基于CE-LIF的唾液代謝側(cè)面圖譜研究

1、蔣婷婷蔣婷婷 10101570115鄭慧萍鄭慧萍 10101570112研究背景： 含有胺基官能團(tuán)的有機(jī)化合物是一類非常重要的生物分子。這些有機(jī)物的定量分析，在食品分析、臨床診斷和生物化學(xué)等許多領(lǐng)域中起著重要作用特別是氨基酸和生物胺的分析已成為國(guó)際研究的一個(gè)焦點(diǎn) 。 唾液不僅是一種易得的生物樣品，并且能夠提高多種生命信息，非常適合大多數(shù)疾病的早期檢測(cè)，包括心血管、腎臟和自身免疫性疾病、病毒和細(xì)菌感染、甚至癌癥。 在本課題的研究中，我們將中空纖維膜液相微萃?。℉F-LPME）技術(shù)與CE-LIF相結(jié)合，新發(fā)展了一種用于氨基化合物分析的HF-LPME/CE-LIF方法。 研究方法：所有唾液樣品均保存

2、在-20 。每個(gè)解凍的樣品通過(guò)0.22 mm的尼龍過(guò)濾器過(guò)濾 在裝有500 L唾液樣品的1.5 mL微管中加入500 L乙腈，充分混合，并離心15 min（10,000 rpm）。 取500 L樣品上清液，加入320 L FITC（1.0 mmol/L）和180 L硼酸鹽緩沖液（pH=9.23，225 mmol/ L），將反應(yīng)混合物在室溫下避光儲(chǔ)存12 h。 考慮到被分析物的衍生效率和FITC響應(yīng)峰的干擾，F(xiàn)ITC 與分析物的衍生比例定為3:1。萃取前，將反應(yīng)物放于4 冰箱中避光保存。 中空纖維段長(zhǎng)度為5 cm。將中空纖維段用丙酮超聲波處理1 min，去除纖維的污染物。待溶劑完全蒸發(fā)后，將中空

3、纖維用正辛醇浸漬30 s。 用10 L進(jìn)樣針使空氣通過(guò)中空纖維的內(nèi)部，以除去過(guò)量的有機(jī)溶劑。 注入10 L 300 mmol/ L的NaOH溶液（接受相），將上述中空纖維膜的一端密封。提取過(guò)程的優(yōu)化，使用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行（10.0 nmol/L）。 配8 mL的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液（含HCl濃度為 5 mmol/L）在10 mL的燒杯中，將雙端密封的中空纖維放入其中，用鋁箔覆蓋，防止蒸發(fā)。然后，將磁力攪拌器接通，以500 rpm的轉(zhuǎn)速提取。 一定萃取時(shí)間后，關(guān)閉磁力攪拌器，取出中空纖維。將其一端用刀片切斷，中空纖維的受體溶液被吸入注射器，用于CE-LIF分析。 基于自組裝CE-LIF系統(tǒng)，使用12g

4、/ L PSS / 3 mmol/ L CTAB / 80 mmol/ L Na2B4O7 -NaOH緩沖液（pH12.35）進(jìn)行電泳分離。 LIF檢測(cè)器的激發(fā)波長(zhǎng)為483 nm，發(fā)射中心波長(zhǎng)為520 nm。所有樣品采用電動(dòng)進(jìn)樣8 s（22 kV）。所有實(shí)驗(yàn)均在室溫下進(jìn)行。Aluminum coverBeaker (10 mL)Donor phase (8 mL)Magnetic stirrerPorous hollow fiber impregnated with organic solventAcceptor phase (10 L)動(dòng)態(tài)三相HF-LPME的原理示意圖 研究結(jié)果：（一）方法

5、驗(yàn)證 將一系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（六種分析物，每種含有0.01-5.0 mol/L）進(jìn)行測(cè)試，以確定線性關(guān)系。表表1. 六種分析物的回歸方程及檢測(cè)下限和定量限（六種分析物的回歸方程及檢測(cè)下限和定量限（n=3）AnalytesRegression equationbr2Linear range (M)EFsLOD (nM)LOQ (nM)Puty=32.8x+1736.00.99850.01-5.01120.0170.057Cady=41.5x+2456.50.99830.01-5.02180.00720.024Spey=10.2x+512.40.99800.02-5.0630.130.43Argy=

6、6.3x+32.50.99950.02-5.0380.230.75Lysy=13.4x+299.90.99830.02-5.0230.230.77Orny=13.4x+276.50.99950.02-5.0190.260.88結(jié)果表明，峰面積和遷移時(shí)間的RSD分別為腐胺0.26，4.64，尸胺0.28，4.75，精氨酸1.28，4.70，賴氨酸0.56，4.64，鳥(niǎo)氨酸0.63，4.64，亞精胺0.69，4.75。 （二）應(yīng)用0.30.60.91.21.51.82.12.42.722242628303234363840424446 0.0遷移時(shí)間 / minRF U / mV1234567A標(biāo)準(zhǔn)混合溶液（A） 的電泳圖在優(yōu)化條件下，采用建立的HF-LPME/CE-LIF用于健康志愿者（n=10）和口腔疾?。ò谇话⒖诔?、牙齦炎、牙菌斑和牙周炎）患者（n=30）的唾液樣品分析，并對(duì)三種生物胺及其前體氨基酸進(jìn)行定量。 00.20.40.60.81.01.21.41.61.82.022242628303234363840424446481234567遷移時(shí)間 / minRFU / mVB健康志愿者唾液樣品電泳圖（B） 分析結(jié)果表明： 口腔疾病患者特別是牙齦炎、牙齦癌和口臭患者的唾液中尸胺、腐胺和亞精胺的含