產(chǎn)番瀉葉瀉下及抗骨質(zhì)疏松作用探究

1、產(chǎn)番瀉葉瀉下及抗骨質(zhì)疏松作用探究【摘要】目的：探討國產(chǎn)番瀉葉的瀉下及雌性激素樣抗 骨質(zhì)疏松作用。方法：比較國產(chǎn)與進口商品番瀉葉提取物對小鼠排便和腸蠕動作用的影響，觀察其瀉下通便的效果。并通過觀察對去勢雌性小鼠動情周期、子宮重、股骨重的變化和血鈣、血磷、降鈣素含量的影響，研究由國產(chǎn)番瀉葉制備 而得的番瀉總昔提取物的雌性激素樣抗骨質(zhì)疏松作用。結(jié)果: 兩種商品番瀉葉提取物與生理鹽水對照組相比均能顯著增 加墨汁推進率、縮短首次排便時間，增加6 h排便量，兩種 商品之間無顯著性差異。由國產(chǎn)番瀉葉制備而得的番瀉總昔 提取物能縮短去勢小鼠動情周期，有雌性激素樣促進子宮增 生和骨質(zhì)鈣化的作用。結(jié)論：國產(chǎn)番瀉葉

2、具有較好的瀉下通 便作用，并初步發(fā)現(xiàn)其具有雌性激素樣抗骨質(zhì)疏松作用?！娟P(guān)鍵詞】番瀉葉瀉下劑骨質(zhì)疏松abstract： objective： to investigate the cathartic and anti-osteoporosis effect of native folium sennae. methods： cathartic effect was assayed by measuring the action on defecation and intestinal peristalsis of mice treated with folium sennae extracts.

3、 inhibitory effect on osteoporosis similar to estrogen was investigated by observing estrous cycle, detecting weight of uterus and left femur, and value of plasma calcium, plasma phosphorus and calcitonin treated with purified total sennosides extracts results： compared with saline control group, th

4、e group treated with folium sennae extracts markedly enhanced peristaltic rate of intestine, shortened the time of first defecation and increased bulk of 6 hours stools there was no significant difference between native and foreign folium sennae on these aspects. the purified total sennosides extrac

5、t shortened estrous cycle, improved weight of uterus and left femur, and decreased value of plasma calcium in ovariectomized mice conclusion： the resuits indicate that native folium sennae possesses obvious cathartic effect, and the purified total sennosides extract from native folium sennae exhibit

6、s inhibitory effect on osteoporosis similar to estrogen.key words： folium sennae； purgative agents； osteoporosis番瀉葉(folium sennae)為中國藥典2005年版一部收載 的常用瀉下導(dǎo)滯藥之一，為豆科植物狹葉番瀉(cassia angustifolia vahl)或光葉番瀉(c. acutifolia lei訂e)的 干燥小葉1。番瀉葉味甘、苦，性寒，有瀉熱行滯、通便的功能。主 要用于治療熱結(jié)便秘、積滯腹脹。近些年來發(fā)現(xiàn)番瀉葉可治 療流行性出血熱、急性胰腺炎及中毒性腸麻痹等2

7、, 3。本 品長期以來依靠進口，主要進口國是印度。20世紀80年代 以來，我國在海南、廣西等省引種成功，但商品售價僅為進 口的1/3l/2o國產(chǎn)番瀉葉外觀、性狀、顯微特征與進口 商品無明顯差異，但其有效成分的多寡和活性如何還需要進 一步研究。為此我們課題組從化學(xué)成分、活性成分的定性定 量以及藥理作用等多方面進行一系列的比較研究?，F(xiàn)將兩種 商品番瀉葉提取物對小鼠排便和腸蠕動作用的比較及由國 產(chǎn)番瀉葉制備而得的番瀉總昔提取物的雌性激素樣抗骨質(zhì) 疏松作用的結(jié)果報告如下。1材料和方法1.1材料1.1.1動物：健康昆明種小白鼠，體重(20±2)g,雌雄 兼用。進行雌性激素樣抗骨質(zhì)疏松作用研究時

8、僅用雌性小 鼠。由沈陽藥科大學(xué)提供。1.1.2藥材：藥材a,產(chǎn)于我國海南省陵水地區(qū)，總番瀉 昔以番瀉昔b計算為2. 30%o藥材b,印度進口，中華人民 共和國進口藥材批件受理號為：jzc2003292；天津藥品檢驗 所進口藥品檢驗報告書編號為：20040112/13；檢驗結(jié)果含 總番瀉昔以番瀉昔b計算為2. 50%,收驗日期：2004-09-02o 兩者經(jīng)沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院路金才副教授鑒定均為豆科 植物狹葉番瀉（cassia angustifolia vahl）的干燥葉。1. 1. 3試劑：含碳末的生理鹽水，含碳末0. 1 g/ml；含 50%墨汁（5%炭末，10%阿拉伯膠制成的混懸液）生理

