藥物色譜分析期末考試重點及內(nèi)容 藥大

1、考試題型：名解、填空、選擇、問答、計算藥物色譜分析復(fù)習(xí)重點第三章 氣相色譜法1. 了解氣相色譜法的特點及分類；特點：1、效能高 2、靈敏度高 3、選擇性高 4、分析速度快 5、應(yīng)用范圍廣，測定高溫下可氣化的物質(zhì) 6、樣品用量少分類：1、按固定相分：氣-固、氣-液 2、按柱子分：填充柱、毛細(xì)管柱 3、按分離機制分：吸附、分配2. 氣相色譜的固定液（1）對固定液的要求1、熱穩(wěn)定性好，在柱溫下不熱解，2、化學(xué)惰性，不應(yīng)與樣品組分、擔(dān)體、柱材料及載氣發(fā)生不可逆反應(yīng)。3、蒸氣壓低，在操作溫度下一般應(yīng)低于0.1mmHg，否則固定液易流失，影響柱使用壽命、保留時間及檢測器響應(yīng)。4、對樣品組分有一定的溶解度，

2、否則樣品組分不被保留而得不到分離。5、對樣品組分具有選擇性，不同的組分有不同的分配系數(shù)，以利分離。6、對擔(dān)體有濕潤性，以利于在擔(dān)體表面形成均勻液膜，以增加柱效。（2） 樣品組分與固定液之間的分子作用力的種類1、 定向力：由極性分子的永久偶極間的靜電作用形成的。如極性組分與強極性固定液PEG-20M等的作用力。2、 誘導(dǎo)力：在極性分子的永久偶極的電場作用下，鄰近的可極化的非極性分子可產(chǎn)生誘導(dǎo)偶極，因而兩分子間產(chǎn)生相互作用力，這種作用力通常較小。3、 色散力：非極性分子由于原子核和電子的運動，產(chǎn)生瞬間偶極，因而產(chǎn)生相互作用，這種力普遍存在，但非極性分子間的作用力僅此一種。此作用力更弱。4、 特殊作

3、用力：主要來源于組分與固定液形成絡(luò)合物。例如含有Ag+的固定液與烯烴可形成絡(luò)合物。（3） 固定液的極性與分離特性評價，主要掌握Rohrschneider常數(shù)，了解McReynolds常數(shù)組分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與固定液相似時，在固定相中的溶解度大，因而保留時間長；反之，溶解度小，保留時間短。Rohrschneider（羅胥耐得）提出了一種固定相極性的分類法：規(guī)定非極性固定液角鯊?fù)榈南鄬O性為0，強極性固定液,-氧二丙腈的極性為100，其它固定液的極性按下式計算： q為丁二烯和正丁烷在固定液上的相對保留值之比的對數(shù)，即：q 1、q 2、q x 分別為待測物在氧二丙腈、角鯊?fù)榧坝麥y固定液上的q按這一方法測

4、出的相對極性，從0至100分為五級，每20為一級，用“”表示。按上述方法不能反映出樣品組分與固定液之間的全部相互作用力，只是反映了色散力和誘導(dǎo)力。Mc Reynolds改進(jìn)了羅氏的方法，采用下列十種化合物作為檢測物： 麥?zhǔn)铣?shù)I的計算公式如下： Ip為某組分在待測固定液上的保留指數(shù)，Ia為同一組分在角鯊?fù)樯系谋Ａ糁笖?shù)， 一種固定液在規(guī)定的十種組分上測得的各個I值，體現(xiàn)了組分與固定液間的色散力、誘導(dǎo)力、定向力與氫鍵力。因而比較全面地反映了該固定液的分離特性。 結(jié)論：1、 當(dāng)固定液品種不同，但I(xiàn)值均幾乎相同時，它們的分離特性也幾乎相同，如SE-30，OV-1，OV-101，DC-410，SE-96

5、。2、 當(dāng)固定液之間的I值接近時，它們的分離特性也接近，如DC710與OV-17。3、 當(dāng)固定液間的I值差別大時，它們的分離特性也有很大差別。 （4） 固定液的分類，掌握幾種常見常見固定液如聚二甲基硅氧烷類、聚苯基甲基硅氧烷類、氰烷基聚硅氧烷類和聚乙二醇的特點及使用分析對象，特別是一些商品代碼所表示的對應(yīng)的固定液名稱。常用：1、 甲基硅酮（又稱甲基聚硅氧烷） 甲基硅酮SE-30，OV-1是最常用的固定液，極性很弱，與組分的相互作用力主要是色散力，對含氧化合物有一定的選擇性。對于烴類等非極性化合物基本上按沸點順序分離。2、 苯基甲基硅酮 按苯基含量的不同，有低苯基（含苯基25%），中苯基（含苯基

