PRL作業(yè)指導(dǎo)書22-132

1、達(dá)旗人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：達(dá)-1-2013-22版本/修訂號(hào)：1/0主題內(nèi)容催乳素(PRL )生效日期：20130101 第 139 頁(yè) 共 頁(yè)催乳素(PRL )分析原理采用雙抗夾心法原理，整個(gè)過程18分鐘完成。· 第1步：10l標(biāo)本和一份生物素抗泌乳素特異性單克隆抗體一起孵育，反應(yīng)形成復(fù)合體。· 第2步：添加釕復(fù)合體a標(biāo)記泌乳素特異單克隆抗體和鏈酶親和素包被的微粒后，反應(yīng)生成一“三明治”樣抗原抗體復(fù)合體，并在生物素和鏈酶親和素的相互作用下形成固相。· 第3步：將反應(yīng)液吸入檢測(cè)池中，檢測(cè)池中的微粒通過電磁作用吸附在電極表面。未結(jié)合的物質(zhì)通過Pr

2、oCell除去。在電極上加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，用光電倍增器檢測(cè)發(fā)光的強(qiáng)度。通過檢測(cè)儀的定標(biāo)曲線得到最后的檢測(cè)結(jié)果，定標(biāo)曲線是通過2點(diǎn)定標(biāo)點(diǎn)和試劑條形碼上獲得的主曲線生成的。標(biāo)本要求 只有按如下方法收集的標(biāo)本才適合用本試劑盒檢測(cè)。 血清必須用標(biāo)準(zhǔn)試管或內(nèi)有分離膠的試管收集。肝素鋰和K3-EDTA血漿。 （原則：回收率90110；斜率0.91.1；相關(guān)系數(shù)>0.95；<±2×分析敏感度（LDL，最低檢測(cè)水平）相關(guān)因子>0.95）. 穩(wěn)定性： 28°C可保存14小時(shí)；在-20°C可保存6月，只可凍溶一次14。內(nèi)有分離膠的試管收集的

3、血清標(biāo)本穩(wěn)定性：2-8°C 24小時(shí)（注意此數(shù)據(jù)由試管廠商提供）。 選擇檢測(cè)時(shí)市場(chǎng)上能獲得的標(biāo)本收集試管收集標(biāo)本和檢測(cè)，不是所有能獲得的廠商的試管均可用于檢測(cè)。不同廠商標(biāo)本收集系統(tǒng)可能含有不同材料，某些情況下會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。 在使用原始試管處理標(biāo)本時(shí)，應(yīng)遵循試管生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。 如標(biāo)本中有沉淀出現(xiàn)，必須先作離心處理再進(jìn)行分析。已經(jīng)加熱失活的標(biāo)本無(wú)法分析。使用疊氮化物作為穩(wěn)定劑的標(biāo)本或質(zhì)控液無(wú)法分析。 檢測(cè)前，請(qǐng)確?；颊邩?biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液放置在2025°C的環(huán)境中。 由于蒸發(fā)因素的影響，標(biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液在放入分析儀后請(qǐng)?jiān)?小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定。試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所

4、需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M 鏈酶親和素包被的微粒（透明瓶蓋）每瓶6.5ml 。鏈酶親和素包被的微粒，0.72mg/ml；結(jié)合力：470ng 生物素/mg 微粒；微粒經(jīng)過防腐處理。R1 生物素化泌乳素特異性抗體（灰色瓶蓋）每瓶10ml。生物素化單克隆抗泌乳素抗體（鼠）：0.7mg/L；磷酸鹽緩沖液：50mmol/L，PH 值7.0；經(jīng)過防腐處理。R2 釕復(fù)合物標(biāo)記的泌乳素特異性抗體（黑色瓶蓋）每瓶10ml。釕復(fù)合物標(biāo)記抗泌乳素單克隆抗體（鼠）：0.35mg/L；磷酸鹽緩沖液：50 mmol/L，PH 值7.0；經(jīng)過防腐處理。其他所需材料：常規(guī)實(shí)驗(yàn)設(shè)備Elecsys E 170/E 41

5、1Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）,貨號(hào)11298500 Elecsys E 170分析儀所需材料:Elecsys 系統(tǒng)緩沖液 （ProCell M）,貨號(hào)12135019Elecsys 檢測(cè)池洗液（CleanCell M）,貨號(hào)12135027Elecsys PC/CC杯,貨號(hào)03023141Elecsys 清洗液（ProbeWash M），貨號(hào)03005712Elecsys 反應(yīng)杯/加針頭/廢物袋（CUP/TIP），貨號(hào)12102137Elecsys 系統(tǒng)清洗適配器（SysClean Adapter M），貨號(hào)03027651 Elecsys E 411分析儀所需材料:Ele

