藥理學(xué)實驗指導(dǎo)(臨床)

1、藥理學(xué)實驗指導(dǎo)一、藥理學(xué)實驗課的目的和要求藥理學(xué)實驗課是藥理學(xué)教學(xué)的重要組成部分，它的目的在于通過實驗，不僅僅是驗證藥理學(xué)中的重要基本理論，牢固地掌握藥理學(xué)的基本概念，更重要的是培養(yǎng)智能，即了解獲得藥理學(xué)知識的科學(xué)途徑，使學(xué)生掌握進(jìn)行藥理學(xué)實驗的基本方法和技能，初步具備客觀地對事物進(jìn)行觀察、比較、分析、綜合和解決實際問題的能力。同時，通過實驗培養(yǎng)學(xué)生對科學(xué)工作的嚴(yán)肅態(tài)度、嚴(yán)格的要求、嚴(yán)密的工作方法和實事求是的作風(fēng)。為了達(dá)到上述目的，要求做到下列事項：實驗前：1. 仔細(xì)預(yù)習(xí)藥理學(xué)實驗指導(dǎo)，了解實驗?zāi)康摹⒁?、方法和操作步驟，領(lǐng)會其設(shè)計原理。2. 結(jié)合實驗內(nèi)容，復(fù)習(xí)有關(guān)藥理學(xué)、生理學(xué)、生化學(xué)等方面

2、的知識，3。預(yù)測實驗中各步驟可能出現(xiàn)的情況，注意實驗中可能發(fā)生的問題。實驗時：1. 實驗分小組進(jìn)行，每次實驗前做好明確分工，同時要密切配合，使實驗時能各盡其責(zé)，有條不紊地完成實驗。2. 先檢查儀器、藥品、動物是否與實驗講義相符合，將實驗器材妥善安排、正確裝置。3. 嚴(yán)格按實驗講義上的步驟進(jìn)行操作，準(zhǔn)確計算給藥量，注意愛護(hù)動物和標(biāo)本，節(jié)約實驗材料和藥品。4. 保持實驗室肅靜和實驗臺面清潔與整齊，注意遵守實驗室規(guī)則，當(dāng)儀器損壞時，應(yīng)立即報告老師，按規(guī)章處理。5. 細(xì)致的觀察和思考實驗過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象，隨時記錄藥物反應(yīng)的出現(xiàn)時間、表現(xiàn)及最后結(jié)果。實驗后：1. 明確實驗?zāi)康摹⒁?，精通實驗?nèi)容及各項實

3、驗在整個實驗課中所處的地位。2. 指導(dǎo)實驗課要認(rèn)真、耐心，指導(dǎo)學(xué)生實驗技術(shù)和操作，培養(yǎng)學(xué)生獨立分析問題和解決問題的能力和科學(xué)作風(fēng)。3仔細(xì)閱讀實驗報告，加強對學(xué)生的實驗成績考核工作。4指導(dǎo)教師帶實驗課前必須參加預(yù)實驗，是正式實驗前的關(guān)鍵步驟，根據(jù)預(yù)試所得結(jié)果或?qū)嶒?，對原實驗設(shè)計作必要的修正，是指導(dǎo)藥理實驗課不可缺少的步驟，通過預(yù)試驗可以解決，修正實驗動物種類和例數(shù)，檢查觀察指標(biāo)是否客觀、靈敏、可靠，改進(jìn)實驗方法，和掌握熟悉實驗技術(shù)，摸索藥物劑量、濃度與反應(yīng)關(guān)系，以便確定最適劑量，并擬出實驗記錄格式，并進(jìn)行修正，確保正式實驗有條理、按秩序進(jìn)行。以上從學(xué)與教兩方面提出要求，師生雙方共同努力，才能達(dá)到

4、實驗課的教學(xué)目的。二、實驗結(jié)果的整理和實驗報告的寫作整理實驗結(jié)果和撰寫實驗報告是做完每項實驗后的總結(jié)工作，通過總結(jié)，使我們把在實驗過程中獲得的感性認(rèn)識提高到理性認(rèn)識，肯定實驗取得的成果，明確存在的問題。實驗報告是向他人提供研究經(jīng)驗及供自己日后參考的重要資料，寫實驗報告可培養(yǎng)學(xué)生的文字表達(dá)能力和概括綜合分析能力，也是一次科研論文撰寫的練習(xí)。1、實驗結(jié)果的整理 藥理實驗結(jié)果有測量資料如血壓值、心率、體溫變化、瞳孔大小、睡眠時間、生化測定數(shù)據(jù)等。計數(shù)資料如陽性反應(yīng)數(shù)或陰性反應(yīng)數(shù)，動物死亡與存活數(shù)等。凡測量資料和計數(shù)資料，均應(yīng)以正確的單位和數(shù)值作定量表示，必要時應(yīng)做統(tǒng)計處理，以保證結(jié)論有較大的可靠性，

5、盡可能將有關(guān)數(shù)據(jù)組成表格或統(tǒng)計圖，使主要結(jié)果有重點的表達(dá)出來，以便閱讀和分析、比較。作表格時，一般將觀察項目列在表內(nèi)左側(cè)，由上而下逐項填寫，而將實驗中出現(xiàn)的變化，按照時間順序，由左而右逐項填寫。繪圖時，應(yīng)在縱軸和橫軸上列出數(shù)值刻度，標(biāo)明單位。一般以縱軸表示反映程度，橫軸表示時間或藥量，而在圖的下方注明實驗條件。如不是連續(xù)性變化，也可以用柱型圖表示。凡有曲線記錄的實驗，應(yīng)及時在曲線圖上標(biāo)注說明，包括實驗項目，實驗動物的種類、性別、體重、給藥量或其它實驗條件等。對較長的曲線記錄，可選取出現(xiàn)典型變化的段落，剪下后粘貼保存。這里需注意的是必須以客觀的態(tài)度進(jìn)行裁剪工作，不論預(yù)期內(nèi)的或預(yù)期外的結(jié)果，均應(yīng)留