6、50%）及高苯基硅酮之分。OV-17屬中苯基硅酮。此類固定液適合于分離甾體化合物、生物堿、醇類、糖類等化合物。3、 氰烷基硅酮 XE-60、OV-225 這類固定液含有電負(fù)性的氰基，對極性組分有較強的定向力，對易極化組分可使之產(chǎn)生誘導(dǎo)偶極。適用于分離糖類、醇類、酚類、甾體化合物、脂肪酸等。4、 氟烷基硅酮QF-1含三氟丙基，對硝基化合物和酮類有顯著的選擇性保留。而對芳烴和醇類則否。對于酮-芳烴，酮-醇能很好地分離。5、 聚乙二醇 PEG20M、PEG6000、PEG400 這類固定液含有醚基及羥基，是氫鍵型固定液。在氫鍵的形成中，既是氫鍵的質(zhì)子接受體又是質(zhì)子給予體。它們能與羥基化合物、堿性含氮

7、化合物、酮類等形成氫鍵。組分在這類固定液上的保留主要取決于氫鍵力的大小。適合于分離醇類、醛類、脂肪酸類、酚類、生物堿、酯類等化合物。6、 聚酯 DEGA、DEGS等為線性脂肪族聚酯，酯基中的氧原子有未用電子對，有親核性，能與帶部分正電荷的氫形成氫鍵。另外，由于誘導(dǎo)效應(yīng)（酯基的），存在著活潑氫原子，所以有親電性，對烯烴、芳烴、雜環(huán)化合物有較大的作用力。適用于分離醇類、酚類、脂肪酸類、酯類、胺類等化合物。（5） 氣相色譜中如何選擇固定液1、 相似相溶：分離極性大的組分，則選用極性大的固定液。分離非極性的組分，則可選用非極性或弱極性固定液。無論采用非極性或極性固定液，一般沸點小的先出峰（對同系物而言

8、）2、 若樣品中的待測成分一個是極性組分，另一個是非極性組分，則采用極性固定液比非極性固定液有利。 3、 若樣品中的待測組分容易形成氫鍵，則采用氫鍵型固定液（如PEG-20M）較為有利。4、 混合固定液：混合固定液的保留值具有加和性。因此，在同一條件下分別測出被分離組分在單一固定液柱上的調(diào)整保留時間（tR）后，可用圖解法求出混合固定液的最佳配比。 （6） 擔(dān)體一、 擔(dān)體的作用是支持固定液，使成均勻薄膜，以利氣液平衡。有以下要求1、 顆粒均勻 2、比表面積大3、化學(xué)惰性4、熱穩(wěn)定性好5、機械強度好 藥物分析中常用擔(dān)體為硅藻土擔(dān)體。紅色擔(dān)體：天然硅藻土燒結(jié)而成，含氧化鐵而成紅色，結(jié)構(gòu)緊密，機械強度

9、好，表面有氫鍵及酸堿活性作用點。主要用于非極性固定液（樣品）。 白色擔(dān)體：硅藻土+助熔劑（Na2SO4）煅燒而成，其中氧化鐵變成無色的鐵硅酸鈉配合物。結(jié)構(gòu)疏松，機械強度較前者差，易碎而產(chǎn)生結(jié)粉，極性中心較紅色擔(dān)體少。2、 擔(dān)體的表面處理 ：酸洗、堿洗、釉化、硅烷化酸洗法：酸洗水洗烘干硅烷化目的：除去擔(dān)體表面的鐵等金屬氧化物雜質(zhì)。酸洗擔(dān)體主要用于分離酸和酯類化合物。3、 釉化目的：釉化可以堵塞擔(dān)體表面的微孔、改善表面性質(zhì)、屏蔽或惰化擔(dān)體表面的活性中心，增加機械強度，用于分離醇、和酸類極性強的物質(zhì)，甲酸和甲醇會不可逆吸附，非極性物質(zhì)柱效低。（7） 色譜柱的制備過程：固定液的涂布柱管預(yù)處理柱子填裝及

10、老化老化的目的：除去填料中殘余溶劑及固定液中帶來的低分子聚合物。（8） 填充柱操作條件的選擇載氣：GC中的載氣有氮氣、氦氣、氬氣、氫氣。FID檢測器時：普氮。ECD檢測器時：高純氮、氦氣。TCD檢測器時：氫氣及氦氣均可達(dá)到較高靈敏度。MSD檢測器時：氦氣。溫度:1、檢測器溫度至少比柱溫高30。以防柱中流出物在檢測器上凝結(jié)，污染檢測器。2、柱溫至少比固定液的最高使用溫度低30。以防固定液流失。3、柱溫降低，保留時間延長，容量因子增加，分離可得到改善。4、氣化室溫度一般與檢測器溫度相同，若待測物不穩(wěn)定，則氣化室溫度應(yīng)設(shè)低一點。 5、柱溫一般比樣品中各組分平均沸點稍微低一些。3、氣-液色譜柱氣相色譜

