自身抗體風(fēng)濕病中的應(yīng)用

1、自身抗體風(fēng)濕病中的應(yīng)用狼瘡細(xì)胞（狼瘡細(xì)胞（19481948，Hargrave)Hargrave)一、概述v自身抗體的定義：自身抗體的定義： 以自身組織成分為靶抗原而出現(xiàn)的相應(yīng)以自身組織成分為靶抗原而出現(xiàn)的相應(yīng)抗體抗體風(fēng)濕免疫病自身抗體v抗核抗體譜v抗磷脂抗體v類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗體v肌炎抗體v血管炎抗體v自身免疫性肝病抗體自身抗體在自身免疫病中的意義自身抗體在自身免疫病中的意義 1、是自身免疫病的標(biāo)記、是自身免疫病的標(biāo)記 2、有助于彌漫性結(jié)締組織?。ā⒂兄趶浡越Y(jié)締組織?。–TD）的診的診 斷和鑒別診斷斷和鑒別診斷 3、判斷疾病的活動(dòng)性判斷疾病的活動(dòng)性 4、預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后二、自身抗體

2、的檢測(cè)方法 1、間接免疫熒光法（IFT） 2 2、ELISAELISA 3 3、免疫印跡法、免疫印跡法 4 4、放射免疫法、放射免疫法 5 5、免疫雙擴(kuò)散、免疫雙擴(kuò)散抗核抗體（核仁型抗核抗體（核仁型, Mi-2, Mi-2、PM-SCLPM-SCL、RNA Polymerase IRNA Polymerase I）抗核抗體（核膜型抗核抗體（核膜型, dsDNA, dsDNA）抗核抗體（均質(zhì)型抗核抗體（均質(zhì)型, Histone-DNA, Histone-DNA）三、常見(jiàn)的自身免疫性疾病的抗體ANAANA譜及其臨床意義譜及其臨床意義v定義：是一種對(duì)細(xì)胞內(nèi)脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA),

3、蛋白或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物的自身抗體，因此ANA應(yīng)稱(chēng)為抗核抗體譜。間接免疫熒光法（IFT）: HEp-2細(xì)胞 靈長(zhǎng)類(lèi)肝 臟冰凍組織切片1、完整的抗原譜 (細(xì)胞核、細(xì)胞漿)2、ANA檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，具有最高的敏感性和特 異性 3、質(zhì)量控制容易 4、除ANA外，還可獲得一些對(duì)臨床醫(yī)生有用的 其他信息 (如ANCA)ANA 的檢測(cè)方法ANA 的檢測(cè)方法 ELISA:用高度純化的抗原來(lái)篩查ANAs 1、抗原譜比IIF窄 2、對(duì)所用的靶抗原具有很高的敏感性和特異性 3、操作簡(jiǎn)便、快速ANA分類(lèi)抗DNA抗體 抗DNA抗體： ssDNA / dsDNA 抗原：?jiǎn)捂淒NA，變性的DNA (嘌呤嘌呤和嘧啶堿基嘧啶

4、堿基) 雙鏈DNA，天然DNA (脫氧核糖核酸骨架) 相關(guān)疾?。?ssDNA dsDNA SLE 80.8% 30% Sjgrens綜合征 40.0% 硬皮病 44.0% 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 12.3% 健康獻(xiàn)血員 6.8% ANA分類(lèi)抗非組蛋白抗體 抗ENA抗體：此組抗體不含組蛋白，可以溶 于鹽水而被提取 檢測(cè)方法：免疫印跡法抗ENA抗體 抗Sm抗體 抗原: 與U1-、U2-、U4-、U5-或U6-nRNA相關(guān)的6種不同的蛋白分子(核心蛋白B、B、D、E、F、G) 相關(guān)疾病: SLE:5% - 30%抗ENA抗體 抗核糖體蛋白抗體 靶抗原:由3個(gè)蛋白質(zhì)分子組成的核糖體60S亞單位： P0、P1、

5、P2 (38、16、15 kD) 在碳末端具有 相同的免疫反應(yīng)性表位 相關(guān)疾病: SLE:5% - 15%抗ENA抗體抗SS-A抗體 靶抗原:與Y1、Y3、Y4或Y5型RNA相關(guān) 的 2種蛋白分子(52 kDa和60 kDa) 相關(guān)疾病: 干燥綜合征: 40% - 95% SLE: 34.7%抗ENA抗體抗SS-B抗體 靶抗原:與小分子RNA(U6-RNA、tRNA 前體)結(jié)合的磷蛋白磷蛋白(48 kDa) 相關(guān)疾病:干燥綜合征：40% - 95% SLE: 10% - 20% 抗ENA抗體抗U1-nRNP抗體 靶抗原:三種與U1-nRNA相關(guān)的蛋白(70KD、A和C蛋白) 相關(guān)疾病: MCT

