膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測2ppt課件

1、器材預(yù)備器材預(yù)備斜面斜面4 4支，空氣、手指皮膚、細菌分別培育物上次實驗平板支，空氣、手指皮膚、細菌分別培育物上次實驗平板醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗三v空氣細菌學(xué)檢查結(jié)果分析v手指皮膚細菌學(xué)檢查結(jié)果分析空氣的細菌學(xué)檢查空氣的細菌學(xué)檢查組號時間(min)地點菌落形成單位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù) A：平板面積(38.5cm2)T：采樣時間(15分鐘) CFU：colony forming unit WHO推薦的醫(yī)院各部門空氣細菌標(biāo)準(zhǔn)級別cfu/m3適用范圍級區(qū)10器官移植、

2、心血管、矯形等外科手術(shù)室，保護性隔離室，灌注或配制注射液實驗室級區(qū)200無菌室、手術(shù)室、供應(yīng)室、嬰兒室、中心滅菌單位、術(shù)后恢復(fù)室、早產(chǎn)兒及產(chǎn)房、重癥監(jiān)護病房級區(qū)200500一般病房、治療室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手術(shù)室浴室我國公共場所空氣衛(wèi)生細菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直徑9cm）撞擊法cfu/m3沉降法個/皿適用范圍1000 1035星級賓館、飯店1500 202星級以下賓館和非星級帶空調(diào)賓館、飯店2500 30普通飯店、招待所、酒吧、茶座、咖啡廳、圖書館、博物館、美術(shù)館、飛機客艙4000 40音樂廳、影劇院、錄像廳（室）、游藝廳、舞廳

3、、理發(fā)店、美容院（店）、游泳館、體育館、醫(yī)院候診室、候機室、旅客列車車廂、輪船客艙、飯館（餐廳）7000 75展覽館、商場（店）、書店、候車室、候船室液體或固體標(biāo)本菌落總數(shù)測定v可將標(biāo)本作十倍、百倍、千倍、萬倍稀釋。v分別取1ml注入直徑9cm的滅菌平皿內(nèi)。v傾注46營養(yǎng)瓊脂培育基大約15ml，混合均勻。瓊脂完全凝固以后，37培育48小時。v選擇菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測定規(guī)范。v將計數(shù)得到的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出cfu/g(ml)。 1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮膚的細菌學(xué)檢查第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對照。 2人1個營養(yǎng)瓊脂平板上:甲

4、、丙常規(guī)洗手下:乙、丁規(guī)范洗手甲丙乙丁丙丁手指皮膚細菌學(xué)檢查結(jié)果分析第1格為洗手前：+ 第2格為洗手后 常規(guī)(甲、丙)洗手方法：? 標(biāo)準(zhǔn)(乙、丁)洗手方法：?第3格為消毒后：？第4格空白對照：-醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗一v膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測三v菌落特征察看P11v細菌純培育P10v膿汁和糞便標(biāo)本檢驗錄像v油鏡運用方法講解菌落特征(Colony Characteristics)大小：大(直徑約3mm以上)，中(直徑約13mm)，小(直徑約1mm以下)。外形：圓形，卵圓形、假根形、絲狀、不規(guī)那么等。邊緣：整齊，鋸齒狀，波浪狀，羽毛狀。外表：隆起、平坦、中心凸起、臍形凹陷；光滑或粗糙、潮

5、濕或枯燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周圍呈草綠色、不透明)，溶血(菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán))。色素：普通為無色或灰白色，特殊色素有兩類：脂溶性色素(菌落本身著色，培育基不著色)和水溶性色素(菌落及培育基均著色)。 細菌的溶血景象v根據(jù)細菌對血平板中紅細胞的溶解才干可分為以下三種溶血類型甲型溶血甲型溶血: :產(chǎn)生溶血素，不完全產(chǎn)生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周圍有性溶血，在血平板上菌落周圍有1 12mm2mm半透明的草綠色溶血環(huán)。半透明的草綠色溶血環(huán)。乙型溶血乙型溶血: : 呈完全性溶血，在血呈完全性溶血，在血平板上菌落周圍有平板上菌落周圍有2 24mm4mm寬，界限清楚，寬，界限清楚，