11、法（1）氣-液色譜柱氣相色譜法中對擔(dān)體的要求；（2）使用前擔(dān)體的表面處理的原因及方法，其中擔(dān)體表面處理時釉化的目的是什么？（3）了解填充柱的制備過程，掌握填充柱的老化的目的、方法及注意事項。（4）掌握填充柱氣相色譜條件的選擇，重點是載氣和溫度的選擇。4.氣-固色譜與氣-液色譜的特點比較5. 毛細(xì)管柱氣相色譜法（1）掌握毛細(xì)管氣相色譜儀的流程示意圖（P47圖3-6，會畫出主要流程和標(biāo)出主要部件）（1）毛細(xì)管柱的柱管使用聚酰亞胺涂層的原因及作用。（2）交聯(lián)毛細(xì)管柱的特點及常用交聯(lián)方法，毛細(xì)管氣相色譜柱交聯(lián)引發(fā)劑主要有哪些？（3）毛細(xì)管柱進(jìn)樣方式，掌握分流及吹尾氣目的。（4）分流比及測定方法；線性分

12、流與非線性分流及影響樣品失真的因素。（5）分流進(jìn)樣法的優(yōu)缺點。第四章 氣相色譜檢測器FID 火焰離子化檢測器 是以氫氣在空氣(或氧氣)中燃燒生成的火焰為能源, 因而得名。為通用型檢測器。原理：通常在發(fā)射極上加+150V300V的電壓,則在噴口附近形成一個電場。來自色譜柱的載氣與氫氣與氧氣混合后，自噴口流出，與空氣相遇，為點火極(槍)所引燃。當(dāng)樣品組分出現(xiàn)在載氣中時，為氫火焰之高溫所離子化，形成正離子和負(fù)離子(或電子)。在電場作用下，正離子移向收集極，從而產(chǎn)生微電流信號，經(jīng)微電流放大器放大，由記錄儀記錄下來。也可在極化極加負(fù)電壓，則收集極收集為負(fù)離子流。性能特點：對含碳有機物有很高靈敏度。線型范

13、圍寬，達(dá)107。檢測器耐用，噪聲小，基線穩(wěn)定性好。死體積小，響應(yīng)快。對溫度變化不敏感。ECD電子捕獲檢測器為選擇型高靈敏度檢測器，它對具有高電負(fù)性的組分具有高靈敏度。主要用于檢測含鹵素的有機物及含硝基的有機物。對于含氧、硫、氮、磷、金屬的有機物也有信號。原理：3H放射源的使用溫度在220以下，63Ni放射源的使用溫度350以下。放射源產(chǎn)生射線，使載氣解離，由陽極收集電子，形成穩(wěn)定的基流。當(dāng)電負(fù)性組分進(jìn)入檢測器，捕獲了電子，從而使基流下降，產(chǎn)生信號。要求：載氣純度要高，不能用普氮。載氣需經(jīng)脫氧處理，以提高靈敏度。TCD熱導(dǎo)檢測器原理：基于載氣和樣品的導(dǎo)熱系數(shù)的差異，并用惠斯登電橋檢測。特點：為濃

14、度型通用檢測器。不破壞樣品，可串聯(lián)其它檢測器。載氣的熱導(dǎo)系數(shù)與被測物的熱導(dǎo)系數(shù)相差越大，靈敏度越高。靈敏度H2HeN2,故常用H2及He作載氣。熱敏元件的電阻值越大，靈敏度越高。熱絲與池體的溫度差值越大，越利于熱傳導(dǎo)，故采用低的池體溫度為好，但要以樣品不被冷凝沾污池體為限。橋電流越大越靈敏，但不同的載氣和不同的熱敏元件有不同的最高允許橋流，操作時要嚴(yán)格遵照儀器說明書。一般H2作載氣時用120180mA，N2 用80 mA。第五章 氣相色譜相關(guān)技術(shù)1.程序升溫色譜法 (Programmed temperature gas chromatography) 是指在一個分析周期里，色譜柱溫按預(yù)定的加熱

15、速度，隨時間線性或非線性的增加，則混合物中所有組分將在其最佳柱溫下流出色譜柱。（1）特點：可使低沸點組分與高沸點組分同時得到檢測；峰形尖銳，提高檢測靈敏度 ；省時；較快的趕走柱中雜質(zhì)峰，便于下一次分析。（2）主要方式及適用對象方式：線性升溫、非線性升溫。線型恒溫加熱、恒溫線性加熱、恒溫線性恒溫加熱、多階程序升溫加熱。適用：在分離多個性質(zhì)相差較大的待測組分時，用程序升溫GC法來分析樣品。當(dāng)柱溫較低時，低沸點組分最早流出并能得到良好分離，隨著柱溫的逐步升高，高沸點組分逐個流出，并能和低沸點組分一樣也能得到良好的尖峰保留溫度：在程序升溫中，某一樣品組分的濃度極大值流出色譜柱時的柱溫，稱為該組分的保留

