高考生物熱點(diǎn)題型和提分秘籍專(zhuān)題34微生物的培養(yǎng)和利用(含解析)

1、- 1 - 專(zhuān)題三十四微生物的培養(yǎng)和利用【高頻考點(diǎn)解讀】1. 微生物的分離和培養(yǎng)。2. 某種微生物數(shù)量的測(cè)定。3. 培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。【熱點(diǎn)題型】題型一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)例 1、可以作為硝化細(xì)菌碳源、氮源和能源的是( ) a co2、nh3、光能b (ch2o)、n2、nh3c co2、nh3、 nh3d (ch2o)、nh3、n2【提分秘籍】1培養(yǎng)基的種類(lèi)(1) 按物理狀態(tài)分類(lèi)：培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基加凝固劑( 如瓊脂 ) 微生物分離、 鑒定， 活菌計(jì)數(shù)， 菌種保藏(2) 按功能分類(lèi)：種類(lèi)制備方法原理用途舉例選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)依據(jù)某些

2、微生物對(duì)某些物質(zhì)的抗性而設(shè)計(jì)從眾多微生物中分離所需的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中依據(jù)微生物鑒別不同種伊紅美藍(lán)- 2 - 加入某種指示劑或化學(xué)藥品產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)類(lèi)的微生物培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌2. 消毒和滅菌的比較3. 微生物的純化培養(yǎng)平板劃線(xiàn)法與稀釋涂布平板法方法平板劃線(xiàn)法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1) 接種環(huán)的灼燒：第一次劃線(xiàn)前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物每次劃線(xiàn)前：殺死殘留菌種，保證每次劃線(xiàn)菌種來(lái)自上次劃線(xiàn)末端劃線(xiàn)結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(1) 稀釋操作時(shí)： 每支試管及

3、其中的9 ml 水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰12 cm 處- 3 - 注意事項(xiàng) (2) 灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種(3) 劃線(xiàn)時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4) 劃線(xiàn)用力要大小適當(dāng)， 防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破 (2) 涂布平板時(shí)：涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70% 酒精消毒，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體菌落培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的

4、水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染4. 平板劃線(xiàn)法純化大腸桿菌時(shí)不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同(1) 第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。(2) 每次劃線(xiàn)之前：殺死上次劃線(xiàn)后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線(xiàn)的菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端。(3) 劃線(xiàn)結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者?！痉椒ㄒ?guī)律】自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同(1) 自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來(lái)自含碳、含氮的無(wú)機(jī)物，而異養(yǎng)微生物需要的碳源、氮源來(lái)自含碳、含氮的有機(jī)物，因此可根據(jù)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類(lèi)型。(2) 含氮無(wú)機(jī)物不但能給自養(yǎng)微生物提供氮源，也能作為能源物質(zhì)，提

5、供能量，如nh3既作為硝化細(xì)菌的氮源也作為能源。【舉一反三】如下所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基的配方，請(qǐng)回答：- 4 - (1) 依物理性質(zhì)，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基；依用途劃分，則屬于_培養(yǎng)基。(2) 根據(jù)培養(yǎng)基原料，所培養(yǎng)微生物的同化作用的類(lèi)型是_，培養(yǎng)的微生物可能是_。(3) 該培養(yǎng)基中的碳源是_。不論何種培養(yǎng)基，在各成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是 _和_；倒平板時(shí)，一般需冷卻至_左右，在 _附近操作。(4) 若用該培養(yǎng)液培養(yǎng)纖維素分解菌，應(yīng)除去的物質(zhì)是_，至少應(yīng)加入的物質(zhì)是_，為檢測(cè)纖維素分解菌的存在與否還應(yīng)加入_，形成 _色復(fù)合物，若產(chǎn)生 _，則證明有纖維素分解菌存在。【熱點(diǎn)題型】題型二分

6、解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)例 2、用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是( ) a 涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230 b 涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215 和 260，取平均值238 - 5 - c 涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212 和 256，取平均值163 d 涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240 和 250，取平均值233 解析：在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3 個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，所以a、b不正確。 c項(xiàng)雖涂布了3 個(gè)平板，但是，其中1 個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩

7、個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3 個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。答案： d 【提分秘籍】 1 篩選菌株的原理微生物的選擇培養(yǎng)：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1) 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)算。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。(2) 間接計(jì)數(shù)法 ( 活菌計(jì)數(shù)法 ) ：原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有

