《發(fā)酵分析》試驗(yàn)教案

1、 發(fā)酵分析試驗(yàn)教案 試驗(yàn)一 釀造用水硬度分析（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的:掌握配位滴定法分析水硬度的操作技術(shù)。二、重點(diǎn)與難點(diǎn):學(xué)習(xí)EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定過程；掌握指示劑鉻黑T的使用條件和終點(diǎn)變化三、主要內(nèi)容:1.原理:水硬度主要是由水中鈣鹽、鎂鹽引起的，故硬度一般指水中鈣離子、鎂離子的濃度。水的硬度高就是指水中鈣離子、鎂離子濃度高。按鈣、鎂成鹽形式不同，水的硬度分為碳酸鹽硬度（又稱暫時(shí)硬度）和非碳酸鹽硬度（又稱永久硬度）。水的硬度表示方法有好幾種，常用的表示方法是以度為單位：1 L 水中含有鈣、鎂等鹽的總量相當(dāng)于10 mg CaO時(shí)，稱為1度。按照硬度的大小，可將水質(zhì)分為下列幾類：水質(zhì)的分類

2、60;Water Quality Class 名稱(Name) 極軟水(Very soft water) 軟水(Soft water) 中等水(Moderately hard water) 硬水(Hard water) 極硬水(Very hard water) 硬度(Hardness) 04.2 4.28.4 8.416.8 16.828.0 >28.0 EDTA(乙二胺四乙酸)其二鈉鹽可與水中鈣離子、鎂離子生成可溶性無色配合物,指示劑鉻黑T也能與鈣離子、鎂離子配位,生成酒紅色配合物。但EDTA與鈣離子、鎂離子的配合物更穩(wěn)定。當(dāng)在水樣中加入藍(lán)色的鉻黑T后，生成鉻黑T鈣、鎂配合物，而使溶液

3、呈酒紅色。再用EDTA滴定時(shí)，由于EDTA與鈣離子、鎂離子的配合能力強(qiáng)于鉻黑T，故能將鉻黑T鈣、鎂配合物中的鈣離子、鎂離子奪出來，進(jìn)行配位，生成無色的EDTA鈣、鎂配合物，致使鉻黑T游離出來，溶液從酒紅色突變?yōu)樗{(lán)色，即為滴定終點(diǎn)。2.試劑：0.01mol/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：稱取4g C10H14N2O8Na2·2H2O，用水加熱溶解，冷卻后用水定容至1000mL。a.標(biāo)定:稱取基準(zhǔn)ZnO 1g（準(zhǔn)確到0.0001g），用少量水潤濕，加6mol/L的HCl溶液至樣品溶解，移入250mL容量瓶中，用水稀釋定容。移取該溶液25mL，加70mL水，用10%N

4、H2 / 443·H2O中和pH至7-8，加10mL pH10 NH4OH-NH4Cl緩沖液，加5滴1%鉻黑T指示劑，用待標(biāo)定的EDTA-Na2溶液滴定至溶液由紫色變?yōu)榧兯{(lán)色。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。b.計(jì)算：c(C10H14N2O8Na2·2H2O)=m/0.08138×(V1-V2) 式中：c(C10H14N2O8Na2·2H2O)：EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L； V1：滴定消耗EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL； V2：空白試驗(yàn)消耗EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL； m：ZnO的質(zhì)量 0.08138:與1.00mL

5、EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 c( EDTA) = 1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜难趸\的質(zhì)量。PH10 NH4OH-NH4Cl緩沖溶液：稱取5.4g NH4Cl溶于水中，加35mL濃NH3·H2O，用水稀釋定容至100mL。1%鉻黑T指示劑：稱取1g鉻黑T和1g鹽酸羥胺，溶于100mL無水乙醇中。3.測定方法總硬度的測定：移取50mL水樣，置于250mL三角瓶中，加5mL PH10 NH4OH-NH4Cl緩沖溶液和5滴1%鉻黑T指示劑，用0.01mol/L EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至藍(lán)色。永久硬度的測定：移取50mL水樣，置于250mL三角瓶中，煮沸10min，用濾紙

6、過濾，濾液用250mL三角瓶接收，用水充分洗滌濾紙，使濾液接近50mL，加5mL PH10 NH4OH-NH4Cl緩沖溶液和5滴1%鉻黑T指示劑，用0.01mol/L EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至藍(lán)色。4.計(jì)算總硬度=cV1×28.04×1/50×1/10×1000永久硬度=cV2×28.04×1/50×1/10×1000暫時(shí)硬度=總硬度-永久硬度C：EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L；V1：總硬度測定時(shí)消耗EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；V2：永久硬度測定時(shí)消耗EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)

7、滴定溶液的體積，mL；28.04: 與1.00mL EDTA-Na2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 c( EDTA) = 1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜难趸}的質(zhì)量，mg。5.討論滴定過程為什么要緩慢進(jìn)行？如果鉻黑T在水樣中變白色或渾濁的玫瑰色，該怎么辦？是什么原因引起的？ 試驗(yàn)二 Glu的制備（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：學(xué)會(huì)由味精制備谷氨酸的方法,加深對谷氨酸發(fā)酵下游技術(shù)的認(rèn)識(shí)。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握酸堿滴定的操作步驟。三、主要內(nèi)容：1.原理：谷氨酸與適量的堿發(fā)生中和反應(yīng)生成L-谷氨酸一鈉味精,味精與鹽酸作用生成谷氨酸。2.實(shí)驗(yàn)材料與儀器：味精、濃HCl、燒杯、精密酸性PH試紙、紗布、玻棒、干燥箱。3.實(shí)驗(yàn)步

