藥物安全性評(píng)價(jià)-局部給藥毒性試驗(yàn)譚ppt課件

1、1姓名：譚珍媛電話：QQ:5399676942被被”反應(yīng)停反應(yīng)?！眾Z去胳膊的孩子們奪去胳膊的孩子們 “反應(yīng)停反應(yīng)停”的兩種手性結(jié)構(gòu)分子的兩種手性結(jié)構(gòu)分子 “反應(yīng)停反應(yīng)?！?事件事件-50年代年代.德國(guó)德國(guó)3“海豹畸形嬰兒海豹畸形嬰兒 ”“海豹畸形人海豹畸形人 ”4龍膽瀉肝丸事件龍膽瀉肝丸事件 -90年代年代.中國(guó)中國(guó)馬兜鈴酸 5腎病腎病腎衰腎衰毒尿癥毒尿癥6案例案例 痤瘡痤瘡 是一種毛囊皮脂炎癥，多發(fā)于青年男女面部、胸部等皮脂分泌旺盛的區(qū)域，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，且易反復(fù)發(fā)作。 克林霉素克林霉素-過氧苯甲酰凝膠過氧苯甲酰凝膠 是由克林霉素磷酸脂與過氧苯甲酰制成的復(fù)方制劑，臨床用于痤瘡治療。要求觀察其對(duì)皮

2、膚的刺激性與過敏反應(yīng)。7 藥物安全性評(píng)價(jià)中局部給藥毒性試驗(yàn)藥物安全性評(píng)價(jià)中局部給藥毒性試驗(yàn) 局部給藥毒性試驗(yàn)概念： 是指局部用藥后所引起的毒性反應(yīng)。 最常用制劑 : 有皮膚用藥制劑（涂劑、擦劑、膏藥劑、透皮吸收制劑等）、滴眼劑、滴鼻劑和噴霧劑、肌內(nèi)注射劑、直腸和陰道用藥制劑等等。 8第一節(jié)第一節(jié) 皮膚用藥的毒性評(píng)價(jià)皮膚用藥的毒性評(píng)價(jià)一. 皮膚組織結(jié)構(gòu) 皮膚覆蓋于整個(gè)體 表，由表皮、真皮和皮下組織組成。 9二二.化學(xué)物質(zhì)對(duì)皮膚毒性作用的類型化學(xué)物質(zhì)對(duì)皮膚毒性作用的類型 根據(jù)性質(zhì)不同，由藥物引起的皮膚損害包括原發(fā)性刺激炎癥反應(yīng)和致敏反應(yīng)，偶然也可引起皮膚癌。10三、皮膚給藥毒性評(píng)價(jià)包括三、皮膚給藥

3、毒性評(píng)價(jià)包括: 1、急性毒性試驗(yàn) 2、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn) 3、皮膚刺激性試驗(yàn) 4、過敏試驗(yàn) 5、光敏試驗(yàn)等。11（一）皮膚用藥急性毒性實(shí)驗(yàn) 1. 定義： 指動(dòng)物完整或破損皮膚一次性接觸受試物后在短期內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。 2.受試物： 使用臨床制劑，如臨床制劑濃度無法滿足劑量要求，受試物為粉末狀的用適宜基質(zhì)（如凡士林、羊毛脂等）溶解混勻。 12 3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)條件 每組動(dòng)物數(shù)：每組動(dòng)物數(shù)： 一般選白色家兔、小型豬4-6只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半； 動(dòng)物體重：動(dòng)物體重： 家兔2-3kg，豚鼠200-300g，大鼠200-250g，小型豬30- 40kg。 飲食、攝水：飲食、攝

