動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方法 14.9.16

1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方法及其在中醫(yī)研究中的應(yīng)用吳廣文吳廣文中西醫(yī)結(jié)合研究院中西醫(yī)結(jié)合研究院1.臨床試驗(yàn)？臨床試驗(yàn)？2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)？動(dòng)物實(shí)驗(yàn)？ 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是根據(jù)研究目的，恰當(dāng)?shù)剡x用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是根據(jù)研究目的，恰當(dāng)?shù)剡x用標(biāo)準(zhǔn)的并符合實(shí)驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)的并符合實(shí)驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在設(shè)計(jì)的條件下，進(jìn)行各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察、記錄的條件下，進(jìn)行各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察、記錄動(dòng)物的反應(yīng)過(guò)程與反應(yīng)結(jié)果，以探討或檢驗(yàn)動(dòng)物的反應(yīng)過(guò)程與反應(yīng)結(jié)果，以探討或檢驗(yàn)未知因素對(duì)生命活動(dòng)的作用與影響的醫(yī)學(xué)實(shí)未知因素對(duì)生命活動(dòng)的作用與影響的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)。驗(yàn)。 1 1嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件2便于控制處理因素便于控制處理因素4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可有

2、目的培育實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可有目的培育5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)簡(jiǎn)便實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)簡(jiǎn)便動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)3最大限度獲取實(shí)驗(yàn)資料最大限度獲取實(shí)驗(yàn)資料 作為作為“人的替身人的替身”承受各種科學(xué)研究承受各種科學(xué)研究1 1 可以更深入地揭示微觀變化可以更深入地揭示微觀變化2 2 相對(duì)減少研究周期相對(duì)減少研究周期 3 3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的意義動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的意義美國(guó)心理學(xué)會(huì)動(dòng)物研究指導(dǎo)總則美國(guó)心理學(xué)會(huì)動(dòng)物研究指導(dǎo)總則“動(dòng)物行為研究動(dòng)物行為研究者應(yīng)努力促進(jìn)對(duì)基本行為原理的理解和者應(yīng)努力促進(jìn)對(duì)基本行為原理的理解和/ /或?yàn)樘岣呷嘶驗(yàn)樘岣呷祟惖慕】岛托腋Ｗ髫暙I(xiàn)。為達(dá)到這些目標(biāo)，研究者要類的健康和幸福作貢獻(xiàn)。為達(dá)到這些目標(biāo)，研究者要保證動(dòng)

3、物的權(quán)利和人道地對(duì)待它們。雖然有法律和規(guī)保證動(dòng)物的權(quán)利和人道地對(duì)待它們。雖然有法律和規(guī)定，但一只動(dòng)物的即時(shí)保護(hù)則有賴于科學(xué)家的個(gè)人良定，但一只動(dòng)物的即時(shí)保護(hù)則有賴于科學(xué)家的個(gè)人良知。知?！泵绹?guó)心理學(xué)會(huì)還提供了學(xué)生研究者的指導(dǎo)原則。美國(guó)心理學(xué)會(huì)還提供了學(xué)生研究者的指導(dǎo)原則?？傮w上，總體上，“當(dāng)采用動(dòng)物被試時(shí)，應(yīng)精心照料并盡可能當(dāng)采用動(dòng)物被試時(shí)，應(yīng)精心照料并盡可能減少它們的痛苦和不適。減少它們的痛苦和不適?！?參考文獻(xiàn)：參考文獻(xiàn)：B.H.B.H.坎特威茨等坎特威茨等. . 實(shí)驗(yàn)心理學(xué)。實(shí)驗(yàn)心理學(xué)。 中醫(yī)研究能不能采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物？中醫(yī)研究能不能采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物？突出的問(wèn)題是四診困難、情志難以把握，突出的問(wèn)

4、題是四診困難、情志難以把握，大家有什么看法大家有什么看法?有人懷疑心理學(xué)研究的價(jià)值，責(zé)問(wèn)政府何以資助小白鼠走迷津。這是他們對(duì)于心理學(xué)研究的期望不恰當(dāng)，而不在于心理學(xué)研究的本身。有人通過(guò)幾年的研究發(fā)現(xiàn)，盡管不同地區(qū)山雀的“方言”不同，但在同一地區(qū)生活的山雀所發(fā)出的入侵警報(bào)模式確可以穩(wěn)定地延續(xù)幾代。參考：B.H.坎特威茨等. 實(shí)驗(yàn)心理學(xué),24，35。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)的重要組成部分和重要?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)的重要組成部分和重要的研究方法和手段，無(wú)論對(duì)中醫(yī)學(xué)數(shù)千年來(lái)所積累的研究方法和手段，無(wú)論對(duì)中醫(yī)學(xué)數(shù)千年來(lái)所積累的疾病認(rèn)識(shí)、防治豐富經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證和總結(jié)，對(duì)歷的疾病認(rèn)識(shí)、防治豐富經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證和總結(jié)，

5、對(duì)歷代醫(yī)家理法方藥的研究，對(duì)中醫(yī)學(xué)理論的研究和發(fā)代醫(yī)家理法方藥的研究，對(duì)中醫(yī)學(xué)理論的研究和發(fā)展，還是對(duì)當(dāng)前中醫(yī)藥學(xué)各個(gè)學(xué)科的教學(xué)、科研，展，還是對(duì)當(dāng)前中醫(yī)藥學(xué)各個(gè)學(xué)科的教學(xué)、科研，對(duì)新的治療方法（包括應(yīng)用藥物和非藥物療法）的對(duì)新的治療方法（包括應(yīng)用藥物和非藥物療法）的發(fā)展，乃至對(duì)新的中醫(yī)藥學(xué)理論體系的創(chuàng)立，等等，發(fā)展，乃至對(duì)新的中醫(yī)藥學(xué)理論體系的創(chuàng)立，等等，都是不可缺少的。都是不可缺少的。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在中醫(yī)藥發(fā)展中的作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在中醫(yī)藥發(fā)展中的作用1 1驗(yàn)證中醫(yī)藥療效驗(yàn)證中醫(yī)藥療效2展示和檢驗(yàn)傳統(tǒng)理論展示和檢驗(yàn)傳統(tǒng)理論4精確診察手段精確診察手段3擴(kuò)大認(rèn)識(shí)范圍擴(kuò)大認(rèn)識(shí)范圍一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)

6、物的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的定義實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的定義：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指以實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指以實(shí)驗(yàn)研究為目的，在一定的環(huán)境條件控制下，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)馴為目的，在一定的環(huán)境條件控制下，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)馴化，具有明確的生物學(xué)特性和清楚的遺傳和微生化，具有明確的生物學(xué)特性和清楚的遺傳和微生物背景的動(dòng)物物背景的動(dòng)物。圖1 小鼠 圖2 裸小鼠 圖3 裸大鼠 圖4 大鼠 圖5 白兔 圖6 兔的飼養(yǎng)圖7 比格犬及其飼養(yǎng) 圖8 馬及其飼養(yǎng)常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類繁多，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)課題實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類繁多，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)課題的需要和動(dòng)物的特性加以選擇，使研究目的與動(dòng)物的的需要和動(dòng)物的特性加以選擇，使研究目的與動(dòng)物的種屬、特性和個(gè)體差異

7、相吻合，才能保證研究工作的種屬、特性和個(gè)體差異相吻合，才能保證研究工作的順利進(jìn)行。順利進(jìn)行。不同的科學(xué)實(shí)驗(yàn)要求選擇和開(kāi)發(fā)最適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)不同的科學(xué)實(shí)驗(yàn)要求選擇和開(kāi)發(fā)最適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。正確選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)周密詳盡，可以節(jié)物。正確選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)周密詳盡，可以節(jié)省人力、動(dòng)物和時(shí)間，以最小的代價(jià)，最大限度地獲省人力、動(dòng)物和時(shí)間，以最小的代價(jià)，最大限度地獲得可靠的研究結(jié)果。否則，不僅會(huì)造成不必要的浪費(fèi)，得可靠的研究結(jié)果。否則，不僅會(huì)造成不必要的浪費(fèi)，嚴(yán)重的還會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷，甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)重的還會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷，甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。因此，選擇和開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的首要失敗。