8、驟(配50mL水中加35g味精）在燒杯中配制味精飽和溶液，然后緩慢加入一定量濃鹽酸，邊攪拌邊檢測溶液的PH值。當(dāng)PH值3.0-3.2左右時(shí),停止加濃鹽酸，低溫靜止30min,谷氨酸沉淀出現(xiàn)。如果上清液比較少，考慮用紗布過濾后放進(jìn)干燥箱干燥；如果上清液比較多，直接倒去部分上清或用紗布過濾后放進(jìn)干燥箱干燥。（干燥一周左右后，稱量固體粉末）4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:根據(jù)加入的味精質(zhì)量和得到的谷氨酸的質(zhì)量，計(jì)算出谷氨酸的大概得率。5.討論：為什么要緩慢加濃鹽酸？ 試驗(yàn)三 Glu的檢測（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：學(xué)會(huì)紙層析方法定性檢測樣品中氨基酸含量的操作步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握Rf值的計(jì)算方法。三、主要內(nèi)容：1.原

9、理：樣品經(jīng)紙層析分離、顯色后，由于不同氨基酸色斑的Rf值不同,因此，可依據(jù)Rf值大小定性。樣品中谷氨酸色斑與標(biāo)準(zhǔn)谷氨酸色斑的Rf值大小一致。2.實(shí)驗(yàn)材料與儀器：干燥箱，濾紙，針管，鉛筆，直尺，一次性手套，正丁醇，冰醋酸，茚三酮。3.實(shí)驗(yàn)步驟： 配制展開劑：正丁醇:冰醋酸:水=5:3:2(V/V/V)(20-30mL)，展開劑中含有0.4%的茚三酮(W/V)。 層析紙的準(zhǔn)備:裁取高度約為15cm的濾紙，寬度依樣品數(shù)量而定，注意濾紙的纖維方向與長邊一致。在距濾紙短邊邊線2cm處用鉛筆畫一直線，每隔1cm設(shè)一點(diǎn)樣點(diǎn)，寫上點(diǎn)樣標(biāo)記。 點(diǎn)樣:用微量進(jìn)樣器將氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液和處理好的待測谷氨酸樣品（濃度2%）

10、點(diǎn)在層析濾紙的相應(yīng)點(diǎn)樣點(diǎn)上，自然晾干或用電吹風(fēng)吹干，點(diǎn)樣點(diǎn)直徑控制在4mm內(nèi)。展開及顯色:將點(diǎn)好樣的濾紙用釘書機(jī)(或繩子)將兩端固定，使濾紙成圓筒狀，置于裝有5mm深展開劑的層析缸內(nèi)，當(dāng)展開劑前沿離濾紙上端1厘米時(shí)將濾紙取出，直接放在80的烘箱中烘烤15min顯色。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)谷氨酸和樣品中谷氨酸色斑的位置、色斑的亮度來判斷樣品中谷氨酸的有無以及谷氨酸的含量。5.討論：測定過程中為什么要使濾紙、溶劑溫度等保持恒定？ 試驗(yàn)四 啤酒色度的測定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：學(xué)會(huì)分光光度法和目視比色法測定啤酒的色度。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握分光光度法和目視比色法測定啤酒色度的操作過程。三、主要內(nèi)容：分

11、光光度法：1.啤酒的色澤愈深，則在一定波長下的吸光值愈大，因此可通過吸光度的測定求得啤酒的色度。測試時(shí)用1/2min比色杯，在波長430nm下測得吸光度，并換算成啤酒色度。2.材料與儀器：可見光分光光度計(jì)；1cm比色杯3.操作步驟：將除氣并澄清的啤酒酒樣注入1cm比色杯中，以蒸餾水作空白，用可見光分光光度計(jì)在波長430nm測定其吸光度A值。4.結(jié)果計(jì)算：X=10×1.27×A430×2.651.2式中：X啤酒色度，EBC單位； 101/2in比色杯在波長430nm下測得的吸光度值轉(zhuǎn)化為啤酒樣品色度的轉(zhuǎn)化系數(shù)； 1.27-1cm比色杯換算成1/2in比色杯的系數(shù)；

12、A430-在波長430nm測得的吸光度； 2.65換算成EBC單位的經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)； 1.2校正系數(shù)。目視比色法：1.原理：啤酒色度的測定以碘液消耗量為標(biāo)準(zhǔn)，取100ml水，向其中滴加0.1mol/L碘液，滴至溶液顏色與啤酒色澤一樣，所消耗的碘液體積即為啤酒色度。2.試劑與儀器：0.1mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液，比色管。3.測定步驟：選取直徑、色澤、管壁厚度均相同的比色管2支，1支準(zhǔn)確加入100ml啤酒試樣，另一支準(zhǔn)確加入100ml水，將2支比色管并列放在白紙上面，置光亮處，用1ml吸管向盛水的比色管內(nèi)逐滴滴入0.1mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液，邊滴邊攪拌，直至2支比色管色澤相同，記錄消耗碘液體積。4.計(jì)算：X=

13、Vc/0.1 式中：X-啤酒色度，用0.1mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定100ml啤酒試樣所消耗碘液的體積，ml； V-滴定消耗碘液的體積，ml； c標(biāo)定后碘液的濃度，mol/L。討論：2種方法測得的啤酒色度值是否一致？為什么？試驗(yàn)五 玉米粉中粗纖維素的測定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握測定發(fā)酵原料中纖維素含量的方法步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握對原料進(jìn)行加酸和加堿處理時(shí)的操作方法。三、主要內(nèi)容：1.原理:在熱的稀硫酸作用下，樣品中的糖、淀粉、果膠等物質(zhì)經(jīng)水解而除去，再用熱的氫氧化鉀處理，使蛋白質(zhì)溶解，脂肪皂化而除去，然后用乙醇和乙醚處理來除去單寧、色素及殘余的脂肪，所得的殘?jiān)鼮榇掷w維素，如其中含有無機(jī)物