4、水： 自由飲食、攝水。 動(dòng)物房溫濕度：動(dòng)物房溫濕度： 家兔、豚鼠及小型豬控制在18-26；大鼠控制在20-25，相對(duì)濕度均為40%-70%；換氣次數(shù)為10-20次/min；12h明暗交替光照。13 4.劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)計(jì) 至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，另設(shè)賦形劑對(duì)照組，必要時(shí)設(shè)空白對(duì)照組。 如受試物在擬用臨床給藥時(shí)有可能與破損皮膚接觸，則應(yīng)另設(shè)破損皮膚組。 145.實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 給藥前24h對(duì)給藥區(qū)（通常在背部）進(jìn)行脫毛處理，給藥時(shí)將受試物均勻涂于動(dòng)物脫毛區(qū)，液體制劑，應(yīng)將受試物涂于敷料上，再貼于脫毛或破損皮膚區(qū)，用半封閉的外罩固定敷料。 涂敷24h后，除去敷料，用溫水或適宜的溶劑除去殘留的受試物和賦

5、形劑。 15觀察期：觀察期： 連續(xù)觀察14d，觀察1-2次/天。也可根據(jù)出現(xiàn)毒性反應(yīng)的情況適當(dāng)延長(zhǎng)。觀察指標(biāo)：觀察指標(biāo)： 給藥前后7d、14d稱體重，觀察給藥后動(dòng)物的全身反應(yīng)：皮毛、眼睛、黏膜、呼吸、行為、自主活動(dòng)、肌張力等，有無顫抖、震顫、抽搐、流涎、腹瀉、少動(dòng)、精神萎靡不振、昏迷等毒性反應(yīng)癥狀。若有動(dòng)物死亡應(yīng)立即進(jìn)行尸檢，有明顯異常時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。6.觀察指標(biāo)觀察指標(biāo)167.結(jié)果評(píng)價(jià)結(jié)果評(píng)價(jià) 對(duì)觀察到的陽性癥狀結(jié)合大體解剖或病理組織學(xué)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，與對(duì)照組比較，對(duì)動(dòng)物的毒性反應(yīng)及死亡原因作出明確判斷。 病理組病理組對(duì)照組對(duì)照組17（二）皮膚給藥長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)（二）皮膚給藥

6、長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)1.定義 指動(dòng)物完整或破損皮膚長(zhǎng)期反復(fù)接觸受試物后出現(xiàn)的毒性反應(yīng)及其可逆程度實(shí)驗(yàn)。2.受試物 與“皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)”基本相同。3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及條件 與“皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)”一致。 184.劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)計(jì) 至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組. (可設(shè)賦形劑對(duì)照組，必要時(shí)設(shè)空白對(duì)照組。) 高劑量：原則上應(yīng)使動(dòng)物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，甚至出現(xiàn)個(gè)別動(dòng)物死亡； 低劑量：原則上應(yīng)高于動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的等效劑量，并不使動(dòng)物出現(xiàn)毒性反應(yīng)； 中劑量：動(dòng)物可出現(xiàn)輕度毒性反應(yīng)。195.給藥期限給藥期限藥物臨床療程藥物臨床療程皮膚給藥長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)給皮膚給藥長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)給藥期限藥期限可以支持的臨床研究階段可以支持的臨床研

7、究階段單次給藥2周期，期（及生產(chǎn)）2周1個(gè)月期，期（及生產(chǎn)）2周1個(gè)月1個(gè)月期3個(gè)月期（及生產(chǎn)）3個(gè)月3個(gè)月期6個(gè)月期（及生產(chǎn)）6個(gè)月6個(gè)月期，期（及生產(chǎn)）6個(gè)月6個(gè)月期，期（及生產(chǎn)）20 6.給藥頻率給藥頻率 給藥期限3個(gè)月，原則上應(yīng)每天給藥； 給藥期限3個(gè)月，每周至少應(yīng)給藥6d； 也可根據(jù)臨床給藥頻率給藥。21 7.恢復(fù)期限恢復(fù)期限 給藥結(jié)束后保留部分動(dòng)物，繼續(xù)觀察其可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)，并了解毒性反應(yīng)的可逆程度。 根據(jù)受試物的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)、靶器官或靶組織的毒性反應(yīng)和實(shí)際恢復(fù)情況確定恢復(fù)期的長(zhǎng)短。 22 8.8.實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 首次給藥前24h對(duì)給藥區(qū)在背部進(jìn)行脫毛處理。每天給藥1