8、因此，選擇和開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的首要環(huán)節(jié)，至關(guān)重要，應(yīng)予以足夠的重視。環(huán)節(jié)，至關(guān)重要，應(yīng)予以足夠的重視。三個(gè)基本要求：三個(gè)基本要求：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通常應(yīng)該具備個(gè)體間實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通常應(yīng)該具備個(gè)體間的均一性、遺傳性能的穩(wěn)定性和比較容易獲得這三的均一性、遺傳性能的穩(wěn)定性和比較容易獲得這三個(gè)基本要求。個(gè)基本要求。具體要求如下：具體要求如下：1 1盡量選用機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及其它方面機(jī)盡量選用機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及其它方面機(jī)能與人相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能與人相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物的進(jìn)化階段愈高，機(jī)能、代謝、一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物的進(jìn)化階段愈高，機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)愈復(fù)雜，也就愈接近人類。結(jié)構(gòu)愈復(fù)雜，也就愈接近人類。2 2選用標(biāo)準(zhǔn)

9、化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物指遺傳背景明確、飼養(yǎng)環(huán)境與標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物指遺傳背景明確、飼養(yǎng)環(huán)境與動(dòng)物體內(nèi)的微生物得到控制、符合一定標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的微生物得到控制、符合一定標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。動(dòng)物。 只有選用標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，而且實(shí)驗(yàn)過(guò)程也只有選用標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，而且實(shí)驗(yàn)過(guò)程也在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中飼養(yǎng)的動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)中才能排除因動(dòng)在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中飼養(yǎng)的動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)中才能排除因動(dòng)物雜交、遺傳上的不均質(zhì)及環(huán)境條件的變化，所引物雜交、遺傳上的不均質(zhì)及環(huán)境條件的變化，所引起的個(gè)體反應(yīng)不一致。起的個(gè)體反應(yīng)不一致。 排除因動(dòng)物攜帶細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)和潛在排除因動(dòng)物攜帶細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)和潛在疾病的影響，才能

10、便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，減少實(shí)驗(yàn)誤疾病的影響，才能便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高科學(xué)性，準(zhǔn)確性，把所獲得的結(jié)果與同類差，提高科學(xué)性，準(zhǔn)確性，把所獲得的結(jié)果與同類研究進(jìn)行比較、交流，并得到承認(rèn)。研究進(jìn)行比較、交流，并得到承認(rèn)。 在實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)避免使用隨意交配繁殖的在實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)避免使用隨意交配繁殖的動(dòng)物，而應(yīng)根據(jù)研究目的選擇用遺傳學(xué)控制的方動(dòng)物，而應(yīng)根據(jù)研究目的選擇用遺傳學(xué)控制的方法培育出來(lái)的近交系、突變系、系統(tǒng)雜交或封閉法培育出來(lái)的近交系、突變系、系統(tǒng)雜交或封閉群動(dòng)物。群動(dòng)物。 同時(shí)應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行微生物控制，發(fā)展同時(shí)應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行微生物控制，發(fā)展使用無(wú)菌動(dòng)物、已知菌動(dòng)物或無(wú)特定病原體（使用

11、無(wú)菌動(dòng)物、已知菌動(dòng)物或無(wú)特定病原體（SPFSPF）動(dòng)物。動(dòng)物。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分類 按遺傳控制分類：按遺傳控制分類： （1 1）近交系，即純系動(dòng)物：其動(dòng)物遺傳的均質(zhì)）近交系，即純系動(dòng)物：其動(dòng)物遺傳的均質(zhì)性保證了實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的穩(wěn)定性。性保證了實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的穩(wěn)定性。 （2 2）封閉群動(dòng)物：能較好地代表自然群體的遺）封閉群動(dòng)物：能較好地代表自然群體的遺傳特性。傳特性。 （3 3）雜交一代動(dòng)物（）雜交一代動(dòng)物（F1F1）：在一定程度上，兼）：在一定程度上，兼有近交系和封閉群的特點(diǎn)。有近交系和封閉群的特點(diǎn)。 （4 4）突變動(dòng)物：往往具有鮮明的人類疾病模型）突變動(dòng)物：往往具有鮮明的人類疾病模型特征。特征

12、。 按微生物控制的程度，我國(guó)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按微生物控制的程度，我國(guó)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)等級(jí)：分為四個(gè)等級(jí)： （1 1）普通級(jí)動(dòng)物（）普通級(jí)動(dòng)物（CVCV動(dòng)物）動(dòng)物） ：一般為教學(xué)：一般為教學(xué)示范用。示范用。 （2 2）清潔級(jí)動(dòng)物（）清潔級(jí)動(dòng)物（CLCL動(dòng)物）動(dòng)物） ：國(guó)內(nèi)科研工作：國(guó)內(nèi)科研工作要求的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物，適合于大多數(shù)科研課題。要求的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物，適合于大多數(shù)科研課題。 （3 3）無(wú)特定病原體動(dòng)物（）無(wú)特定病原體動(dòng)物（SPFSPF動(dòng)物）：國(guó)際標(biāo)動(dòng)物）：國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。 （4 4）無(wú)菌動(dòng)物（）無(wú)菌動(dòng)物（GFGF動(dòng)物）和悉生動(dòng)物（動(dòng)物）和悉生動(dòng)物（GNGN動(dòng)動(dòng)物）物） ：僅在特殊課題需要時(shí)使

13、用。：僅在特殊課題需要時(shí)使用。圖圖9 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心是我省規(guī)模較大、標(biāo)準(zhǔn)最高、設(shè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心是我省規(guī)模較大、標(biāo)準(zhǔn)最高、設(shè)施最完善，集教學(xué)、科研、技術(shù)服務(wù)和培訓(xùn)為一體施最完善，集教學(xué)、科研、技術(shù)服務(wù)和培訓(xùn)為一體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心為3 3層大樓，層高層大樓，層高4.5 M4.5 M，建筑面，建筑面積積2197M2197M2 2。大樓總體分布：一層?xùn)|側(cè)為犬等動(dòng)物實(shí)。大樓總體分布：一層?xùn)|側(cè)為犬等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)區(qū)域；一層西側(cè)為辦公區(qū)及部分附屬設(shè)施。二層驗(yàn)區(qū)域；一層西側(cè)為辦公區(qū)及部分附屬設(shè)施。二層西側(cè)為教學(xué)、科研用兔實(shí)驗(yàn)室；二層?xùn)|側(cè)為動(dòng)物實(shí)西側(cè)為

14、教學(xué)、科研用兔實(shí)驗(yàn)室；二層?xùn)|側(cè)為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（驗(yàn)室（“兔類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)服務(wù)基地兔類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)服務(wù)基地”配套功能實(shí)配套功能實(shí)驗(yàn)室）。三層西側(cè)為屏障系統(tǒng)區(qū)，驗(yàn)室）。三層西側(cè)為屏障系統(tǒng)區(qū)，SPFSPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室；級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室；三層?xùn)|側(cè)為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（三層?xùn)|側(cè)為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（“GLPGLP中心中心”配套動(dòng)物實(shí)驗(yàn)配套動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室）。實(shí)驗(yàn)室）。技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目動(dòng)物代養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的日常管理，提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料等服務(wù)。動(dòng)物代養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的日常管理，提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料等服務(wù)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物藥理學(xué)、毒理學(xué)藥物有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物藥理學(xué)、毒理學(xué)藥物有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物模型：如高血壓動(dòng)物模型、糖尿病動(dòng)物模型