14、質(zhì)，可通過測定灰分扣除。2.儀器和試劑儀器:電子天平,電熱恒溫水浴鍋,電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,回流裝置,抽提裝置試劑:1.25%硫酸溶液:量取7.1ml硫酸，緩慢倒入適量水中，并用水稀釋至1000ml；1.25%氫氧化鈉溶液：稱取1.25g氫氧化鈉，用水溶解并定容至1000ml；乙醚；乙醇。 3 測定方法乙醇處理：準(zhǔn)確稱量 5-10g玉米粉試樣，置入500ml磨口三角瓶中。加入200ml乙醚，蓋嚴(yán)，靜置24小時(shí)，以除去脂肪，用傾瀉法除去乙醚層，并用乙醚洗滌殘?jiān)瑲埓嫔倭康囊颐言谒≈姓舭l(fā)除去。加酸處理：加200ml煮沸的1.25%硫酸溶液于上述500ml三角瓶中，安上冷凝器，在沸水浴中回流30分鐘

15、，取下錐形瓶，3000-3500r/min離心10-15分鐘，用熱水洗滌沉淀至上清液呈中性。加堿處理：將殘?jiān)弥蠓械?.25%氫氧化鈉溶液轉(zhuǎn)入500ml磨口三角瓶中，補(bǔ)足1.25%氫氧化鈉溶液至200ml，安上冷凝器，加熱使之微沸，回流30分鐘，取下錐形瓶，用4層紗布過濾，用熱水洗滌殘?jiān)翞V液呈中性，再分別用乙醇、乙醚洗滌一次。干燥、灼燒：將殘?jiān)?00-105干燥箱中干燥至恒重，然后再灼燒至恒重。4.計(jì)算粗纖維素（以絕干計(jì)）=(m1-m2)/m)×(1/(1-w)×100%式中m1-試樣與坩堝干燥至恒重的質(zhì)量，g;m2-試樣與坩堝灼燒至恒重（灰分）的質(zhì)量，g；m-試樣的質(zhì)

16、量，g；w-風(fēng)干試樣的水分，g；5.討論測定玉米粉計(jì)玉米秸稈中的粗纖維素，應(yīng)先測定其中的水分，因其參與纖維素的計(jì)算。用離心機(jī)高速離心，可以解決過去用麻布過濾時(shí)，由于其孔徑不均勻，測定結(jié)果重現(xiàn)性較差的現(xiàn)象。國產(chǎn)粗纖維測定儀，一次測定6個(gè)樣品，在操作上僅需90分鐘，（酸堿處理、抽提、洗滌）。試驗(yàn)六 0.1000mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握0.1000mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握0.05mol/L Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的配制與標(biāo)定過程。三、主要內(nèi)容：1.原理：先用基準(zhǔn)物質(zhì)K2Cr2O7標(biāo)定Na2S2O3溶液，再用標(biāo)定好的Na2S2O

17、3溶液滴定配好的碘液，根據(jù)消耗的Na2S2O3溶液體積計(jì)算出碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。2.試劑：Na2S2O3·5H2O，Na2CO3，K2Cr2O7，KI，H2SO4，0.5%淀粉指示劑，I2。配制0.5%淀粉指示劑：稱取0.5g可溶性淀粉于100mL燒杯中，用少量水調(diào)成糊狀，倒入70mL沸水，繼續(xù)煮沸2min，冷卻后用水定容至100mL（臨用前現(xiàn)配）。3.方法：c（Na2S2O3）=0.05molL硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：稱取13g Na2S2O3·5H2O和0.1g碳酸鈉（Na2CO3），溶于剛煮沸冷卻后的蒸餾水中，并用該水定容至1000mL，貯于棕色瓶中密閉保存，放置1周后

18、標(biāo)定使用。 a標(biāo)定：稱取基準(zhǔn)物K2Cr2O7 0.05g（K2Cr2O7 預(yù)先在130干燥2h，準(zhǔn)確至0.0001g）置于500mL碘量瓶中，用25mL新煮沸并冷卻的水溶解，加1g KI及10mL c（12 H2SO4）=2molL的H2SO4溶液，待KI溶解后，于暗處放置10min，加150mL水，用配好的Na2S2O3溶液滴定，接近終點(diǎn)時(shí)，加3mL 0.5%淀粉指示劑，繼續(xù)滴定到溶液由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色時(shí)為終點(diǎn)。同時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn)。b計(jì)算 c（Na2S2O3）=m（V1-V2）×0.04903式中c（Na2S2O3）- 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，molL； m-基準(zhǔn)物K2Cr

19、2O7的質(zhì)量，g； V1-滴定消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL； V2-試劑空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL； 0.04903-與 1.00mL硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c（Na2S2O3）=1.000molL相當(dāng)?shù)闹劂t酸鉀的質(zhì)量，g；c（12I2）=0.1molL碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：稱取36gKI溶于50mL水中,在不斷攪拌下加入13g碘（I2），完全溶解后用水稀釋定容至1000mL，貯于棕色瓶，密閉、避光保存。 a標(biāo)定：用已標(biāo)定的c（Na2S2O3）=0.05mol/L Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液標(biāo)定碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。 吸取10.00mL待標(biāo)定的I2溶液于250mL碘量瓶中，用已標(biāo)定

20、過的c（Na2S2O3）=0.05mol/L Na2S2O3溶液滴定至淡黃色時(shí)，加2-3滴0.5%淀粉指示劑，繼續(xù)滴定至無色即為終點(diǎn)。b計(jì)算c（1/2I2）=cv/10.00式中c（1/2I2）-碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L； c-Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L； V-滴定消耗Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL； 10.00-吸取碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；4.討論：結(jié)晶的Na2S2O3·5H2O一般含有少量雜質(zhì)，同時(shí)還容易分化潮解，需用間接法配制。Na2S2O3容易受空氣中的O2、溶解在水中的CO2、微生物和光照等作用而分解。它在堿性介質(zhì)中較穩(wěn)定。所以

