常用的展開劑體系

1、常用的展開劑體系科研必讀發(fā)布日期：2011-4-27 15:09:05閱讀次數(shù)：36常用的展開劑體系1. 極性最大：CH2CI2: MeOH H2O=3 2: 0.5該體系可以適用于同時(shí)含有-COOH和-NH2的物質(zhì)2. 極性較大：MeOH/CH2CI2=5% 10% 20% 30%該體系可以適用于同時(shí)含有-COOH或-NH2的物質(zhì)3. 極性較小：EA/PE=5%-100%該體系可以適用于含有 OH的物質(zhì)。 另外 5% EA/CH2Cl2 相當(dāng)于 30% EA/PE 具有裸露-COOK-NH2的物質(zhì)的化合物，一般用 10% MeOH/CH2CI展開劑 TLC的Rf值最好小于0.5 TLC檢測的

2、站開點(diǎn)，最好是圓形或橢圓形，有拖尾沒關(guān)系，但底部一定不能平（可能是外因推 上去，使不同的點(diǎn)混到一起） 如果走完后的點(diǎn)顯得很長，可在展開劑中滴加酸（AcOH或鍵（氨水或三乙胺）。若滴加三乙胺，須在顯色前（特別是碘顯色）吹干！選擇適當(dāng)?shù)恼归_劑是首要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷己烷苯 乙醚Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,Petroleumether/CH2CI2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展開劑的比例要靠嘗試.一

3、般根據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個(gè)分離效果好的展開劑。展開劑的選擇條件：對(duì)的所需成分有良 好的溶解性；可使成分間分開；待測組分的 Rf在0.20.8之間，定量測定在0.30.5之間；不與 待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；沸點(diǎn)適中，黏度較小；展開后組分斑點(diǎn)圓且集中；混合溶劑最好 用新鮮配制。一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調(diào)節(jié) 溶劑系統(tǒng)的極性，以達(dá)到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯 仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調(diào)節(jié)，適合

4、于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木 脂素和萜類的分離；強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調(diào)節(jié)，適合于極性 很大的生物堿類化合物的分離。很多時(shí)候，展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達(dá)到最佳效果。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中，為了實(shí)現(xiàn)一個(gè)配體與其他雜質(zhì)有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合，最后才找到石油醚一EtOAc-HCOOH5.5 : 3.5 :0.1 ）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時(shí)，采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑，如果有分開的跡象，再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑），達(dá)到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點(diǎn)較“拖”），最好是換溶劑。對(duì)于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分

5、解的物質(zhì)，在展開劑里往往加一點(diǎn)點(diǎn)三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質(zhì)來中和硅膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無疑是較好的 選擇。）分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關(guān)系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的 粗細(xì)程度，酸性強(qiáng)弱不同，從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個(gè)廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個(gè)廠家的就不行。 溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對(duì)分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對(duì)分離效果影響也很明顯，在實(shí)驗(yàn)中我 們發(fā)現(xiàn)有時(shí)同一展開條件，上下午的Rf截然不同展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮在進(jìn)行薄層層析時(shí)，首先應(yīng)該知道未知化學(xué)成分的類型，其極性的大致

6、歸屬，從提取液或從色譜柱的流動(dòng) 相極性可知，另外某樣品里含多種化學(xué)成分先按極性不同大致分，然后細(xì)分，對(duì)于分離未知的化學(xué)物質(zhì)， 展開劑的選擇也是一個(gè)摸索的過程，不應(yīng)該僅僅從展開劑考慮，多因素綜合衡量！溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對(duì)組分分離關(guān)系極大。在柱層析時(shí)所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣 上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時(shí)常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì) 這兩者結(jié)合起來加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層析時(shí)，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑 為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對(duì)某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的 吸附劑（如以硅藻土或滑石粉

7、代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。（梯在柱層操作時(shí)，被分離樣品在加樣時(shí)可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品 的溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一 個(gè)十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個(gè)成分逐個(gè)被洗脫。如果極性增大過訣度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時(shí)可以用溶劑的介電常數(shù)（£）來表示。介電常 數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對(duì)非極性吸附劑，如活性 炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強(qiáng)。

