水質(zhì)微生物檢測基礎(chǔ)

1、微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)培訓(xùn)寧波安聯(lián)檢測有限公司微生物的定義微生物的定義 微生物微生物（microorganism, microbe）:存在于自然界存在于自然界中的一群體型細(xì)小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼看不見，必須中的一群體型細(xì)小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼看不見，必須借助于特殊儀器放大后才能觀察到的微小生物借助于特殊儀器放大后才能觀察到的微小生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性可分為按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性可分為: :原核類:僅有原始核質(zhì)，無核仁或核膜，細(xì)胞器很不完善。如細(xì)菌、僅有原始核質(zhì)，無核仁或核膜，細(xì)胞器很不完善。如細(xì)菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體、螺旋體放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體、

2、螺旋體 真核類:細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體，細(xì)胞器完細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體，細(xì)胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生動(dòng)物、藻類原生動(dòng)物、藻類非細(xì)胞類:體積微小，能通過除菌過濾器。如病毒和朊病毒等體積微小，能通過除菌過濾器。如病毒和朊病毒等按其致病性可分為按其致病性可分為: :病原性微生物非病原性微生物微生物的特點(diǎn)微生物的特點(diǎn)個(gè)體小個(gè)體小,面積大：面積大：小于小于0.1mm。肉眼不可見。肉眼不可見。分布廣分布廣, ,種類多（種類多（10萬多種）萬多種） ：自然界中到處都：自然界中到處都有，如水、空氣、土壤等有，如水、空氣、土壤等,

3、 , 土壤中的數(shù)量最多。土壤中的數(shù)量最多。代謝強(qiáng)，轉(zhuǎn)化快：代謝強(qiáng)，轉(zhuǎn)化快：發(fā)酵乳糖的細(xì)菌在發(fā)酵乳糖的細(xì)菌在1小時(shí)內(nèi)可小時(shí)內(nèi)可分解其自重分解其自重100010000倍的乳糖；產(chǎn)朊假絲酵母倍的乳糖；產(chǎn)朊假絲酵母合成蛋白質(zhì)的能力比食用公牛強(qiáng)合成蛋白質(zhì)的能力比食用公牛強(qiáng)10萬倍萬倍生長旺，繁殖快：生長旺，繁殖快：微生物有驚人的繁殖速度，大微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代適應(yīng)性強(qiáng)，易變異適應(yīng)性強(qiáng)，易變異（耐藥性產(chǎn)生的原因）（耐藥性產(chǎn)生的原因）葡萄球菌葡萄球菌 菌落單位菌落單位菌落單位菌落單位-CFU 由單個(gè)菌細(xì)胞或幾個(gè)同種菌細(xì)胞在培養(yǎng)基上長成

4、肉由單個(gè)菌細(xì)胞或幾個(gè)同種菌細(xì)胞在培養(yǎng)基上長成肉眼可見的菌落，每個(gè)菌落就是眼可見的菌落，每個(gè)菌落就是1CFU光滑型菌落光滑型菌落粗糙型菌落粗糙型菌落微生物的分布微生物的分布土壤：土壤：是微生物生活的最適環(huán)境是微生物生活的最適環(huán)境水：水：僅次于土壤的微生物分布、定居的第二場所僅次于土壤的微生物分布、定居的第二場所空氣空氣：空氣中的微生物主要來源于帶有微生物菌體及孢子空氣中的微生物主要來源于帶有微生物菌體及孢子的灰塵，這類微生物大多數(shù)是腐生性的，還來源于人和動(dòng)的灰塵，這類微生物大多數(shù)是腐生性的，還來源于人和動(dòng)物，它們大多數(shù)是通過呼吸道排出的，其中也包含有病原物，它們大多數(shù)是通過呼吸道排出的，其中也包

5、含有病原微生物，懸浮在大氣中。微生物，懸浮在大氣中。 微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu) 一、細(xì)菌一、細(xì)菌 細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌，以二分裂方式無性細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌，以二分裂方式無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。繁殖的原核微生物，分布廣泛。1.細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu) （1） 球菌球菌 多數(shù)球菌直徑在多數(shù)球菌直徑在1微米左右，外觀呈球形微米左右，外觀呈球形或近似球形。由于繁殖時(shí)分裂平面不同可形成不同的排或近似球形。由于繁殖時(shí)分裂平面不同可形成不同的排列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。 （