21、配制溶液時(shí)，為了減少溶解在水中的CO2和殺滅水中的微生物，使用新煮沸的冷蒸餾水配制溶液，并加入少量碳酸鈉，其濃度約為0.02%，以維持溶液的微堿性，防止Na2S2O3的分解。日光能促使Na2S2O3溶液分解，故Na2S2O3溶液貯于棕色瓶中，并放置暗處。長期保存的溶液，應(yīng)每隔一段時(shí)間重新標(biāo)定。如發(fā)現(xiàn)溶液變渾濁（表面有固體析出）時(shí)，就應(yīng)過濾后標(biāo)定，或重新配制。保存得好，可每兩個(gè)月標(biāo)定一次。標(biāo)定Na2S2O3溶液，常選用強(qiáng)氧化劑如KIO3、KBrO3或K2Cr2O7等作基準(zhǔn)物質(zhì)，這些物質(zhì)均能與KI反應(yīng)析出定量的I2。試驗(yàn)七 碘量法測定維C含量（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握碘量法測定樣品中維C含量的操

22、作步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握碘量法測定維C含量的原理。三、主要內(nèi)容：維生素C在乙酸的酸性條件下，可被碘定量氧化。根據(jù)消耗碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，即可計(jì)算出維生素C的含量。1、原理：維生素C在乙酸的酸性條件下，可被碘定量氧化。根據(jù)消耗碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積即可計(jì)算維生素C的體積，即可計(jì)算維生素C的含量。2、儀器和試劑、儀器 電子天平、試劑a.c(1/2I2)=0.1000molL碘標(biāo)準(zhǔn)滴定液(配制見實(shí)驗(yàn)六)b.1淀粉指示劑(配制見實(shí)驗(yàn)六)c.c(CH3COOH=1molL乙酸溶液 取6ml冰醋酸用水稀釋定容至100ml3、測定方法 稱取試樣0.2g（稱準(zhǔn)至0.0001g）于500ml三角瓶中，加新煮

23、沸過的冷水100ml與1molL乙酸溶液10ml使之溶解，加淀粉指示劑1.0ml，立即用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定液滴定至溶液顯藍(lán)并在30s內(nèi)不褪色,記錄消耗c(1/2I2)=0.1000molL碘標(biāo)準(zhǔn)滴定液的體積。4、計(jì)算1ml c(1/2I2)=0.1000molL碘標(biāo)準(zhǔn)滴定液相當(dāng)于8.806mg的維生素C（C6H8O6）5、討論（1）操作中加入1molL乙酸溶液可使滴定在酸性溶液中進(jìn)行。因在酸性介質(zhì)中維生素C受空氣中氧的氧化速度減慢，但樣品溶于稀酸后仍需立即進(jìn)行滴定。（2）加入新煮沸過的冷水的目的是為了減少水中氧對測定的影響（3）中國藥典采用本方法對維生素C原料、片劑、泡騰片、顆粒和注射劑進(jìn)行含量測定，

24、為消除制劑中輔料對測定的干擾，滴定前要進(jìn)行必要的處理。如片劑溶解后應(yīng)過濾，取濾液測定；注射液測定時(shí)要加2ml丙酮，以消除注射液中含有的抗氧化劑亞硫酸氫鈉對測定結(jié)果的影響。試驗(yàn)八 蒸餾酒中總?cè)┑臏y定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握化學(xué)分析法測定蒸餾酒中總?cè)┖康牟僮鞑襟E。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握化學(xué)分析法測定蒸餾酒中總?cè)┖康脑怼Ｈ?、主要?nèi)容：1.原理:白酒中醛類的羰基與亞硫酸氫鈉可起加成反應(yīng)，反應(yīng)中剩余的亞硫酸氫鈉可用I2氧化，過量的I2用Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，從空白試驗(yàn)值與酒樣值之差求得醛的含量。2. 試劑： C Na2S2O3（硫代硫酸鈉）=0.05mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 稱取1

25、3g Na2S2O3晶體和0.1g Na2CO3，溶于剛煮沸冷卻后的蒸餾水中，并用該水定容至1000ml，貯于棕色瓶中密閉保存，放置1周后標(biāo)定使用。 C NaHSO3（亞硫酸氫鈉）=0.025mol/L NaHSO3溶液 稱取2.6g NaHSO3，用水溶解并定容至1000ml（該試劑不穩(wěn)定，須現(xiàn)用現(xiàn)配）。 C（）=0.1mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 稱取36g KI溶于50ml水中，在不斷攪拌下加入13g I2，完全溶解后用水稀釋定容至1000mL，貯于棕色瓶，密閉、避光保存。 0.5%淀粉指示劑 稱取0.5g可溶性淀粉于1000ml燒杯中，用少量水調(diào)成糊狀，倒入70沸水，繼續(xù)煮沸2min，冷卻

26、后用水定容至1000ml（臨用前現(xiàn)配）。3.測定方法：吸取待測酒樣50.0ml，置于250ml碘量瓶中，準(zhǔn)確加入20.00ml C（NaHSO3）=0.025mol/L NaHSO3溶液，于暗處反應(yīng)30min，其間需經(jīng)常搖動(dòng)以利反應(yīng)進(jìn)行。準(zhǔn)確加入25.0ml C（）=0.1mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，搖勻，立即用C（Na2S2O3）=0.05mol/L Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至淺黃色，加1.00ml 0.5%淀粉指示劑，再繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)，不加酒樣，其余操作同上。4.計(jì)算：總?cè)ㄒ砸胰┯?jì)，g/100ml）=（V-）×C（Na2S2O3）×0.22

27、03×100/50.0式中 V-試樣測定時(shí)消耗Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml； -空白試驗(yàn)時(shí)消耗Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml；C（Na2S2O3）- Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L；02203-與1.00ml Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c（Na2S2O3）=1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊胰┑馁|(zhì)量，g。5.討論：NaHSO3極不穩(wěn)定，用后需密封防潮；NaHSO3溶液要現(xiàn)用現(xiàn)配，然后用C（）=0.1mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定；用Na2S2O5（偏重亞硫酸鈉）代替NaHSO3效果較好，因?yàn)镹a2S2O5較NaHSO3穩(wěn)定得多，且作用相同。試驗(yàn)九 蒸餾酒中總脂