15、建立與疾病治療、異常毒性試驗(yàn)、動(dòng)物模型：如高血壓動(dòng)物模型、糖尿病動(dòng)物模型建立與疾病治療、異常毒性試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)等。熱原試驗(yàn)等。技能操作：如給藥，采血，注射等。技能操作：如給藥，采血，注射等。人員培訓(xùn)工作人員培訓(xùn)工作自自20092009年年0909月旗山校區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心啟用以來(lái)，已舉辦了月旗山校區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心啟用以來(lái)，已舉辦了1818期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)崗前培訓(xùn)。期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)崗前培訓(xùn)。為校內(nèi)外教師和同學(xué)開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究工作提供相應(yīng)的技術(shù)服務(wù)。為校內(nèi)外教師和同學(xué)開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究工作提供相應(yīng)的技術(shù)服務(wù)。 圖11 清潔級(jí)準(zhǔn)備室 圖12 清潔級(jí)走廊 圖13 大鼠、小鼠飼養(yǎng)室3 3選用解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊筮x

16、用解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物催吐實(shí)驗(yàn)催吐實(shí)驗(yàn)適宜選用猴、貓，不選用大小鼠。適宜選用猴、貓，不選用大小鼠。膽囊功能實(shí)驗(yàn)?zāi)懩夜δ軐?shí)驗(yàn)不選用大鼠。不選用大鼠。因?yàn)榇笠驗(yàn)榇? /小鼠無(wú)嘔吐反應(yīng)小鼠無(wú)嘔吐反應(yīng)因?yàn)榇笫鬅o(wú)膽囊因?yàn)榇笫鬅o(wú)膽囊發(fā)汗中藥的研究發(fā)汗中藥的研究不能選用小鼠。不能選用小鼠。慢性支氣管炎的實(shí)驗(yàn)慢性支氣管炎的實(shí)驗(yàn)不能選用大小鼠。不能選用大小鼠。無(wú)汗腺無(wú)汗腺因?yàn)榇笠驗(yàn)榇? /小鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達(dá)小鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達(dá)計(jì)劃生育研究計(jì)劃生育研究常選用小鼠和大鼠。因繁常選用小鼠和大鼠。因繁殖力強(qiáng)，性周期和妊娠期短，生長(zhǎng)快。如常用小殖力強(qiáng)，性周期和妊娠期短，生長(zhǎng)快。如常

17、用小鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等實(shí)驗(yàn)應(yīng)鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上的首選動(dòng)物。用上的首選動(dòng)物。心血管病研究心血管病研究豬豬( (辛克萊小型豬辛克萊小型豬/ /廣西巴廣西巴馬小型豬馬小型豬/ /歐米尼豬歐米尼豬) )。豬冠狀動(dòng)脈，在解剖學(xué)、。豬冠狀動(dòng)脈，在解剖學(xué)、血液動(dòng)力學(xué)上與人類相似。對(duì)高膽固醇食物的反血液動(dòng)力學(xué)上與人類相似。對(duì)高膽固醇食物的反應(yīng)與人一樣，很容易出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的典型病應(yīng)與人一樣，很容易出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的典型病灶。灶。實(shí)驗(yàn)外科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)外科學(xué)研究犬犬( (比格犬比格犬/ /華北犬華北犬/ /西西北犬北犬/ /狼犬狼犬) )。內(nèi)臟與人相似，比例近似。臨床

18、醫(yī)。內(nèi)臟與人相似，比例近似。臨床醫(yī)生在研究新的手術(shù)或麻醉方法時(shí)往往選用犬來(lái)做生在研究新的手術(shù)或麻醉方法時(shí)往往選用犬來(lái)做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，取得經(jīng)驗(yàn)和技巧后用于臨床。如心血?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)，取得經(jīng)驗(yàn)和技巧后用于臨床。如心血管外科，腦外科，斷肢再植，管外科，腦外科，斷肢再植， 器官和組織移植器官和組織移植等。等。行為學(xué)和精神病及神經(jīng)生物學(xué)研究行為學(xué)和精神病及神經(jīng)生物學(xué)研究獼猴。獼猴。制造和鑒定脊髓灰質(zhì)炎疫苗制造和鑒定脊髓灰質(zhì)炎疫苗獼猴是唯一獼猴是唯一的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。4 4選用不同種屬品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某些特選用不同種屬品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某些特殊反應(yīng)，使適合于不同研究目的的需要殊反應(yīng)，使適合于不同研究目的的需要腫瘤研究腫

19、瘤研究常選用近交系小鼠，如常選用近交系小鼠，如AKRAKR小小鼠白血病發(fā)生率可達(dá)鼠白血病發(fā)生率可達(dá)9090；C3HC3H小鼠乳腺癌發(fā)病小鼠乳腺癌發(fā)病率達(dá)率達(dá)9797，而不選用，而不選用C57BLC57BL等小鼠，因其乳腺癌等小鼠，因其乳腺癌發(fā)病率極低發(fā)病率極低( (5 5) )。發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實(shí)驗(yàn)發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實(shí)驗(yàn)適宜選用適宜選用兔做實(shí)驗(yàn)，因?qū)俸銣貏?dòng)物，對(duì)致熱物質(zhì)反應(yīng)敏感。兔做實(shí)驗(yàn)，因?qū)俸銣貏?dòng)物，對(duì)致熱物質(zhì)反應(yīng)敏感。高血壓病研究高血壓病研究選用選用SHRSHR大鼠，因自發(fā)性大鼠，因自發(fā)性高血壓，心血管疾病發(fā)病率高，對(duì)降壓藥物有反高血壓，心血管疾病發(fā)病率高，對(duì)降壓藥物有反應(yīng)。應(yīng)。

20、耳科學(xué)研究耳科學(xué)研究豚鼠聽(tīng)神經(jīng)對(duì)聲波特別是豚鼠聽(tīng)神經(jīng)對(duì)聲波特別是7007002000Hz2000Hz的純音最敏感，常用于聽(tīng)覺(jué)和內(nèi)耳的純音最敏感，常用于聽(tīng)覺(jué)和內(nèi)耳疾病的研究。疾病的研究。免疫學(xué)研究免疫學(xué)研究豚鼠易引起變態(tài)反應(yīng)，產(chǎn)生豚鼠易引起變態(tài)反應(yīng)，產(chǎn)生大量補(bǔ)體，是過(guò)敏性休克和變態(tài)反應(yīng)研究的首選大量補(bǔ)體，是過(guò)敏性休克和變態(tài)反應(yīng)研究的首選動(dòng)物。動(dòng)物。5 5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬、品系的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬、品系的選擇如果實(shí)驗(yàn)結(jié)論只針對(duì)某一品系則使用一個(gè)品如果實(shí)驗(yàn)結(jié)論只針對(duì)某一品系則使用一個(gè)品系。系。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)論針對(duì)整個(gè)物種在內(nèi)的一般性研如果實(shí)驗(yàn)結(jié)論針對(duì)整個(gè)物種在內(nèi)的一般性研究則使用多個(gè)不同來(lái)源的品種、品系。究則

21、使用多個(gè)不同來(lái)源的品種、品系。一般對(duì)多物種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)先選小型動(dòng)物，一般對(duì)多物種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)先選小型動(dòng)物，再推廣到大型物種；要求只能建立在對(duì)多個(gè)物種再推廣到大型物種；要求只能建立在對(duì)多個(gè)物種進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，才能推廣到人類，也稱動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，才能推廣到人類，也稱動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外推。常用順序時(shí)小鼠、大鼠、兔、犬、猴。實(shí)驗(yàn)外推。常用順序時(shí)小鼠、大鼠、兔、犬、猴。6 6遵守動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的一般規(guī)則遵守動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的一般規(guī)則 （1 1）年齡、體重）年齡、體重應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇適齡動(dòng)物。一般實(shí)驗(yàn)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇適齡動(dòng)物。一般實(shí)驗(yàn)均用成年動(dòng)物進(jìn)行；幼齡動(dòng)物一般較成年動(dòng)物敏均用成年動(dòng)物進(jìn)行；幼齡動(dòng)物一般較