6、樣參考。2、實驗報告的寫作實驗報告要求結(jié)構(gòu)完整，條理分明、文字簡練、書寫工整、措詞注意科學(xué)性和邏輯性，盡量采用科學(xué)術(shù)語。一般應(yīng)包括下列內(nèi)容：實驗題目實驗?zāi)康膶嶒灧椒?當(dāng)完全按照實驗指導(dǎo)上的步驟進(jìn)行時，可不必再重述。如果實驗方法臨時有所變動，或者由于操作技術(shù)方面的原因，影響觀察的可靠性，應(yīng)做簡要說明。實驗結(jié)果 是實驗報告中最重要的部分，實驗報告上一般只列經(jīng)過歸納、表現(xiàn)的結(jié)果。但原始記錄應(yīng)保存?zhèn)洳?，原始記錄一般包括：實驗動物條件：種類、體重、性別、標(biāo)記、編號、種系等；實驗藥品來源、批號、劑型、濃度、劑量、給藥途徑等；實驗時環(huán)境如日期、室溫等；實驗進(jìn)程、步驟方法詳細(xì)記錄；觀測各種指標(biāo)數(shù)據(jù)和原始描記曲

7、線，圖紙和統(tǒng)計學(xué)處理分析資料等。實驗結(jié)果需要絕對真實性，切不可只選用主觀愿望的資料，任意刪去不同意的結(jié)果。要正確圖表，表應(yīng)有標(biāo)題，說明表的內(nèi)容，表的結(jié)構(gòu)要簡單明了，如實驗報告中有表又有圖時，圖與表不要重復(fù)用同一數(shù)據(jù)，表中數(shù)據(jù)要注意有效數(shù)字，文字只提示圖表說明什么問題，而不把圖表中數(shù)據(jù)重復(fù)記錄，文字能簡單寫明的數(shù)據(jù)不必用圖表。討論 應(yīng)針對實驗中所觀察到的現(xiàn)象與結(jié)果，聯(lián)系課堂講授的理論知識進(jìn)行分析和討論，切不可離開實驗結(jié)果去空談理論，應(yīng)抓住重點，不要面面俱到，避免外展過多，要判斷結(jié)果是否為預(yù)期的，如果屬于非預(yù)期的，則應(yīng)分析其可能的原因。切忌文過飾非，應(yīng)提出實驗中不足和存在的問題。結(jié)論 實驗結(jié)論是從

8、實驗結(jié)果歸納而得的概括性判斷，也就是對本實驗所能說明的問題、驗證的概念或理論的簡要總結(jié)。不必再在結(jié)論中重述具體結(jié)果。未獲證據(jù)的理論分析，不能寫入結(jié)論中?？傊?，一篇好的實驗報告應(yīng)具備五性：創(chuàng)造性、準(zhǔn)確性、客觀性、確證性、可讀性。創(chuàng)造性：實驗中能發(fā)現(xiàn)新問題，探索創(chuàng)新準(zhǔn)確性：目的明確，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、方法可靠客觀性：實驗結(jié)果要真實，實事求是確證性：作結(jié)論要根據(jù)實驗結(jié)果，資料可信可讀性：文字簡明扼要、重點突出、層次清楚、文字通俗易懂，但不能用口語，有邏輯性。3、實驗報告示例 實驗 給藥途徑對藥物作用的影響【目的】 觀察不同給藥途徑對MgSO4作用的影響?！痉椒ā咳〖彝?只，稱體重，觀察正?；顒忧闆r，然后給甲

9、兔耳靜脈緩慢注射2% MgSO4175mg/kg體重，觀察其反應(yīng)；乙兔用以2% MgSO4溶液800mg/kg灌胃（劑量為靜注劑量的4.6倍）?！窘Y(jié)果】兔號藥物劑量給藥途徑 反應(yīng)甲2%MgSO4175mg/kg靜脈注射隨著注射量的增加，兔出現(xiàn)不能站立，癱倒，最后呼吸停止、死亡。乙2%MgSO4800mg/kg灌胃觀察2小時以上未出現(xiàn)類似家兔的上述反應(yīng)?！居懻摗?甲兔耳靜脈注射MgSO4很快出現(xiàn)肌肉松弛，癱瘓及呼吸抑制現(xiàn)象，最后死亡。而乙兔所用的MgSO4劑量比甲兔大4.6倍，但系灌胃法給藥，結(jié)果經(jīng)2小時以上未出現(xiàn)上述反應(yīng)。說明給藥途徑不同，藥物的作用不同，這可能因MgSO4口服不易吸收之故。【

10、結(jié)論】給藥途徑不同可影響藥物的作用。MgSO4靜脈注射，可致家兔肌肉松弛，呼吸抑制而灌胃給藥則否。 不正確的實驗報告示例【目的】【方法】 均參見上述實驗【結(jié)果】【討論】 因為給藥途徑不同可影響藥物的作用。所以乙兔雖然以比甲兔大4.6倍的MgSO4溶液灌胃也不出現(xiàn)類似甲兔在靜注MgSO4后的肌肉麻痹和呼吸抑制等反應(yīng)【結(jié)論】給藥途徑不同可影響藥物的作用。MgSO4靜注可致家兔癱瘓。呼吸中樞抑制而死亡。MgSO4灌胃則否。思考題：為什么說上例的【討論】項和【結(jié)論】項均寫得不正確：錯在何處？試與實驗報告示例相對照加以思考？三、藥理學(xué)實驗設(shè)計基本知識藥理學(xué)實驗的基本程序大體分為選題、設(shè)計、實驗、資料整理

11、與總結(jié)五步。實驗設(shè)計是中心環(huán)節(jié)，是制定實踐選題目標(biāo)，它關(guān)系到能否按選題愿望取得預(yù)期的結(jié)果。（一）實驗設(shè)計的基本原則1. 對照沒有對照就沒有比較和鑒別，也就會影響科學(xué)性。對照的原則即“齊同對比”的原則。即除了要觀察研究的因素外，實驗組與對照組一切條件應(yīng)盡量相同，有完全的可比性，才能排除影響因素，作出科學(xué)結(jié)論，常用的對照形式有：(1) 陰性對照：即用等量的無效制劑，如生理鹽水或藥物基質(zhì)對照(2) 陽性對照：用已知有確切療效的典型藥物對照。一般選用藥典或部頒與省頒標(biāo)準(zhǔn)的藥物。(3) 空白對照：即不加任何處理的對照(4) 配對對照：包括同源配對和異體配對，前者是指同一個前后不同時間比較對照的結(jié)果與實驗

