公共場(chǎng)所微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、作業(yè)指導(dǎo)書(shū)編號(hào)：ZQCDC/ZY02第1頁(yè)共1頁(yè)公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具微生物檢驗(yàn)方法大腸 菌群測(cè)定操作規(guī)程第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的依據(jù)GB/-2000公共場(chǎng)所茶具微生物檢驗(yàn)方法大腸菌群測(cè)定，熟練掌握此 規(guī)程，保證檢驗(yàn) 結(jié)果的準(zhǔn)確性。2適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場(chǎng)所公用毛巾、床上臥具大腸菌群的測(cè)定方法。3、責(zé)任使操作者熟悉此規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容：定義：大腸菌群指一群在37C、24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭癢的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿該菌主要來(lái)源于人畜糞便，故以次作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)公用毛巾、床上臥具的衛(wèi)生質(zhì) 量。儀器：見(jiàn)G

2、B/T- 2000中第3章。培養(yǎng)基和試劑：見(jiàn)GB/T -2000中第4章。 檢驗(yàn)程序：見(jiàn)GB/T -2000中第5章。4.5.1采樣方法4.5.1.1隨機(jī)法:4.5.1.2涂抹法：4.5.1.3紙片法：操作步驟隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的毛巾、床上臥具。 用測(cè)定細(xì)菌總數(shù)時(shí)采集的樣品，無(wú)需重采。用滅菌生理鹽水濕潤(rùn)5cmx 5cm大腸菌群快速測(cè)定紙片兩 張，分別貼在毛 巾、床上臥具規(guī)定部位和面積范圍內(nèi)，約30s后取下，置于無(wú)菌塑料袋內(nèi)。4.5.2檢驗(yàn)方法4.5.2.1發(fā)酵法4.5.2. 用測(cè)定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢樣，倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液中。置36C± 1C培養(yǎng)箱 內(nèi)培養(yǎng)24ho4.5.

3、2. 觀(guān)察是否產(chǎn)算、產(chǎn)氣，若有變黃和氣體產(chǎn)生，該管推測(cè)是檢驗(yàn)陽(yáng)性。如不產(chǎn)酸、產(chǎn) 氣則為大腸菌群陰性。4.5.2. 自推測(cè)性檢驗(yàn)陽(yáng)性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)種伊紅美藍(lán)瓊脂平板 上，置36C+ 1C培養(yǎng)箱培養(yǎng)1824h,然后取出，觀(guān)察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)性試驗(yàn)。4.5.2. 在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個(gè)進(jìn)行染色鏡檢；同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，只36C± 1C培養(yǎng)24ho4.5.3紙片法將已采樣的紙片置36C± 1C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1618h,觀(guān)察結(jié)果。結(jié)果報(bào)告見(jiàn)GB/2000中第7章。作業(yè)指導(dǎo)書(shū)編號(hào)：ZQCDC/ZY03第1頁(yè)共2頁(yè)公共場(chǎng)所浴盆、臉（腳）盆微生物第1

4、次修訂檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定操作規(guī)程實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的:公共場(chǎng)所浴盆、臉（腳）盆微生物檢驗(yàn)方法細(xì)總數(shù)測(cè)定。2、適用范圍:本標(biāo)準(zhǔn)適用于公共場(chǎng)所浴盆、臉（腳）盆細(xì)總數(shù)的測(cè)定。3、責(zé)任：使操作者熟悉本規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指公共場(chǎng)所浴盆、臉（腳）盆經(jīng)過(guò)采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后（培養(yǎng)基成 分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、PH值、需氧性質(zhì)等），25cmi表面上含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫性 需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公共場(chǎng)所浴盆、臉（腳）盆被污染程度的標(biāo)志，也可 以為公共場(chǎng)