16、溫度，以TR 表示。 2.頂空氣相色譜法是對液體或固體中的揮發(fā)性成分進(jìn)行氣相色譜分析的一種間接測定法。特點：樣品處理簡單，取氣相部分進(jìn)行分析，大大減少了樣品基質(zhì)對于分析的干擾。頂空進(jìn)樣技術(shù)與氣相色譜定量分析相結(jié)合，能準(zhǔn)確進(jìn)行定量分析。通過優(yōu)化操作參數(shù)，提高靈敏度，可達(dá)到分析測試的要求。應(yīng)用范圍廣泛，適用于絕大多數(shù)揮發(fā)性氣體的分析。分類：靜態(tài)頂空氣相色譜：平衡頂空氣相色譜；動態(tài)頂空氣相色譜：吹掃捕集法（2） 靜態(tài)頂空分析的原理及影響靜態(tài)頂空氣相色譜分析的因素將液體或固體樣品置于一個恒溫密閉的樣品容器中，使其中的揮發(fā)性成分逸出，在達(dá)到氣液或氣固平衡后，采集蒸氣相進(jìn)行氣相色譜分析。其基本理論依據(jù)是在

17、一定條件下氣相和凝聚相（液相或固相）之間存在著分配平衡，因此氣相的組成能反映凝聚相的組成。通過測定樣品基質(zhì)上方的氣體成分來測定這些組分在原樣品中的含量。影響因素：樣品的性質(zhì)、分配常數(shù)和平衡溫度、平衡時間、樣品瓶、（3） 動態(tài)頂空分析的原理及動態(tài)頂空法操作條件選擇把液體或者固體樣品置于樣品管中，向樣品管中通入惰性氣體(N2)，將待測組分吹掃出來，并使其通過裝有吸附劑的捕集管，被吸附劑吸附，然后將吸附劑加熱，使被測組分脫附，再用載氣將脫附的樣品氣體帶入氣相色譜儀中進(jìn)行分析。條件選擇：樣品吹掃溫度、捕集器溫度、連接管路的溫度、吹掃流速、吹掃氣的類型。比較：靜態(tài)頂空：儀器較簡單，無需吸附裝置樣品基質(zhì)干

18、擾小揮發(fā)性樣品組分不會丟失可連續(xù)取樣分析靈敏度稍低對于較高沸點的組分較難分析動態(tài)頂空：可將揮發(fā)性組分全部萃取出來，并在捕集裝置濃縮后進(jìn)行分析靈敏度較高應(yīng)用更廣泛，可分析沸點較高的組分樣品基質(zhì)可能干擾分析吸附和解吸可能造成樣品組分的丟失第六章 GC在藥物分析中的應(yīng)用1. 如何判斷待測物是否可以直接進(jìn)行GC分析A、對于分子量小于500的藥物，分子結(jié)構(gòu)中不含具有活潑氫的OH，NH2，NH，COOH，SO3H，SH，NHR ，CONH2，CONH，SO2NH2，SO2NH等極性官能團(tuán),并且對熱穩(wěn)定，一般均可采用GC法進(jìn)行分析。B、對于分子量小于200的小分子化合物，若分子結(jié)構(gòu)中含有以下五種極性官能團(tuán)：

19、 OH，NH2， SH，NHR，CONH2 ，但分子結(jié)構(gòu)中總的極性官能團(tuán)數(shù)目不超過兩個，并且對熱穩(wěn)定，則一般均可采用GC法進(jìn)行分析。 C、分子量小于500的中等極性化合物往往可以直接進(jìn)行GC分析。如硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、尼索地平等地平類降壓藥、地西泮、硝西泮等西泮類安眠藥。2. 哪些化合物經(jīng)過衍生化后可以進(jìn)行GC分析含有羥基、羧基、氨基或酰胺基等極性基團(tuán)，糖類和氨基酸類化合物一般經(jīng)衍生化后可以進(jìn)行氣相色譜分析。目的：使難氣化的待測物變成一種新的具有一定揮發(fā)性的化合物，以適應(yīng)GC分離的要求。例如單糖的GC分析。降低待測物的極性，減小拖尾和吸附，改善其色譜性能。例如通過衍生化反應(yīng)來封閉羧基

20、等基團(tuán)，以消除待測物的拖尾現(xiàn)象。使待測物在特定檢測器上具備或提高檢測特性，以達(dá)到痕量分析的目的。例如引入氟原子，增加待測物的電子捕獲能力，提高電子捕獲檢測靈敏度等。如關(guān)附甲素的三氟乙?；?。改變樣品中被測組分或干擾組分的理化性質(zhì)，以改進(jìn)分離特性。在與其它儀器聯(lián)用技術(shù)中(如GC-MS)利用各類衍生化反應(yīng)以獲得更明確或特定的結(jié)構(gòu)信息。3. 當(dāng)待測物用GC法和HPLC法均可分析時應(yīng)如何選擇由于HPLC法的進(jìn)樣準(zhǔn)確度和精密度一般比GC法好，通常選擇準(zhǔn)確度和精密度較好的HPLC法。GC法則主要用于測定那些以沒有紫外吸收的或紫外吸收很弱的揮發(fā)油類成分為主成分或輔料的藥物制劑。在化學(xué)藥品、中成藥、中藥中間體和