6、無色透明的溶血環(huán)。無色透明的溶血環(huán)。丙型溶血丙型溶血: :不產(chǎn)生溶血素，在血不產(chǎn)生溶血素，在血平板上的菌落周圍無溶血環(huán)。平板上的菌落周圍無溶血環(huán)。細菌的純培育 Pure Culturesv膿汁標(biāo)本在普通平板上有黃色、白色兩種菌落，菌落的色素是脂溶性的，是細菌本身的顏色。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、外表光滑、潮濕、邊緣整齊、不透明。37培育24小時 v糞便標(biāo)本在伊紅美藍平板上，有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落顏色是水溶性的，不是細菌本身的顏色，顏色的產(chǎn)生是由于大腸埃希菌分解乳糖產(chǎn)酸，酸使伊紅與美藍結(jié)合，構(gòu)成紫黑色具有金屬光澤、大而隆起、不透明的菌落；菌落直徑23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈

7、伊紅的顏色，很淡的粉紅色，半透明，直徑12mm。37培育24小時 紫黑色紫黑色v假設(shè)培育、放置時間過長或者平板上某個部位細菌比較多、菌落比較密集，大腸桿菌菌落顏色能夠會發(fā)生改動。由于大腸桿菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分解大多產(chǎn)生堿性物質(zhì)，中和了乳糖分解時產(chǎn)生的酸。大腸桿菌菌落能夠會由原來的紫黑色變成粉紅色，和致病菌顏色一樣。v密集或半密集區(qū)域的菌落，不一定是單菌落，有能夠是菌落構(gòu)成單位CFU 。由紫黑色變成粉紅色由紫黑色變成粉紅色37培育36小時 斜面接種分工v甲普通平板黃色菌落1支斜面 v乙普通平板白色菌落1支斜面 v丙伊紅美藍平板紫黑菌落1支斜面 v丁伊紅美藍平板粉紅菌落1支斜

8、面 v斜面標(biāo)志：組號、黃色、白色、紫黑、粉紅。v選擇平板上一樣的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落。v在平皿底部玻璃上，畫個大圈選取菌落，得到同組同窗認可，才干挑取。畫圈選菌落畫圈選菌落甲甲黃色黃色接種環(huán)套住菌落，輕刮下來，接種斜面。 乙乙白色白色接種環(huán)套住菌落，輕刮下來，接種斜面。 丙丙紫黑紫黑接種環(huán)套住菌落，輕刮下來，接種斜面。 丁丁粉紅粉紅接種環(huán)套住菌落，輕刮下來，接種斜面。 甲甲黃色黃色乙乙白色白色丙丙紫黑紫黑丁丁粉紅粉紅斜面接種法 Streak Slant Method甲黃色, 乙白色。丙紫黑, 丁粉紅。標(biāo)志：組號，顏色生物平安警告v接種環(huán)接種斜面一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒

9、。v氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)分散開,5um經(jīng)過呼吸道直接到達肺泡。vPike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明緣由的感染高達82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中分散引起的。v實驗時應(yīng)坐著，在火焰周圍1020厘米內(nèi)操作，堅持安靜、有序，盡量少說話、少走動，以免感染病原菌。滅菌 搜集平板 滅菌桶內(nèi)平板底部朝下，蓋朝上放置 高壓蒸汽滅菌 洗刷。奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡運用須知v顯微鏡是精細光學(xué)儀器，請不要讓其遭到撞擊，請小心操作。v在搬運顯微鏡時，請按右圖所示，以雙手抓住鏡臂孔的兩側(cè)，小心搬運。v假設(shè)拿住載物臺和鏡筒等部位搬運的話，有能夠會呵斥損壞。開關(guān)與調(diào)整光強v開