28、的測定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握測定蒸餾酒中總脂含量的操作步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握測定蒸餾酒中總脂含量的原理。三、主要內(nèi)容：1.原理：先用堿（NaOH）中和蒸餾酒中的游離酸，再加入一定量的堿（NaOH）使脂皂化，過量的堿（NaOH）再用酸（H2SO4）進(jìn)行反滴定，然后計(jì)算出脂的含量。 2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O2.儀器和試劑（1） 儀器 電子天平（0.1mg）；電熱恒溫水浴鍋；全玻璃回流裝置（250ml）。（2） 試劑C(NaOH)=0.1mol/L 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 稱取4g NaOH,用水溶解并稀釋定容至1000mL.a.標(biāo)定：準(zhǔn)確稱取0.4g(稱準(zhǔn)至0.0001g)鄰苯

29、二甲酸氫鉀（預(yù)先于120烘2h）,置入250 mL三角瓶中，加50 mL水使其溶解，加2滴0.5%酚酞指示劑，用待標(biāo)定的NaOH溶液滴定至微紅色，30s不褪色即為終點(diǎn)。同時(shí)做一空白試驗(yàn)。b.計(jì)算式中m鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，g;V1滴定消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；V2空白試驗(yàn)消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml;0.2042與1.00mlNaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(NaOH)=1.000mol/L相當(dāng)?shù)泥彵蕉姿釟溻浀馁|(zhì)量，g。c(1/2 H2SO4)=0.1mol/L H2SO4標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 量取2.8ml濃H2SO4，用水稀釋至1000ml.a標(biāo)定：吸取20.00,ml待標(biāo)定的硫酸溶液

30、，置入150ml三角瓶中，加2滴0.5%酚酞指示劑，用已標(biāo)定過C(NaOH)=0.1mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至微粉色，30s不褪色即為終點(diǎn)。b計(jì)算 式中 硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L;C(NaOH)NaOH標(biāo)準(zhǔn)的滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L;V消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml。0.5%酚酞指示劑 稱取0.5g酚酞，溶于100ml 95%乙醇中。3.測定方法吸取酒樣50.0ml置于250ml磨口三角瓶中，加入2滴0.5%酚酞指示劑，用C(NaOH)=0.1mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至微粉色，切忌過量記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積V1（ml）.再準(zhǔn)確加入C

31、(NaOH)=0.1mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液25.00ml，搖勻，置沸水浴中回流30min（用球形冷凝管），取下后冷卻至室溫，用c(1/2 H2SO4)=0.1mol/L H2SO4標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液進(jìn)行反滴定，使微紅色剛好完全消失為終點(diǎn)，記錄消耗c(1/2 H2SO4)=0.1mol/L H2SO4標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積V2（ml）。4.計(jì)算總酯（以乙酸乙酯計(jì)，g/L）式中C(NaOH)NaOH標(biāo)準(zhǔn)的滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L;25.00皂化時(shí)加入NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml; 硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L;V2反滴定時(shí)消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml;0.08812與1.0

32、0mlNaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(NaOH)=1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊宜嵋阴サ馁|(zhì)量，g。50.0取樣體積，ml;結(jié)果的允許誤差：同一樣品兩次測量的結(jié)果相差不得超過0.006g/L,結(jié)果保留兩位小數(shù)。5.討論(1).皂化時(shí)加入NaOH的量，視白酒中總酯的含量而定，如總酯含量大于0.4%時(shí)，0.1mol/LNaOH溶液需加入30ml。 皂化條件的改變影響總酯測定的結(jié)果，通常皂化工程如采用靜置過夜，則其結(jié)果比采用沸水浴回流30min偏低。(2).本測定方法是國家標(biāo)準(zhǔn)（GB 10345.5-89）試驗(yàn)方法，是檢測酯類的經(jīng)典的化學(xué)方法，適用于各種香型白酒中總酯的測定?，F(xiàn)在可用氣相色譜法對白酒中各種酯類分

33、別進(jìn)行定性定量。(3).該測定方法可同時(shí)測定白酒中的總酸含量。若以乙酸計(jì)，可表示為： 總酸（以乙酸計(jì)，g/L）(4).若采用氣相色譜法，可將蒸餾酒中的各種酯分離后定量，具體方法參見“17 成品酒精中甲醇、醛高級(jí)醇、酯的測定”。(5).長期飲用總酯含量過高的蒸餾酒，對飲用者身體健康可能會(huì)造成影響，這又增加了測定蒸餾酒總酯的意義，故應(yīng)嚴(yán)格控制蒸餾酒中總酯的含量。(6).NaOH與鄰苯二甲酸氫鉀反應(yīng)方程式為：試驗(yàn)十 乳酸純度的測定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握測定總酸含量的操作步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握測定總酸含量的原理。三、主要內(nèi)容：乳酸含量實(shí)際上是指乳酸發(fā)酵產(chǎn)物的純度，采用堿中和酸，測得的應(yīng)是總的

34、乳酸含量，即乳酸純度。1. 原理試樣與過量NaOH反應(yīng)，剩余的NaOH以酚酞為指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定。2. 試劑1 C(NaOH)=1mol/L NaOH 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 稱取 4g NaOH，加水溶解并定容至100mL。標(biāo)定：準(zhǔn)確稱取4g（稱準(zhǔn)至0.0001g）鄰苯二甲酸氫鉀（預(yù)先于120干燥2h），置于250ml三角瓶中，加50mL新煮沸過的冷水，振搖使溶解，加2滴0.5%酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至微紅色，30s不褪色即為終點(diǎn)。2 c()=0.5mol/L 標(biāo)準(zhǔn)滴定液 量取2.8mL ,加入已盛有少量水的100mL容量瓶中，并用水定容至刻度。標(biāo)定：吸取20.