21、中藥制品中的殘留溶劑的檢測方面一般采用GC法，因為GC法中的FID和ECD檢測器對殘留溶劑的檢測響應(yīng)（靈敏度）要優(yōu)于HPLC的檢測器。1、 高效液相色譜儀的組成：流動相及貯液罐、高壓輸液泵及梯度洗脫裝置、進(jìn)樣裝置、色譜柱、檢測器。 高效液相色譜儀組成 流動相及貯液罐：1貯液罐 1材料應(yīng)耐腐蝕2容積約0.52.0L3使用過程中應(yīng)密閉4吸濾頭 2流動相脫氣 1低壓脫氣法2吹氮脫氣法3超聲波脫氣法4真空脫氣法 高壓輸液泵及梯度洗脫裝置 進(jìn)樣裝置：注射器進(jìn)樣，六通閥進(jìn)樣，自動進(jìn)樣器2、 高效液相色譜法與其他色譜法優(yōu)缺點比較；氣相色譜法：只能分析揮發(fā)性物質(zhì)或高溫可氣化的物質(zhì)、不適合于分析熱不穩(wěn)定的物質(zhì)、

22、用毛細(xì)管柱色譜可得到很高的柱效、載氣不影響分配，一般靠改變固定相或色譜柱溫度來改變選擇性、流動相為氣體，無毒、樣品回收困難經(jīng)典液相色譜的比較：1高分離效能2快速，省時，省材料3靈敏度高，準(zhǔn)確度高氣象色譜比較：1幾乎可以分析各種物質(zhì)2實用與分析熱不穩(wěn)定物質(zhì)3色譜柱不如氣象色譜長，柱效不如氣象色譜的毛細(xì)管高4固定相不如氣相色譜柱種類繁多，主要靠改變流動相來改變選擇性5流動相位有機溶劑，有毒6樣品可定量回收，也可用于制備4、 液固吸附色譜法的保留規(guī)律和主要應(yīng)用；一 液固吸附色譜法 液固吸附色譜法的分離原理：色譜分離基于吸附效應(yīng)的色譜法稱為吸附色譜，以固體吸附劑為固定相，以液體為流動相的色譜法稱為液固

23、吸附色譜法。當(dāng)流動相流過固定相時，樣品組分分子與流動相分子競爭吸附劑表面活性吸附中心，樣品中不同組分也競爭吸附中心 液固吸附色譜法的固定相：1表面具有極性活性基團(tuán)2形狀適宜且粒徑分布均勻3多孔性且比表面積較大，載樣量大4化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定5機械強度高6價格合理 液固吸附色譜法的流動相：主要為有機溶劑（如己烷，庚烷），某些有機溶劑（如甲醇，三乙胺）作為緩沖劑加入其中以調(diào)節(jié)流動相的溶劑強度，極性及PH值。流動相極性越大，洗脫越強，溶質(zhì)保留越小。 二 液液分配色譜基于樣品組分在固定液和流動相之間分配系數(shù)不同而分離的色譜法叫液液分配色譜。流動相極性小于固定相的叫正相液液色譜，流動相極性大于固定相的叫做反相液

24、液色譜一般規(guī)律： F化物Cl化物Br化物I化物； 順式幾何異構(gòu)體比反式幾何異構(gòu)體保留值大； 官能團(tuán)之間的分子內(nèi)氫鍵將使保留值減??； 極性基團(tuán)旁邊有龐大烷基存在時，保留值減??； 環(huán)己烷衍生物和甾體化合物的中位取代基比軸端取代基有更強的保留。 應(yīng)用：異構(gòu)體的分離、樣品預(yù)處理、制備色譜5、 化學(xué)鍵合相色譜的特點、分類和主要制備程序；一 化學(xué)鍵合相的特點和分類 特點;1與液液分配色譜相比，使用過程中固定相不流失，耐溶劑沖洗2與液固吸附色譜相比，消除了擔(dān)體上的表面活性作用特點，清除了某些可能的催化活性3表面改性靈活，容易獲得重復(fù)性產(chǎn)品4化學(xué)性能穩(wěn)定，耐受范圍為PH28 5熱穩(wěn)定性好，一般在70 一下穩(wěn)定