5、所浴 盆、臉（腳）盆消毒效果的判定和評(píng)價(jià)提供依據(jù)。儀器見(jiàn)GB/2000中第四章培養(yǎng)基和試劑431營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基見(jiàn) GB/ 2000 中4.3.2 無(wú)菌生理鹽水：分裝125mL瓶供浴盆采樣，50mL瓶供臉（腳）盆采 樣。米樣121C 20 分鐘。4.4.1采樣必須在無(wú)菌操作下進(jìn)行，采樣用具應(yīng)高壓滅菌4.4.2采樣部位，選擇在盆內(nèi)側(cè)壁二分之一至三分之一高度采樣。4.4.3采樣布點(diǎn)，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布點(diǎn)，臉（腳）盆可在相對(duì) 兩側(cè)壁布點(diǎn)。4.4.4米樣方法4.4.4.1涂抹法：用侵有無(wú)菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格板（5cmx5cm）內(nèi)來(lái)回均勻涂滿(mǎn)整個(gè)方格，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉試子，剪去手接觸部位后，將涂抹

6、浴盆的5個(gè)棉試子一并放入125mL生 理鹽水燒瓶中，涂抹臉（腳）盆的2個(gè)棉試 子一并放入50 mL生理鹽水三角燒瓶中，充分振搖或在旋渦振蕩器上振蕩 分鐘，每毫升的菌濃度相當(dāng)于1平方厘米的菌量。4.4A.2斑貼法：將5cmx5cm無(wú)菌濾紙片放入滅菌平皿中，注入滅菌生理鹽水1 mL片 （吸滿(mǎn)為止），以無(wú)菌操作將濾紙片貼到采樣部位，1分鐘后按序取下，將貼浴盆的5片濾紙一并 放入125,mL生理鹽1分鐘，每毫升的菌嘗試相當(dāng) 于1平方厘米的菌量。檢驗(yàn)方法4.5.1用1 mL滅菌吸管吸取樣品1 mL加到滅菌平皿內(nèi)，同樣再吸1 mL加到作業(yè)指導(dǎo)書(shū)編號(hào)：ZQCDC/ZY03第2頁(yè)共2頁(yè)公共場(chǎng)所浴盆、臉（腳）盆

7、微生物檢驗(yàn)方法細(xì)第1次修訂菌總數(shù)測(cè)定操作規(guī)程實(shí)施日期：2011年5月1日平皿內(nèi)。4.5.2如污染嚴(yán)重，可作10倍遞增稀釋?zhuān)窟f增稀釋一次，換一支無(wú) 吸客，每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)平皿。4.5.3稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將冷卻至46 C的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放 置46C± 1C 水浴保溫）注入平皿約15mL并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36C+ 1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h.落計(jì)數(shù)方法見(jiàn)GB/ 2000中第8章。浴盆、臉（腳）的細(xì)數(shù)按式（1）計(jì)算:式中:總數(shù)，cfu/25 m2;編號(hào)：ZQCDC/ZY5第2頁(yè) 共3頁(yè)k稀釋倍數(shù);n 一平均落數(shù);落計(jì)數(shù)的報(bào)告見(jiàn)GB/2000中的第9章。

8、作業(yè)指導(dǎo)書(shū)編號(hào)：ZQCDC/ZY04第1頁(yè)共3頁(yè)公共場(chǎng)所茶具微生物檢驗(yàn)萬(wàn)法細(xì)菌第1次修訂總數(shù)測(cè)定操作規(guī)程實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的：公共場(chǎng)所茶具微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定。2、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于公共場(chǎng)所茶具細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定。3、責(zé)任:使操作者熟悉本規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指公用茶具經(jīng)過(guò)采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后（培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng) 時(shí)間、PH值、需氧性質(zhì)等），icm表面上含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只 包括一群在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公用茶具被污染程度的標(biāo)志，也

9、可以為公用茶具消毒效果的判定和評(píng)價(jià) 提供了依據(jù)。儀器高壓蒸汽滅菌器。干熱滅菌箱。培養(yǎng)箱：36C± 1Co冰箱。電爐。天平。滅菌。滅菌平皿：直徑9cm.滅菌刻度吸管:1mL,10mL滅菌棉拭子。滅菌剪刀。放大鏡。PH計(jì)或精密PH式紙。培養(yǎng)基和試劑4.3.1生理鹽水成分：氯化鈉蒸f留水1000mL制法：將氯化鈉（）溶解于蒸f留水dOOOmL中，分裝到試管內(nèi)，每 管10mL,12IC20min 咼壓滅菌。4.3.2營(yíng)養(yǎng)瓊脂檢驗(yàn)程序細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)程序如下：作業(yè)指導(dǎo)書(shū)公共場(chǎng)所茶具微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定操第1次修訂作規(guī)程實(shí)施日期：2011年5月1日操作步驟4.5.1采樣方法4.5.1.1隨機(jī)抽