8、多少活菌。操作：a設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。b為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)(cv) m，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，v代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，m代表稀釋倍數(shù)。- 6 - 4鑒定分解尿素的細(xì)菌(1) 原理： co(nh2)2h2o脲酶co22nh3；由于 nh3的產(chǎn)生，培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，ph升高，因此可通過(guò)檢測(cè)ph的變化來(lái)判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。(2) 方法： 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌， 若指示劑變紅，則 ph升高，說(shuō)明該種細(xì)菌能分解尿素。5. 選擇培養(yǎng)基的選

9、擇方法(1) 在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在主要營(yíng)養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。(2) 改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。例如缺乏氮源時(shí)可以分離出固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出消除石油污染的微生物。(3) 改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境下培養(yǎng)，可以得到耐高溫的微生物。【方法規(guī)律】微生物分離的常用方法(1) 培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分的改變可達(dá)到分離微生物的目的。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離固氮微生物。(2) 當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。 如石油是唯一碳源時(shí)，可以抑制不

10、能利用石油的微生物的生長(zhǎng)，使能夠利用石油的微生物生存，達(dá)到分離出能消除石油污染的微生物的目的。(3) 改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)，只能得到耐高溫的微生物?！九e一反三】下面是探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)，完成下列問(wèn)題：(1) 實(shí)驗(yàn)原理： 農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將用表層土制成的稀泥漿，接種到無(wú)氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長(zhǎng)繁殖。用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離開(kāi)來(lái)。(2) 材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛9 ml 無(wú)菌水的試管、無(wú)菌吸管、無(wú)菌涂布器、

11、無(wú)菌培養(yǎng)皿、盛90 ml 無(wú)菌水的錐形瓶、恒溫箱。(3) 方法步驟：倒平板：分別將無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，操作過(guò)程應(yīng)在火焰旁。- 7 - 制備土壤稀釋液：取土樣10 g 加入盛有90 ml 無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。用無(wú)菌吸管吸取上清液1 ml，轉(zhuǎn)至 9 ml 的無(wú)菌水的大試管中，依次稀釋到107稀釋度。涂布：按照由107103稀釋度的順序分別吸取0.1 ml 進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無(wú)氮培養(yǎng)基一般應(yīng)至少涂布_個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1 個(gè)平板。培養(yǎng)：放入恒溫箱內(nèi)，在2830 下培養(yǎng)34 天。細(xì)菌的計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)為_(kāi)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果測(cè)試的平均值

12、為50，則每克樣品中的菌落數(shù)是_( 稀釋度是105) 。(4) 預(yù)測(cè)結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上的菌落數(shù)應(yīng)多于無(wú)氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。請(qǐng)說(shuō)明原因_ _ _ ?！緹狳c(diǎn)題型】題型三分解纖維素的微生物的分離例 3、下列有關(guān)剛果紅染色法的敘述，不正確的是( ) a 剛果紅可以在細(xì)菌菌落形成前倒平板時(shí)加入b 剛果紅可以在菌落形成后加入c 剛果紅在菌落形成前倒平板時(shí)加入，加入的剛果紅不需要滅菌d 在菌落形成后加入剛果紅時(shí)，剛果紅不需要滅菌- 8 - 【提分秘籍】 1 篩選原理2實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量梯度稀釋涂布平板：將樣品涂布于鑒

13、別培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落3兩種剛果紅染色法的比較方法先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)在倒平板時(shí)就加入剛果紅- 9 - 過(guò)程培養(yǎng)基長(zhǎng)出菌落覆蓋cr溶液 ( 質(zhì)量濃度為 1 mg/ml) 1015 min倒出 cr溶液加入nacl 溶液 ( 物質(zhì)的量濃度為1 mol/l) 15 min倒掉 nacl 溶液產(chǎn)生透明圈配制 cr溶液 ( 質(zhì)量濃度為10 mg/ml)滅菌按照1 ml cr 溶液 /200 ml培養(yǎng)基比例混勻倒平板培養(yǎng)透明圈優(yōu)點(diǎn)顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作簡(jiǎn)便，不存在菌落的混雜問(wèn)題缺點(diǎn)操作繁瑣，加入剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含淀粉

