糧油檢驗植物油中角鯊烯的測定氣相色譜法

1、ics 67. 040x 04中華人民共和國糧食行業(yè)標準ls/t61202017糧油檢驗 植物油中角鯊烯的測定氣相色譜法inspection of grain and oils一determination of squalene in vegetable oil by gaschromatography2017- 09- 15 發(fā)布2017-09- 15 實施國家糧食局 發(fā)布本標準按照gb/t 1. 1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由國家糧食局提出。本標準由全國糧油標準化技術委員會(sac/tc 270)歸口。本標準起草單位：國家糧食局科學研究院、國家林業(yè)局國有林場和林木種苗工作總站、屮紡糧

2、油進 出口有限責任公司、北京市營養(yǎng)源研究所、中糧食品營銷有限公司。本標準主要起草人：朱琳、薛雅琳、楊超、趙兵、張超英、張東、劉寶珍、崔亞娟、安駿。糧油檢驗 植物油中角鯊烯的測定氣相色譜法1范圍本標準規(guī)定了氣相色譜法測定植物油中角鯊烯含量的原理、試劑、儀器、試樣制備、操作步驟、結 果表示和精密度等。本標準適用于植物油中角鯊烯含量的測定。木標準方法的檢岀限為5mg/kgo2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。gb/t 6379. 1測量方法與結杲的準確度（正確度

3、與精密度）第1部分：總則與定義gb/t 6379. 2測量方法與結果的準確度（正確度與精密度）第2部分：確定標準測量方法重復性與再 現(xiàn)性的基本方法gb/t 6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法gb/t 15687動植物油脂試樣的制備3原理樣品經(jīng)氫氧化鉀-乙醇溶液皂化、正己烷提取后，采用氣相色譜法，以角鯊烷為內標測定植物油中 角鯊烯的含量。4試劑除非另有說明，在分析中應使用分析純試劑，水為gb/t 6682推薦使用的二級水。4.1氫氧化鉀。4. 2 95%乙醇。4.3無水乙醇。4.4正己烷：色譜純。4.5氫氧化鉀-乙醇溶液（約lmol/l）:稱取60g±0. lg氫氧化鉀（4. 1）,

4、加入50n±的水進行溶解, 然后用乙醇（4.2）稀釋至loooml,溶液應為無色或淺黃色。4.610%乙醇溶液：用量筒量取50譏乙醇（4.3）于500n±容量瓶中，用水定容至刻度。4. 7無水硫酸鈉。4.8角鯊烷標準品：純度$98%。4.9角鯊烯標準品：純度298%。4.10角鯊烷內標溶液：準確稱取25mg （精確至0. ooolg）角鯊烷標準品（4.8）于25汕容量瓶中，加 入少量正己烷（4.4）,使其充分溶解后，用正己烷（4.4）定容至刻度，搖勻，即配成lmg/ml角鯊烷 內標溶液。4.11角鯊烯標準儲備溶液：準確稱取50mg （精確至0. ooolg）角鯊烯標準品（4

5、. 9）于50ml容量瓶中, 加入少量正己烷（4.4）,使其充分溶解后，用正己烷（4.4）定容至刻度，搖勻，即配成lmg/ml角鯊 烯標準儲備液。4.12配制含30 u g/ml角鯊烷內標的角鯊烯工作液：將角鯊烯標準儲備液（4. 11）用正己烷（4.4）稀 釋至濃度分別為 2. 5 p g/ml> 5 u g/ml、10 卩 g/ml、20 u g/ml、50 u g/ml、100 y g/ml、200 p g/ml 的標 準工作液，并在工作液中加入適量的角鯊烷內標溶液（4.10）,保證每個工作液中角鯊烷終濃度為30 卩 g/ml。4.13 ph試紙:指示范圍114。5儀器5. 1圓底燒

6、瓶：帶標準磨口的250ml圓底燒瓶。5.2回流冷凝管：具有與燒瓶（5.1）配套的磨口。5.3 250ml分液漏斗：具用聚四氣乙烯旋塞。5.4恒溫水浴鍋。5.5渦旋振蕩器。5.6分析天平：精度0. 0001go5.7旋轉蒸發(fā)儀。5.8氮吹儀。5.9氣相色譜儀：配fid檢測器。6試樣制備按 gb/t 15687執(zhí)行。7操作步驟7.1樣品處理7.1.1稱量：準確吸取300pl角鯊烷內標溶液（4. 10）于250ml圓底燒瓶（5.1）屮，在氮吹儀上吹干 后，準確稱取0.2g2g樣品（6）（精確至0. ooolg）于此燒瓶中。7.1.2皂化：于燒瓶（7.1.1）屮加入50ml氫氧化鉀-乙醇溶液（4.5）