8、3 被分離物質(zhì)的性質(zhì)：被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個(gè)要素，彼此緊密相 連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個(gè)成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對(duì) 極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強(qiáng)。當(dāng)然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團(tuán)的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會(huì)更大些，在同系 物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會(huì)強(qiáng)些。總之，只要兩個(gè)成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在 于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強(qiáng)度，與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來考慮。 首先要考慮被分離物質(zhì)的極性。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但非極性基團(tuán)，則需選

9、 用吸附性較強(qiáng)的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進(jìn)行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選 擇吸附性能較弱的吸附劑（一般山W級(jí)）。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增，或可應(yīng)用薄 層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度 有很大關(guān)系?，F(xiàn)以實(shí)例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系。如有多組分的混合物，象 植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當(dāng)以硅膠為吸附劑時(shí)，使油脂被吸附 后選用一系列混合溶劑進(jìn)行洗脫，油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。又如對(duì)于C-27甾體皂甙元類成分，能因其分字中羥基

10、數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂甙元溶于含有 氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低，亦即采用苯或含5%氯仿的苯，即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時(shí)，需用不 同的溶劑才能達(dá)到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系。（二）簿層層析：薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平 面如玻璃片上，形成一薄層進(jìn)行層析時(shí)一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。1 薄層層析的特點(diǎn)：薄層層析在應(yīng)用

11、與操作方面的特點(diǎn)與柱層析的比較。2 吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細(xì)，一般應(yīng)小于250目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預(yù)制薄層一般活度不宜過高，以H山級(jí)為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細(xì)而定，薄層粒度越細(xì)，展開距離相應(yīng)縮 短，一般不超過10厘米，否則可引起色譜擴(kuò)散影響分離效果。3展開劑的選擇：薄層層析，當(dāng)吸附劑活度為一定值時(shí)（如H或山級(jí)），對(duì)多組分的樣品能否獲得滿 意的分離，決定于展開劑的選擇。中草藥化學(xué)成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無極性、 弱極性、中極性與強(qiáng)極性。但在實(shí)際工作中， 顯色劑：碘

12、：適用于不飽和或者芳香族化合物配制方法：在100ml廣口瓶中，放入一張濾紙，少許碘粒。或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅膠 高錳酸鉀適用于含還原性基團(tuán)化合物，比如羥基，氨基，醛配制方法：1.5g KMnO4 10g K2CO3 1.25mL 10% NaOH200mL水.使用期3個(gè)月磷鉬酸（PMA）廣譜配制方法：10 g of 磷鉬酸100 mL乙醇紫外燈適用于含共軛基團(tuán)的化合物，芳香化合物 硫酸鈰：生物堿配制方法：10%硫酸鈰（IV） 15%硫酸的水溶液氯化鐵苯酚類化合物配制方法：1% FeCI3 50%乙醇水溶液.桑色素（羥基黃酮）廣譜，有熒光活性配制方法：0.1%桑色素 甲醇茚三酮適用

13、于氨基酸配制方法：1.5g茚三酮100mL of正丁醇3.0mL醋酸二硝基苯肼（DNP）適用于醛和酮配制方法：12g二硝基苯肼 60mL濃硫酸80mL水200mL乙醇香草醛（香蘭素）廣譜配制方法：15g香草醛250mL乙醇2.5mL濃硫酸溴甲酚綠適用于羧酸，pKa=5.0配制方法：在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚綠，緩慢滴加 0.1M的NaOH水溶液，剛好出現(xiàn)藍(lán)色即至。鉬酸鈰廣譜配制方法：235 mL水12 g鉬酸氨0.5 g 鉬酸鈰氨15 mL濃硫酸茴香醛（對(duì)甲氧基苯甲醛）1廣譜配制方法：135乙醇5 mL濃硫酸1.5 mL of 冰醋酸3.7 mL茴香醛，劇烈攪拌，使混合均勻.茴香