14、類(lèi)物質(zhì)，可能使產(chǎn)生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假陽(yáng)性反應(yīng)有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)降解剛果紅形成明顯透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分【舉一反三】幽門(mén)螺桿菌 (hp) 感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：配制培養(yǎng)基 滅菌、倒平板 x 培養(yǎng) 觀(guān)察請(qǐng)回答：(1) 在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)閔p含有 _，它能以尿素作為氮源；若有hp，則菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn) _色環(huán)帶。(2) 下列對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是_滅菌。a高壓蒸汽 b紫外燈照射c70% 酒精浸泡 d 過(guò)濾(3) 步驟 x表示

15、 _。在無(wú)菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋?zhuān)?然后將菌液 _到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得_菌落。(4) 在培養(yǎng)時(shí)， 需將培養(yǎng)皿倒置并放在_中。若不倒置培養(yǎng)， 將導(dǎo)致 _。- 10 - (5) 臨床上用14c呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染hp ，其基本原理是hp能將14c標(biāo)記的_分解為nh3和14co2。解析：此題考查微生物的分離與培養(yǎng)知識(shí)。(1) 幽門(mén)螺桿菌 (hp) 含有脲酶，能以尿素為氮源，在加入尿素和酚紅指示劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)hp，由于尿素經(jīng)脲酶的降解可產(chǎn)生堿性的nh3，nh3能使培養(yǎng)基中的酚紅由紅黃色變成紅色，故菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2) 由于尿素加熱會(huì)分解，對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌最好

16、用g6玻璃砂漏斗過(guò)濾。(3) 微生物的分離和培養(yǎng)步驟是：配制培養(yǎng)基滅菌、倒平板接種培養(yǎng)。為獲得單菌落，接種操作前應(yīng)先將菌液稀釋?zhuān)缓髮⒕和坎嫉脚囵B(yǎng)基平面上即可。(4) 微生物培養(yǎng)時(shí)需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，若不倒置培養(yǎng)，則無(wú)法形成單菌落。 (5) 幽門(mén)螺桿菌能將14c標(biāo)記的尿素分解為nh3和14co2，故臨床上常用14c呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體內(nèi)幽門(mén)螺桿菌的存在。答案： (1) 脲酶紅(2)d (3) 接種涂布單(4) 恒溫培養(yǎng)箱無(wú)法形成單菌落(5) 尿素【高考風(fēng)向標(biāo)】1 （2014全國(guó)卷）某同學(xué)在三種條件下培養(yǎng)大腸桿菌，這三種條件是：以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不斷補(bǔ)充培養(yǎng)基，及時(shí)去除代謝產(chǎn)物

17、以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不補(bǔ)充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物以葡萄糖和乳糖為碳源的培養(yǎng)基，不補(bǔ)充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果繪制的一段時(shí)間內(nèi)菌體數(shù)的對(duì)數(shù)隨時(shí)間變化的趨勢(shì)圖如下：甲乙丙假設(shè)三種培養(yǎng)基中初始總糖量相等，則三種條件依次對(duì)應(yīng)的趨勢(shì)圖是( ) a甲、乙、丙b乙、丙、甲c丙、甲、乙 d 丙、乙、甲- 11 - 2 （2014新課標(biāo)全國(guó)卷） 生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐 植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問(wèn)題：(1) 分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3 種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成 _。(2) 在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(cr)時(shí)，cr可與纖維素

18、形成_色復(fù)合物。 用含有 cr的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。(3) 為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基 ( 成分見(jiàn)下表 ) ：酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂cr溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：“”表示有，“”表示無(wú)。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_( 填“能”或“不能” ) 用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是 _；培養(yǎng)基乙 _( 填“能”或“不能” ) 用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_ 。- 12 - 3 （2014新課標(biāo)全國(guó)卷） 生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐 為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并

19、進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1) 該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白干板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是_ ；然后，將 1 ml 水樣稀釋100 倍，在 3 個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 ml 稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38 和 37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)。(2) 該小組采用平板劃線(xiàn)法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)_滅菌，在第二 次 及 以 后 的 劃 線(xiàn) 時(shí) ， 總 是 從 上 一 次 劃 線(xiàn) 的 末 端 開(kāi) 始 劃 線(xiàn) 。 這 樣 做 的 目 的 是_ 。(3) 示意圖 a和 b中，