7、后，燒瓶與回流冷凝管（5.2） 連接好,在80°c恒溫水浴鍋（5. 4）中皂化冋流50min,停止加熱，從回流管頂部加入50譏水，取出燒 瓶搖勻，冷卻至室溫。7.1.3提?。簩恐械脑砘恨D移至250ml分液漏斗（5. 3）中，用50ml正己烷（4.4）分三次洗滌 燒瓶，并將洗滌液倒入分液漏斗中，用力搖動分液漏斗2min,倒轉分液漏斗，并小心打開旋塞，間歇 地釋放壓力，靜置分層，將下層皂化液轉移至另一個250譏分液漏斗小，再用相同的方法，分別用 30ml. 20ml正己烷（4.4）對皂化液再提取兩次，將三次正己烷提取液置于同一分液漏斗中。7.1.4洗滌：用25ml乙醇溶液（4.6）

8、洗滌正己烷提取液三至四次，每次棄去下層的乙醇水溶液，用 pll試紙（4.13）檢驗直至下層流出液呈中性。注1：第一次用乙醇溶液洗滌時要輕搖，防止乳化，逐次振搖強度可增加。如出現(xiàn)乳化層，可噴淋少量的無水乙醇。7.1.5濃縮：將洗至中性的正己烷提取液經(jīng)過鋪有約5g無水硫酸鈉（4.7）的濾紙濾入與旋轉蒸發(fā)儀（5.7）配套的球形蒸發(fā)瓶中，再用約20ml的正己烷沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉三次，并入蒸發(fā)瓶中， 在40°c水浴屮旋轉蒸發(fā)溶劑，待瓶屮剩下約2也正己烷時，取下蒸發(fā)瓶，立即放入氮吹儀（5.8） +吹 干，最后用正己烷（4.4）溶解并定容至10ml,待測。7.2色譜參考條件氣相色譜柱：hp-

9、5毛細管柱，柱長30m,內徑0. 32 mm,膜厚0.25 m；載氣：高純氮氣，純度99.999%；恒壓,16psi；分流比：1:10；進樣口溫度：250°c；柱溫采用程序升溫方式，以15°c/min的速率從160°c升溫到220°c,保持2min, 然后以5°c/min的速率升溫至（j28o°c,保持20min；最后以5°c/min的速率升溫到300°c,保持2min0fid檢測器：溫度300°c,氫氣流速40ml/min,空氣流速450ml/min,尾吹氣流速30inl/mino 進樣量：l.oul。

10、也可采用其他等效的毛細管柱或色譜條件。7.3標準曲線的制作將含有30 u g/ml角鯊烷內標的不同濃度角鯊烯標準工作溶液（4.12）注入氣相色譜儀屮進行分析, 記錄角鯊烯和角鯊烷的峰面積。以二者峰面積比為橫坐標，以二者質量比為縱坐標，繪制標準曲線，標 準曲線的斜率即為角鯊烯和角鯊烷的校正因子f。7.4樣品測定將樣品待測溶液（7.1.5）注入氣相色譜儀中進行分析，記錄樣品屮角鯊烯和角鯊烷峰面積。根據(jù) 樣品測試溶液的角鯊烯和角鯊烷的峰面積比、內標的質量及角鯊烯和角鯊烷的校正因子，計算出樣品待 測液角鯊烯的質量。如果樣品測試溶液的角鯊烯和角鯊烷峰面積比未落在標準曲線范圍內，應適當調整待測樣品的稱樣

11、質量，再重新進行測定。樣品中角鯊烯的含量（才丿按式（1）計算:=axx/xioooas m1000式中：樣品中角鯊烯的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；a一樣品中角鯊烯的峰面積；as樣品中內標角鯊烷的峰面積；ilk樣品中加入內標角鯊烷的質量，單位為微克（ug）；/-角鯊烯和角鯊烷的校正因子；m樣品質量，單位為克（g）。結果保留小數(shù)點后一位。9精密度9. 1重復性在重復條件下獲得的兩個獨立測試結果的絕對差值小于等于重復性限（廠）的情況應大于95%。角鯊烯含量的重復性限（廠）參見附錄a。9.2再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩個獨立測試結果的絕對差值小于等于再現(xiàn)性限（q的情況應大于95%。角鯊烯含量

12、的再現(xiàn)性限（q參見附錄a。附錄a（資料性附錄）實驗室間比對試驗統(tǒng)計結果組織11家實驗室對7個不同樣品進行實驗室間比對試驗，建立了本方法的精密度。結果按gb/t6379. 1和gb/t 6379. 2統(tǒng)計分析，統(tǒng)計結果見表a. 1。表a. 1實驗室間比對試驗統(tǒng)計結果樣品1234567實驗室數(shù)目11111111111111參加統(tǒng)計實驗室數(shù)目11111010111011離群實驗室數(shù)h0011010平均值/ (mg/kg)40. 2746.91247. 101960. 274951. 855677. 307760. 05重復性標準偏差，s0. 791.637. 9235. 10170.9464. 1871.89重復性限,r2.214.5622. 179& 29478.63179. 71201.28重復性變異系數(shù)/%1.963. 473. 201.793. 451. 130. 93再現(xiàn)性標準偏差，s10. 695. 851