6、2） 桿菌桿菌 形態(tài)多數(shù)呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多形態(tài)多數(shù)呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多數(shù)呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈數(shù)呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈狀桿菌、球桿菌等。狀桿菌、球桿菌等。 （3） 螺形菌螺形菌 菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺桿菌。桿菌。 細(xì)菌雖小，仍具有一定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。細(xì)胞壁、細(xì)胞細(xì)菌雖小，仍具有一定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)等各種細(xì)菌都有，是細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)。膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)等各種細(xì)菌都有，是細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)。球菌球菌(coccus)腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌桿菌桿

7、菌(bacillus)不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。炭疽芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌 3-10 m3-10 m大大中中大腸埃希菌大腸埃希菌 2-3 m2-3 m小小布魯菌布魯菌 0.6-1.5 m0.6-1.5 m細(xì)菌的繁殖細(xì)菌的繁殖 細(xì)菌生長速度很快，一般約細(xì)菌生長速度很快，一般約20min分裂一次。若按此速度分裂一次。若按此速度計(jì)算，細(xì)菌群體將龐大到難以想象的程度。但事實(shí)上由于計(jì)算，細(xì)菌群體將龐大到難以想象的程度。但事實(shí)上由于細(xì)菌繁殖中營養(yǎng)物質(zhì)的逐漸消耗，有害代謝產(chǎn)物的逐漸積細(xì)菌繁殖中營養(yǎng)物質(zhì)的逐漸消耗，有害代謝產(chǎn)物的逐漸積累，細(xì)菌不可能始終保持高速度的無

8、限繁殖。經(jīng)過一段時(shí)累，細(xì)菌不可能始終保持高速度的無限繁殖。經(jīng)過一段時(shí)間后，細(xì)菌繁殖速度逐漸減慢，死亡菌數(shù)增多，活菌增長間后，細(xì)菌繁殖速度逐漸減慢，死亡菌數(shù)增多，活菌增長率隨之下降并趨于停滯。率隨之下降并趨于停滯。熱原與內(nèi)毒素?zé)嵩c內(nèi)毒素許多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱許多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱原。原。熱原是微量即可引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高熱原是微量即可引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)的總稱。的物質(zhì)的總稱。主要物質(zhì)為細(xì)菌內(nèi)毒素、胞壁酰主要物質(zhì)為細(xì)菌內(nèi)毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗體復(fù)合物、半抗體原物質(zhì)和某二肽及其他抗原抗體復(fù)合物、半抗體原物質(zhì)和某些藥物（類固醇）等。些藥物（

9、類固醇）等。1、細(xì)菌內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分，主、細(xì)菌內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分，主要是脂多糖。要是脂多糖。 2、細(xì)菌內(nèi)毒素生物學(xué)活性可分為兩類：一是致病作用，一、細(xì)菌內(nèi)毒素生物學(xué)活性可分為兩類：一是致病作用，一是保護(hù)性反應(yīng)。是保護(hù)性反應(yīng)。3、其他理化特性、其他理化特性耐熱性：耐熱性：120加熱加熱4h，可破壞，可破壞98%。180加熱加熱2h或或250加熱加熱30min，才可徹底破壞。，才可徹底破壞。濾過濾過性：其體積小，約在性：其體積小，約在15nm之間，故能通過濾器進(jìn)入濾液之間，故能通過濾器進(jìn)入濾液中。中。具有水溶性及不揮發(fā)性。具有水溶性及不揮發(fā)性。能被強(qiáng)酸

10、、強(qiáng)堿和氧化能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和氧化劑破壞劑破壞消毒與滅菌消毒與滅菌下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對(duì)微生物的殺滅程度下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對(duì)微生物的殺滅程度 消毒：消毒：殺死物體上病源微生物的方法殺死物體上病源微生物的方法,并不一定能殺死細(xì)并不一定能殺死細(xì)菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。滅菌：滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。包括殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑菌：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為

11、抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細(xì)菌的繁殖。各種抗生素，可抑制細(xì)菌的繁殖。防腐：防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法，細(xì)菌一般不防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)常死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)常為防腐劑。為防腐劑。無菌：無菌：不存在活的細(xì)菌。防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的不存在活的細(xì)菌。防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)，為無菌操作。操作技術(shù)，為無菌操作。消毒與滅菌消毒與滅菌l輻射滅菌法輻射滅菌法 1、紫外線紫外線：波長波長200-300nm的紫外線具有殺的紫外線具有殺 菌作用。穿透物