25、6載樣量大7梯度洗脫平衡快 分類：1按鍵和相的表面結(jié)構(gòu)：單分子鍵合和聚合鍵合2按鍵合有機硅烷的官能團(tuán)：極性鍵和相，非極性鍵和相和離子交換鍵和相二 固定相的制備與性能評價制備：1所用的擔(dān)體材料應(yīng)有某種化學(xué)反應(yīng)活性2有機分子應(yīng)含有能與擔(dān)體表面發(fā)生反應(yīng)的官能團(tuán)性能評價：1微量元素分析或熱失重法：本法直接測定鍵和相的碳含量，表示方法 表面鍵合官能團(tuán)濃度，表面碳覆蓋率，有機官能團(tuán)的表面覆蓋率 2色譜法3光譜法三 非極性鍵合相 疏溶劑作用理論：1分子毛：非極性烷基鍵合相是在硅膠表面蒙覆了一層以Si-C鍵化學(xué)鍵合的十八烷基（或其他烴基）的分子毛2溶質(zhì)分子：溶質(zhì)分子=非極性部分+極性官能團(tuán)部分3疏溶劑效應(yīng)：當(dāng)

26、溶質(zhì)分子的非極性部分與極性溶劑接觸式，相互間產(chǎn)生斥力叫做“疏溶劑”。當(dāng)鍵合相表面的烷基與極性溶劑接觸時，相互間也產(chǎn)生斥力。當(dāng)溶質(zhì)分子的非極性部分與鍵合相表面的烷基接觸時，相互之間產(chǎn)生締合作用。這種締合是可逆的，其強弱決定了溶質(zhì)分子色譜保留的強弱。溶質(zhì)分子的極性部分與極性溶劑具有親和力。4溶質(zhì)保留值的影響因素：溶質(zhì)分子結(jié)構(gòu)，烷基鍵合固定相特性，流動相性質(zhì)，溫度 親硅醇基效應(yīng)：烷基鍵合相表面往往還有殘留硅醇基，這是一種微量酸性的基團(tuán)，可與溶質(zhì)陽離子或氫鍵基團(tuán)相互作用。 流動相的設(shè)計：1首選原則2多元溶劑3洗脫能力的選擇4替代溶劑5離子抑制色譜法。四 非極性鍵合相填料的新進(jìn)展 空間保護(hù)鍵合相：由于在

27、C18烷基側(cè)鏈引入較大的官能團(tuán)以及立體效應(yīng)，阻礙了硅烷基于分析物的相互作用，他在PH=7時對堿性化合物的分離，呈現(xiàn)對稱峰形并有很好的柱效，在低PH值時有較高水解穩(wěn)定性 雙齒鍵合固定相：其環(huán)狀結(jié)構(gòu)無論在低PH值還是高PH值條件下均顯示了較高穩(wěn)定性，滿意的柱效和色譜行為 內(nèi)嵌極性基團(tuán)鍵合固定相：極性官能團(tuán)嵌入鍵合相的技術(shù)是改善固定相和水溶液兼容能力的一個途徑，對堿性化合物展現(xiàn)出良好的對稱峰形，有時可以表現(xiàn)不同的選擇性。 硅碳雜化硅膠：這種填料發(fā)揮了硅膠與聚合物基質(zhì)填料的優(yōu)勢，為研究者優(yōu)化分離速度，分離度，PH選擇性，色譜柱壽命及上樣量提供了強有力的工具。 其他：以氧化鋯為基質(zhì)的鍵和相，聚合物包覆法

28、五 極性鍵和相 將極性官能團(tuán)鍵合到載體上，構(gòu)成極性鍵和相。以極性鍵合相為固定相的色譜法稱作極性鍵和相色譜法。適用于分離極性和強極性的化合物。六 離子交換鍵合相 分離機理：陽離子交換，陰離子交換 保留規(guī)律：1陰離子交換分離有機酸，陽離子交換分離有機堿2離子強度增加，k'減少。原因是離子交換平衡的移動3有機改性劑對保留的影響 如果洗脫液中加入極性有機組分則抑制離子交換，并且產(chǎn)生按分配機理進(jìn)行的分離。6、 非極性鍵合相色譜的保留機制和保留規(guī)律；雙保留機理：溶質(zhì)的保留值應(yīng)包括兩部分的貢獻(xiàn)，即疏溶劑效應(yīng)和親硅醇基效應(yīng)。親硅醇基效應(yīng)：烷基鍵合相表面往往還有殘余硅醇基，這是一種微量酸性的基團(tuán)，可與溶

29、質(zhì)陽離子或氫鍵基團(tuán)相互作用，主要影響含氮類藥物的分離，造成色譜峰拖尾，柱效下降。7、 離子對色譜法的保留機制和應(yīng)用；在化學(xué)鍵合的有機硅烷分子中帶上固定的離子交換基團(tuán)，便成了離子交換鍵合相。保留規(guī)律：陰離子交換劑分離有機酸，pH越小，酸的解離被抑制，保留越小。在用強陰離子交換鍵合相分離酸性藥物時，pka值越小，保留時間陽離子交換劑分離有機堿：在用強陽離子交換鍵合相分離堿性藥物時，pH游離堿，保留時間。pH高，堿以分子形式存在，保留值很小。8、 分離極性化合物可供選擇的主要分離模式；9、 分子排阻色譜法的分離原理；分析：多肽、蛋白質(zhì)、多糖等生物大分子、高聚物。原理：具有不同分子大小的樣品通過柱時，