12、結(jié)果的差異，或同一個左右兩部分作對照處理和實驗處理的差異，由于是在同一個體進(jìn)行實驗，可以最大限度地減少抽樣誤差，異體對照可包括一卵雙胎或同窩動物，這可最大限度減少遺傳變異的影響。(5) 組間對照：是用不同個體分組，比較兩組或幾組間的差異。藥理研究中除設(shè)“陰性對照”外，要求同時設(shè)立“陽性對照”組以證明實驗方法是否確實可靠。2. 隨機隨機是按機遇原則進(jìn)行分配，如動物分組、操作程序等，一切影響實驗結(jié)果的非實驗因素和條件均要注意隨機化，其目的是在于將一切干擾因素分配到各組時，不受實驗者主觀因素或其他偏性誤差的影響，使其均得到隨機化的安排，3. 重復(fù)要使樣本能代表總體，除用隨機抽樣方法縮小抽樣誤差外，重

13、復(fù)實驗是保證結(jié)果可靠的另一基本方法。重復(fù)有兩個含義：一是實驗樣本必須夠大，二是如果一批試驗結(jié)果可靠，應(yīng)經(jīng)得起重復(fù)實驗。重復(fù)實驗是檢驗科研結(jié)果可靠性的唯一方法。(二) 實驗設(shè)計程序中應(yīng)考慮的四個問題1. 明確實驗?zāi)康脑诔浞值恼{(diào)查研究（包括文獻(xiàn)資料的查閱、現(xiàn)場情況考察，前人與外域有關(guān)經(jīng)驗的借鑒等）基礎(chǔ)上確定研究課題、進(jìn)行實驗設(shè)計時，首先必須考慮的是明確研究目的，然后圍繞這一目的實驗。做到有的放矢，目標(biāo)不可定的太多，否則主次不分，結(jié)果一個也弄不清楚。2. 確定實驗方法與觀察指標(biāo)常常要根據(jù)既定目的，掌握國內(nèi)外該領(lǐng)域研究動態(tài)，結(jié)合本單位條件，確定切實可行的實驗方法。盡可能采用先進(jìn)技術(shù)與儀器，特別注重將有

14、關(guān)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)成果如免測定技術(shù)、電子計算機等用于藥理學(xué)實驗，指標(biāo)的選擇首先要能反映要研究問題的本質(zhì)，具專一可靠性。如抗高血壓藥的藥理指標(biāo)為血壓，而腎炎病人雖然血壓升高亦為常見癥狀，但更為特異性指標(biāo)應(yīng)為腎功能及尿常規(guī)等指標(biāo)3. 選擇適當(dāng)?shù)膶嶒瀯游锘A(chǔ)藥理實驗對象包括正常動物、麻醉動物及病理模型。既有整體動物，也有離體器官、組織和細(xì)胞等。主要根據(jù)實驗?zāi)康?、方法、動物的生理特點及指標(biāo)的要求而定。為了避免動物在實驗過程中出現(xiàn)無效反應(yīng)或反應(yīng)異常，應(yīng)根據(jù)實驗內(nèi)容選擇與人反應(yīng)近似的動物。如過敏實驗宜選豚鼠；平喘實驗宜選豚鼠；血壓實驗可選狗、貓、大白鼠、亦可選家兔；心臟實驗可選青蛙、蟾蜍、家兔、豚鼠等，但不宜

15、選大白鼠；嘔吐實驗選狗、貓、鴿、不可選無嘔吐中樞的嚙齒類，神經(jīng)系統(tǒng)實驗選貓、狗；離體、在體子宮實驗，選大白鼠，亦可選用家兔，腸管實驗可選豚鼠、大白鼠、家兔；致畸實驗選猴；依賴性實驗選猴、狗、大鼠；致癌與抗癌實驗選大白鼠、小白鼠、狗；LD50測定，所需數(shù)量大，宜選小白鼠；長期毒性實驗，多選大白鼠，可選家兔、狗等；熱原檢查與解熱藥實驗選用家兔。除特殊要求外，動物大小一般選用接近成熟的動物，性別大致雌雄各半，而且一個實驗一般要用兩種以上的動物，盡量注意嚙齒類與非嚙齒類均要兼有。4. 重視預(yù)備實驗預(yù)備實驗是正式實驗前的重要步驟，也是實驗設(shè)計的實踐探索。根據(jù)預(yù)試情況，還可對原始實驗設(shè)計作必需的修正，是完

16、善實驗設(shè)計的一個不可缺少的步驟。預(yù)備實驗一般解決以下問題： 修正實驗樣本種類與數(shù)量。 檢查實驗的觀測指標(biāo)是否客觀、靈敏與可靠 改進(jìn)實驗方法與熟練實驗技術(shù) 探索藥物劑量大小與反應(yīng)關(guān)系，確定用藥劑量 發(fā)現(xiàn)值得進(jìn)一步研究的線索四、實驗動物的捉拿法1、小白鼠用右手輕輕抓住尾，放在粗糙面上，輕向后拉，以左手拇指和食指夾住其兩耳及頭部皮膚，用無名指和小指壓住鼠尾將小白鼠完全固定于手中。2、大白鼠以右手或持鑷子抓住尾部，左手戴手套防護(hù)（有經(jīng)驗者也可不戴），抓緊兩耳和頭頸部的皮膚，并將鼠固定在左中，右手即可進(jìn)行操作。3、豚鼠先用手掌以穩(wěn)準(zhǔn)的手法迅速扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，將手張開，用手指握住頸部，或握住