35、00mL硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，置于150mL三角瓶中，加2滴0.1%甲基紅指示劑，用已標(biāo)定過的NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.1mol/L）滴定至黃色。3 1%酚酞指示劑 稱取1.0g酚酞，溶于100mL95%乙醇溶液中。3. 測定稱取樣品1.0000g（稱準(zhǔn)至0.0001g），加50mL水，準(zhǔn)確加入c(NaOH)L=1mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液40.00ml，煮沸5min，加2滴1%酚酞指示劑，趁熱用c()=0.5mol/L 標(biāo)準(zhǔn)滴定液滴定至無色。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。4.計(jì)算 乳酸（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）=式中 空白試驗(yàn)消耗標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL； 試樣消耗標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL； c標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃

36、度，mol/L； m試樣的質(zhì)量，g；0.09008與1.00ml標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c()=0.5mol/L相當(dāng)?shù)娜樗岬馁|(zhì)量，g。5. 討論1 本方法源于GB 2023-2003，作者有改動(dòng)；乳酸GB 2023-2003理化指標(biāo)見表27-1。2 L-乳酸生產(chǎn)工藝如下：原料粉碎調(diào)漿糊化液化糖化過濾發(fā)酵除雜酸解脫色凈化濃縮離子交換濃縮成品。表27-1 乳酸GB 2023-2003理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)L(+)-乳酸DL-乳酸乳酸含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）/%8090色度（APHA）50150L(+)-乳酸占總酸的含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）/%95-氯化物（以氯離子計(jì)）/%0.002硫酸鹽（以硫酸根計(jì)）/%0.005鐵鹽（以Fe計(jì)）

37、/%0.001灼燒殘?jiān)?%0.1砷（以As計(jì)）/(mg/kg)1重金屬（以Pb計(jì)）/(mg/kg)10鈣鹽合格易炭化物合格-醚中溶解度合格檸檬酸、草酸、磷酸、酒石酸還原糖甲醇/%0.2-氰化物/(mg/kg)5試驗(yàn)十一 常壓干燥法測定玉米粉和谷氨酸中水分含量（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握水分測定的各種方法，熟練掌握常壓干燥測定水分的操作技能。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握蒸發(fā)、干燥、恒重的概念和知識(shí)。三、主要內(nèi)容：1.原理：食品中的水分一般是指在常壓下、100-105C直接干燥的情況下或在減壓條件下、55-70所失去物質(zhì)的總量。實(shí)際上在此溫度下所失去的是水和揮發(fā)性物質(zhì)的總量，而不完全是水。直接干燥法適用于

38、在95105C下，不含或含其他揮發(fā)性物質(zhì)甚微的樣品。本試驗(yàn)采用直接干燥法測試玉米粉和谷氨酸中的水分含量。2.儀器和材料：玉米粉、谷氨酸、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、電子天平（0.1mg）、稱量瓶、干燥器。3.測定方法：取潔凈的稱量瓶，置于100-105C電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，干燥2h，蓋好取出，立即放入干燥器內(nèi)冷卻30min，稱重。再放入100-105C干燥箱中干燥1h，蓋好取出，放入干燥器內(nèi)冷卻30min，稱重。重復(fù)干燥至恒重（前后兩次質(zhì)量差不超過0.5mg）。準(zhǔn)確稱取5g玉米粉、谷氨酸樣品于上述已恒重的稱量瓶中，置于100-105C干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，干燥3h，蓋好取出，立即

39、放入干燥器內(nèi)冷卻30min，稱重。再放入100-105C干燥箱中干燥2h，蓋好取出，放入干燥器內(nèi)冷卻30min，稱重。重復(fù)干燥至恒重。4.計(jì)算水分=(m1-m2)/(m1-m0)×100 式中，m0稱重瓶的質(zhì)量，g； m1稱重瓶和樣品干燥前的質(zhì)量，g; m2稱重瓶和樣品干燥后的質(zhì)量，g。5.討論本法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，但比較費(fèi)時(shí)，且不適合膠體、高脂肪、高糖樣品及含有較多的高溫易氧化、易揮發(fā)物質(zhì)的樣品。本法測得的水分實(shí)際上還應(yīng)包括微量的芳香油、醇、有機(jī)酸等揮發(fā)性物質(zhì)。操作過程中，須戴手套，否則稱量瓶難恒重。本法最低檢出量為0.002g，取樣量為2g，本法檢出限為0.10g/100g，方

40、法相對誤差5%。試驗(yàn)十二 啤酒中雙乙酰的測定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握比色法測定雙乙酰含量的操作步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握水蒸汽蒸餾的基本原理和操作，掌握紫外分光光度計(jì)的操作要求。三、主要內(nèi)容：1.原理：本實(shí)驗(yàn)采用比色法測定雙乙酰。通過水蒸氣蒸餾初步分離得到雙乙酰，鄰苯二胺與包括雙乙酰的連二酮類物質(zhì)反應(yīng)，生成物的鹽酸鹽在335nm有最大吸收，其吸收度與聯(lián)二酮的濃度成正比，依此可進(jìn)行定量測定。2. 儀器和試劑：儀器：電子天平（0.1mg)；紫外可見分光光度計(jì)（應(yīng)符合或高于GB 9721的要求）；半微量凱氏定氮蒸餾裝置（100mL)。試劑：消泡劑（有機(jī)硅消泡劑或甘油聚醚）；4mol/L鹽酸溶液（

41、量取34mL濃HCl，用水定容至100mL）；1%鄰苯二胺溶液（準(zhǔn)確稱取0.5g鄰苯二胺，溶于4mol/L HCl溶液中，并以4mol/L HCl溶液定容至50mL，貯存于棕色瓶中，宜當(dāng)天配制）；0.5000mg/mL雙乙酰貯備液（稱取0.5000g優(yōu)級(jí)純雙乙酰，用水稀釋定容至1000mL，貯于棕色瓶中，冰箱保存，最好現(xiàn)配現(xiàn)用）；0.2500mg/mL雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)溶液（吸取雙乙酰貯備液5.00mL于25mL具塞比色管中，用水稀釋至10.0mL)3.測定方法：蒸餾 于25mL具塞比色管內(nèi)加約2.5mL 水，置于冷凝器下端，使冷凝器下端浸入水中。量取未除氣的啤酒100.0mL，加2-4滴消泡劑，迅速