20、_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。a b (4) 該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)的- 13 - 利用率。4 （2014四川卷）有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖甲、乙所示。甲乙(1) 微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、_四類(lèi)，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因

21、是_ 。(2) 與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和_，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成_保存?zhèn)溆谩?3) 純化菌株時(shí)，通常使用的劃線(xiàn)工具是_。劃線(xiàn)的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線(xiàn)區(qū)- 14 - 域的劃線(xiàn)上都不間斷地長(zhǎng)滿(mǎn)了菌，第二劃線(xiàn)區(qū)域所劃的第一條線(xiàn)上無(wú)菌落，其他劃線(xiàn)上有菌落。造成劃線(xiàn)無(wú)菌落可能的操作失誤有_ _ 。(4) 為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是_ ，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？_。 (4) 從圖示可知，加入了蛋白酶后測(cè)定苯磺隆降解率，而蛋白酶專(zhuān)一性分解蛋白質(zhì)，可推知該實(shí)驗(yàn)作出的假設(shè)是目的菌株能分泌降解苯磺隆的

22、蛋白質(zhì)；實(shí)驗(yàn)需要空白對(duì)照，來(lái)確定加入蛋白酶后對(duì)苯磺隆降解情況的影響。5 （2014浙江卷）下面是關(guān)于固定化酶和細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題。請(qǐng)回答：(1) 某興趣小組欲利用固定化酶進(jìn)行酶解淀粉的實(shí)驗(yàn)，分組見(jiàn)下表。組別固定化酶柱長(zhǎng)度(cm) 淀粉溶液的流速 (mlmin1) 甲10 0.3 乙10 0.5 丙15 0.3 丁15 0.5 將吸附了- 淀粉酶的石英砂裝入柱中后，需用蒸餾水充分洗滌固定化酶柱，以除去_。按上表分組，將配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流- 15 - 出液進(jìn)行ki-i2檢測(cè)。若流出液呈紅色，表明有_生成；若各組呈現(xiàn)的顏色有顯著差異，則流出液中淀粉水解產(chǎn)物濃度最高的

23、是_組。(2) 下列關(guān)于上述固定化酶實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是( ) a固定化酶柱長(zhǎng)度和淀粉溶液流速?zèng)Q定了酶柱中酶的含量b淀粉溶液流速過(guò)快會(huì)導(dǎo)致流出液中含有淀粉c各組實(shí)驗(yàn)所用的淀粉溶液濃度應(yīng)相同d淀粉溶液的ph對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響(3) 現(xiàn)有一份污水樣品，某興趣小組欲檢測(cè)其中的細(xì)菌數(shù)，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。將一定量的污水樣品進(jìn)行濃度梯度稀釋。取適量不同稀釋度的稀釋液，用_法分別接種于固體平面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意，接種前，從盛有_的容器中將玻璃刮刀取出，放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后待用；分組時(shí)，需用_作為對(duì)照。(4) 在上述細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)計(jì)數(shù)的是接種了( ) a各個(gè)稀釋度樣品的培

24、養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)b合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)c各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)d合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)【答案】 (1) 未吸附的- 淀粉酶糊精丙(2)a (3) 涂布分離70% 酒精未接種的培養(yǎng)基(4)d 【解析】 (1) 用蒸餾水洗滌固定化酶柱的目的是洗掉未吸附的- 淀粉酶，防止產(chǎn)物中混有酶等物質(zhì)；淀粉的產(chǎn)物可以是糊精，可以用ki-i2檢測(cè)，呈現(xiàn)的顏色是紅色；根據(jù)表格分析4 組實(shí)驗(yàn)，如果反應(yīng)時(shí)間越充分，則反應(yīng)就越充分，流出物中糊精的含量就越高，因丙組的固定化酶柱長(zhǎng)度最長(zhǎng)，淀粉溶液的流速也越低，所以它的流出物中糊精的含量最高。(2) 酶柱長(zhǎng)度和流速?zèng)Q定了反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短，a 項(xiàng)錯(cuò)誤