8、次，每次至少接觸6h。保證受試物與給藥部位具有良好接觸并避免動(dòng)物食入藥物?？捎眉啿嫉葻o刺激性輔料包裹或給動(dòng)物穿上特制的通透性好的外套。 239.觀察指標(biāo)觀察指標(biāo) 除增加給藥部位皮膚及其周圍組織乃至全身皮膚變化和皮膚病理學(xué)檢查外，其余指標(biāo)與長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)要求一樣。 24 10.結(jié)果評(píng)價(jià) 全身毒性反應(yīng)的結(jié)果評(píng)價(jià)與長(zhǎng)毒實(shí)驗(yàn)要求一樣，應(yīng)根據(jù)各檢測(cè)指標(biāo)及病理組織學(xué)檢查結(jié)果綜合分析。除此以外還應(yīng)注意評(píng)價(jià)給藥局部及其周圍組織的毒性反應(yīng)。25（三）皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)（三）皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)1.1.定義：定義： 皮膚刺激性：皮膚刺激性：指經(jīng)皮膚給藥后，在皮膚上產(chǎn)生的可逆性炎性病變。 （若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則

9、稱為腐蝕性。若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性。） 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)：皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)：是觀察動(dòng)物的皮膚接觸受試物后是否引起紅腫、充血、滲出等局部反應(yīng)。26 2.受試物 應(yīng)采用與臨床應(yīng)用制劑一致，符合臨床用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的受試物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，同時(shí)注明其名稱、來源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、賦形劑、保存條件及配制方法等，其中賦形劑和雜質(zhì)等的名稱和量應(yīng)盡可能明確，并附有研制單位的自檢報(bào)告。所用賦形劑應(yīng)該標(biāo)明批號(hào)、規(guī)格和生產(chǎn)廠家，并符合實(shí)驗(yàn)要求。27 3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 多種哺乳動(dòng)物可以選擇，一般首選白色家兔，每組動(dòng)物數(shù)48只，雌、雄各半。也可以選用其他種屬的動(dòng)物 (如小型豬等) ,選擇家兔和小型豬以外的動(dòng)

10、物應(yīng)闡明合理性。28 4.實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 設(shè)賦形劑對(duì)照，采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。 試驗(yàn)前24h對(duì)給藥區(qū)進(jìn)行脫毛處理。去毛范圍各3cm3cm。(給藥前應(yīng)檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。) 進(jìn)行破損皮膚的刺激性研究時(shí)，在用藥部位用砂紙磨或劃“井”字并以滲血為度。 29 4.實(shí)驗(yàn)操作 受試物藥量一般是固體或半固體0.5g，液體0.5ml，直接涂布于一側(cè)已去毛的皮膚上，然后用兩層紗布(2.5cm 2.5cm)和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定； 另一側(cè)涂布賦形劑做對(duì)照。貼敷時(shí)間至少4h。貼敷結(jié)束后，除去受試物并用溫水或無刺激性溶劑清潔給藥部位。 注：

11、多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)應(yīng)連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時(shí)間相同，貼敷期限一般不超過4周。30 刺激反應(yīng) 分值 刺激反應(yīng) 分值紅斑 無紅斑 0 輕度紅斑（勉強(qiáng)可見） 1 中度紅斑（明顯可見） 2 重度紅斑 3 紫紅色紅斑到輕度焦痂形成 4水腫 無水腫 0 輕度水腫（勉強(qiáng)可見） 1 中度水腫（明顯隆起） 2 重度水腫（皮膚隆起1mm，輪廓清楚） 3 嚴(yán)重水腫（皮膚隆起1mm以上并有擴(kuò)大）4 總分值 85.觀察指標(biāo)觀察指標(biāo) 在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應(yīng)。按表給出的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)皮膚紅斑和水腫進(jìn)行評(píng)分。31 6.結(jié)果評(píng)價(jià)結(jié)果評(píng)價(jià) 單次給藥實(shí)驗(yàn)： 計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各組受試物及賦形劑皮膚反應(yīng)積分的平均

