分解纖維素的微生物的分離

1、三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋將樣品涂布到鑒別將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培纖維素分解菌的培養(yǎng)基上養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透挑選產(chǎn)生透明圈的菌落明圈的菌落土壤取樣土壤取樣取樣環(huán)境取樣環(huán)境原因原因土壤取樣土壤取樣取樣環(huán)境取樣環(huán)境富含纖維素的環(huán)境中富含纖維素的環(huán)境中原因原因土壤取樣土壤取樣取樣環(huán)境取樣環(huán)境富含纖維素的環(huán)境中富含纖維素的環(huán)境中 由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)

2、境。得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。原因原因土壤取樣土壤取樣 實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。土，多年積累的枯枝敗葉等。土壤取樣土壤取樣 實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。土，多年積累的枯枝敗葉等。 討論討論: :如果找不到合適的環(huán)境，可將如果找不到合適的環(huán)境，可將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)埋進(jìn)土壤中多深？么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)埋進(jìn)土壤中多深？土壤取樣土壤取樣 實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖土，

3、多年積累的枯枝敗葉等。土，多年積累的枯枝敗葉等。 討論討論: :如果找不到合適的環(huán)境，可將如果找不到合適的環(huán)境，可將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)埋進(jìn)土壤中多深？么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)埋進(jìn)土壤中多深？ 將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)集中，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解相對(duì)集中，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深約約10cm10cm左右的土壤中。左右的土壤中。選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)1.1.選擇培養(yǎng)的目的：選擇培養(yǎng)的目的：1.1.選擇培養(yǎng)的目的：選

4、擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物能夠從樣品中分離到所需要的微生物選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)2.2.制備選擇培養(yǎng)基制備選擇培養(yǎng)基參照課本參照課本2929頁旁欄中的比例配置，頁旁欄中的比例配置，回答下列問題回答下列問題a.a.旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？培養(yǎng)基？為什么？b.b.這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？參照課本參照課本2929頁旁欄中的比例配置，頁旁欄中的比例配置，回答下列問題回答下

5、列問題a.a.旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？培養(yǎng)基？為什么？b.b.這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑2.2.制備選擇培養(yǎng)基制備選擇培養(yǎng)基參照課本參照課本2929頁旁欄中的比例配置，頁旁欄中的比例配置，回答下列問題回答下列問題a.a.旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？培養(yǎng)基？為什么？b.b.這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微

6、生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖2.2.制備選擇培養(yǎng)基制備選擇培養(yǎng)基c.c.你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用選擇培養(yǎng)基的作用c.c.你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用選擇培養(yǎng)基的作用用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對(duì)照用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對(duì)照3.3.操作方法：操作方法

7、：將土樣加入裝有將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)一定溫度下振蕩培養(yǎng)12天，直至培養(yǎng)天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃濃縮縮”所需的微生物？所需的微生物？思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃濃縮縮”所需的微生物？所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的速繁殖，而那些不

8、適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮濃縮”的作用的作用梯度稀釋梯度稀釋按照課題按照課題1 1的稀釋操作方法，將的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋，選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)到稀釋最大倍數(shù)到10106 6將樣品涂布到鑒別纖維素將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上分解菌的培養(yǎng)基上1. 制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基:參照旁欄中的比例參照旁欄中的比例2. 涂布平板：涂布平板：將稀釋度為將稀釋度為104106的菌懸液各取的菌懸液各取0.1ml涂布在培養(yǎng)基上，涂布在培養(yǎng)基上，30倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈

9、的菌落 挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。一般即為分解纖維素的菌落。 接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在基上，在30300 0C C 37370 0C C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)。剛果紅染色法剛果紅染色法方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅在倒平板時(shí)就加入剛果紅剛果紅染色法剛果紅染色法方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果

10、紅在倒平板時(shí)就加入剛果紅思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足？與不足？ 方法一方法一缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點(diǎn)是這紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用菌的作用 方法二方法二優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，不存在菌優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，不存在菌落混雜問題落混雜問題缺點(diǎn)一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類缺點(diǎn)一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質(zhì)，可以使能產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)物質(zhì)，可以使能產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)；缺點(diǎn)二有些微生物具有降解假陽性反應(yīng)；缺點(diǎn)二有些微生物

11、具有降解色素的能力，它們?cè)陂L時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)色素的能力，它們?cè)陂L時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分素分解菌不易區(qū)分nAVSEQ08.DATAVSEQ08.DAT1.在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪一生物學(xué)觀點(diǎn)？菌，符合下列哪一生物學(xué)觀點(diǎn)？A.生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)B.生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)C.生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)D.生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)練一練：練一練：1.在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖

12、維素分解在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪一生物學(xué)觀點(diǎn)？菌，符合下列哪一生物學(xué)觀點(diǎn)？A.生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)B.生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)C.生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)D.生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)練一練：練一練：2.從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是土壤取樣土壤取樣梯度稀釋梯度稀釋選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 菌懸液涂布平板菌懸液涂布平板挑選出單個(gè)菌落挑選出單個(gè)菌落A. B.C. D.2.從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是土壤取樣土壤取樣梯度

13、稀釋梯度稀釋選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 菌懸液涂布平板菌懸液涂布平板挑選出單個(gè)菌落挑選出單個(gè)菌落A. B.C. D.3. 有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是A. 可以增加纖維素分解菌的濃度可以增加纖維素分解菌的濃度B. 可以減少纖維素分解菌的濃度可以減少纖維素分解菌的濃度C. 所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基D. 所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基3. 有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是A. 可以增加纖維素分解菌的濃度可以增加纖維素分解菌的濃度B. 可以減少纖維素分解菌的濃度可以減少纖維素分解菌的濃度C. 所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基D. 所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基四、課題延伸四、課題延伸 本課題對(duì)分解纖