25、。流速過(guò)快則反應(yīng)不夠充分，則流出液中含有淀粉，b項(xiàng)正確。實(shí)驗(yàn)的自變量是酶柱長(zhǎng)度和流速，所以每組實(shí)驗(yàn)的淀粉濃度應(yīng)相同， c項(xiàng)正確。 ph大小會(huì)影響酶的活性，所以對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)有影響，d項(xiàng)正確。(3) 要檢測(cè)污水中的細(xì)菌數(shù)，可采用稀釋涂布分離法進(jìn)行操作，操作過(guò)程需注意消毒和滅菌處理，實(shí)驗(yàn)中需要設(shè)計(jì)一個(gè)空白對(duì)照。(4) 計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)的是合理處理的稀釋樣品，計(jì)算其培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，不是細(xì)菌數(shù)。- 16 - 6 （2014江蘇卷）為了獲得- 胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開(kāi)展了產(chǎn)- 胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1) 實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是_；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該 _。

26、(2) 為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是_ 。(3) 上圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是_。( 填序號(hào)) 安全閥、放氣閥、壓力表放氣閥、安全閥、壓力表安全閥、放氣閥、溫度表放氣閥、安全閥、溫度表(4) 為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3 塊相同平板上劃線(xiàn)，結(jié)果其中一塊平板的各劃線(xiàn)區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng)，最可能的原因是_。(5) 為 增 加- 胡 蘿 卜 素 提 取 量 ， 在 研 磨 酵 母 細(xì) 胞 時(shí) ， 添 加 石 英 砂 的 目 的 是_ ； 研 磨 時(shí) _( 填 “ 需 要 ” 或 “ 不 需 要 ”)添 加caco3， 理 由 是_?！敬鸢浮?(1

27、) 干熱滅菌和濕熱滅菌( 高壓蒸汽滅菌) 用牛皮紙 ( 報(bào)紙 ) 包扎器皿(2) 抑制細(xì)菌 ( 放線(xiàn)菌 ) 生長(zhǎng)(3) (4) 接種環(huán)溫度過(guò)高，菌被殺死(5) 有助于研磨充分不需要- 胡蘿卜素較耐酸- 17 - 【隨堂鞏固】 1. 下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是( ) a微生物培養(yǎng)前，需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行消毒b測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用菌落計(jì)數(shù)法c分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度d分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源2下表是對(duì)四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝類(lèi)型的描述，正確的一組是( ) 硝化細(xì)菌乳酸菌根瘤菌衣藻a 能源nh3乳酸n2光能b 碳源co2糖類(lèi)

28、等糖類(lèi)等co2c 氮源nh3n2n2no3d 代謝類(lèi)型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)厭氧型自養(yǎng)需氧型自養(yǎng)需氧型解析：本題綜合考查了不同微生物的代謝類(lèi)型及營(yíng)養(yǎng)要求。從能源來(lái)看，乳酸菌需糖類(lèi)等有機(jī)物供能；從氮源看，乳酸菌需要nh4、 no3；從代謝類(lèi)型看，根瘤菌為異養(yǎng)需氧型；從碳源看，硝化細(xì)菌與衣藻需co2，乳酸菌和根瘤菌需要糖類(lèi)等有機(jī)物。答案： b 3無(wú)菌技術(shù)包括以下幾個(gè)方面的敘述，其中錯(cuò)誤的是( ) - 18 - a對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行滅菌b將用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌c為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行d實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用

29、具與周?chē)锲废嘟佑|解析：無(wú)菌操作技術(shù)的第一方面是：對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間，操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。第二、三、四方面分別是選項(xiàng)b、c、d 。答案： a 4為了保持菌種的純凈需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是( ) a對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法b臨時(shí)保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養(yǎng)基上c臨時(shí)保藏菌種容易被污染或產(chǎn)生變異d對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用低溫4保藏的方法解析：對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3ml甘油瓶中加入1 ml 甘油后滅菌，將1ml培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20 的冷凍箱中保存。答案： d 5有關(guān)平板劃線(xiàn)操作的敘

30、述不正確的是( ) a第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物b每次劃線(xiàn)前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種c在第二區(qū)域內(nèi)劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于菌液d劃線(xiàn)結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者6下列關(guān)于大腸桿菌的培養(yǎng)中敘述不正確的是( ) a在大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮ph、溫度和滲透壓等條件b在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行消毒c若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)- 19 - 嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀

