 為7.0的0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液（取 21.85g, 二 水磷酸氫二鈉與6.08g二水磷酸二氫鈉溶于水中制成 1000mL，用氫氧化鈉或磷酸調溶液的 pH值至（7.0

4、 0.1）為流動相A;以重蒸餾水為流動相B。在下述 條件下進行測定：檢測波長為254nm;流速為 0.6-0.9mL/min ;進樣量為 20 卩 L。2.2 系統(tǒng)適應性試驗在試驗的過程中，研究人員采用藍色葡聚糖 2000ml 的溶液對色譜柱的理論塔板數(shù)和拖尾因子進 行測定，藍色葡聚糖的濃度為1mg/ml,在試驗的過程 中將流動相 A 當做這一步驟采用的流動相。 將流動相 的流速控在0.6-0.9ml/min，檢測的波長一定要控制在 254nm。理論上的塔板數(shù)是1695,拖尾因子能夠為0.86. 試驗當中我們精確的稱取適量的林標準品兩份，將二 者分別放在容積為 50ml 的容量瓶當中，加入適量

5、的重 蒸餾水，對其進行溶解和稀釋，一直到標準的刻度。 兩份對照品按照標準的方法將流動相 B 當成是試驗中 的流動相，將一份樣品進行三次的連續(xù)進樣，峰面積 相對的偏差為 0.38%，而將二者分別進樣一針，兩份 峰面積的相對偏差達到了 0.26%。2.3 溶液制備對照品溶液制備：精確稱取 20mg 的阿莫西林對 照品，將其放置在容積為 50ml 的容量瓶當中， 采用流 動相 B 對其進行溶解和稀釋到容量瓶刻度的位置，將 其當做是對照品溶液。供試品溶液制備：取本品 4 袋，將其按照試驗的 要求研細，同時還要精確的稱取適量的細粉，將其放 置在容積為 50ml 的容量瓶當中，加入 30ml 的流動相 A

6、，采用超聲溶解的方式，將其稀釋到刻度的位置，此外還要以適當?shù)牧Χ葘⑵鋼u勻，用濾膜對其進行濾 膜處理，將其當做供試品溶液。2.4 測定方法精確吸取供試品溶液20 口 I,將其注入到色譜儀當 中，將流動相 A 當成流動相對其進行測定，對色譜圖 進行記錄，此外還要量取20 口 I的對照品溶液，將其 注入到色譜儀當中， 將流動相 B 當做流動相進行測定， 同時還要對色譜圖進行全面的記錄。其暴露的時間要 在藍色葡聚糖 2000和阿莫西林主峰雜質的含量之間， 這一區(qū)間內都能將其計為高分子的雜質，用外標法的 方式五對供試品當中的阿莫西林高分子含量進行計 算。2.5 阿莫西林顆粒中高分子雜質的測定 使用上述色

7、譜條件，對 3 批阿莫西林顆粒的高分 子雜質進行了全面的測定，在測定的過程中采用阿莫 西林當做對照，使用主成分對照的方式去評價當中的 相關物質的含量，供試品當中雜質的含量都不超過 0.2%，結果如表 1所示。藍色葡聚糖 2000和樣品的 色譜圖如圖 1 所示：表 1 樣品測定結果A對照品溶液B藍色葡聚糖2000 C樣品圖 1 HPLC 圖3 討論在試驗的樣品當中加入了質量分數(shù)為 10%的碳酸鈉溶液，所以阿莫西林比較容易出現(xiàn)聚合的現(xiàn)象，在 采取自然的方式放置了 3 格小時之后，對其進行了在 一次的測定，發(fā)現(xiàn)高分子雜質的含量增加了接近一倍。 因此，樣品完全溶解之后應該采取立即進樣的方式， 同時在每

8、次完全溶解之后，樣品只能進一針，在試驗 的過程中一定要對碳酸鈉溶液的加入量進行嚴格的控 制，這樣就可以使得超聲的時間有所延長，溶解也更 為充分。在對照品溶液進樣的過程中，應該將水當成流動 相，進樣品溶液的過程中應該將磷酸鹽緩沖液當成流 動相，這樣也就可以充分的保證對照品主峰的保留時 間和樣品的高分子雜質保留的時間具有高度的一致 性。到目前為止，阿莫西林及青霉素類抗生素的高分 子雜質尚無標準品。以 HPLC 分析相關物質，在沒有 雜質對照品的情況下，中國藥典 采用主成分對照法 評價相關物質的含量，故在參照相關文獻的基礎上， 木研究采用自身對照法進行了測定，結果表明本法簡 便、易行，能有效地檢測到

9、阿莫西林顆粒中的雜質含隨著免疫學和分子生物學技術的迅速發(fā)展，目前 對阿莫西林過敏機制有了較明確的認識。阿莫西林木 身沒有抗原性，不直接引發(fā)過敏反應，引起過敏反應 的是制劑中高分子聚合物雜質。對于口服阿莫西林， 原料藥中高分子雜質 0.1%、制劑中高分子雜質 0.2% 時，一般不會產(chǎn)生青霉素過敏反應。再采用國際上最 優(yōu)質的阿莫西林原料（西班牙 Biochemie 公司）和先 進的生產(chǎn)工藝，成功地將成品中的雜質控制在 0.1% 以下，從而確保了該制劑的療效和安全性。參考文獻1 馬萍，程玉寶，王德剛，鐘雅妮，熊淵 .阿莫西 林顆粒中特定雜質的研究及控制J.今日藥學，2014 （9）.2 李緒倫，任學毅，李霞，李寧 .阿莫西林膠囊聚 合物雜質測定中的異常情況研究