9、鹽水； 乙醇；己烯雌酚；苦味酸染色劑。da101大孔吸附樹脂（遼 寧鑫泰）。1.1.4儀器：超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司， 型號kq-500de型數(shù)控超聲波清洗器；電子分析天平（mettler ab204-a上海）；冷凍干燥儀；計時器；注射器。1. 2實驗方法1.2. 1供試樣品的制備1.2. 1.1樣品制備原則：活性物質(zhì)采用國際上通用的兩 種溶劑即乙醇和水提取制備4,乙醇的濃度根據(jù)文獻采用 65%5o1.2. 1.2乙醇提?。悍謩e取藥材a和藥材b各100 g,各 加65%乙醇1 500 ml浸漬30 min后超聲提?。撼暪β蕿?80%,超聲溫度為20 °c,超聲時間為10

10、 min。減壓回收乙 醇各制成含生藥2. 0 g/mlo標(biāo)記為：a-e （國產(chǎn)番瀉葉乙醇 提取物），b-e （印度進口番瀉葉乙醇提取物）。1.2. 1.3水提取：分別稱取藥材a和藥材b各100 g,分別加蒸餡水1 500 ml浸漬30 min后超聲提?。撼暪β?0%, 超聲溫度20 °c,超聲時間10 mino減壓濃縮各制成含生藥 2. 0 g/mlo標(biāo)記為a-w （國產(chǎn)番瀉葉水提物），b-w （印度進 口番瀉葉水提物）。1.2. 1.4番瀉總昔提取物制備：稱取藥材a 100 g,用65%乙醇加熱回流提取，減壓回收乙醇，調(diào)ph至78,通過da101大孔吸附樹脂純化，流出液經(jīng)冷凍干燥

11、即得。臨用前配成含生藥2. 0 g/ml的溶液。1.2.2對小鼠排便的影響:取禁食24 h小鼠75只，隨機分成5組，每組15只，用苦味酸標(biāo)記。各給藥組動物 分別灌服a-e、b-e、a-w、b-w番瀉葉提取物的碳末混懸液（含碳末0. 1 g/ml）,對照組給予生理鹽水碳末混懸液（含 碳末0. 1 g/ml）,給藥容積0. 3 ml/10go給藥后，每組小鼠 分別置于鋪有濾紙的安鐘罩內(nèi)進行觀察，記錄小鼠首次排黑 色糞便的時間、糞便數(shù)量，并觀察糞便性狀以及糞便沾染肛 門的情況，連續(xù)觀察6 ho1.2.3對小鼠腸蠕動的影響6：取禁食24 h小鼠75 只，隨機分為5組，每組15只，用苦味酸標(biāo)記。各給藥組

12、 分別灌胃a-e、b-e、a-w、b-w四種供試樣品（含50%墨汁）, 對照組給予含50%墨汁的生理鹽水，給藥容積為0. 3ml/10go 給藥后30 min脫頸椎處死。打開腹腔分離腸系膜，剪取上 端至幽門，下端至回盲部腸管，置于托盤上。輕輕將小腸拉 成直線，測量腸管的長度作為小腸總長度，從幽門至墨汁前 沿的距離作為墨汁在腸內(nèi)推進的距離。利用如下公式計算墨 汁推進的百分率，并注意觀察各組小腸容積是否增大。墨汁 推進率（%）=墨汁在腸內(nèi)推進的距離/小腸全長x100%o 1.2.4雌性激素樣抗骨質(zhì)疏松作用研究7,8：將小鼠按體 重隨機分為5組，即假手術(shù)組、模型對照組、番瀉總昔低劑 量組（低劑量組,

13、3.0 mg/kg）.番瀉總昔高劑量組（高劑量 組，6. 0 mg/kg）己烯雌酚組（2.0 mg/kg）,每組15只。 假手術(shù)組行雙側(cè)卵巢摘除假手術(shù)，另4組行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)。 術(shù)后5d開始做陰道涂片，在給藥過程中每天做小鼠陰道涂 片觀察動情期出現(xiàn)情況。以灌胃方式給藥，每天給藥1次， 連續(xù)給藥49 d,對照組給予等體積蒸館水。于末次給藥24 h 后自眼眶取血，分離血清，測血鈣、血磷和降鈣素的含量， 記錄小鼠體重、副性器官子宮重和左側(cè)股骨重，計算臟器系 數(shù)。1.2.5統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)處理使用spss12. 0軟件，多組 間均數(shù)比較用單因素方差分析，進一步兩兩比較用lsd法檢 驗。2結(jié)果2. 1國