12、分值，按表進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。 多次給藥實(shí)驗(yàn)： 首先計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各組積分均值，然后計(jì)算觀察期限內(nèi)每天每只動(dòng)物積分均值，按表進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。 分 值 評(píng) 價(jià) 分 值 評(píng) 價(jià)00.49 無刺激性0.52.99 輕度刺激性3.05.99 中度刺激性6.08.0 強(qiáng)刺激性32（四）皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)（四）皮膚過敏性實(shí)驗(yàn) 1、概念： 皮膚過敏性試驗(yàn)：是觀察動(dòng)物皮膚初始接觸受試物后，再進(jìn)行受試物激發(fā)接觸，觀察是否產(chǎn)生全身或局部過敏反應(yīng)。332、過敏性常用試驗(yàn)方法BuehlerBuehler試驗(yàn)：試驗(yàn)： 在第0，6-8和13-15天有封閉片局部給藥誘導(dǎo)，在第27-28天未給藥肋腹部貼6h局部激發(fā)。除去封閉

13、片24和48h讀取結(jié)果。GMPTGMPT試驗(yàn)：試驗(yàn)： 皮內(nèi)注射進(jìn)行誘導(dǎo)，5-8天后再次誘導(dǎo)，第20-22天給激發(fā)劑量24h，去除激發(fā)劑量24和48h讀取結(jié)果。34（1）光過敏性實(shí)驗(yàn)（光變態(tài)反應(yīng)）（2）光毒性實(shí)驗(yàn)（光刺激性）3、皮膚光過敏性實(shí)驗(yàn)、皮膚光過敏性實(shí)驗(yàn)35第二節(jié) 腔道給藥的毒性實(shí)驗(yàn)一、腔道給藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)一、腔道給藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)1.定義定義 指通過動(dòng)物腔道（包括眼、耳、鼻腔、直腸、陰道）一次性接觸受試物后在短期內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。36 2.受試物受試物 應(yīng)使用臨床制劑，如臨床制劑濃度無法滿足毒性實(shí)驗(yàn)的劑量要求，應(yīng)根據(jù)臨床制劑的制備標(biāo)準(zhǔn)制備高濃度制劑用于本研究。如為滴鼻劑或吸人劑，

14、則受試物多為液體或粉劑；如為直腸、陰道用藥，受試物多為栓劑、液體或膏劑，若受試物為粉末狀，則應(yīng)用適宜的基質(zhì) （如凡士林、羊毛脂等）溶解混勻。 37 3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)條件 滴劑或吸入劑急毒實(shí)驗(yàn)一般選擇大鼠或豚鼠、家兔；需直腸、陰道用藥時(shí)應(yīng)選擇大鼠或家兔。其中大鼠應(yīng)選擇SPF級(jí)動(dòng)物。如選擇其他動(dòng)物應(yīng)充分說明其理由。每組動(dòng)物：家兔46只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。動(dòng)物體重：家兔23kg，大鼠、豚鼠250300g。384.實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟：（1）劑量設(shè)計(jì)）劑量設(shè)計(jì)（2）實(shí)驗(yàn)操作）實(shí)驗(yàn)操作（3）觀察指標(biāo)）觀察指標(biāo)（4）結(jié)果評(píng)價(jià)）結(jié)果評(píng)價(jià)39 對(duì)經(jīng)直腸、陰道給藥的受試物，應(yīng)根據(jù)其藥