17、身體的四周，再拿起來。懷孕或體重較大的豚鼠，應(yīng)以另手托其臀部。4、家兔用左手抓住頸背部皮膚（抓的面積越大其吃重點越分散）。將兔提起，以左手托住其臀部，使兔呈座位。5、貓溫順貓可用一只手捉住貓的頸部皮膚，另一只托起四肢部抱起。對兇暴貓，將手慢慢伸入籠內(nèi)，輕撫貓的背、頭、頸部。一只手抓住貓的頸部，取出籠外，另一只手捉住從背到腰部的皮膚捉拿。當(dāng)貓不許手接觸它的皮膚時，可用皮手套或網(wǎng)捉拿。6、狗用一捕狗夾住狗頸，另一人用一粗棉帶綁住嘴巴，使其不能咬人。如系馴順狗，可突然捉住兩耳，將前足提高，然后綁嘴巴。綁嘴的方法是將扁帶繞上下頜，再作一結(jié)，最后將帶牽引至頭后頸背上打第三結(jié)，在此結(jié)上須再打一活結(jié)以固定之

18、。7、蟾蜍一般由左手握蛙，將蛙的雙下肢固定于無名指和小指之間，一上肢固定于食指和中指之間，另一上肢夾于虎口。五、實驗動物的給藥及取血法1、蟾蜍蛙皮下有數(shù)個淋巴囊，注藥易吸收，常用腹淋巴囊（見圖1），注藥時，將蛙四肢固定，使腹部向上，注射針頭從蛙大腿上部刺入，經(jīng)大腿肌層入腹壁肌層，再淺出至腹壁皮下，即是腹淋巴囊。此法可避免藥液外漏。注藥量0。251。0ml/只。2、小白鼠（1）灌胃（po）：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃針頭自口角進(jìn)入口腔，緊貼上腭插入食道（如圖2），如遇阻力，將灌胃針頭抽回重插，以防損傷。灌胃量0.10.2ml/10g.（2）皮下注射（sc）：可用腹部、背部、腹股溝皮下，皮膚

19、比較松弛，也可由助手協(xié)助。注藥量0。10。2ml/10g.（3）肌肉注射（im）：一人抓住小鼠頭部皮膚和尾巴，另一人持連4號針頭的注射器，將針頭刺入后腿外側(cè)肌肉（如圖3）。注射量不超過0。1ml.（4）靜脈注射（iv）：將小鼠置入固定器，酒精涂擦尾部，以使血管擴張，自尾部末段刺入，刺入血管后抽針芯可見回血。注射量0.10.2ml/10g。（5）腹腔注射（ip）：將小鼠固定后，從下腹部外側(cè)進(jìn)針，深度較皮下注射深。注射量0.10.2ml/10g。（6）取血 尾尖取血：使尾部充血后剪去尾尖即可。適小量血樣采血。尾靜脈取血：用刀切割尾靜脈，可取血0.30.5ml。3、大鼠（1）給藥：大鼠灌胃、腹腔注射

20、、皮下注射及尾靜脈注射與小鼠相似。注藥量為小鼠的23倍。靜脈注射也可在麻醉下行舌下靜脈注射。（2）取血：同小鼠。4、家兔（1）灌胃：一人將兔身固定于腋下，一手固定兔頭，另一手將開口器放入兔口。另一人將導(dǎo)尿管從開口器孔插入口內(nèi)，再慢慢插入食道和胃。為慎重起見，可將胃管外端放入水中，如無氣泡，則可證實導(dǎo)尿管在胃內(nèi)。灌胃量10ml/kg。如用兔寄存定盒，中由一個操作。（2）耳靜脈注射：一人固定兔身和兔頭，另一人在使兔耳邊緣血管擴張后，從靜脈末端刺入血管，左手拇指和食指固定針頭和兔耳，右手注藥（如圖4）。注藥量2ml/kg，等滲液可達(dá)10ml/kg。（3）皮下、肌肉、腹腔注射與鼠相似。注藥量分別為0.

21、5、1.0、5.0ml/kg.（4）取血：耳靜脈取血，先使兔耳血管擴張，以粗針頭刺破或用刀切割血管，使血液流入容器中。心臟取敵國，將兔仰位固定，剪去心前區(qū)毛，用碘酒、酒精消毒皮膚。觸摸胸骨左緣3、4肋間隙，取心跳最明顯處作為穿刺點，然后將針頭刺入胸腔，當(dāng)感受到心臟跳動時，再將針頭刺入心臟，即可抽出血液。2公斤兔每次抽血2025ml，飼養(yǎng)二周后可再抽血。5、豚鼠豚鼠腹腔、皮下注射法同鼠為。小量取血可從耳背靜脈切開或刺破靜脈。需較多血時，在麻醉下暴露一側(cè)頸外靜脈取血。心臟取血時，助手固定豚鼠四肢，腹部向上，用5號針頭于心尖跳動最明顯處刺入。取血量：500g豚鼠每次可取6ml。6、犬（1）腹腔注射：

22、犬被夾住后，用力將犬的頸、頭壓在地上，提起一側(cè)后肢，將藥注入腹腔。（2）靜脈注射：可從后肢外側(cè)小隱靜脈或前肢皮下頭靜脈注射。（3）取血：前肢皮下頭靜脈取血：在前肢腳爪上方背側(cè)剪毛，一人抓緊腿并壓迫血管上端，注射者固定靜脈后即可刺入血管。后肢小隱靜脈取血，該血管從后肢外踝后側(cè)走向外上側(cè)，取血法同前肢皮下頭靜脈取法。小量取血時可從耳緣血管。六、藥理實驗中藥物的濃度及劑量的換算（一）藥量單位藥量的基本重量單位是克（g），有時亦用到毫克（mg）、微克（g）、毫微克（ng）及微微克（pg）。換算關(guān)系是：g=103 mg=106g藥量的基本容量單位是毫升（ml），有時亦用到升（l）及微升（l）。換算關(guān)系是

23、：l=103ml=106l。（二）給藥容量注射用藥前應(yīng)首先考慮該種動物在特定注射途徑所能允許的最大容量（ml），只有確定容量之后才能決定溶液配成多大濃度合適。通常，動物血容量約占體重的1/3左右，靜脈注射藥液容量過大，可影響到循環(huán)系統(tǒng)正常功能，故靜脈注射容量最好在體重的1/100以下，靜脈外注射（皮下、肌肉及腹腔）容量最好在體重的1/40以下。如一只20克體重的小白鼠，尾靜脈注射不宜超過0.2 ml；肌肉、皮下、腹腔等部位注射不宜超過0.5 ml。（三）藥物濃度藥物濃度是指定量液體或固體制劑中所含藥物的分量，常用的液體制劑有下列幾種表示方法：1、百分濃度以每一百份溶液中所含藥物的份數(shù)來表示，簡