6、D: 95% - 100% SLE: 15% - 40%抗ENA抗體抗Scl-70抗體 靶抗原: DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I(100 kDa) 相關(guān)疾病:硬皮病: 79.7% (25% - 75%)抗ENA抗體 抗J0-1抗體 靶抗原:組氨酰-tRNA合成酶(50 kDa)，細(xì)胞漿磷蛋白 相關(guān)疾病: 多肌炎/皮肌炎: 25% - 35% 伴有肺間質(zhì)纖維化的多肌炎: 70%ANA分類(lèi)抗非組蛋白抗體2、抗著絲點(diǎn)抗體 靶抗原: 著絲點(diǎn)中的4種蛋白分子：A- (17 kDa)、 B- (80 kDa)、C- (140 B- (80 kDa)、C- (140 kDa)、 D-蛋白 (50 kDa) 主要的靶抗

7、原是著絲點(diǎn)蛋白B 相關(guān)疾病: 硬皮病: 18% 局限型 (CREST綜合征): 80% - 95% ANA分類(lèi)抗組蛋白抗體 抗原: 組蛋白H1, H2A, H2B, H3, H4 (主要的靶抗原為H1和H2B) 相關(guān)疾病: 藥物誘導(dǎo)性 LE: 100% （標(biāo)志性抗體） SLE: 40% - 80% 在其他風(fēng)濕病中很少見(jiàn)ANA分類(lèi)抗核仁抗體 靶抗原:核仁內(nèi)的RNA多聚酶、原纖維 和To/Th抗原 相關(guān)疾?。?SSc 4%SLE患者特異性自身抗體 靶抗原 陽(yáng)性率 (%) ssDNA 70-95dsDNA 30-90組蛋白 40-80U1-nRNP 15-40Sm 5-30SS-A 20-60SS-

8、B 10-20核糖體P蛋白 5-15增殖性細(xì)胞核抗原I (PCNA) 3心磷脂，2-糖蛋白1 20-40Ku 5-10抗核小體抗體 90多肌炎和皮肌炎抗體譜 靶抗原 陽(yáng)性率(%)ssDNA40-50Jo-125-35PM-Scl (重疊綜合征) 8Mi-2 5Ku (與硬皮病的重疊綜合征) 1-7PL-7、PL-12、OJ、EJ、KJ 2-3原發(fā)性干燥綜合征抗體譜 靶抗原 陽(yáng)性率(%)SS-A 40-95SS-B 40-95ssDNA 40-95進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥抗體譜 靶抗原 陽(yáng)性率 (%)著絲點(diǎn) 80-95Scl-70 25-75ssDNA 30-60原纖維蛋白 5-10RNA 多聚酶 4

9、PM-Scl (重疊綜合征) 3NOR-90 (核仁形成區(qū)) 少見(jiàn)Ku (與多肌炎的重疊綜合征) 1-7可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的感染、藥物的感染、藥物v瘧疾v血吸蟲(chóng)v結(jié)核v麻風(fēng)v沙門(mén)氏菌v克雷伯菌vEB病毒vHIVv肯定的藥物肼苯噠嗪普魯卡因酰胺異煙肼v可能的藥物(近80種）米諾環(huán)素SASPEtanercept, Infliximabv可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的肝病的肝病慢性活動(dòng)性肝炎原發(fā)性膽汁性肝硬化自身免疫肝炎自身免疫膽管炎v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的肺病的肺病特發(fā)性肺纖維化石棉導(dǎo)致的纖維化原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的腫瘤的腫瘤白血病黑色素瘤實(shí)體瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、

10、腎癌）淋巴瘤v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的血液病的血液病特發(fā)性血小板減少性紫癜自身免疫性溶血性貧血v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的內(nèi)分泌的內(nèi)分泌病病1型糖尿病Grave病Hashimoto甲狀腺炎R(shí)ARA自身抗體譜及臨床意義自身抗體譜及臨床意義 RF 60RA中出現(xiàn)，量與中出現(xiàn)，量與RA活動(dòng)性及活動(dòng)性及 嚴(yán)重性呈正相關(guān)。亦在其它嚴(yán)重性呈正相關(guān)。亦在其它CTD出現(xiàn)出現(xiàn) 抗抗CCP 在在50RA中出現(xiàn)中出現(xiàn)（聚角蛋白微絲聚角蛋白微絲 蛋白）蛋白）特異性較高特異性較高AKA（抗角蛋白抗體）抗角蛋白抗體） 在在40RA陽(yáng)性陽(yáng)性APF（抗核周因子）抗核周因子）在在52RA陽(yáng)性陽(yáng)性抗抗RA33RA陽(yáng)性率為陽(yáng)性率