12、質(zhì)的能力很差，一般要求紫外燈菌作用。穿透物質(zhì)的能力很差，一般要求紫外燈距離照射物不超過距離照射物不超過1.0米為宜米為宜 2、電離輻射、電離輻射 高速電子、高速電子、X射線、射線、射線射線 3、微波、微波 波長波長1mm1ml熱力滅菌法：使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細(xì)胞膜溶使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細(xì)胞膜溶解，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。解，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。1、干熱滅菌法干熱滅菌法采用灼燒或干熱空氣滅菌采用灼燒或干熱空氣滅菌 ，使用方便，使用方便，適用于玻璃器皿和瓷器等耐高溫的固體物的滅菌適用于玻璃器皿和瓷器等耐高溫的固體物的滅菌 。2、濕熱滅菌法濕熱滅菌法利用熱蒸汽殺死微生

13、物。利用熱蒸汽殺死微生物。 高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法法 ，蒸汽的穿透力較熱空氣強(qiáng)可以殺死一切微生，蒸汽的穿透力較熱空氣強(qiáng)可以殺死一切微生物，包括細(xì)菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐物，包括細(xì)菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐高溫的個(gè)體高溫的個(gè)體 。最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。水質(zhì)微生物水質(zhì)微生物 采樣采樣自來水：自來水：現(xiàn)將自來水龍頭用火焰燒灼3min，滅菌；再打開水龍頭防水5min（常用的水龍頭可以 防水23min）；采樣水置于無菌錐形瓶中，采樣總量占錐形瓶的80%左右，以便搖勻。水源水：水源水：選取可

14、疑及有代表性的水域，一般距離水面1015cm采樣；河道水采樣時(shí)，將瓶口朝向、水流方向，在指定位置打開瓶蓋。采樣結(jié)束后，樣品冷藏運(yùn)輸，盡快檢測。樣品處理、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)步驟及報(bào)告詳見作業(yè)指導(dǎo)書革蘭氏染色革蘭氏染色法法 革蘭染色法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生革蘭染色法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生 ChristainChristain Gram Gram于于18841884年創(chuàng)立的一種細(xì)菌年創(chuàng)立的一種細(xì)菌復(fù)染色復(fù)染色方法，已有方法，已有130130多年的歷史，仍在廣泛使用。多年的歷史，仍在廣泛使用。結(jié)晶紫結(jié)晶紫盧戈碘液液盧戈碘液液95%乙醇乙醇復(fù)紅復(fù)紅G-菌：菌：類脂質(zhì)類脂質(zhì)肽聚糖肽聚糖G+菌：菌：肽聚糖肽聚糖交聯(lián)度大交聯(lián)度大

15、類脂質(zhì)類脂質(zhì)通透性學(xué)說通透性學(xué)說、等電學(xué)說、化學(xué)學(xué)說v鑒別細(xì)菌：把細(xì)菌分成鑒別細(xì)菌：把細(xì)菌分成G G+ +和和G G- -兩大類。兩大類。v選擇抗菌藥物：例如選擇抗菌藥物：例如G G+ +球菌球菌對(duì)青霉素敏感對(duì)青霉素敏感, ,G G- -桿菌桿菌耐藥。耐藥。v了解細(xì)菌的致病機(jī)理：了解細(xì)菌的致病機(jī)理：G G+ +菌大多產(chǎn)生外毒素菌大多產(chǎn)生外毒素,G,G- -菌菌產(chǎn)生內(nèi)毒素。產(chǎn)生內(nèi)毒素。革蘭染色的步驟革蘭染色的步驟 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色紫紫碘酒紅，分分半半碘酒紅，分分半半意義滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)無無菌菌操操作作 細(xì)菌合適 細(xì)菌較多接種環(huán)取鹽接種環(huán)取鹽水水3ul3ul2 2滴滴, ,水滴間距小于水滴間距小于2cm2cm。 取 菌 苔 少 許取 菌 苔 少 許（1mm1mm小菌落半個(gè)）小菌落半個(gè)）與鹽水混勻，涂成與鹽水混勻，涂成大于大于1cm1cm2 2均勻涂膜均勻涂膜。涂畢涂畢環(huán)移至涂膜中