24、寫成%。（1）重量/容量（W/V）法：表示每100ml溶液中含有藥物的克數(shù)，如5%葡萄糖，是指100ml溶液中含有5克葡萄糖，不加特別說明時的藥物%濃度即指這種方法。（2）容量/容量（V/V法）：適用于液體藥物的配制，表示100ml溶液中含有藥物的ml數(shù)，如75%乙醇即100ml中含無水乙醇75ml，換言之，用75ml無水乙醇加蒸餾水至100ml即可制得75%乙醇。2、比例濃度用來表示稀溶液的濃度，如1：10000腎上腺素溶液即指0.01%腎上腺素（1ml中含0.1mg腎上腺素。3、摩爾/升（mol/l）濃度是指一升溶液中所含溶質(zhì)的克分子數(shù)，稱為該溶液的摩爾/升濃度，如0.1mol/l NaC

25、l表示1升溶液中含有0.1克分子即5.844gNaCl（NaCl分子量為58.44）。4、劑量換算動物實驗所用的藥物劑量，一般是按mg/kg（有時也用g/kg）計算，給藥時需從已知藥物濃度換算成相當(dāng)于每kg體重（為方便起見，大鼠、豚鼠也可按每100g，小鼠、蟾蜍可按每10g體重）應(yīng)該注射的藥液量（ml）。有時則需根據(jù)藥物劑量和給藥容量計算出合適的藥物濃度；有時還須進(jìn)行濃度之間換算（如百分濃度和克分子濃度間）以便進(jìn)行分析和計算。（1）由藥物劑量mg/kg以及藥液百分濃度換算成每kg體重注射藥量（ml），進(jìn)而計算出每只動物應(yīng)該注射多少ml。例：小白鼠體重22g，腹腔注射鹽酸嗎啡10mg/kg，藥物

26、濃度 0.1%，應(yīng)該注射多少ml？計算方法：0.1%的鹽酸嗎啡溶液每ml含藥物 1mg， 10mg/kg相當(dāng)于 10ml/kg，動物22g體重?fù)Q算成 0.022kg，10mg/kg×0.022kg =0.22ml。為計算方便，上述10ml/kg首先換算成0.1ml/10g，小白鼠體重改寫成 2.2×10g ，0.1ml/10g×2.2×10g=0.22ml。（2）由藥物劑量mg/kg和設(shè)定的藥液容量ml/kg，計算應(yīng)該配制的藥物濃度。例：家兔靜脈注射鹽酸嗎啡10mg/kg，注射容量1ml/kg，應(yīng)該配制的藥液濃度是多少？計算方法：10mg/kg相當(dāng)于1m

27、l/kg，1ml藥液應(yīng)該含10mg鹽酸嗎啡，1：10=100：X，X=100（mg）=1g，故配成的濃度100ml含1g，即1%的鹽酸嗎啡。3、習(xí)題：（1）給體重2.2kg的兔注射30mg/kg的尼可剎米，注射濃度為10%，應(yīng)注射多少毫升？（2）大白鼠口服雙氫氯塞嗪劑量為5mg/kg，規(guī)定灌胃藥液量為2.5ml/100g，應(yīng)配制的濃度是多少？（3）硫噴妥鈉注射劑每支0.5g兔體重1.8kg，靜脈注射硫噴妥鈉劑量為10mg/kg，容量為1ml/kg，該藥0.5g應(yīng)配成多少毫升？注射藥量是多少毫升？實驗一 給藥途徑不同對藥物作用的影響【目的】 觀察以不同的給藥途徑給予同劑量尼可剎米時，所引起藥理作

28、用的差異?！静牧稀?小白鼠2只 鼠籠 天平 注射器 小鼠灌胃針頭 注射針頭 2%尼可剎米溶液【方法】取性別相同，體重相近的小白鼠2只，以甲、乙編號，分別稱重，觀察各鼠的一般情況，依次給藥。甲鼠以灌胃法給予尼可剎米4mg/10g（2%溶液0.2ml/10g)。乙鼠以腹腔注射給予尼可剎米4mg/10g（2%溶液0.2ml/10g)。每次給藥后立即記下當(dāng)時時間。密切觀察小白鼠的反應(yīng)。動物首次出現(xiàn)驚厥時，也應(yīng)立即記下時間。從給藥到首次出現(xiàn)驚厥的一般時間為藥物作用的潛伏期。比較2只小白鼠結(jié)果之差別?！緢蟾嬉c】鼠號性別體重尼可剎米劑量給藥途徑作用潛伏期最后結(jié)果 注：最后結(jié)果欄記載是否發(fā)生死亡及給藥到死亡

29、相隔時間等?！居懻擃}】不同給藥途徑在哪些情況下可使藥物的作用產(chǎn)生量的差異？在哪些情況下又可使藥物產(chǎn)生質(zhì)的不同？實驗二 肝功能對藥物作用的影響【目的】 觀察小白鼠肝功能損傷對硫噴妥鈉作用的影響?！静牧稀?器材：天平 1ml注射器 鼠籠 藥品：0.4%硫噴妥鈉溶液,10%四氯化碳,苦味酸溶液 動物:小白鼠【方法】 1、試驗前24小時用四氯化碳損傷小鼠肝功能，即以10%四氯化碳0.2ml/10g皮下注射(由教研室預(yù)先注射好)。 2、取體重相近的正常小白鼠及肝功能已損傷的小白鼠各一只，稱體重，以苦味酸溶液作好標(biāo)記。并試其翻正反射是否存在。 （將小白鼠仰臥試驗臺上，若能恢復(fù)正常體位，為翻正反射存在，否則