11、為35抗抗Sa在部分在部分RA陽(yáng)性陽(yáng)性類(lèi)風(fēng)濕因子（類(lèi)風(fēng)濕因子（RF)RF)v抗原：變性的IgG Fc段v意義RA陽(yáng)性率70%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值24%。滴度與疾病活動(dòng)平行其他風(fēng)濕病可陽(yáng)性感染、非感染疾病、正常人可陽(yáng)性非風(fēng)濕病中的RF抗核周因子抗核周因子-(-(APF)靶抗原位于人頰粘膜細(xì)胞的核周顆粒中靶抗原位于人頰粘膜細(xì)胞的核周顆粒中間接免疫熒光法檢測(cè)間接免疫熒光法檢測(cè)對(duì)對(duì)RARA診斷的特異性高達(dá)診斷的特異性高達(dá)90%90%以上以上APFAPF陽(yáng)性與病情相關(guān)，往往提示預(yù)后欠佳（尤陽(yáng)性與病情相關(guān)，往往提示預(yù)后欠佳（尤其對(duì)其對(duì)RFRF陰性的患者）陰性的患者）抗角蛋白抗體抗角蛋白抗體- -（AKAAKA）v

12、取取6 6周齡雄性周齡雄性WistarWistar大鼠的中大鼠的中1/31/3食道切片為食道切片為底物底物v間接免疫熒光法間接免疫熒光法v以典型的角質(zhì)層板層狀、線(xiàn)狀沉積的熒光為以典型的角質(zhì)層板層狀、線(xiàn)狀沉積的熒光為陽(yáng)性陽(yáng)性v對(duì)對(duì)RARA診斷的敏感性診斷的敏感性44.13%44.13%、特異性、特異性89%89%v與與RARA的病情嚴(yán)重程度相關(guān)的病情嚴(yán)重程度相關(guān), ,提示預(yù)后不良提示預(yù)后不良抗抗 Sa Sa 抗抗 體體 v新鮮胎盤(pán)提取新鮮胎盤(pán)提取v免疫印跡法免疫印跡法v分子量為分子量為5050和和/ /或或55KD55KD部位出現(xiàn)條帶者為部位出現(xiàn)條帶者為陽(yáng)性陽(yáng)性v敏感性敏感性 36.7%36.7

13、%、 特異性特異性 91.6%91.6%vHLA-DR4HLA-DR4相關(guān)是慢性、嚴(yán)重相關(guān)是慢性、嚴(yán)重RARA的早期標(biāo)記的早期標(biāo)記vRARA的滑液中也有高濃度的抗的滑液中也有高濃度的抗SaSa抗檢出，抗檢出，提示在滑膜可能發(fā)生原位免疫反應(yīng)提示在滑膜可能發(fā)生原位免疫反應(yīng)抗抗RA33/36RA33/36抗體抗體 v從從HelaHela細(xì)胞或細(xì)胞或EhrilichEhrilich瘤細(xì)胞核中提取瘤細(xì)胞核中提取v免疫印跡法免疫印跡法v分子量分子量3333或或36KD36KD區(qū)帶出現(xiàn)陽(yáng)性者為陽(yáng)性區(qū)帶出現(xiàn)陽(yáng)性者為陽(yáng)性v敏感性敏感性 35.8%35.8%、特異性、特異性 99.6%99.6%抗環(huán)瓜氨酸多肽抗環(huán)

14、瓜氨酸多肽(CCP)(CCP)抗體抗體 v19981998年年 證實(shí)抗證實(shí)抗filaggrinfilaggrin相關(guān)抗體識(shí)別相關(guān)抗體識(shí)別的主要抗原決定簇成分是瓜氨酸的主要抗原決定簇成分是瓜氨酸v20002000年年 合成環(huán)瓜氨酸肽（合成環(huán)瓜氨酸肽（CCPCCP），并將），并將抗抗CCPCCP抗體用于抗體用于RARA檢測(cè)檢測(cè)vELISAELISA法檢測(cè)法檢測(cè)v對(duì)對(duì)RARA診斷高度敏感和特異診斷高度敏感和特異v陽(yáng)性者骨破壞較陰性者嚴(yán)重陽(yáng)性者骨破壞較陰性者嚴(yán)重v對(duì)對(duì)RARA的早期診斷和預(yù)后評(píng)估都很有意義的早期診斷和預(yù)后評(píng)估都很有意義抗肽酰基精氨酸脫亞氨酶肽?；彼崦搧啺泵? (PADI4)抗體vR