22、成年動(dòng)物敏感；老年動(dòng)物的代謝活動(dòng)及各種機(jī)能低下，反應(yīng)感；老年動(dòng)物的代謝活動(dòng)及各種機(jī)能低下，反應(yīng)遲鈍，除了作老年醫(yī)學(xué)研究外，其它專業(yè)很少應(yīng)遲鈍，除了作老年醫(yī)學(xué)研究外，其它專業(yè)很少應(yīng)用。同一實(shí)驗(yàn)所選動(dòng)物年齡應(yīng)一致，體重大致相用。同一實(shí)驗(yàn)所選動(dòng)物年齡應(yīng)一致，體重大致相近，一般不應(yīng)相差近，一般不應(yīng)相差10%10%。（2 2）性別）性別不同性別動(dòng)物對(duì)同一實(shí)驗(yàn)處理（如藥物、刺不同性別動(dòng)物對(duì)同一實(shí)驗(yàn)處理（如藥物、刺激等）的感受性常有差異，在實(shí)驗(yàn)研究中如無(wú)特激等）的感受性常有差異，在實(shí)驗(yàn)研究中如無(wú)特殊要求，一般宜選用雌雄各半做實(shí)驗(yàn)。殊要求，一般宜選用雌雄各半做實(shí)驗(yàn)。（3 3）生理狀態(tài)與健康情況）生理狀態(tài)與健康

23、情況動(dòng)物的不同生理狀態(tài)如懷孕、授乳時(shí)對(duì)外界動(dòng)物的不同生理狀態(tài)如懷孕、授乳時(shí)對(duì)外界刺激的反應(yīng)常有所改變，在一般研究中應(yīng)從實(shí)驗(yàn)刺激的反應(yīng)常有所改變，在一般研究中應(yīng)從實(shí)驗(yàn)組中刪除；必須選用健康動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。組中刪除；必須選用健康動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。（4 4）實(shí)驗(yàn)季節(jié)和晝夜過(guò)程）實(shí)驗(yàn)季節(jié)和晝夜過(guò)程不同季節(jié)和不同晝夜，動(dòng)物機(jī)體反應(yīng)性會(huì)有不同季節(jié)和不同晝夜，動(dòng)物機(jī)體反應(yīng)性會(huì)有一定改變，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇中也應(yīng)予以注意。一定改變，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇中也應(yīng)予以注意。（5 5）實(shí)驗(yàn)的重復(fù)與肯定）實(shí)驗(yàn)的重復(fù)與肯定由于不同種動(dòng)物有不同的功能和代謝特點(diǎn)，由于不同種動(dòng)物有不同的功能和代謝特點(diǎn)，所以在肯定一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，往往采用兩種以

24、上所以在肯定一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，往往采用兩種以上動(dòng)物進(jìn)行比較觀察，尤其將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷到動(dòng)物進(jìn)行比較觀察，尤其將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷到人的實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)該慎重。例如，所選的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如人的實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)該慎重。例如，所選的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如一種為嚙齒類動(dòng)物，另一種應(yīng)該為非嚙齒類動(dòng)物。一種為嚙齒類動(dòng)物，另一種應(yīng)該為非嚙齒類動(dòng)物。常用的序列是小鼠、大鼠、狗或猴。常用的序列是小鼠、大鼠、狗或猴。二、中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的注意點(diǎn)二、中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的注意點(diǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在中醫(yī)實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用和發(fā)展中，建議實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在中醫(yī)實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用和發(fā)展中，建議注意以下幾個(gè)方面。注意以下幾個(gè)方面。1 1中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)以中醫(yī)理論為指導(dǎo)中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)以中醫(yī)理論

25、為指導(dǎo)2 2中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)從中醫(yī)臨床出發(fā)中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)從中醫(yī)臨床出發(fā)3 3中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)突出中醫(yī)治療原則中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)突出中醫(yī)治療原則一、證動(dòng)物模型的開(kāi)創(chuàng)和發(fā)展一、證動(dòng)物模型的開(kāi)創(chuàng)和發(fā)展自本世紀(jì)自本世紀(jì)6060年代以來(lái)，在中醫(yī)證的動(dòng)物模型制年代以來(lái)，在中醫(yī)證的動(dòng)物模型制作與研究方面做了大量的研究工作。迄今證的動(dòng)物作與研究方面做了大量的研究工作。迄今證的動(dòng)物模型逾模型逾150150多種。其中包括各種虛證（陰虛、陽(yáng)虛、多種。其中包括各種虛證（陰虛、陽(yáng)虛、氣虛、血虛、各臟腑虛）、血瘀證、肝郁證、寒證、氣虛、血虛、各臟腑虛）、血瘀證、肝郁證、寒證、熱證、溫病衛(wèi)氣營(yíng)血諸證、里實(shí)證等模型，

26、等等。熱證、溫病衛(wèi)氣營(yíng)血諸證、里實(shí)證等模型，等等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型應(yīng)用于中醫(yī)臨床研究，為中醫(yī)診實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型應(yīng)用于中醫(yī)臨床研究，為中醫(yī)診療方法研究提供了大量的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑸榕R床理論的療方法研究提供了大量的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，為臨床理論的深化與新理論的形成提供了便利。深化與新理論的形成提供了便利。中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的主要內(nèi)容中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的主要內(nèi)容1 1感染病原體，如用肝炎病毒復(fù)制肝炎模型感染病原體，如用肝炎病毒復(fù)制肝炎模型4 4手術(shù)損傷，如用血管結(jié)扎復(fù)制腦缺血模型手術(shù)損傷，如用血管結(jié)扎復(fù)制腦缺血模型2 2藥物和化學(xué)試劑，如用利尿劑復(fù)制陰虛模型藥物和化學(xué)試劑，如用利尿劑復(fù)制陰虛模型3 3改變生活和飲食條件

27、，如用低溫寒冷復(fù)制痹癥模型改變生活和飲食條件，如用低溫寒冷復(fù)制痹癥模型5 5其他，致癌物質(zhì)誘發(fā)各種腫瘤其他，致癌物質(zhì)誘發(fā)各種腫瘤動(dòng)物模型復(fù)制方法動(dòng)物模型復(fù)制方法問(wèn)題是，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，大鼠、小鼠能不能實(shí)現(xiàn)問(wèn)題是，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，大鼠、小鼠能不能實(shí)現(xiàn)四診，能不能實(shí)現(xiàn)基于四診的辨證，以及辨證論治？四診，能不能實(shí)現(xiàn)基于四診的辨證，以及辨證論治？小鼠辨證論治方法的由來(lái)和進(jìn)展方肇勤方肇勤 潘志強(qiáng)潘志強(qiáng) 陳曉陳曉 盧文麗盧文麗 付曉伶付曉伶李海燕李海燕 陳德溯陳德溯 侯俐侯俐 廖明娟廖明娟 湯偉昌湯偉昌管冬元管冬元 吳中華吳中華 許敏許敏 闞衛(wèi)兵闞衛(wèi)兵 許家佗許家佗上海中醫(yī)藥大學(xué)上海中醫(yī)藥大學(xué) 引 言 辨證論

