imageJ測(cè)熒光

1、這里是它的官網(wǎng)：/ij/正題1、安裝后首先打開ImageJ：2、打開要分析圖片：File>open（熱鍵為Ctrl+O）3、轉(zhuǎn)換成8bit的灰度圖：Image>Type>8-bit4、黑白反轉(zhuǎn)（因?yàn)閷?duì)于光密度（OD）來說越白數(shù)值越小，純白為0；越黑數(shù)值越大，純黑理論上是無限大。因此我們需要將上一步所轉(zhuǎn)換的灰度圖進(jìn)行黑白反轉(zhuǎn)，不然的話測(cè)出來的數(shù)值就會(huì)熒光越亮反而數(shù)值越小）：Edit>Invert（熱鍵為Ctrl+Shift+I）以下為從左到右分別為原圖、8bit灰度圖及反轉(zhuǎn)后的圖：5、校正光密度（軟件默認(rèn)為測(cè)量灰度，因此我們要改為更

2、加適用的光密度，其中原理不是一兩句話能說得清的，這里忽略）：Analyze>Calibrate 在彈出來的界面的Function選擇Uncalibrated OD，并下界面左下方勾選Global calibration，然后點(diǎn)擊右下角的OK點(diǎn)擊OK后會(huì)跳出校正后的光密度曲線：如不勾選Global calibration，光密度的校正只對(duì)這張圖片有效，一般分析都要分析多張圖片，所以需要勾選，勾選后在打開另一圖片時(shí)會(huì)提示是否將此校正應(yīng)用于所有圖片，不勾選Disable Global Calibration，勾選Disable these Messages6、選擇測(cè)量單位（一般選擇象素，如有明

3、確的比例，也可以選擇相應(yīng)單位）：Analyze>Set scale點(diǎn)擊后在彈出的界面里點(diǎn)擊中間的click to Remove Scale，并勾選下面的Global（同樣的，如不選Global這個(gè)測(cè)量單位的選擇只對(duì)這張圖片有效），最后點(diǎn)擊OK7、選擇測(cè)量項(xiàng)目：Analyze>Set Measurements在彈出界面中選擇我們需要測(cè)量的項(xiàng)目Area、Integrated density，并勾選下面的Limit to threshold（這個(gè)選項(xiàng)是指只測(cè)量我們選中的范圍，如不勾選側(cè)會(huì)測(cè)量整張圖片數(shù)據(jù)），選擇后點(diǎn)擊OK8、選擇測(cè)量域值：Image>Adjust>Thresh

4、old（熱鍵為Ctrl+Shift+T）滑動(dòng)彈出界面中間的滑塊選擇適合的域值，以使的你圖片中的細(xì)胞或待測(cè)目標(biāo)剛好全部被選中，選好之后點(diǎn)擊右下角的Set在彈出來的界面點(diǎn)擊OK9、測(cè)量：Analyze>Measure（熱鍵為Ctrl+M或直接按M）10、記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算：結(jié)果中的Area為選擇范圍的面積，如果是測(cè)量的是細(xì)胞的話就是細(xì)胞在圖中的面積；IntDen就是所選范圍的IOD（光密度的總和）。結(jié)果界面中的數(shù)據(jù)可以復(fù)制到Excel等軟件中進(jìn)行計(jì)算。用IntDen的數(shù)值除以Area的數(shù)值得出來的就是這張圖片中細(xì)胞的平均光密度，以這張圖片的數(shù)據(jù)為例，即：18854/179252=0.105181532（/pixel）同法測(cè)量多張圖的平均光密度值后就可以進(jìn)行半定量比較。以下附上分別應(yīng)用Image-Pro Plus及