14、醛（對(duì)甲氧基苯甲醛）2適用于萜烯，桉樹腦（cineoles）, withanolides,出油柑堿（acronycine）配制方法：茴香醛：HCIO4:丙酮：水（1:10:20:80）經(jīng)常需要利用溶劑的極性大小，對(duì)展開劑的極性予以調(diào)整。（一）有機(jī)合成中展開劑的選擇做有機(jī)合成時(shí)走板子是常有的事，展開劑的選擇就至關(guān)重要了。選擇適當(dāng)?shù)恼归_劑是首要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷己烷苯 乙醚vTHFZ酸乙酯 丙酮 乙醇 甲醇使用單一溶劑，往往不能達(dá)到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使 用一個(gè)高極性和低級(jí)性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，展開劑的比例要

15、靠嘗試.一般根據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個(gè)分離效果好的展開劑。展開劑的選擇條件：對(duì)的所需成分有良好的溶解性；可使成分間分開；待測組分的Rf在0.20.8之間，定量測定在0.30.5之間；不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；沸點(diǎn)適中，黏度較?。徽归_ 后組分斑點(diǎn)圓且集中；混合溶劑最好用新鮮配制。一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達(dá)到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調(diào)節(jié)，適合

16、于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離；強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調(diào)節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。很多時(shí)候，展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達(dá)到最佳效果。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中，為了實(shí)現(xiàn)一個(gè)配體與其他雜質(zhì)有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合，最后才找到石油醚一EtOAc HCOOH5.5 :3.5 : 0.1）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時(shí)，采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑，如果有分開 的跡象，再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑），達(dá)到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點(diǎn)較“拖”），最好是換溶劑。對(duì)于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的

17、物質(zhì)，在展開劑里往往加一點(diǎn)點(diǎn)三乙胺，氨水，吡啶 等堿性物質(zhì)來中和硅膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無疑是較 好的選擇。）分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關(guān)系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細(xì)程度，酸性強(qiáng)弱不同，從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個(gè)廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個(gè)廠家的就不行。溶 劑的含水量和雜質(zhì)含量對(duì)分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對(duì)分離效果影響也很明顯，在實(shí)驗(yàn)中我們 發(fā)現(xiàn)有時(shí)同一展開條件，上下午的 Rf截然不同。展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮，在進(jìn)行薄層層析時(shí)，首先應(yīng)該知道未知化學(xué)成分的類型，其極性的大

18、致歸屬，從提取液或從色譜柱的流動(dòng)相極性可知，另外某樣品 里含多種化學(xué)成分先按極性不同大致分，然后細(xì)分，對(duì)于分離未知的化學(xué)物質(zhì)，展開劑的選擇也是一個(gè)摸 索的過程，不應(yīng)該僅僅從展開劑考慮，多因素綜合衡量！溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對(duì)組分分離關(guān)系 極大。在柱層析時(shí)所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時(shí)常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層 析時(shí)，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分，則須選用 極性溶劑為洗脫劑。如果對(duì)某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉

19、代替硅膠），則洗 脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。在柱層操作時(shí)，被分離樣品在加樣時(shí)可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品 溶解后加入。溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個(gè)十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個(gè)成分逐個(gè)被洗脫。 如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時(shí)可以用溶劑的介電常數(shù)（£）來表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對(duì) 非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性 溶劑中為強(qiáng)

20、。被分離物質(zhì)的性質(zhì)被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個(gè)要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個(gè)成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對(duì)極性吸附劑而言，成 分的極性大，吸附住強(qiáng)。當(dāng)然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團(tuán)的數(shù)目愈多，被吸附的 住能就會(huì)更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會(huì)強(qiáng)些。總之，只要兩個(gè)成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強(qiáng)度，與溶劑的性質(zhì)這三 者的相互關(guān)系來考慮。首先要考慮被分離物質(zhì)的極性。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧 但非極性基團(tuán)，則需選用吸附性較強(qiáng)的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進(jìn)行洗脫。但多數(shù)中藥成分 的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般山W級(jí)）。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一 梯度遞增，或可應(yīng)用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系。現(xiàn)以實(shí)例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系。如有