28、治是中醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢(shì)。在新形式下，如何深入揭辨證論治是中醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢(shì)。在新形式下，如何深入揭示辨證論治的機(jī)制、提高辨證論治的療效，是中醫(yī)、中西示辨證論治的機(jī)制、提高辨證論治的療效，是中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)學(xué)科的重要研究方向。醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)學(xué)科的重要研究方向。 辨證論治的基礎(chǔ)研究主要借助于小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。為辨證論治的基礎(chǔ)研究主要借助于小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。為了滿足研究的需要，國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)界業(yè)已發(fā)展出了滿足研究的需要，國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)界業(yè)已發(fā)展出200200余種證候的余種證候的動(dòng)物模型，集中在常見(jiàn)的氣、血、陰、陽(yáng)虛證和實(shí)熱、血?jiǎng)游锬Ｐ?，集中在常?jiàn)的氣、血、陰、陽(yáng)虛證和實(shí)熱、血瘀等實(shí)證。在很大程度上彌補(bǔ)了辨證論治研究動(dòng)物模型的瘀

29、等實(shí)證。在很大程度上彌補(bǔ)了辨證論治研究動(dòng)物模型的欠缺，促進(jìn)了辨證論治基礎(chǔ)研究與發(fā)展。欠缺，促進(jìn)了辨證論治基礎(chǔ)研究與發(fā)展。 但是迄今為止，尚缺乏小鼠四診和基于四診的辨證論但是迄今為止，尚缺乏小鼠四診和基于四診的辨證論治方法和技術(shù)，這成為新時(shí)期中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究的瓶頸。治方法和技術(shù)，這成為新時(shí)期中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究的瓶頸。 那么，為什么要實(shí)現(xiàn)基于四診的小鼠辨證？那么，為什么要實(shí)現(xiàn)基于四診的小鼠辨證？這是因?yàn)橐恍W(xué)術(shù)問(wèn)題已凸現(xiàn)出來(lái)：這是因?yàn)橐恍W(xué)術(shù)問(wèn)題已凸現(xiàn)出來(lái)： （1 1）證候是體內(nèi)多系統(tǒng)、組織、細(xì)胞、分子）證候是體內(nèi)多系統(tǒng)、組織、細(xì)胞、分子等不同層次生物學(xué)變化外在的綜合反映。由于缺少等不同層次生物學(xué)變化外

30、在的綜合反映。由于缺少小鼠四診方法，以往有關(guān)小鼠證候判斷，主要依據(jù)小鼠四診方法，以往有關(guān)小鼠證候判斷，主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)，或治療反證，一直未能建立起證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)，或治療反證，一直未能建立起證候與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)一一對(duì)應(yīng)的聯(lián)系。而大量的研究表候與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)一一對(duì)應(yīng)的聯(lián)系。而大量的研究表明，目前一些常用實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)還不能代表證候。明，目前一些常用實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)還不能代表證候。 （2 2）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，大多要求損傷、處死動(dòng)物，）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，大多要求損傷、處死動(dòng)物，如此難以動(dòng)態(tài)觀察證候的自然演變和辨證論治療效。如此難以動(dòng)態(tài)觀察證候的自然演變和辨證論治療效。 （3 3）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，大多成本高、檢測(cè)周期長(zhǎng)，）實(shí)

31、驗(yàn)室檢測(cè)，大多成本高、檢測(cè)周期長(zhǎng)，不利于辨證論治基礎(chǔ)研究和發(fā)展的高效、批量要不利于辨證論治基礎(chǔ)研究和發(fā)展的高效、批量要求。求。 （4 4）大量的證候動(dòng)物模型、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和方）大量的證候動(dòng)物模型、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和方證論治一再證明，實(shí)驗(yàn)用大鼠、小鼠是存在證候證論治一再證明，實(shí)驗(yàn)用大鼠、小鼠是存在證候的。的。 （5 5）我們長(zhǎng)期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，一再觀察到實(shí)驗(yàn)）我們長(zhǎng)期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，一再觀察到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠、小鼠存在體質(zhì)差異，以及同病異證、動(dòng)物大鼠、小鼠存在體質(zhì)差異，以及同病異證、異病同證的現(xiàn)象，不加辨證的單方治療，療效往異病同證的現(xiàn)象，不加辨證的單方治療，療效往往受到限制，甚至?xí)a(chǎn)生副作用。往受到限制，甚至?xí)a(chǎn)

32、生副作用。 那么，那么，如何實(shí)現(xiàn)小鼠的四診呢？比如問(wèn)診如何如何實(shí)現(xiàn)小鼠的四診呢？比如問(wèn)診如何問(wèn)？中醫(yī)四診重視面色和舌診，小鼠頭面布滿被問(wèn)？中醫(yī)四診重視面色和舌診，小鼠頭面布滿被毛，舌又不會(huì)配合地伸出來(lái)，如何望診？小鼠如毛，舌又不會(huì)配合地伸出來(lái)，如何望診？小鼠如何把脈？何把脈？一些學(xué)者還一直對(duì)中醫(yī)四診有顧慮，不能量化，一些學(xué)者還一直對(duì)中醫(yī)四診有顧慮，不能量化，小鼠四診能否量化？小鼠四診能否量化？對(duì)此他們開(kāi)展了長(zhǎng)期的探索和研究，結(jié)果如下對(duì)此他們開(kāi)展了長(zhǎng)期的探索和研究，結(jié)果如下： 圖圖1 正常與晚期荷瘤小鼠面容正常與晚期荷瘤小鼠面容 圖圖2 正常小鼠正常小鼠 圖圖3 腫瘤腫瘤壓迫張口呼吸小鼠壓迫張口

33、呼吸小鼠 一、疾病小鼠存在證侯及其演變一、疾病小鼠存在證侯及其演變圖圖4 4 早期荷瘤昆明種小鼠早期荷瘤昆明種小鼠 圖圖5 5 中期荷瘤氣虛小鼠中期荷瘤氣虛小鼠 圖圖6 6 中晚期荷瘤氣虛小鼠中晚期荷瘤氣虛小鼠 圖圖7 7 中晚期荷瘤陰虛小鼠中晚期荷瘤陰虛小鼠 圖圖8 8 晚期荷瘤陰陽(yáng)兩虛小鼠晚期荷瘤陰陽(yáng)兩虛小鼠 以下為不同組別荷瘤小鼠爪： 圖圖11 11 爪消瘦而略紅爪消瘦而略紅 圖圖12 12 爪淡掌略胖爪淡掌略胖圖圖9 9 正常小鼠爪正常小鼠爪 圖圖10 10 爪淡伸展無(wú)力爪淡伸展無(wú)力以下為編號(hào)為H9荷瘤小鼠不同日期拍攝的爪： 圖圖15 15 腫瘤接種第腫瘤接種第2 2周周 圖圖16 1

34、6 腫瘤接種第腫瘤接種第2.52.5周周圖圖13 13 腫瘤接種第腫瘤接種第1 1周周 圖圖14 14 腫瘤接種第腫瘤接種第1.51.5周周二、正常小鼠存在體質(zhì)差異/證候差異 圖圖17 17 正常昆明種小鼠后爪正常昆明種小鼠后爪 圖圖18 18 偏虛證的正常昆明種小鼠后爪偏虛證的正常昆明種小鼠后爪 三、小鼠如何問(wèn)診三、小鼠如何問(wèn)診 人、鼠對(duì)話是困難的，但是問(wèn)診所期望采人、鼠對(duì)話是困難的，但是問(wèn)診所期望采集的信息卻大多是可以獲得的，而且部分信息集的信息卻大多是可以獲得的，而且部分信息的完整性、可靠性還優(yōu)于普通臨床上的問(wèn)診。的完整性、可靠性還優(yōu)于普通臨床上的問(wèn)診。 為什么呢？眾所周知，問(wèn)診歸納起來(lái)