30、溶質(zhì)分子能夠被柱填料的孔徑分類。10、 超高效液相色譜分離的主要優(yōu)勢；比HPLC更高的分離度、比HPLC更高的分析速度、比HPLC更高的靈敏度、應(yīng)用：體內(nèi)藥物分析、中藥分析、代謝組學(xué)分析及其它一些生化領(lǐng)域 先導(dǎo)化合物的篩選 蛋白質(zhì)組學(xué)研究 天然產(chǎn)物的分析第十章，手性高效液相色譜法1 手性藥物的定義（名詞解釋類）；手性藥物是指由具有藥理活性的手性化合物組成的藥物，其中只含有效對映體或者以含有效的對映體為主。 2 手性衍生化試劑拆分原理及衍生化反應(yīng)的要求（簡答類）；光學(xué)活性藥物與有高光學(xué)純度的手性試劑于分離前衍生化，在藥物對映體中引入另外一個手性，形成非對映異構(gòu)體，再以HPLC分析。衍生化要求：胺

31、基類手性藥物 ：運用異硫氰酸酯（ITC）、異氰酸酯（IC）類、手性酰氯、磺酰氯類試劑，將其衍生化為酰胺、氨基甲酸酯、脲、硫脲和磺酰胺 。羧基類手性藥物 ：運用手性胺類衍生化試劑，將其衍生化為酯和酰胺 。醇類手性藥物 ：運用手性酰氯、磺酰氯類試劑 ，將其衍生化成酯 。烯類手性藥物 ：衍生化成水性鉑復(fù)合物 。3 簡述常見手性固定相的種類；（簡答類）；吸附性：蛋白質(zhì)類反向，防止有機溶劑、多糖衍生物類正向防水、環(huán)糊精類正反均可電荷轉(zhuǎn)移型第十二章，高效液相色譜檢測器4 理想檢測器應(yīng)具備的特點（填空類）適用范圍廣、線性范圍寬、靈敏度高、響應(yīng)快，能精確將流出物轉(zhuǎn)換成電信號、對樣品無破壞性、死體積小，不引起柱

32、外譜帶擴展、可靠、重現(xiàn)性好，不受溫度和流動相流速變化、噪音低、漂移小，對流動相組成變化不敏感。5 列舉常見的高效液相檢測器的種類及其特點（簡答類）紫外吸收檢測器UVD:濃度型、靈敏度高噪音低、選擇性型、不受溫度和流動相組成的影響、非破壞型。熒光檢測器FD：高靈敏度、高選擇性、應(yīng)用沒有紫外廣泛、干擾因素多，如熒光淬滅、背景熒光。蒸發(fā)光散射檢測器ELSD：通用型檢測器、對流動相組成變化不敏感，適合梯度洗脫。、流動相組成應(yīng)是揮發(fā)性的、靈敏度比紫外檢測器要低、色譜響應(yīng)與其質(zhì)量的對數(shù)值成正比。電化學(xué)檢測器ECD：靈敏度高F選擇性高、線性范圍寬示差折光檢測器RID：通用型檢測器、濃度型檢測器、示差折光檢測

33、器的檢測限一般為10-6 g/ml 10-7 g/ml，線性范圍一般都小于105、靈敏度低、對外界環(huán)境變化很敏感，溫度、壓力、濃度、流速等，不能用于梯度洗脫。6 光電二極管陣列檢測器的主要應(yīng)用和原理（簡答或填空類）光電二極管陣列紫外檢測器DAD、PDA、PDAD：主要特點是用光電二極管陣列同時接受來自流通池的全光譜透過光。特點:同時得到多個波長的色譜圖，因此可以計算不同波長處相對吸光度比。可以選擇整個波長范圍的寬譜帶檢測，僅需一次進(jìn)樣，將所有組分檢測出來。在色譜運行期間可以對每個色譜峰的指定位置實時記錄吸收光譜圖，并計算其最大吸收波長。同時逐點進(jìn)行光譜掃描，得到時間-波長-吸光度三維圖形。應(yīng)用

34、：1. 色譜峰的純度檢查、2. 色譜峰的鑒別、3. 譜帶寬度檢測4.峰抑制5. 選擇最佳波長7 分子熒光原理和熒光檢測器的特點（簡答或填空類）原理：利用某些溶質(zhì)在受紫外光激發(fā)后，能發(fā)射可見光（熒光）的性質(zhì)進(jìn)行檢測。特點：1）高靈敏度：最小檢測限比紫外檢測法低一個數(shù)量級以上。2）高選擇性：優(yōu)于紫外檢測法或至少一樣不足：應(yīng)用沒有紫外廣泛，措施：與熒光試劑反應(yīng)生成熒光衍生物；干擾因素多，如熒光淬滅、背景熒光8 常見電化學(xué)檢測器的特點安培檢測器、極譜檢測器、庫侖檢測器、電導(dǎo)檢測器特點：工作電壓對檢測靈敏度影響最為關(guān)鍵。靈敏度高，最小檢測限可達(dá)10-910-12g；選擇性高，一般只對電活性物質(zhì)有響應(yīng)，可