10、或關(guān)之前，必需將亮度調(diào)整旋鈕按箭頭相反方向轉(zhuǎn)動到最小位置，以免損壞燈泡。v電源開關(guān)撥到 側(cè)為開，撥到側(cè)為封鎖。v按箭頭方向轉(zhuǎn)動亮度調(diào)整旋鈕變亮，相反方向轉(zhuǎn)動那么變暗。聚焦v從顯微鏡的側(cè)面察看，按箭頭方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕，使物鏡盡能夠接近標(biāo)本。一邊看目鏡，一邊漸漸逆箭頭方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕， 使載物臺下降。v看到標(biāo)本以后，用微調(diào)旋鈕來正確對焦。10倍物鏡的任務(wù)間隔WD，從物鏡到標(biāo)本的 間隔為10.5mm。v 油鏡的WD為0.13mm。調(diào)整聚光鏡位置和孔徑光闌v用聚光鏡上下挪動旋鈕，將聚光鏡轉(zhuǎn)到最上面。v在孔徑光闌環(huán)上刻有物鏡倍率10倍，100倍等，察看時將與運用物鏡相對應(yīng)的倍率放到正面。轉(zhuǎn)換物鏡v旋轉(zhuǎn)物

11、鏡轉(zhuǎn)盤，將希望運用的物鏡10倍、100倍轉(zhuǎn)到標(biāo)本的上方。100倍浸油物鏡運用方法v油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的察看部位上加一滴浸油。v旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡進入光路，用微調(diào)旋鈕對好焦距。v假設(shè)浸油內(nèi)有氣泡，會影響察看，可略微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回經(jīng)過12次浸油，排除油內(nèi)氣泡。香柏油折射率香柏油折射率n=1.515n=1.515空氣折射率空氣折射率n=1.00n=1.00玻璃折射率玻璃折射率n=1.52n=1.52油浸鏡的原理光線光線 滴加香柏油可使滴加香柏油可使光線更多進入物鏡光線更多進入物鏡,防防止光線經(jīng)過折射率低止光線經(jīng)過折射率低的空氣而散失的空氣而散失,以提高以提高物鏡的分辨率物鏡的

12、分辨率,使物象使物象亮堂明晰。亮堂明晰。 放大倍數(shù)：目鏡放大倍數(shù)：目鏡10倍物鏡倍物鏡90或或100倍倍顯微鏡油鏡的運用P13v10物鏡標(biāo)本位置滴加香柏油100油鏡浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸任務(wù)間隔0.13mm細調(diào)理調(diào)焦，察看物像記錄結(jié)果封鎖電源。v油鏡處置：擦鏡紙拭去香柏油 擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚7:3混合液擦拭擦鏡紙擦拭油鏡。v顯微鏡罩上防塵罩 橫放在實驗柜內(nèi)。v(順德校區(qū)實驗臺兩側(cè)的電源插座，只能插入一個插頭，請選擇離他最近的電源插座。v校本部實驗臺中間，三個位的插座，中間那位插孔沒有電，不能運用，只能用兩側(cè)的插座。 奧林巴斯奧林巴斯 CX21CX21型型 生物顯微鏡生物顯微鏡實驗柜內(nèi)，每人一臺實驗柜內(nèi)，每人一臺留意：只能橫放，不得豎放。留意：只能橫放，不得豎放。思索題v在微生物學(xué)實驗中,怎樣才干防止雜菌的污染?v空氣的衛(wèi)生規(guī)范規(guī)定如何?v他的實驗結(jié)果闡明了什么問題?v怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分別和鑒定金黃色葡萄球菌?v菌落特征主要描畫哪幾方面問題？任何挑選單菌落？ 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗三、一v空氣、手指皮膚的細菌學(xué)檢查結(jié)果分析v膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測v菌落特征察看P11v細菌純培育P10純培育不得超越18小時v油鏡運用方法講解v膿汁標(biāo)本檢驗 錄像v腸道致病菌