35、是十為什么呢？眾所周知，問(wèn)診歸納起來(lái)是十問(wèn)：?jiǎn)枺阂粏?wèn)寒熱二問(wèn)汗，三問(wèn)頭身四問(wèn)便，五問(wèn)一問(wèn)寒熱二問(wèn)汗，三問(wèn)頭身四問(wèn)便，五問(wèn)飲食六胸腹，七聾八渴俱當(dāng)辨，九問(wèn)舊病十問(wèn)飲食六胸腹，七聾八渴俱當(dāng)辨，九問(wèn)舊病十問(wèn)因，還要參考服藥。因，還要參考服藥。臨床上，患者的一般情況臨床上，患者的一般情況也是問(wèn)診的重要內(nèi)容。也是問(wèn)診的重要內(nèi)容。 小鼠通過(guò)何途徑實(shí)現(xiàn)？小鼠通過(guò)何途徑實(shí)現(xiàn)？ 1. 1. 問(wèn)寒熱問(wèn)寒熱。小鼠畏寒，往往表現(xiàn)為扎堆，飼。小鼠畏寒，往往表現(xiàn)為扎堆，飼養(yǎng)中可以觀察到；畏寒的另一特點(diǎn)是畏寒的局部養(yǎng)中可以觀察到；畏寒的另一特點(diǎn)是畏寒的局部體表溫度下降，通過(guò)體表紅外成像數(shù)碼拍攝和圖體表溫度下降，通過(guò)體表紅外

36、成像數(shù)碼拍攝和圖像處理，可以精確定量；而體內(nèi)和體表溫度的改像處理，可以精確定量；而體內(nèi)和體表溫度的改變，可以分別通過(guò)肛溫、腋溫、尾溫、爪溫檢測(cè)變，可以分別通過(guò)肛溫、腋溫、尾溫、爪溫檢測(cè)獲得。因此，以上檢測(cè)可以很好地達(dá)到問(wèn)寒熱的獲得。因此，以上檢測(cè)可以很好地達(dá)到問(wèn)寒熱的主要目的，而且部分實(shí)現(xiàn)了量化。主要目的，而且部分實(shí)現(xiàn)了量化。 2. 2. 問(wèn)汗問(wèn)汗。有報(bào)道嘗試通過(guò)特殊染色技術(shù)，檢。有報(bào)道嘗試通過(guò)特殊染色技術(shù)，檢測(cè)爪面出汗點(diǎn)和數(shù)量多寡；有的實(shí)驗(yàn)觀察了皮毛測(cè)爪面出汗點(diǎn)和數(shù)量多寡；有的實(shí)驗(yàn)觀察了皮毛潮濕的程度，部分彌補(bǔ)了問(wèn)汗的困難。潮濕的程度，部分彌補(bǔ)了問(wèn)汗的困難。 3. 3. 問(wèn)頭身問(wèn)頭身。頭身的

37、感受可以綜合兩個(gè)方面。頭身的感受可以綜合兩個(gè)方面的信息獲得：的信息獲得：1 1）造模方法，如果這些方法在臨）造模方法，如果這些方法在臨床上可能造成頭身證候的，比如頭顱手術(shù)、高床上可能造成頭身證候的，比如頭顱手術(shù)、高血壓、感冒等，可以參考；血壓、感冒等，可以參考；2 2）小鼠曠場(chǎng)自主探）小鼠曠場(chǎng)自主探究和活動(dòng)、抖攏檢測(cè)，如果頭身痛楚，則小鼠究和活動(dòng)、抖攏檢測(cè)，如果頭身痛楚，則小鼠活動(dòng)和探究頻率和幅度會(huì)減少?；顒?dòng)和探究頻率和幅度會(huì)減少。 4. 4. 問(wèn)便問(wèn)便。飼養(yǎng)可以直接觀察大便的數(shù)量和。飼養(yǎng)可以直接觀察大便的數(shù)量和質(zhì)量，小便可以通過(guò)代謝籠完整回收，觀測(cè)其質(zhì)量，小便可以通過(guò)代謝籠完整回收，觀測(cè)其數(shù)

38、量和性狀。數(shù)量和性狀。 5. 5. 問(wèn)飲食問(wèn)飲食。攝食量和飲水量可以精確測(cè)量，。攝食量和飲水量可以精確測(cè)量，嚙齒頻率（通過(guò)聲音采集與分析）可以部分反嚙齒頻率（通過(guò)聲音采集與分析）可以部分反映其脾胃健康與否。映其脾胃健康與否。 6. 6. 胸腹胸腹。方法類似于問(wèn)頭身。方法類似于問(wèn)頭身。 7. 7. 聾聾。生理學(xué)有聽(tīng)覺(jué)反應(yīng)檢測(cè)，可以采用；。生理學(xué)有聽(tīng)覺(jué)反應(yīng)檢測(cè)，可以采用；小鼠曠場(chǎng)、抖攏檢測(cè)可以觀察小鼠反應(yīng)的靈敏小鼠曠場(chǎng)、抖攏檢測(cè)可以觀察小鼠反應(yīng)的靈敏與遲鈍，間接反映其聽(tīng)覺(jué)。與遲鈍，間接反映其聽(tīng)覺(jué)。 8. 8. 渴渴。飲水量的精確測(cè)量，以及結(jié)合代謝籠。飲水量的精確測(cè)量，以及結(jié)合代謝籠尿液收集數(shù)量、顏

39、色，判斷其可能水分通過(guò)呼吸、尿液收集數(shù)量、顏色，判斷其可能水分通過(guò)呼吸、汗液、尿液代謝的途徑：陽(yáng)熱盛往往表現(xiàn)為飲多汗液、尿液代謝的途徑：陽(yáng)熱盛往往表現(xiàn)為飲多而尿少且赤；下消則飲一溲一，等等。而尿少且赤；下消則飲一溲一，等等。 9. 9. 問(wèn)舊病問(wèn)舊病。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疾病遺傳，以及疾病。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疾病遺傳，以及疾病或證候造模方法是明確的，而臨床卻往往做不到?；蜃C候造模方法是明確的，而臨床卻往往做不到。 10. 10. 問(wèn)病因問(wèn)病因。同上，而且造模藥物干預(yù)過(guò)程也。同上，而且造模藥物干預(yù)過(guò)程也是明確的。是明確的。 11. 11. 參服藥參服藥。治療干預(yù)記錄是十分明確的。治療干預(yù)記錄是十分明確的。 12.

40、 12. 一般情況一般情況。包括動(dòng)物購(gòu)入和實(shí)驗(yàn)日期、品。包括動(dòng)物購(gòu)入和實(shí)驗(yàn)日期、品系、月齡、性別，飼養(yǎng)、繁殖背景等均是明確的。系、月齡、性別，飼養(yǎng)、繁殖背景等均是明確的。 因此，小鼠雖然難以實(shí)現(xiàn)傳統(tǒng)意義上的問(wèn)因此，小鼠雖然難以實(shí)現(xiàn)傳統(tǒng)意義上的問(wèn)診，比如疼痛的性質(zhì)或持續(xù)時(shí)間，但問(wèn)診許多診，比如疼痛的性質(zhì)或持續(xù)時(shí)間，但問(wèn)診許多重要內(nèi)容，卻是可以詳細(xì)、準(zhǔn)確獲得的。而且，重要內(nèi)容，卻是可以詳細(xì)、準(zhǔn)確獲得的。而且，大多可以精確地定量，因而其可靠性、準(zhǔn)確性大多可以精確地定量，因而其可靠性、準(zhǔn)確性往往還要優(yōu)于通常意義上的臨床問(wèn)診。往往還要優(yōu)于通常意義上的臨床問(wèn)診。 四、小鼠如何望診四、小鼠如何望診 1. 1