30、為翻正反射消失）。 3、分別由腹腔注射硫噴妥鈉溶液40mg/kg（0.4溶液0.1ml/10g）,記錄并比較小白鼠麻醉作用維持時間有何差別?麻醉作用以翻正反射消失為指標(biāo).麻醉作用維持時間由麻醉醒轉(zhuǎn)時間減去麻醉開始時間而得。 4、將小白鼠處死（用頸椎脫臼法），剖視肝臟觀察形態(tài)上改變，并注意肝臟形態(tài)改變與麻醉作用維持時間的關(guān)系?！咀⒁馐马棥?如果已下課，小白鼠仍未從麻醉狀態(tài)中醒轉(zhuǎn)，其麻醉作用維持時間則記作大于多少分鐘？【報告要點】組別麻醉開始時間（分）麻醉維持時間（分）正常組肝損組實驗三 普魯卡因半數(shù)致死量（LD50）的測定和計算【目的】通過實驗了解測定藥物L(fēng)D50的方法、步驟和計算過程。【材料】

31、 1、器材：鼠籠，天平，1ml注射器。 2、藥品：2%鹽酸普魯卡因溶液，苦味酸溶液。 3、動物：小鼠（體重1725克，雌雄均可，應(yīng)注明性別）?！痉椒ê筒襟E】 1、探索劑量范圍：取小鼠8-10只，以2只為一組，選擇劑量間距較大的一系列劑量，分別給各組腹腔注射鹽酸普魯卡因溶液，觀察出現(xiàn)的癥狀并記錄死亡數(shù)，找出引起0%及100%死亡率劑量的所在范圍（致死量約在105150mg/kg范圍內(nèi)）。本步驟可由教研室預(yù)先進(jìn)行。 2、正式試驗：在預(yù)試驗所獲得的0%和100%致死量的范圍內(nèi)，選用幾個劑量（一般用5個劑量，按等比級數(shù)增減，相鄰劑量之間比例為1：0.7或1：0.8），各劑量組動物數(shù)為10只，分別用苦味

32、酸標(biāo)記。動物的體重和性別要分層隨機分配，完成動物分組和劑量計算后按組腹腔注射給藥。最好先從中劑量組開始，以便能從最初幾組動物接受藥物后的反應(yīng)來判斷兩端的劑量是否合適，否則可隨時進(jìn)行調(diào)整，盡可能使動物的死亡率在50%上下，死亡率為0%或100%時，不能用于計算。 實驗以全班為一個單位，可以一個組觀察一個劑量組（10只小鼠），或每組各作每一劑量組的2只小鼠，務(wù)求用藥量準(zhǔn)確，注射方法規(guī)范，以減少操作誤差，避免非藥物所致的死亡，得到較理想的結(jié)果。 3、觀察試驗結(jié)果：給藥后即觀察小鼠活動改變情況和死亡數(shù)，存活者一般都在15-20分鐘內(nèi)恢復(fù)常態(tài)，故觀察30分鐘內(nèi)的死亡率。 4、計算LD50及其95%可信限

33、： LD50計算方法有多種，這里介紹最常用的加權(quán)直線回歸法（Bliss法）。此法雖計算步驟稍繁，但結(jié)果較精確，實際應(yīng)用時可借助于計算機。 首先，用較大的劑量間距確定致死劑量的范圍，進(jìn)而在此范圍內(nèi)設(shè)定若干劑量組，劑量按等比方式設(shè)計，相鄰兩個劑量間距比例在0.65-0.85之間，給藥后觀察7-14天內(nèi)動物一般情況和死亡數(shù)，根據(jù)死亡率計算LD50。請注意：若死亡率為100%和0%的數(shù)據(jù)，其機率單位為+和-，數(shù)據(jù)可列于表格中，但不能用于計算?，F(xiàn)用下述例子具體說明計算方法。 例：將某批中藥厚樸注射液腹腔注射于小鼠，三天內(nèi)的死亡率如下： 劑量（g/kg）： 4.255.316.648.30 死亡率（死亡數(shù)

34、/試驗動物數(shù)）：1/103/105/109/10 求LD50及其95%可信限，計算步驟如下： （1）列計算用表 將各項數(shù)據(jù)填入表16-1，機率單位和權(quán)重系數(shù)分別查附表A和附表B。 （2）計算LD50logD與機率單位之間有線性關(guān)系，因此將logD作為X，機率單位作為Y，用計算器作直線回歸。 LD50的對數(shù)值與機率單位5相對應(yīng)，故輸入5（Y值），連續(xù)按“SHIFT”和“)”鍵后顯示的X值，即為LD50的對數(shù)（稱為m ），取其反對數(shù)，就是LD50。在此例，結(jié)果為：m=logLD50=0.7891LD50=log-1m=6.1532g/kg小鼠腹腔注射厚樸注射液LD50計算表劑量DlogDXX2n死

35、亡率%機率單位Y權(quán)重系數(shù)權(quán)重*WWXWX24.250.62840.394910103.720.3433.432.15541.35455.310.72510.525810304.480.5765.764.17663.02846.460.82220.676010505.000.6376.375.23744.30628.300.91910.844710906.280.3433.433.15252.8975WWXWX218.9914.721911.5866* 權(quán)重權(quán)重系數(shù)×各組動物數(shù)(n)(3)計算LD50的95%可信限由于實驗求得的LD50存在抽樣誤差,因此須按統(tǒng)計學(xué)方法確定LD50值95

36、%可能出現(xiàn)的范圍(95%可信限)。在此例，由于n數(shù)相等。計算方法如下：m±1.96Sm(Sm為m的標(biāo)準(zhǔn)誤)m=logLD50=0.7891(見上述計算步驟)Sm2=1/b2(m-X)2/W(X-X )2+1/W其中W(X-X)2=WX2-(WX)2/W=0.1735b=8.4605(從直線回歸計算中得出)X=WX/W=0.7752固而Sm2=0.01397×(0.7891-0.7752)2/0.1735+0.05266=0.0007512Sm=Sm2=0.0007512=0.02741m±1.96Sm=0.7891±0.05372=0.73538-0.8

37、4282分別取反對數(shù),取LD50的95%可信限:5.4373-6.9634g/kg(4) LD50及其95%可信限:6.1532g/kg(5.4373-6.9634 g/kg)要求：1、報告實驗日期，藥品批號，生產(chǎn)廠名，小鼠的性別和體重范圍，給藥途徑，給藥后的中毒癥狀；并將劑量（單位體重所用藥量，mg/kg），死亡率等LD50的計算數(shù)據(jù)歸納簡明的表格（參照表1），報告LD50及其95%可信限主要計算過程和計算結(jié)果。2、如實驗失敗或結(jié)果不理想，可按同樣要求對下述練習(xí)題中的一個進(jìn)行計算和和報告。練習(xí)題1、將某種中藥制劑給小白鼠灌胃后，48小時內(nèi)各劑量組的死亡數(shù)如下，求該藥的LD50及其95%可信限