15、A抗PADI4抗體陽(yáng)性率為47%,v抗PADI4抗體對(duì)RA診斷的敏 感性為43%,特異性為92%。vRF陰性患者PADI4抗體陽(yáng)性 50%;AKA陰性的患者PADI4抗體陽(yáng)性43%;抗CCP抗體陰性的患者抗PADI4抗體陽(yáng)性60%。抗突變型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗體v136例RA患者抗MCV抗體敏感性和特異性分別為95.6%和80.8%。v抗MCV抗體與抗CCP抗體、AKA和RF的重疊陽(yáng)性率分別為91.9%、52.8%和76.5%。血管炎相關(guān)抗體血管炎相關(guān)抗體vcANCA 靶抗原：靶抗原：PR-3 (蛋白酶蛋白酶3vpANCA 靶抗原：靶抗原：MPO(髓過(guò)氧化酶髓過(guò)氧化酶) 彈性蛋白酶彈性

16、蛋白酶 乳鐵蛋白乳鐵蛋白 vWegener肉芽腫肉芽腫 其量指示病情活動(dòng)其量指示病情活動(dòng)v其它血管炎及炎性其它血管炎及炎性 腸病腸病抗絲氨酸蛋白酶（PR3)抗體針對(duì)蛋白酶3的cANCA的意義疾病頻率（%）Wegeners 肉芽腫90顯微鏡下多動(dòng)脈炎50結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎5-10變應(yīng)性肉芽腫性血管炎10過(guò)敏性血管炎R(shí)are光敏性紫癜RareIgA腎病Rare感染后腎小球腎炎R(shí)are系統(tǒng)性紅斑狼瘡Rare川崎病+對(duì)照抗髓過(guò)氧化物酶（MPO）抗體v抗原：髓過(guò)氧化物酶（MPO）v意義可出現(xiàn)于多種血管炎性疾病。也可見(jiàn)于SLE、藥物等針對(duì)MPO的pANCA的意義疾病疾病頻率（頻率（% %）顯微鏡下多動(dòng)脈炎50

17、-70特發(fā)性壞死性腎小球腎炎50-85變應(yīng)性肉芽腫性血管炎70-85Goodpasture綜合征10-30Wegener肉芽腫5-10結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎+多血管炎重疊+系統(tǒng)性紅斑狼瘡+肼苯噠嗪誘導(dǎo)的腎炎+川崎病+cANCA(胞漿型, 絲氨酸蛋白酶)pANCA(核周型）1、髓過(guò)氧化物酶2、彈力酶3、組織蛋白酶G4、乳鐵蛋白5、溶酶體6、細(xì)菌增透蛋白7、Azurocidin8、原發(fā)性膽汁性肝硬化抗體譜 靶抗原靶抗原 陽(yáng)性率陽(yáng)性率(%) AMA M2 85-95 AMA M4 40-60 AMA M9 35 Sp-100 (核點(diǎn)) 30 肌動(dòng)蛋白 10-20AMA M2 靶抗原靶抗原: :由由3 3種不

18、同的乙?；D(zhuǎn)移酶種不同的乙?；D(zhuǎn)移酶 組成的多酶復(fù)合物：組成的多酶復(fù)合物： - -丙酮酸脫氫酶丙酮酸脫氫酶(74 (74 kDa)kDa) -2- -2-酮酸脫氫酶酮酸脫氫酶 (50 (50 kDa)kDa) -2- -2-酮戊二酸脫氫酶酮戊二酸脫氫酶(50(50kDa)kDa) 與丙酮酸脫氫酶復(fù)合物相關(guān)與丙酮酸脫氫酶復(fù)合物相關(guān) 的蛋白的蛋白X(52 kDa)X(52 kDa) 相關(guān)疾病相關(guān)疾病: : PBC:PBC: 85% - 95% 85% - 95% 自身免疫性肝炎抗體譜 靶抗原 陽(yáng)性率(%)肝特異性蛋白(LSP) 50-100肝細(xì)胞膜抗原 (LMA) 35-100唾液酸糖蛋白受體 80-90肌動(dòng)蛋白 40-90ANA 30-40核膜 ?SLA/LP 15-30肝腎微粒體 (LKM-1) 7LC-1 ?抗磷脂抗體(APA)APA定義：