41、. 望面色望面色 以下圖右是正常小鼠，腫瘤虛證小鼠在左側(cè)。以下圖右是正常小鼠，腫瘤虛證小鼠在左側(cè)。從圖中可以看到，正常小鼠頭部上抬，直視相機(jī)鏡從圖中可以看到，正常小鼠頭部上抬，直視相機(jī)鏡頭，很關(guān)注；眼裂寬，眼色紅潤(rùn)、有神；吻部飽滿、頭，很關(guān)注；眼裂寬，眼色紅潤(rùn)、有神；吻部飽滿、紅潤(rùn)；腫瘤虛證小鼠則相反，頭低垂、目光呆滯，紅潤(rùn)；腫瘤虛證小鼠則相反，頭低垂、目光呆滯，失去了好奇；雙目色暗；吻部瘦削、色暗滯。失去了好奇；雙目色暗；吻部瘦削、色暗滯。圖圖21 21 正常與腫瘤小鼠面容與體態(tài)正常與腫瘤小鼠面容與體態(tài) 2. 2. 望舌望舌 清醒狀態(tài)下，小鼠舌不易自主伸出，如果強(qiáng)清醒狀態(tài)下，小鼠舌不易自主伸

42、出，如果強(qiáng)迫其伸出，必然嚴(yán)重干擾氣血運(yùn)行，不符合中醫(yī)迫其伸出，必然嚴(yán)重干擾氣血運(yùn)行，不符合中醫(yī)四診原則。當(dāng)小鼠麻醉后，可以方便地輕輕撐開(kāi)四診原則。當(dāng)小鼠麻醉后，可以方便地輕輕撐開(kāi)小鼠嘴，使其舌自然伸出口腔之外，采用顯微放小鼠嘴，使其舌自然伸出口腔之外，采用顯微放大（大（8-158-15），是可以清晰觀察到的。其表現(xiàn)與），是可以清晰觀察到的。其表現(xiàn)與人類舌象十分相似。血虛舌淡，陰虛陽(yáng)盛舌偏紅。人類舌象十分相似。血虛舌淡，陰虛陽(yáng)盛舌偏紅。 但是，麻醉會(huì)干擾小鼠氣血運(yùn)行；不同模型但是，麻醉會(huì)干擾小鼠氣血運(yùn)行；不同模型小鼠對(duì)麻醉的耐受度還不同，甚至難以接受；麻小鼠對(duì)麻醉的耐受度還不同，甚至難以接受；麻

43、醉過(guò)深會(huì)導(dǎo)致小鼠死亡，過(guò)淺則小鼠會(huì)出現(xiàn)掙扎、醉過(guò)深會(huì)導(dǎo)致小鼠死亡，過(guò)淺則小鼠會(huì)出現(xiàn)掙扎、不配合等等。因此，常規(guī)地開(kāi)展舌診，有一定的不配合等等。因此，常規(guī)地開(kāi)展舌診，有一定的限制。限制。有沒(méi)有部分可以替代的方法？有沒(méi)有部分可以替代的方法？ 圖圖22正常小鼠舌正常小鼠舌 圖圖23環(huán)磷酰胺模型環(huán)磷酰胺模型 圖圖24乙酰苯肼模型乙酰苯肼模型 圖圖25甲狀腺素模型甲狀腺素模型 圖圖26丙基硫氧嘧啶模型丙基硫氧嘧啶模型 圖圖27正常小鼠爪正常小鼠爪 圖圖28環(huán)磷酰胺模型環(huán)磷酰胺模型 圖圖29乙酰苯肼模型乙酰苯肼模型 圖圖30甲狀腺素模型甲狀腺素模型 圖圖31丙基硫氧嘧啶模型丙基硫氧嘧啶模型 圖圖32正常小

44、鼠尾正常小鼠尾 圖圖33環(huán)磷酰胺模型環(huán)磷酰胺模型 圖圖34乙酰苯肼模型乙酰苯肼模型 圖圖35甲狀腺素模型甲狀腺素模型 圖圖36丙基硫氧嘧啶模型丙基硫氧嘧啶模型 小鼠舌象與爪尾的比較小鼠舌象與爪尾的比較 3. 3. 望爪和尾望爪和尾 與人類不同，小鼠爪、尾的角化質(zhì)比較薄，與人類不同，小鼠爪、尾的角化質(zhì)比較薄，可以較好地反映氣血充盈和陰陽(yáng)盛衰的表現(xiàn)。以可以較好地反映氣血充盈和陰陽(yáng)盛衰的表現(xiàn)。以上不同模型小鼠爪、尾（上不同模型小鼠爪、尾（8 8）各取自以上舌象）各取自以上舌象的同一小鼠。就紅色的程度而言，各模型舌、爪、的同一小鼠。就紅色的程度而言，各模型舌、爪、尾是一致的，爪、尾色可以部分替代舌色和

45、面色。尾是一致的，爪、尾色可以部分替代舌色和面色。 以上結(jié)果說(shuō)明：以上結(jié)果說(shuō)明： （1 1）舌、爪、尾顏色的變化趨勢(shì)是一致的，）舌、爪、尾顏色的變化趨勢(shì)是一致的，r r值的變化趨勢(shì)也一致。值的變化趨勢(shì)也一致。 （2 2）反映紅色的程度，舌優(yōu)于爪、爪優(yōu)于）反映紅色的程度，舌優(yōu)于爪、爪優(yōu)于尾。因此，要觀察氣血寒熱，優(yōu)先觀察舌、其次尾。因此，要觀察氣血寒熱，優(yōu)先觀察舌、其次是爪。是爪。 4. 4. 望診其他采集內(nèi)容望診其他采集內(nèi)容 包括：稱重、望形體虛實(shí)、望形體神、望形包括：稱重、望形體虛實(shí)、望形體神、望形體寒熱、望運(yùn)動(dòng)步態(tài)、望精力、望毛色虛實(shí)、體寒熱、望運(yùn)動(dòng)步態(tài)、望精力、望毛色虛實(shí)、望呼吸狀況、望

46、眼神、望耳、望鼻、望唇、望望呼吸狀況、望眼神、望耳、望鼻、望唇、望腹、望二陰、望大便、望小便、望爪、望尾、腹、望二陰、望大便、望小便、望爪、望尾、望睡眠、爪和尾顯微拍照（顏色、胖瘦、光澤、望睡眠、爪和尾顯微拍照（顏色、胖瘦、光澤、爪舒展、爪伸展、爪老嫩、爪潔凈、爪潰爛）。爪舒展、爪伸展、爪老嫩、爪潔凈、爪潰爛）。 5. 5.不同品系小鼠爪等的證候表現(xiàn)非常不同品系小鼠爪等的證候表現(xiàn)非常一致一致 以上望診方法，是否適用于常見(jiàn)不同品系小以上望診方法，是否適用于常見(jiàn)不同品系小鼠？黑色與白色小鼠是否一致？鼠？黑色與白色小鼠是否一致？ 他們比較了常用不同品系小鼠他們比較了常用不同品系小鼠C57C57小鼠（

47、黑小鼠（黑色）、色）、BALBcBALBc、ICRICR、昆明小鼠（均為白色）的、昆明小鼠（均為白色）的四診表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)具有很高的一致性。四診表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)具有很高的一致性。 這一結(jié)果提示，他們所建立的望診方法是這一結(jié)果提示，他們所建立的望診方法是適用于常用不同品系小鼠的。適用于常用不同品系小鼠的。以下是不同品系小鼠的爪：以下是不同品系小鼠的爪： 圖圖38 C57小鼠爪小鼠爪 圖圖39 BALBc小鼠爪小鼠爪 圖圖40 ICR小鼠爪小鼠爪 圖圖41 昆明小鼠爪昆明小鼠爪 五、小鼠如何切診五、小鼠如何切診 1. 1. 小鼠如何把脈小鼠如何把脈 他們沒(méi)有開(kāi)展小鼠把脈的研究，主要是擔(dān)心他們沒(méi)有開(kāi)展小鼠把脈