38、。灌胃劑量（g/kg）： 5.126.408.0010.012.5死亡數(shù)/實驗動物數(shù):1/102/104/107/109/102、小鼠皮下注射有機磷制劑對硫磷(1605)1.8mg/kg,立即腹腔注射不同劑量的氯磷定進(jìn)行搶救,觀察生存率(即氯磷定的有效率)如下:氯磷定劑量（mg/kg）： 12.816.020.0生存數(shù)/實驗動物數(shù): 1/106/109/10 求氯磷定的ED50及其95%可信限:如果氯磷定的LD50為173.6 mg/kg,那么它的治療指數(shù)(TI)為多少?附表A 分率與機率單位對照表百分率01234567890-2.672.953.123.253.363.453.523.593

39、.66103.723.773.833.873.923.964.014.054.084.12204.164.194.234.264.294.334.364.394.424.45304.484.504.534.564.594.614.644.674.694.72404.754.774.804.824.854.874.904.924.954.97505.005.035.055.085.105.135.155.185.205.23605.255.285.315.335.365.395.415.445.475.50705.525.555.585.615.645.675.715.745.775.81805

40、.845.885.925.955.996.046.086.136.186.23906.286.346.416.486.556.646.756.887.057.33附表B 機率單位與權(quán)重系數(shù)對照表機率單位權(quán)重系數(shù)機率單位權(quán)重系數(shù)機率單位權(quán)重系數(shù)機率單位權(quán)重系數(shù)1.10.000823.10.154365.10.634317.10.110261.20.001183.20.179945.20.627427.20.091791.30.001673.30.207745.30.616097.30.075641.40.002353.40.237535.40.600527.40.061681.50.003273

41、.50.269075.50.580997.50.049791.60.004513.60.301995.60.557887.60.039771.70.006143.70.335895.70.531597.70.031431.80.008283.80.370315.80.502607.80.024581.90.011053.90.404745.90.471447.90.019032.00.014574.00.438636.00.438638.00.014572.10.019034.10.471446.10.404748.10.011042.20.024584.20.502606.20.370318

42、.20.008282.30.031434.30.531596.30.335898.30.006142.40.039774.40.557886.40.301998.40.004512.50.049794.50.580996.50.269078.50.003272.60.061684.60.600526.60.237538.60.002352.70.075644.70.616096.70.207748.70.001672.80.091794.80.627426.80.179948.80.001182.90.110264.90.634316.90.154368.90.000823.00.131125

43、.00.636627.00.131129.00.00056實驗四 阿托品對平滑肌的抑制作用【目的】觀察阿托品對小白鼠平滑肌蠕動的抑制作用【材料】 器材：剪刀、鑷子、天平、蛙板、棉花 藥品：0.05%硫酸阿托品溶液、生理鹽水、墨汁 動物：小白鼠2只【方法】 1、取已饑餓12-24小時體重相近的小白鼠2只，甲鼠以0.05%硫酸阿托品溶液0.1ml/10g灌胃，乙鼠以0.2ml生理鹽水灌胃。15分鐘后，甲、乙兩鼠各給予0.2ml墨汁灌胃。 2、經(jīng)15分鐘后，分別將兩鼠以頸椎脫臼法處死。立即剖腹。將胃幽門為起點，量出墨汁流動的距離，以及小腸的總長度。然后求出二鼠墨汁在小腸內(nèi)移動距離占小腸總長度的百分比

44、，比較兩鼠有何不同，此結(jié)果說明什么問題？墨汁流動距離小腸總長度 ×100%=【注意】 1、黑汁必須準(zhǔn)確； 2、灌墨法和處死的間隔時間必須正確； 3、本實驗中墨汁也可改用1%卡紅溶液。實驗五 傳出神經(jīng)藥對瞳孔的影響【目的】 1、觀察抗膽堿藥及擬腎上腺素藥對瞳孔的作用并分析其作用機制。 2、練習(xí)家兔的捉拿、滴眼及量瞳方法。【材料】 器材：剪刀、測瞳器、注射器（1ml）、兔固定箱 藥品：0.5%硫酸阿托品溶液、1%新福林溶液 動物：家兔1只，體重2kg3kg【方法】(1)取健康家兔1只,標(biāo)記后放入兔固定箱內(nèi)，剪去眼睫毛，在自然光線下測量并記錄兩側(cè)正常瞳孔直徑（mm）及對光反射，然后按下列順

45、序給藥：左眼0.5%硫酸阿托品右眼1%新福林滴藥時將下眼瞼拉成杯狀，并用手指按住鼻淚管，使其在眼瞼內(nèi)保留1min，然后將手輕輕放開，任其自然溢出。（2）滴藥15min后，在同樣強度的光線下，再分別測量并記錄各眼瞳孔大小和對光反射?！緢蟾嬉c】將實驗結(jié)果整理記入表內(nèi)。眼藥物瞳孔直徑（mm）對光反射給藥前給藥后給藥前給藥后左硫酸阿托品右新福林【討論題】（1） 從實驗結(jié)果分析阿托品和新福林?jǐn)U瞳機制有何不同？【注意事項】 （1）測量瞳孔勿刺激角膜，否則會影響瞳孔大小。 （2）滴藥時應(yīng)按壓內(nèi)眥部的鼻淚管，以防藥液進(jìn)入鼻腔，經(jīng)鼻粘膜吸收。 （3）各眼滴藥量要準(zhǔn)確，在眼內(nèi)停留時間要一致，以確保藥液充分作用。