42、加入到已預(yù)先加熱的蒸餾器中，用少量水沖洗加樣口，并作水封。繼續(xù)加熱蒸餾至餾出液近25mL。取下比色管，以水定容至25mL，混勻。顯色 分別取10.00mL餾出液，置于兩支25mL具塞比色管中，向1號(hào)管加入0.5mL1%鄰苯二胺溶液，2號(hào)管不加（做空白）。充分搖勻，放置暗處反應(yīng)20-30min。向1號(hào)管中加入2.00mL 4mol/L HCl溶液，2號(hào)管中加2.50mL 4mol/L HCl溶液，搖勻。同時(shí)準(zhǔn)確吸取0.10mL 0.2500mg/mL雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)溶液于25mL具塞比色管中，用水稀釋至10.0mL。加入0.5mL 1%鄰苯二胺溶液，充分搖勻，放置暗處反應(yīng)20-30min。加入2.00

43、mL 4mol/L HCl 溶液。比色 于335nm波長下，用2cm的石英比色皿，以空白做參比，用紫外可見分光光度計(jì)測出樣品和雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，比色操作需在20min內(nèi)完成。4.計(jì)算：聯(lián)二酮（以雙乙酰計(jì)，mg/L)=×0.625無雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)品，可按下式計(jì)算：聯(lián)二酮（以雙乙酰計(jì)，mg/L)=A×1.2-0.01式中 A-試樣的吸光度； 1.2-吸光度與雙乙酰換算系數(shù)(多次用純雙乙酰測得的經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)）； 0.01-校正數(shù)（本法與Duades和Drews 法比較得出的差值），可略去。5.討論雙乙酰不易純化，市售雙乙酰需測定純度。雙乙酰純度測定方法：吸取1mL雙乙酰貯備液，稀釋

44、定容至100mL，吸取10mL該稀釋液（含雙乙酰50ug/mL），按21.3節(jié)中的（2）、（3）測定其濃度。蒸餾時(shí)加樣要迅速，勿使成份損失，而且要盡快蒸出，最好在5min內(nèi)完成。如果蒸餾器體積小，或消泡劑效果差時(shí)，可將100mL試樣分兩次蒸餾（接收在同一支比色管內(nèi)），調(diào)節(jié)蒸汽量，控制蒸餾強(qiáng)度，勿使泡沫過高而被蒸汽帶出。試樣蒸餾結(jié)束后，加入稀堿液煮沸，以除去附著在容器壁上的殘?jiān)?，再用熱水沖洗至中性。顯色反應(yīng)宜在暗處進(jìn)行，如在光亮處可導(dǎo)致結(jié)果偏高。試驗(yàn)十三 啤酒中甲醛殘留量的測定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握變色酸法測定甲醛殘留量的操作步驟。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握蒸餾的基本原理和操作，掌握紫外分光光度

45、計(jì)的操作要求。三、主要內(nèi)容：1.原理：甲醛在酸性條件下從試樣中蒸出，在H2SO4存在下可與變色酸（1,8-二萘酸-3,6-二磺酸）反應(yīng)生成紫色化合物。該化合物在575nm處有最大吸收，甲醛含量在一定范圍內(nèi)與其吸光度值呈線性關(guān)系，故可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對甲醛定量。2.儀器和試劑（1） 儀器 凱氏定氮蒸餾裝置（500ml)；紫外可見分光光度計(jì)（應(yīng)符合或高于GB9721要求）（2） 試劑 磷酸（H3PO4) 磷酸原裝試劑 5變色酸（1,8-二萘酸-3,6-二磺酸）溶液稱取2.5g變色酸（或變色酸鈉鹽）于100ml燒杯中，用約30ml水完全溶解后，定容至50ml。如不澄清，需要過濾。冰箱保存，一周內(nèi)有效。

46、變色酸試劑 吸取2.00ml5變色酸溶液于100ml容量瓶中，用濃H2SO4定容至刻度。 c(H2SO4)=0.5mol/L硫酸溶液 量取28ml濃硫酸，緩慢倒入適量水中，用水稀釋至1000ml。 c(I2)=0.1mol/L碘溶液 稱取13.5g I2,加36gKI、50mlH2O,溶解后加入3滴鹽酸及適量水稀釋至1000ml。用垂融漏斗過濾，置于陰涼處，密閉、避光保存。 c(Na2S2O3)=0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 稱取約25g硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O）和0.2g碳酸鈉（Na2CO3）溶解于新煮沸冷卻后的水中，并定容至1000ml，貯于棕色試劑瓶中，一

47、周后標(biāo)定。 a.0.1mol/L Na2S2O3溶液的標(biāo)定：稱取基準(zhǔn)物K2Cr2O7 0.1g（K2Cr2O7）預(yù)先于130干燥2h，準(zhǔn)確至0.0002g)置于500ml碘量瓶中，用25ml新煮沸并冷卻的水溶解，加2gKI及20mlc(H2SO4)=2mol/L的H2SO4溶液，待KI溶解后，于暗處放置10min，加150ml水，用配好的Na2S2O3溶液滴定，接近終點(diǎn)時(shí)，加3ml5淀粉指示劑，繼續(xù)滴定到溶液由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色時(shí)為終點(diǎn)。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。b.計(jì)算c（Na2S2O3）= 式中c（Na2S2O3）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L；m基準(zhǔn)物K2Cr2O7的質(zhì)量，g；滴定消

48、耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml；試劑空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml；0.04903與1.00ml硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c（Na2S2O3）=1.000mol/L相當(dāng)?shù)闹劂t酸鉀的質(zhì)量，g。 甲醛（HCHO)標(biāo)準(zhǔn)貯備液 吸取3638的HCHO7.0ml,加0.5ml0.5mol/L的H2SO4溶液，定容至250ml。用碘量法標(biāo)定其濃度。a.甲醛（HCHO）標(biāo)準(zhǔn)貯備液的標(biāo)定：吸取10.00mlHCHO標(biāo)準(zhǔn)貯備液于100ml容量瓶中，用水定容至刻度。吸取稀釋后的HCHO溶液10.00ml于500ml碘量瓶中，加90ml水，加20.0ml0.1mol/L碘溶液，放置15min。用0.1

49、mol/L Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至溶液至淺黃色，加3.0ml0.5淀粉指示劑，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色透明。用水代替甲醛溶液，做空白試驗(yàn)。b.計(jì)算甲醛（mg/ml)=式中空白試驗(yàn)消耗Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml；試樣消耗Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml；CNa2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L；15.00與1.00ml Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c（Na2S2O3）=1.000mol/L相當(dāng)?shù)闹劂t酸鉀的質(zhì)量，mg。 甲醛（HCHO)標(biāo)準(zhǔn)使用液 用HCHO標(biāo)準(zhǔn)貯備液準(zhǔn)確稀釋至1mol/L。3.測定方法(1)、試樣制備 將啤酒反復(fù)傾倒除去泡沫后，取200.