31、釋的稀釋度d使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟棄7在對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行選擇培養(yǎng)時(shí)用液體培養(yǎng)基的目的是( ) a用液體培養(yǎng)基可獲得大量菌體b纖維素分解菌適宜在液體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)c用液體培養(yǎng)基可以充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)d用液體培養(yǎng)基可獲得高純度的纖維素分解菌解析：液體培養(yǎng)基有利于纖維素分解菌的生長(zhǎng)和繁殖。答案： a 8下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述不正確的是( ) a利用稀釋涂布平板法只能分離微生物不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)b接種時(shí)連續(xù)劃線(xiàn)的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落c以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌d用大白菜腌制泡菜的過(guò)程中亞硝酸鹽含量變化是先增加后減少

32、9下表為某培養(yǎng)基的配方，有關(guān)敘述正確的是( ) 成分牛肉膏葡萄糖k2hpo4伊紅美藍(lán)青霉素瓊脂蒸餾水含量10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 萬(wàn)單位適量1000 ml - 20 - a.能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的大腸桿菌，擬核上有抗青霉素的基因b此培養(yǎng)基是天然鑒別培養(yǎng)基c此培養(yǎng)基可以用來(lái)檢測(cè)自來(lái)水中細(xì)菌含量是否符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)d此培養(yǎng)基可以用于選育轉(zhuǎn)基因大腸桿菌菌種的基因工程的操作過(guò)程中解析：此表表示鑒定大腸桿菌的合成培養(yǎng)基?？剐曰蛞话阄挥诖竽c稈菌的質(zhì)粒上，而不是擬核上；此培養(yǎng)基只能用來(lái)檢測(cè)自來(lái)水中大腸桿菌含量是否符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)。答案： d 10下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)和分離的敘述

33、中，不正確的是( ) a細(xì)菌能在液體培養(yǎng)基中以二分裂方式迅速擴(kuò)增b噬菌體或大腸桿菌可在蛋白胨培養(yǎng)基中增殖c滅菌的目的是消滅與培養(yǎng)菌競(jìng)爭(zhēng)的雜菌d稀釋涂布法分散細(xì)菌得到單菌落的效果更好解析：細(xì)菌繁殖方式是二分裂方式，噬菌體是沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的病毒，需要在活細(xì)胞中才能生活，在蛋白胨培養(yǎng)基中不能增殖；滅菌目的是防止雜菌和培養(yǎng)菌發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)。答案： b 11. 如圖是微生物平板劃線(xiàn)示意圖。劃線(xiàn)的順序?yàn)?、 2、 3、 4、 5。 下列操作方法正確的是( ) a操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌b劃線(xiàn)操作須在火焰上進(jìn)行c在 5 區(qū)域中才可以得到所需菌落d在 1、2、3、4、5 區(qū)域中劃線(xiàn)前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌解析：

34、在每次劃線(xiàn)前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法是在火焰上灼燒，接種時(shí)劃線(xiàn)操作是在火焰邊進(jìn)行。在5 個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過(guò)培養(yǎng)即可獲得所需菌落。- 21 - 答案： d 12制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的下列操作中，不正確的是( ) a操作流程是計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌和倒平板b將稱(chēng)好的牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同倒入燒杯中再加水、去紙c滅菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加2% 瓊脂，并使其溶解d將培養(yǎng)基冷卻到約50 時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板解析：瓊脂加入到牛肉膏蛋白胨溶液中，熔化后再滅菌。答案： c 13炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對(duì)

35、炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的宿主專(zhuān)一性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確診。(1) 細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。(2) 細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程如圖所示對(duì)配制的液體培養(yǎng)基等需采取_方法滅菌；實(shí)驗(yàn)所用液體培養(yǎng)基的碳源為_(kāi)( 填“無(wú)機(jī)碳”或“有機(jī)碳”) 。挑選可疑菌落制片后，用_觀(guān)察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。接種可疑菌后， 35 培養(yǎng)24 小時(shí)，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是_，對(duì)照組試管中應(yīng)加入 _，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6 小時(shí)后，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組_( 填“高”或“低” ) ，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。對(duì)排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體。與產(chǎn)生抗體相關(guān)的細(xì)胞除t 細(xì)胞、 b細(xì)胞外，還有 _。- 22 - 14為了探究土壤中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用和，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌( 目的菌 ) 。培養(yǎng)基成分如下表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如下圖所示。請(qǐng)分析回答問(wèn)題：kh2po4na2hpo4mgso47h2o 葡萄糖尿素瓊脂1.4 g 2.1 g 0