48、的研究，主要是擔(dān)心會(huì)干擾其氣血運(yùn)行。然而，他們建立了小鼠自然會(huì)干擾其氣血運(yùn)行。然而，他們建立了小鼠自然狀態(tài)下心電的快速采集。該設(shè)計(jì)思路和采集裝置狀態(tài)下心電的快速采集。該設(shè)計(jì)思路和采集裝置已經(jīng)獲得中華人民共和國(guó)專利，專利號(hào)為：已經(jīng)獲得中華人民共和國(guó)專利，專利號(hào)為：ZL03116816.7ZL03116816.7?？梢灶愃朴跈z測(cè)脈的至數(shù)與節(jié)律，?？梢灶愃朴跈z測(cè)脈的至數(shù)與節(jié)律，如促、結(jié)、代、數(shù)、疾、緩、遲等脈象。如促、結(jié)、代、數(shù)、疾、緩、遲等脈象。2. 2. 切診的其他項(xiàng)目與內(nèi)容切診的其他項(xiàng)目與內(nèi)容 包括體溫和膚之溫涼、腫塊的大小與質(zhì)地、肌力的包括體溫和膚之溫涼、腫塊的大小與質(zhì)地、肌力的強(qiáng)弱等，不同

49、疾病和證候動(dòng)物還會(huì)有一些特殊的檢測(cè)內(nèi)強(qiáng)弱等，不同疾病和證候動(dòng)物還會(huì)有一些特殊的檢測(cè)內(nèi)容。容。 六、小鼠如何聞診六、小鼠如何聞診 小鼠聞診內(nèi)容目前主要為嗅氣味，聲音的標(biāo)準(zhǔn)采集小鼠聞診內(nèi)容目前主要為嗅氣味，聲音的標(biāo)準(zhǔn)采集和分析將有助于判斷小鼠的虛實(shí)。和分析將有助于判斷小鼠的虛實(shí)。 七、小鼠四診的標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化、計(jì)量化七、小鼠四診的標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化、計(jì)量化采集與分析采集與分析 為實(shí)現(xiàn)小鼠非創(chuàng)傷性的標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化、計(jì)量化四為實(shí)現(xiàn)小鼠非創(chuàng)傷性的標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化、計(jì)量化四診檢測(cè)，他們提出并初步建立了小鼠四診工作站。診檢測(cè)，他們提出并初步建立了小鼠四診工作站。 1. 思路和原則 繼承中醫(yī)四診和辨證論治的理論與方

50、法，模擬中醫(yī)臨床四診信息的采集方式，實(shí)現(xiàn)小鼠的非創(chuàng)傷性四診檢測(cè)，同時(shí)部分實(shí)現(xiàn)四診檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化、量化，提高四診檢測(cè)速度，以適應(yīng)大樣本的檢測(cè)之需。即： （1）非創(chuàng)傷性檢測(cè)； （2）標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化、計(jì)量化； （3）可操作原則，即操作容易和方便，便于掌握和普及； （4）低成本原則，利于普及； （5）流水作業(yè)原則，以提高檢測(cè)速率。 2. 小鼠四診工作站內(nèi)容 （1）小鼠行為學(xué)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)單元 （2）小鼠爪、尾顯微放大拍攝單元 （3）小鼠舌顯微放大拍攝單元 圖圖42 42 小鼠曠場(chǎng)檢測(cè)小鼠曠場(chǎng)檢測(cè) 圖圖42-1 42-1 小鼠爪尾顯微放大拍攝單元小鼠爪尾顯微放大拍攝單元（4）小鼠自然狀態(tài)下心電快速采集單元

51、圖圖43 43 小鼠清醒狀態(tài)下前后肢引導(dǎo)出的心電小鼠清醒狀態(tài)下前后肢引導(dǎo)出的心電圖圖42423 3 小鼠爪持法小鼠爪持法 圖圖42423 3 小鼠尾持法小鼠尾持法（5）小鼠腋溫采集單元（6）小鼠體重采集單元 （7）小鼠整體外觀攝影單元（8）小鼠抖攏自主活動(dòng)狀況采集單元（9）小鼠攝食量稱量單元（10）小鼠飲水量測(cè)量單元（11）荷瘤小鼠瘤徑的測(cè)量（12）信息綜合處理單元八、小鼠常見(jiàn)證候辨證標(biāo)準(zhǔn)1四診信息的標(biāo)準(zhǔn)采集2建立各四診信息的正常參考值（1）建立實(shí)驗(yàn)前各四診信息的正常參考值（2）建立正常對(duì)照組動(dòng)態(tài)的正常參考值（3）部分檢測(cè)數(shù)據(jù)基數(shù)校正3癥狀歸類預(yù)處理表1 形質(zhì)、遲動(dòng)、淡、紅、青紫、瘀、寒熱癥狀

52、類類別癥狀形質(zhì)減少如消瘦、體重減輕/偏輕、爪和尾瘦癟，等形質(zhì)增加如胖、體重偏重/重、爪和尾胖/腫，等動(dòng)心率偏數(shù)/數(shù)、吻和軀體移動(dòng)增加，等遲心率緩/遲、吻和軀體移動(dòng)減弱，等淡唇、耳、爪、尾淡/偏淡等紅唇、耳、爪、尾紅/偏紅等熱腋溫偏高/高等寒腋溫低/偏低、蜷縮、扎堆、發(fā)抖等青紫、瘀唇、耳、爪、尾暗、偏暗/青紫、腫塊，等表2 虛實(shí)、濕、毒、病因病邪、病態(tài)癥狀歸類類別癥狀實(shí)如：病邪造模、腫瘤，等虛如：老年、發(fā)育不良，食量減少、體重減輕等濕大便偏濕、粘液便、皮毛濕，等毒如癌腫等病因病邪如接種腫瘤、血管結(jié)扎、失血，等病態(tài)如爪不潔、污物附著，等表3 五臟定位癥狀歸類類別癥狀心神志異常、眼中無(wú)神、嗜臥、心臟

53、病變等肝筋脈拘攣、目疾、多怒撕咬、或肝臟病變等脾飲食減少、腹脹滿、肌體羸瘦、瀉利等肺皮膚病變、喘急、鼻孔見(jiàn)有出血和撓鼻等腎老年、羸瘦、發(fā)育不良、生殖及生殖器異常等 4常見(jiàn)的寒熱、虛實(shí)、氣血、陰陽(yáng)、病邪、五臟證候辨證標(biāo)準(zhǔn) （1）寒、熱、虛、實(shí)等的辨證標(biāo)準(zhǔn) 表4 寒、熱、虛、實(shí)等的辨證標(biāo)準(zhǔn)證辨證標(biāo)準(zhǔn)寒證寒表現(xiàn)1項(xiàng)或以上偏寒證寒表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低熱證紅、熱表現(xiàn)1項(xiàng)或以上偏熱證紅、熱表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，項(xiàng)目多，程度重偏虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低實(shí)證實(shí)、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，愈重愈實(shí)偏實(shí)證實(shí)、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低（2）陰虛證、陰虛火旺、陽(yáng)虛證、陰陽(yáng)兩虛、氣虛證、血虛證等的辨證標(biāo)準(zhǔn) 表5陰虛證、陰虛火旺、陽(yáng)虛證、陰陽(yáng)兩虛、氣虛證、血虛證等的辨證標(biāo)準(zhǔn)證辨證標(biāo)準(zhǔn)陰虛證形質(zhì)減少1項(xiàng)，或虛證+紅、熱、動(dòng)1項(xiàng)或以上偏陰虛證形質(zhì)減少1項(xiàng)，或虛證+紅、熱、動(dòng)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低陰虛火旺證陰虛證+火征，紅、熱、動(dòng)分值高陽(yáng)虛證虛證+（寒1項(xiàng)或以上，或+