50、0ml試樣于500ml凱氏燒瓶中，加1ml H3PO4，加幾粒沸石，連接凱氏定氮蒸餾裝置，慢慢蒸餾，收集蒸餾液50.0ml（可將50ml容量瓶置于冰水浴中）。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別吸取HCHO標(biāo)準(zhǔn)稀釋液（1mol/L）0、0.20ml、0.40ml、0.80ml、1.20ml、1.60ml、2.00ml于25ml具塞比色管中，加水補(bǔ)至10.0ml。向各管緩慢加入變色酸試劑10.00ml，搖勻。充分冷卻后，在波長575nm下，用3cm比色皿，以試劑空白做參比，測定吸光度。依據(jù)吸光度與甲醛濃度的線性關(guān)系，建立線性回歸方程，求得甲醛濃度。(3)測定 吸取10.00ml制備試樣于25ml具塞比色管

51、中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制顯色，測定吸光度。4.計(jì)算啤酒中甲醛含量（mg/l)=式中c根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出的甲醛濃度，ug/10ml；取樣體積，ml；啤酒試樣體積，ml；啤酒蒸餾液體積，ml。5.討論制備試樣時(shí)，用調(diào)壓電熱套加熱快速安全。蒸餾開始時(shí)電熱套電壓應(yīng)調(diào)低些，以防突然暴沸。用Na2S2O3溶液標(biāo)定甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備液時(shí)，加入0.5%淀粉指示劑前的淺黃色判斷要準(zhǔn)確，否則將帶來很大的誤差。配制變色酸試劑時(shí)，因?yàn)闈釮2SO4遇水大量放熱，所以最初濃H2SO4須慢且少量加入并及時(shí)混勻，每次都要充分冷卻后再繼續(xù)緩慢少量加入。試驗(yàn)十四 醬油中氨基酸態(tài)氮的測定（2學(xué)時(shí)）一、教學(xué)目的：掌握甲醛法測定氨基酸含量的

52、方法。二、重點(diǎn)與難點(diǎn)：掌握PH計(jì)的操作方法。三、主要內(nèi)容：1.原理：氨基酸是具有氨基和羧基的兩性化合物，不能用氫氧化鈉直接滴定，采用加入甲醛溶液，使氨基的堿性被掩蔽，呈現(xiàn)羧基酸性，再用氫氧化鈉滴定。反應(yīng)式為： N-二羥甲基氨基酸 2. 儀器和試劑 （1）儀器 酸度計(jì)；磁力攪拌器；電子天平（0.1mg） （2）試劑 甲醛（HCHO）溶液 體積分?jǐn)?shù)（36%-38%） c(NaOH)=0.05mol/L 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 稱取2.0gNaOH，用水溶解并稀釋至1000ml。3. 測定方法 準(zhǔn)確吸取5.00ml醬油，用水稀釋定容至100ml。吸取20.00mL醬油稀釋液，置于100ml燒杯中，加6

53、0ml水，攪拌下用0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至pH8.20，此為游離酸度，不予計(jì)量（但若測定總酸，可直接利用次滴定體積）。加10.0ml HCHO溶液，開動(dòng)磁力攪拌器，立即用0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至pH9.20，記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積。 另取80ml水，不加醬油稀釋液，同上操作，進(jìn)行空白試驗(yàn)。4. 計(jì)算 氨基酸態(tài)氮(g/100mL)=(V-V0)*0.01401*100/20*1/5*100式中 V加甲醛后式樣消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml； V0加甲醛后空白消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，ml； c氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/

54、L；0.01404與1.00ml氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(NaOH)=1.000mol/L 相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，g；100/2020 為吸取醬油稀釋液的體積，ml；100 為醬油稀釋后體積，ml； 5吸取醬油的體積，ml。 同一樣品兩次平行測定之差，不得超過0.03g/ml。5. 討論 本方法源于釀造醬油GB/T 18186-2000中氨基酸的測定。 氨基酸是一種兩性電解質(zhì)，不能直接用酸或堿滴定，是因?yàn)樗帷A滴定時(shí)其等電點(diǎn)的pH值過高（pH 12-13）或過低（pH 1-2），單一的指示劑難以滿足要求。醬油中氨基酸態(tài)氮測定采用甲醛法，因?yàn)橐话慊瘜W(xué)法不能將氨基酸分離，只能通過測定氨基酸態(tài)氮的方法定量。甲醛法又分為指示劑滴定法和電位滴定法。滴定終點(diǎn)（加甲醛后）確定在pH 9.20，是因?yàn)榘被崛芤褐写嬖?mol/L甲醛時(shí)，滴定終點(diǎn)沖pH 12左右移至pH 9附近，亦即酚酞指示劑的變色區(qū)域，這也是甲醛滴定法的基礎(chǔ)。電位滴定法也同指示劑一樣，由于滴定終點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)不同而檢測結(jié)果有差異，個(gè)別終點(diǎn)掌握在pH 9.00，所以報(bào)告時(shí)最好注明檢測方法及終點(diǎn)的pH值。甲醛法測定醬油中氨基酸態(tài)氮，除氨基酸態(tài)氮外別的氮也可起反應(yīng)，故仍有誤差。另外由于各種氨基酸的等電點(diǎn)不同，故確定一個(gè)合