分子熒光光譜法實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文_第1頁
分子熒光光譜法實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文_第2頁
分子熒光光譜法實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文_第3頁
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文檔簡介

1、分子熒光光譜法實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握熒光光度計(jì)的根本原理及使用。2. 了解熒光分光光度計(jì)的構(gòu)造和各組成局部的作用。3. 掌握分子熒光光度計(jì)分析物質(zhì)的特征熒光光譜:激發(fā) 光譜、發(fā)射光譜的測定方法。4. 了解影響熒光產(chǎn)生的幾個主要因素。5. 學(xué)會運(yùn)用分子熒光光譜法對物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分 析。二、實(shí)驗(yàn)原理 原子外層電子吸收光子后,由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),再回 到較低能級或者基態(tài)時,發(fā)射出一定波長的輻射,稱為原子 熒光。對于分子的能級激發(fā)態(tài)稱為分子熒光,平時所說的熒 光指分子熒光。具有不飽和基團(tuán)的基態(tài)分子經(jīng)光照射后,價(jià)電子躍遷產(chǎn) 生熒光,是當(dāng)電子從第一激發(fā)單重態(tài) S1 的最低振動能級回 到基態(tài)

2、 S0 各振動能級所產(chǎn)生的光輻射。(1) 激發(fā)光譜是指發(fā)光的某一譜線或譜帶的強(qiáng)度隨激發(fā)光波長( 或頻率) 變化的曲線。橫坐標(biāo)為激發(fā)光波長,縱坐標(biāo)為發(fā)光相對 強(qiáng)度。激發(fā)光譜反映不同波長的光激發(fā)材料產(chǎn)生發(fā)光的效果。 即表示發(fā)光的某一譜線或譜帶可以被什么波長的光激發(fā)、激 發(fā)的本領(lǐng)是高還是低;也表示用不同波長的光激發(fā)材料時,使材料發(fā)出某一波長光的效率。熒光為光致發(fā)光,適宜的激 發(fā)光波長需根據(jù)激發(fā)光譜確定激發(fā)光譜是在固定熒光 波長下,測量熒光體的熒光強(qiáng)度隨激發(fā)波長變化的光譜。獲 得方法:先把第二單色器的波長固定,使測定的入em不變,改變第一單色器波長,讓不同波長的光照在熒光物質(zhì)上,測 定它的熒光強(qiáng)度,以

3、I為縱坐標(biāo),入ex為橫坐標(biāo)所得圖譜即 熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜,從曲線上找出入ex,實(shí)際上選波長較長的高波長峰。(2) 發(fā)射光譜 是指發(fā)光的能量按波長或頻率的分布。通常實(shí)驗(yàn)測量的是發(fā)光的相對能量。發(fā)射光譜中,橫坐標(biāo)為波長(或頻率) 縱坐標(biāo)為發(fā)光相對強(qiáng)度。發(fā)射光譜常分為帶譜和線譜,有時也會出現(xiàn)既有帶譜、 又有線譜的情況。 發(fā)射光譜的獲得方法:先把第一單色器 的波長固定,使激發(fā)的入ex不變,改變第二單色器波長,讓 不同波長的光掃描,測定它的發(fā)光強(qiáng)度,以I為縱坐標(biāo),入em 為橫坐標(biāo)得圖譜即熒光物質(zhì)的發(fā)射光譜 ;從曲線上找出最 大的入em。(3) 熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)濃度的關(guān)系用強(qiáng)度為 I0 的入射光,照射到

4、液池內(nèi)的熒光物質(zhì)時, 產(chǎn)生熒光,熒光強(qiáng)度 If 用儀器測得, 在熒光濃度很稀 (A0.05) 時,熒光物質(zhì)發(fā)射的熒光強(qiáng)度 If 與濃度有下面的關(guān)系: If=KC 。三、實(shí)驗(yàn)試劑和儀器試劑:羅丹明 B 乙醇溶液; 1- 萘酚乙醇溶液; 3,3 ' -Diethyloxadicarbocyanine iodide :標(biāo)準(zhǔn)溶液,10 卩 g/ml, 20卩g/ml,30卩g/ml,40卩g/ml和未知濃度;蒸餾水;乙醇。儀器: Fluoromax-4 熒光分光光度計(jì); 1cm 比色皿; spectrofluorometer 分析軟件。熒光分析儀器結(jié)構(gòu):它主要由光源、單色器、液槽、檢 測器和顯

5、示器組成。光源發(fā)出的紫外 - 可見或者紅外光經(jīng)過 激發(fā)單色器分光后,照到熒光池中的被檢測樣品上,樣品收 到該激發(fā)光照射后,發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā)射單色器分光,由光電 倍增管轉(zhuǎn)換成相應(yīng)電信號,再經(jīng)放大器放大反應(yīng)進(jìn)入轉(zhuǎn)換單 元,將模擬電信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)數(shù)字信號,并通過顯示器或打 印機(jī)顯示和記錄被測樣品譜圖。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 樣 品 制 備 。 配 置 不 同 濃 度 的 3,3 ' -Diethyloxadicarbocyanine iodide 溶液,分別為 10 卩 g/ml, 20卩g/ml,30卩g/ml,40卩g/ml和未知濃度。2. 翻開熒光分光光度計(jì)和電腦,預(yù)熱半個小時。3. 翻開 s

6、pectrofluorometer 分析軟件,進(jìn)行相關(guān)參數(shù) 的設(shè)置。首先檢測羅丹明 B 的激發(fā)光譜,此時固定發(fā)射波長 為560nm,檢測并保存激發(fā)光譜。然后根據(jù)所檢測的激發(fā)光譜中的最大峰值541nm來設(shè)置檢測羅丹明B的熒光光譜的激發(fā)波長,檢測并保存所得的熒光光譜。4. 檢測 1- 萘酚的熒光光譜。方法同步驟 35. 用 已 配 置 好 的 3,3 ' -Diethyloxadicarbocyanine iodide 標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行與 2 中相同的步驟, 找到最大激發(fā)波長 與最大發(fā)射波長,之后選定單點(diǎn)檢測模式,并設(shè)置成剛選擇 的最大激發(fā)波長與最大發(fā)射波長,分別對10卩g/ml, 20卩g/ml,30卩g/ml,40卩g/ml進(jìn)行檢測,記錄數(shù)據(jù),繪制工作曲 線。6. 對未知濃度 3,3 '-Diethyloxadicarb

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