35、氧化化合物包括酚、二羥基、過氧化物等；可還原化合物包括酮、醛、共軛不飽和化合物等，線性范圍寬，一般104 105。十三章 高效液相色譜法相關(guān)操作技術(shù)一、藥物的衍生化高效液相色譜法（一）藥物衍生化的目的：1、減小前處理難度或增減穩(wěn)定性2、改善色譜分離3、提高檢測性能4、擴大色譜分析的應(yīng)用范圍 意義：衍生化技術(shù)在高效液相色譜中應(yīng)用較多，尤其在生物樣品中的藥物及其代謝物或內(nèi)源性物質(zhì)的色譜分析中，由于樣品機制復(fù)雜，待測組分含量很低，因此化學(xué)衍生化具有更重要的意義。許多化合物經(jīng)過衍生化反應(yīng)后才能進(jìn)行紫外、熒光、電化學(xué)檢測或?qū)崿F(xiàn)光學(xué)異構(gòu)體分離（二）HPLC方法建立的步驟：1、樣品的性質(zhì)和分離目的2、樣品的

36、前處理方法的選擇3、檢測器的選擇4、選擇優(yōu)化色譜分析條件5衍化物質(zhì)一定量分析一定性分析6、方法學(xué)的引用證明 衍生化HPLC方式：1、柱前衍生化：改善色譜分離，復(fù)雜樣品衍生化難度大2、柱后衍生化：有利于復(fù)雜樣品的衍生化分析，不改善色譜分離，反而可能造成峰展寬3、紫外衍生化反應(yīng)：氨基酸的紫外衍生化試劑，熒光衍生化反應(yīng)：胺類和氨基酸的熒光衍生化試劑常用衍生化反應(yīng)的種類及試劑 及優(yōu)缺點 一 紫外衍生化標(biāo)記反應(yīng)：異硫氰酸苯酯（PITC）優(yōu)點：與一、二級氨基酸都可以反應(yīng)，穩(wěn)定，衍生副產(chǎn)物對測定無干擾，紫外檢測。缺點須去除衍生試劑，樣品制備需較長時間，PITC毒性大，靈敏度較低 丹酰氯（DNSCI）優(yōu)點：反

37、應(yīng)迅速可檢測形式多，剩余衍生試劑不需除去可與二級氨基酸反應(yīng)衍生物較穩(wěn)定，缺點水解產(chǎn)物也可以發(fā)射強熒光，干擾測定反應(yīng)要在避光條件下進(jìn)行，專屬性差；二 熒光衍生化標(biāo)記反應(yīng)：鄰苯二甲醛（OPA）優(yōu)點：反應(yīng)迅速，可檢測形式多，試劑不發(fā)熒光，缺點：不能與二級氨基酸直接反應(yīng)，衍生物不穩(wěn)定；三電化學(xué)二、梯度洗脫定義：色譜分離過程中，流動相中有機相比例或離子強度、PH值不斷改變的洗脫方式 目的：適用于保留范圍寬的多組分復(fù)雜樣品 應(yīng)用特點1）解決組分k值差距過大對分離帶來的困難2）解決組分在色譜柱上殘留問題3）進(jìn)樣量體積較大時產(chǎn)生峰展寬4）改善峰形 洗脫的方式：1）線性梯度2）曲線梯度3）分段梯度，在開始一段時

38、間內(nèi)，使用洗脫能力較弱的流動相，隨著流動相洗脫強度增加，色譜保留較強的組分較快被洗脫 梯度洗脫方法的建立步驟：預(yù)實驗方式選擇梯度范圍調(diào)整分離度十四章 毛細(xì)管電泳法CE基本裝置：毛細(xì)管及溫度系統(tǒng)、控制系統(tǒng)、電路系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)等基本原理：電泳和電滲 電泳：在電解質(zhì)溶液中，帶電離子在電場中的定向移動 影響電滲流因素：1、電場強度的影響，其速度和電場強度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速度正比于工作電壓2、毛細(xì)管材料的影響3、緩沖溶液的影響 加大緩沖液濃度，溶液離子強度增大，使溶液的粘度增大，電滲流速度減小4、溫度十六章 定性定量分析方法及其驗證一） 準(zhǔn)確度（accuracy）是指測定值與真實值或參考值接近的程度二） 精密度（precision）是指在規(guī)定的測試條件下同一均勻樣本多次進(jìn)樣測定所得一系列測定