15、效作用特點(diǎn)及臨床用藥方案，選用家兔、大鼠或beagle犬進(jìn)行長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)，給藥途徑應(yīng)盡量模擬臨床給藥途徑，每次藥后保留時(shí)間盡量與臨床一致，確保藥物與給藥局部的接觸時(shí)間。給藥劑量、給藥期限、恢復(fù)期限及觀察指標(biāo)可參考長(zhǎng)期毒性常規(guī)要求。應(yīng)特別注意觀察給藥局部及可能累及的周圍組織的反應(yīng)和病理改變。 二、腔道給藥的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)二、腔道給藥的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)40 第三節(jié)第三節(jié) 刺激性實(shí)驗(yàn)刺激性實(shí)驗(yàn)1.定義定義 刺激性：刺激性：是指非口服給藥制劑給藥后對(duì)給藥部位產(chǎn)生的可逆性炎癥反應(yīng)，若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性。 刺激性實(shí)驗(yàn)：刺激性實(shí)驗(yàn)：是觀察動(dòng)物的血管、肌肉、皮膚、黏膜等部位接觸受試物后是否

16、引起紅腫、充血、滲出、變性或壞死等局部反應(yīng)。 分類：分類：眼刺激性實(shí)驗(yàn)、血管刺激實(shí)驗(yàn)、肌肉刺激實(shí)驗(yàn)、直腸刺激實(shí)驗(yàn)、陰道刺激實(shí)驗(yàn)、滴鼻劑和吸入劑刺激性實(shí)驗(yàn) 、口腔用藥和滴耳劑刺激性實(shí)驗(yàn)等。412.眼刺激性毒性實(shí)驗(yàn)案例例：氯霉素滴眼液 氯霉素是一種廣譜抗生素，是目前眼用制劑中用量最多的抗生素。其水溶液穩(wěn)定性較差，典型反應(yīng)為水解反應(yīng)，還會(huì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)。將氯霉素滴眼液高溫加速破壞，用HLPC法檢測(cè)到降解產(chǎn)物主要為二醇物；強(qiáng)光照射，其降解產(chǎn)物主要為對(duì)硝基苯甲醛。因此，要考查其降解產(chǎn)物對(duì)眼的刺激作用。421.1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 依據(jù)擬采用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃陀^察指標(biāo)選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一般每個(gè)實(shí)驗(yàn)選擇

17、一種動(dòng)物進(jìn)行評(píng)價(jià)。2.2.給藥的頻率與期限給藥的頻率與期限 給藥的頻率與期限應(yīng)依據(jù)擬定臨床應(yīng)用的情況來決定。重復(fù)給藥的制劑，一般每天給藥一次，給藥期限最長(zhǎng)不超過4周。單次給藥的制劑可用單次給藥的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3.3.可逆性觀察可逆性觀察 為明確毒性反應(yīng)的性質(zhì)，建議進(jìn)行停藥后恢復(fù)期的觀察。局部毒性反應(yīng)的可逆性評(píng)價(jià)應(yīng)包括局部及相關(guān)部位的反應(yīng)。小結(jié)：注意問題小結(jié)：注意問題434.受試物 受試物應(yīng)與臨床應(yīng)用制劑一致。5.對(duì)照組 以溶媒和是（或）賦形劑作陰性對(duì)照，必要時(shí)用已上市制劑作對(duì)照。6.劑量 劑量設(shè)計(jì)主要應(yīng)該考慮受試物濃度和總劑量。一般采用與臨床制劑相同濃度，設(shè)一個(gè)劑量組，可以通過改變給藥頻率進(jìn)行劑量的調(diào)整，必要時(shí)應(yīng)該進(jìn)行不同濃度的刺激性實(shí)驗(yàn)。對(duì)于皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，在給藥面積不變的情況下，不應(yīng)通過增加厚度來滿足增加給藥量的目的