植物生理學(xué) NR活力測定——體內(nèi)法(活體法)

1、-作者xxxx-日期xxxx植物生理學(xué) NR活力測定體內(nèi)法(活體法)【精品文檔】XX大學(xué)實驗報告課程名稱： 植物生理學(xué)及實驗 實驗類型: 實驗項目名稱： 植物NR活力測定體內(nèi)法（活體法） 學(xué)生姓名： XXX 專業(yè)： XX 學(xué)號： 3XXXXXX 同組學(xué)生姓名： XXX 指導(dǎo)老師: XXX 實驗地點： XXXXXXXXX 實驗日期： 2XXX 年 X 月 XX 日一、實驗?zāi)康暮鸵螅?. 掌握體內(nèi)法測定植物組織中的硝酸還原酶原理和方法，明確誘導(dǎo)酶含義。二、實驗內(nèi)容和原理：植物細(xì)胞呼吸代謝NO2NO2NO3NO3NADH2 NAD測定原理：后加！先加！ NO2 + 磺胺 + 萘基乙烯二胺紅色化合物

2、540nm最大吸收峰測定OD三、主要儀器設(shè)備：小麥苗、50mL注射器、恒溫箱、燒杯、分光光度計、試管四、操作方法與實驗步驟：抽氣1min放入50mL注射器中加酶促反應(yīng)液10ml取各組苗地上部0.5g,切成合適長度 加磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml取出后將反應(yīng)液過濾入燒杯中取4ml反應(yīng)過的液體置恒溫箱35 20min 室溫放置5min測540nm OD作空白：測540nm OD室溫放置5min4ml酶促反應(yīng)液 +磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml五、實驗數(shù)據(jù)記錄和處理：OD值對照組處理組六、實驗結(jié)果與分析：NO 2標(biāo)準(zhǔn)曲線:拍照得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為 y = 0.0068x + 0.007

3、(R).處理組NO 2 (nmol) = (1.187 0.007) / 0.0068 = 173.53 (nmol)對照組NO 2 (nmol) = (0.181 0.007) / 0.0068 = 25.59 (nmol)NR活力（NO2生成nmol/（鮮重g.h）= NO2（nmol）*（10/4）/（1/3.處理組NR活力 = * 2.5 * 3 / 0.5 = 2602.95 nmol/gh對照組NR活力 = * 2.5 * 3 / 0.5 = 383.85 nmol/gh取材質(zhì)量（g）OD540NO 2(nmol)NR活力（nmol/gh）處理組對照組1、比較KNO3誘導(dǎo)和加NH4

4、Cl的NR活力大小，誘導(dǎo)時如用NaNO3 替代KNO3結(jié)果會如何，為什么？如不進(jìn)行光照，結(jié)果會怎么樣，為什么？如用NaNO3 替代KNO3，那么光合呼吸作用減弱，酶的活力降低，從而影響硝酸根轉(zhuǎn)化為亞硝酸根，實驗中可能兩組紫紅色的顏色差別很小，使測得的還原酶活力偏低。原因：K+離子可以調(diào)節(jié)滲透，氣孔開閉，促進(jìn)氧化磷酸化，另外鉀火花呼吸作用和光合作用的酶的活性，是40多種酶的輔助因子，是形成細(xì)胞膨脹和維持細(xì)胞內(nèi)電中性的主要陽離子。而Na離子雖然可以部分地代替鉀的作用，但不能完全替代。如不進(jìn)行光照，結(jié)果可能是兩則的實驗結(jié)果相差不大，而且所測定的還原酶的活力都很低。原因：之前的呼吸作用已經(jīng)消耗大量的糖類，而在沒有光合作用的條件下，苗儲存的糖類很少，所以呼吸作用會大大減弱，使酶活力比預(yù)期結(jié)果低，兩組亞硝酸鹽含量相差不多。2、亞硝酸是過多施用氮肥后蔬菜中積累的致癌物質(zhì)，請根據(jù)本實驗寫出簡易測定蔬菜亞硝酸含量的方法。取待測蔬菜的組織，用酶促反應(yīng)液浸提，取適量的反應(yīng)液加磺胺加萘胺，靜置后用分光光度計測定，然后再標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出相應(yīng)的亞硝酸的含量。七、討論、心得：為了一時的簡便而直接用手撕，因為很多手上的雜質(zhì)會帶入到葉片上，從而給實驗帶來