46、 （4）測量瞳孔條件務(wù)求給藥前后一致：如光線的強度，光源的角度等。實驗六 有機磷酸酯類的中毒與解救（討論）【目的】掌握有機磷酸酯類中毒的機理及解毒藥的作用機理?！緝?nèi)容】 1、有機磷酸酯類對膽堿酯酶難逆性抑制作用，中毒機理，急性中毒的癥狀及解救原則。 2、氯解磷定與碘解磷定復(fù)活膽堿酯酶的機理、用途與阿托品的協(xié)同作用？【思考題】1、試述有機磷中毒的癥狀有哪些？2、阿托品在解救有機磷中毒有什么作用特點？3、有機磷中毒為什么必須將M受體阻斷藥與膽堿酯酶復(fù)活藥反復(fù)交替應(yīng)用？實驗七 藥物對兔血壓的作用及其受體作用分析【目的】觀察adrenaline,Norepinephrine和isoprenaline,

47、acetylcholine等藥物對兔血壓作用，并以阻滯劑為工具分析各藥對受體的作用?！静牧稀科鞑模菏中g(shù)臺、1 ml 、10ml注射器、5號長針頭、氣管套管、動脈套管、靜脈套管；動脈夾、手術(shù)刀、小剪刀、普通剪刀、止血鉗、壓力換能器、記錄儀、橡皮管、9號針頭、頭皮針頭（連接硅膠管），Medlab生物學(xué)信號采集處理系統(tǒng)。藥品：1000u/ml sodium heparin 、生理鹽水、20%烏拉坦、2×10-2g/L adrenaline hydrochloride 、2×10-2g/L norepinephrine bitartrate、2×10-2g/Lisopre

48、naline sulfate、1:10萬acetylcholine chloride、10g/L phentolamine、2.5g/L propranolol hydrochloride、1:100 acetylcholine、1:100atropine。動物：家兔【方法和步驟】取家兔一只，稱體重，i.v20%烏拉坦45ml/kg麻醉后，將其背位固定于手術(shù)臺上。1、頸動脈測壓系統(tǒng)：正中切開頸部皮膚。分離左側(cè)頸總動脈在其下置縫線二根，結(jié)扎其遠(yuǎn)心端（盡量高位些），并在近心端夾上動脈夾以阻斷血流。將連于壓力換能器的已充滿生理鹽水和肝素的動脈套管向心臟方向插入頸動脈內(nèi)，用線扎緊，開放動脈夾（緩慢開放

49、）。將血壓描記于Medlab生物信號采集處理系統(tǒng)上。Medlab參數(shù)設(shè)置：記錄方式：連續(xù)記錄存盤方式：連續(xù)存盤輸入：DC放大倍數(shù)：100-200采樣速率：1ms2、兔耳靜脈給藥裝置：將連接硅膠管頭皮針另一端接9號針頭裝入10 ml注射器上，用生理鹽水充滿，然后用頭皮針頭刺入兔耳靜脈中。并用膠布固定。以上步驟就緒后分別描記正常血壓、心率，然后依次從靜脈給予下列藥物：一、腎上腺素系統(tǒng)的藥物（一）觀察adrenaline等藥物對血壓的作用1、2×10-2g/L adrenaline 0.1ml/kg2、2×10-2g/L noradrenaline 0.1ml/kg3、2

50、5;10-2g/L isoprenaline 0.1ml/kg（二）觀察-腎上腺素能受體阻滯劑phentolamine對 Adrenaline等藥物對血壓作用的影響。4、10g/L phentolamine 1mg/kg，緩慢注入，用藥2分鐘再給下列藥物：5、adrenaline（劑量同2）6、noradrenaline（劑量同2）7、isoprenaline （劑量同3）（三）觀察-腎上腺素能受體阻滯劑propranolol對adrenaline等藥物對血壓作用的影響8、2.5g/L propranolol 0.5mg/kg （緩慢注入約2分鐘以上）5分鐘后再給下列藥物：9、adrenali

51、ne （劑量同1）10、norepinephrine（劑量同2）11、isoprenaline（劑量同3）二、膽堿系統(tǒng)的藥物觀察大劑量atropine，再給大量 acetylcholine引起的血壓變化1、acetylcholine 1:100 0.05-0.1ml/kg2、atropine 1:100 0.1ml/kg3、acetylcholine 1:100 0.05-0.1ml/kg【結(jié)果】 以曲線表示，根據(jù)上述結(jié)果分析adrenaline、noradrenaline、isoprenaline 各藥物對血壓作用與及其它受體的關(guān)系。【注意點】 adrenaline等藥物靜脈注射時容積小速度

52、要快，阻滯藥須緩慢注入。每次給藥后，再推生理鹽水1ml，使尼龍管內(nèi)藥物全部進(jìn)入體內(nèi)。 待血壓恢復(fù)到基線或基本穩(wěn)定后，再加入下一個藥物。實驗八 熱板法觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用 【目的】觀察哌替啶的鎮(zhèn)痛效應(yīng)【材料】器材:恒溫水浴、鼠籠、鋁罐、1ml注射器、天平藥品：0.25%哌替啶溶液、生理鹽水動物：雌性小白鼠數(shù)只（18-22g）【方法】 1、將恒溫水浴加水至水面觸及鋁罐底部，調(diào)節(jié)水浴溫度恒定于55±0.1。 2、取雌性小白鼠數(shù)只，于實驗前預(yù)先挑選合格者。方法為將小白鼠放入鉛罐內(nèi)記錄時間，觀察到出現(xiàn)舐后足的時間為止，此段時間作為該鼠的熱痛反應(yīng)時間，記錄之。凡是在30秒內(nèi)不舐后足或跳躍，逃避者棄之。 3、將篩選合格的小白鼠2只，做好記號為甲、乙，測每只小鼠的正常痛閾值一次，作為該鼠給藥前痛閾值。 4、甲鼠腹腔注射0.25%哌替啶溶液0.1ml/10g，乙鼠注射生理鹽水0.1ml/10g作為對照。用藥后15分，30分，60分各測小白鼠痛閾二次，如果用藥后放入鋁罐內(nèi)60秒鐘仍無反應(yīng)，即將小白鼠取出，以免時間太長把腳燙傷，痛閾可按60秒計算。 5、實驗完畢后，按下列公式計算痛閾提高百分率。×100%= 痛閾提高 用藥后平均痛反應(yīng)時間-用藥前平均痛反應(yīng)時間 百分率 用藥前平均痛反應(yīng)時間【注意】 1、小鼠以雌性為好。因為雄性過熱時睪丸下垂，陰囊觸及熱板而致反應(yīng)過敏