10、取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的茶具。4.5.1.2 用滅菌生理鹽水濕潤(rùn)棉拭子，在茶具內(nèi)、外緣，涂沫 即高處一圈(口唇接觸處)。用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分， 理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。4.5.2檢驗(yàn)方法4.5.2.1 將放有棉拭子的試管充分振搖。此液為X 10稀釋液。4.522以無(wú)菌操作，吸取2ml檢樣，分別注入到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每 可十倍遞增稀釋?zhuān)次?0cm,將棉拭子放入10ml生皿1ml。如污染嚴(yán)重,1 ml加到9ml滅菌生理鹽水中，混勻，此液為仁100稀釋液。每個(gè)稀釋度做兩塊平皿。4.5.2.3 將已融化冷至45 C左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml,并立即旋搖 平皿。冷凝后放36C

11、± 1C培養(yǎng)基培養(yǎng)48h.菌落計(jì)數(shù)方法作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼直接觀(guān)察，必要時(shí)用放大鏡檢查為防遺漏，在記下平皿的菌落數(shù) 后，求出同一稀釋度各平皿生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落，該平皿不宜計(jì)數(shù)；若 片狀菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均勻，則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘以2所得 結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。實(shí)際公用茶具菌落數(shù)，按式(1)計(jì)算:a=50式中：a細(xì)菌總數(shù)，cfu/cm 2b平均菌落數(shù)c稀釋倍數(shù)。菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告4.7.1選擇平均菌落在30300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告作業(yè)指導(dǎo)書(shū)公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具微第1次修訂生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定實(shí)施日期：2011年5月

12、1日1、目的練掌握此規(guī)程，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。依據(jù)GB/- 2000公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具微生物檢驗(yàn)方法大腸菌群測(cè)定，熟2、運(yùn)用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具大腸菌群的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場(chǎng)所公用毛 巾、床上臥具大腸菌群的測(cè)定方法。3、責(zé)任使操作者熟悉此規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指被檢物品經(jīng)過(guò)采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后(培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí) 間、PH值、需氧性質(zhì)等)，25cm2表面上含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只 包括一群在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公用毛巾、床上

13、臥具被污染程度的標(biāo)志，檢測(cè)細(xì)菌總 數(shù)，公用毛巾、床 上臥具消毒效果的判定和評(píng)價(jià)提供依據(jù)。儀器見(jiàn)GB沖第4章4.2.2培養(yǎng)基和試劑見(jiàn)GB沖第5章4.2.3檢驗(yàn)程序見(jiàn)GB/2000中第6章操作步驟4.3.1 米樣方法4.3.1.1隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的毛巾、床上臥具4.3.1.2 用滅菌生理鹽水濕潤(rùn)棉試子，在毛巾、枕巾對(duì)折后兩面的各面各|2 2 2.5cm (5cmx 5cm)面積范圍；床單、被單在上下兩部各25cm面積范圍內(nèi)有順序地來(lái)回涂抹, 用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉試子放入10mL生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。4.3.2 檢驗(yàn)方法4.3.2.1將放有棉試子的試管充分振搖。此液為1： 104.3.2.2 以無(wú)菌操作，吸取2mL檢樣，分別注入到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL.如污染嚴(yán) 重，可十倍遞增稀釋?zhuān)次〖拥?mL滅菌生理鹽水中，混勻，此液為1： 100稀釋液。 每個(gè)稀釋度做兩塊平皿。4.3.2.3將已融化冷至45C左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15mL并立即旋搖平皿。冷凝后放入36C+1C培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h.作業(yè)指導(dǎo)書(shū)公共場(chǎng)所毛巾、床上臥具微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定編號(hào)：ZQCDC/ZY05第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日菌落計(jì)數(shù)萬(wàn)法作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼直接觀(guān)察，必要時(shí)用放大鏡檢查以防遺漏, 在記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同