沙眼衣原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷

1、沙眼衣原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷趙琪林(四川省遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科629000)【中圖分類號(hào)】r777.32【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼a文章編號(hào)】1672-5085 (2013 ) 15-0168-02【摘要】目的 探討不同檢測(cè)方法對(duì)生殖道衣原體感染的診斷意義。方法對(duì) 2009年12月2010年12月在木院進(jìn)行治療86的生殖道炎癥患者的尿道(男性) 或?qū)m頸分泌物(女性)，采用聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)、酶聯(lián)免疫反應(yīng)(elisa)及細(xì) 胞培養(yǎng)法(cc)進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行比較。結(jié)果pcr、elisa及cc三種方法的陽(yáng) 性檢出率分別為 25.58% (22/86)> 8.14% (7/86)及 19.76% (19/8

2、6),三種檢測(cè) 方法間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；以細(xì)胞培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，pcr法的特異 性為98.6%,靈敏度為100%； elisa法的特異性為91.2%,靈敏度為88.6%,三 種方法的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p&gt；0.05)o結(jié)論pcr、elisa及cc三種方 法對(duì)于支原體感染的診斷價(jià)值較好，均可以用于對(duì)支原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷?！娟P(guān)鍵詞】pcr elisa cc沙眼衣原體診斷沙眼衣原體是一種在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行專性寄牛的微牛物，其感染后可以引起 多種系統(tǒng)的疾病，包括有沙眼、生殖系統(tǒng)感染等，由于沙眼衣原體引起的泌尿牛 殖系統(tǒng)感染己經(jīng)成為最常見的性傳播疾病1,而其發(fā)病時(shí)

3、臨床癥狀并不明顯從 而導(dǎo)致患者就診不及時(shí)，耽誤治療，因此，尋找高靈敏度、高特異性的診斷方法 具有重要的意義，木文主要探討pcr、elisa及cc三種方法對(duì)生殖道衣原體感染 的診斷價(jià)值。1材料和方法1.1 一般資料木次研究對(duì)象主要為于2009年12月-2010年12月在木院進(jìn)行治療86 的生殖道炎癥患者，其中男性有37例，女性有49例，年齡在18-68歲，平均年 齡為38.4歲；所有患者排除了淋球菌感染。1.2方法1.2.1樣本的采集:對(duì)于女性患者:首先用棉簽將宮頸口的分泌物擦去， 用無菌棉拭子在宮頸內(nèi)進(jìn)行刮取分泌物，將拭子進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，盡量將上皮細(xì)胞都刮 取下來；對(duì)于男性患者：將無菌棉拭子插入尿道

4、3cm左右，將尿道分泌物刮取 下來；將上述拭子放入運(yùn)輸液中(lml,蔗糖磷酸鹽緩沖液)對(duì)拭子進(jìn)行擠壓， 盡量使其中的細(xì)胞都進(jìn)入到運(yùn)輸液中，將拭子舍棄。將上述標(biāo)本保存于-20°co1.2.2細(xì)胞法檢測(cè)：將樣本進(jìn)行漩渦震蕩，取上清，接種到mccoy細(xì)胞 中，進(jìn)行離心(3000r/min, lh), 72h后進(jìn)行固定(無水甲醇)，碘染色，在顯 微鏡下進(jìn)行觀察，若有包涵體，則為陽(yáng)性。1.2.3pcr 法：去標(biāo)本，離心(1500r/min, lomin),加 50μl 的裂解 液a,進(jìn)行煮沸l(wèi)omin,待冷卻后，加入10μl的裂解液b,進(jìn)行混勻，再次 離心(1500

5、r/min, 5min),取上清即為模板，保存于4°c。去待測(cè)樣品10&mu;l, 加入20&mu;l的反應(yīng)液，離心后加入石蠟油100&mu;l,最后進(jìn)行擴(kuò)增(全自動(dòng) 擴(kuò)增儀)1.2.4 elisa法:按照試劑盒上的說明進(jìn)行操作，將樣本進(jìn)行漩渦震蕩15s, 煮沸15min,待冷卻后再次進(jìn)行震蕩15s,加入轉(zhuǎn)移液50ul,孵育90min,再用 pbs洗滌5次，力口擴(kuò)增液30min后加入終止液，若為陽(yáng)性可變?yōu)榧t色。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理本研究對(duì)于三種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率進(jìn)行比較,采用卡方檢驗(yàn)，當(dāng)p<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)軟件應(yīng)用spss13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分

6、析。2結(jié)果2.1三種方法陽(yáng)性率比較：pcr、elisa及cc三種方法的陽(yáng)性檢出率分 別為25.58%、8.14%及19.76%, pcr和cc兩種方法的陽(yáng)性率高于elisa,差異具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p&lt;0.05),具體結(jié)果見表1。表1三種方法陽(yáng)性率比較檢測(cè)方法例數(shù)陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性率()ppcr862225.58&lt;0.05cc861919.76elisa8678.142.2三種方法診斷特異性、靈敏度比較：以細(xì)胞培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，pcr 法的特異性為98.6%,靈敏度為100%； elisa法的特異性為91.2%,靈敏度為88.6%, 三種方法的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p&

7、gt；0.05)o3討論目前，隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床上對(duì)沙眼衣原體進(jìn)行檢測(cè)的手段 也越來越多，沙眼衣原體是一種胞內(nèi)寄生的微生物，細(xì)胞培養(yǎng)法是金標(biāo)準(zhǔn)，但是 此方法對(duì)儀器設(shè)備要求較高，同時(shí)影響因素也多，對(duì)于結(jié)果的準(zhǔn)確性造成影響; pcr法是聚合酶鏈反應(yīng)，其檢測(cè)的靈敏度及特異性較好，其對(duì)于一些不規(guī)范的樣 本其檢測(cè)也有較高的穩(wěn)定性，但是由于pcr技術(shù)本身的問題，使其檢測(cè)結(jié)果的假 陽(yáng)性概率提高；elisa法器陽(yáng)性率較低但是操作簡(jiǎn)單，能夠同吋在短吋間內(nèi) 進(jìn)行高通量的檢測(cè)，大大提高了工作效率2,臨床上可以根據(jù)需要選擇合適的 檢測(cè)方法。本文主要對(duì)于86例樣本進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示pcr、elisa及cc三種 方法的陽(yáng)性檢出率分別為25.58%、8.14%及19.76%；以細(xì)胞培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，pcr 法的特異性為98.6%,靈敏度為100%； elisa法的特異性為91.2%,靈敏度為88.6%, 綜上所述，pcr、elisa及cc三種方法