14、產(chǎn)與進口商品番瀉葉提取物對小鼠排便的影響（見表1）實驗過程中觀察了小鼠糞便的性狀，對照組為成形的 濕軟的小棗狀，各給藥組均為不成形的稀便。2.2國產(chǎn)與進口商品番瀉葉提取物對小鼠腸蠕動的影響（見表2）實驗過程中觀察了腸容積的變化，除對照組不變 外，其他組均明顯增大。2.3番瀉總昔對去勢雌性小鼠動情周期的影響（見表3） 結(jié)果顯示，模型對照組與假手術(shù)組間有顯著性差異（p&lt；0.01）,與模型對照組比較,番瀉總昔高低劑量組均可明顯縮短去勢小鼠動情周期（均p&lt；0.01）,表明番瀉總 昔具有雌性激素樣作用。且番瀉總昔高劑量組與己烯雌酚組 比較無顯著性差異（p&gt；o.

15、05）o2.4番瀉總昔對去勢雌性小鼠子宮重和左股骨重的影響 （見表4）結(jié)果顯示模型對照組子宮系數(shù)和左股骨系數(shù)與假 手術(shù)組間均有顯著性差異（均p&lt；0.01）；己烯雌酚組和番 瀉總昔高低劑量組子宮系數(shù)和左股骨系數(shù)與模型對照組之 間均有顯著性差異（均p&lt；0.01）,表明番瀉總昔有雌性激 素樣促進子宮增生和使骨質(zhì)鈣化加重的作用。2.5番瀉總昔對去勢雌性小鼠血鈣、血磷和降鈣素含量 的影響（見表5）以血鈣為指標(biāo)，模型對照組與假手術(shù)組間 差異有顯著性（p&lt；0.01）；番瀉總昔高低劑量組與模型對 照組間差異有顯著性（p&lt；0.01）o表明番瀉總昔可以降低

16、血鈣，使骨質(zhì)鈣化。以血磷為指標(biāo)，假手術(shù)組和給藥組與模 型對照組之間沒有顯著性差異。以降鈣素為指標(biāo)，與假手術(shù) 組比較，模型對照組小鼠血清降鈣素下降，番瀉總昔組與模 型對照組比較血清降鈣素呈上升趨勢，但沒有顯著差異。3討論本研究所用樣品番瀉葉的活性成分，主要為番瀉昔a和 番瀉昔b,采用國際上通用的乙醇和水兩種溶劑提取制備。 根據(jù)文獻6的工藝考查，發(fā)現(xiàn)65%濃度的乙醇對番瀉昔a、 b提取效果最佳，故采用65%乙醇作為醇提取溶劑。方法1中計數(shù)黑便時，應(yīng)隨時將小鼠排出的已計數(shù)的黑 便清除，否則易混淆。方法2中實驗動物選取成年體大的健 康小鼠為好，腸管粗大易于操作。在小鼠排便和腸道炭末推進法實驗中，發(fā)現(xiàn)a

17、-e、b-e、a-w、:b-w各給藥組小鼠排泄的黑便不成形，成稀軟狀，而且 與生理鹽水對照組相比兩種番瀉葉給藥組均具有明顯的增 加排黑便數(shù)量，縮短首次排黑便時間和增大墨汁推進率的作 用（均p&lt；0.01）,因此推斷其作用機制可能與加強腸蠕動 有關(guān)。此外，無論ae組與be組還是aw組與組在兩 個實驗中各項指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異，這表明國產(chǎn)番瀉葉與進 口番瀉葉不僅外觀性狀鮮有差別而且有著基本相同的藥效 學(xué)作用。本研究采用大孔吸附樹脂法富集純化番瀉總昔，與單純 的乙醇或水提取方法相比，番瀉昔純度較高，一般番瀉昔a、b之和可達20%以上。骨質(zhì)疏松是中老年，尤其是老年女性的常見病、多發(fā)病, 因此

18、對此病的防治已成為醫(yī)學(xué)界普遍關(guān)注的重要課題。本實 驗觀察到番瀉總昔能縮短去勢小鼠動情周期，有雌性激素樣 促進子宮增生和使骨質(zhì)鈣化加重的作用，提示了該藥的雌性 激素樣抗骨質(zhì)疏松作用。【參考文獻】1 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和 國藥典(一部)m.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005:242.2 肖培根.新編中藥志m.第3卷.北京：化學(xué)工業(yè)出 版社，2002： 509-5143 leung ay, foster s. encyclopedia of common na/tural ingre- dients m new york： john wiley &amp； sons,inc,1996.472-