6、csys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell），貨號(hào)11662988 Elecsys 測(cè)量池清洗液（CleanCell），貨號(hào)11662970 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysWash），貨號(hào)11930346 Elecsys 適配器 （Adapter for SysClean），貨號(hào)11933159, Elecsys 反應(yīng)杯（CUP），貨號(hào)11706829 Elecsys 加樣頭（TIP），貨號(hào)11706802儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Elecsys 2010/E 170/E 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀 儀器校準(zhǔn)：每批Elecsys Prolactin試劑盒上都有條形碼記錄各

7、批號(hào)試劑特定的定標(biāo)信息。預(yù)先確定的主曲線適用于用Elecsys Prolactin CalSet試劑盒進(jìn)行測(cè)定的分析儀。定標(biāo)頻率：每批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊(cè)24小時(shí)以內(nèi)）標(biāo)定一次，如再次標(biāo)定即根據(jù)下列要求：· 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑）· 7天（放置儀器上的同一試劑盒）· 根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。操作步驟（以E 170為例）5.1 校準(zhǔn)操作步驟： 在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標(biāo)類型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單Calibration中進(jìn)行即可。進(jìn)入CalibrationS

8、tatus菜單，用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（BLANK鍵）或兩點(diǎn)定標(biāo)（TWO POINT鍵）、跨距定標(biāo)（SPAN鍵）、多點(diǎn)定標(biāo)（FULL鍵），再選擇其它項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)SAVE，將定標(biāo)物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點(diǎn)Start，再點(diǎn)Start，儀器開始定標(biāo)。 在CalibrationStatus菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Calibration Result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Reaction Monitor鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測(cè)程序： 單個(gè)樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Seque

9、nce No欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)SAVE鍵，樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)REPEAT，輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)OK即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在Workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤內(nèi),按START鍵，輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)START鍵，儀器自動(dòng)開始推架檢測(cè)標(biāo)本。質(zhì)量控制Elecsys通用質(zhì)控品（PreciControl ）1和2或其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域

10、的質(zhì)控至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。計(jì)算方法 對(duì)每一個(gè)標(biāo)本，儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算泌乳素含量，單位為uIU/ml，ng/ml 或mIU/L 。 換算方法是 IU/ml ×0.047=ng/ml ng/ml ×21.2=IU/ml（mIU/l）參考范圍一項(xiàng)研究對(duì)泌乳素進(jìn)行了評(píng)估，共檢測(cè)了300份健康人群的樣品，結(jié)果如下：百分位數(shù)502.597.5502.597.5nIU/mlng/ml男性102155863247.304.0415.2女性(非孕婦)198225102496

11、10.64.7923.3每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須調(diào)查各自患者群體的參考范圍變異性，必要時(shí)根據(jù)具體情況制訂自己的參考范圍。分析性能精密度干擾因素 測(cè)定結(jié)果不受黃疸（膽紅素<513mol/L或<30mg/dl）, 溶血（血紅蛋白<0.932 mmol/L或<1.5g/dl）, 高脂血（癥）(脂肪乳劑< 1500mg/dl）和生物素（< 164 nmol/L或<40 ng/ml）的影響。(標(biāo)準(zhǔn)：回收率90110)。 對(duì)于因某些疾病需要而接受高劑量生物素治療的患者（> 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集標(biāo)本。 濃度達(dá)1100U/ml的風(fēng)濕因子對(duì)測(cè)定無(wú)影

12、響。 高達(dá)270,000 IU/mL (12,690 ng/mL)大劑量不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)。 體外對(duì)16種常用藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測(cè)結(jié)果。 由于檢測(cè)試劑中含有單克隆抗體，因此某些接受單克隆鼠抗體治療或診斷的患者標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果可能有誤。 試劑盒附帶有試劑添加劑以減少以上不良影響。 少數(shù)病例中極高濃度的鏈霉抗生物素蛋白和釕抗體會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。 測(cè)定泌乳素時(shí)，需注意測(cè)定濃度和血樣采集時(shí)間有關(guān)，這是因?yàn)槊谌樗亟?jīng)垂體分泌，受生物鐘影響。哺乳和壓力會(huì)促進(jìn)生理性泌乳素分泌。另外，血清泌乳素濃度升高與多種藥物（如dibenzodiazepine抗精神病藥、吩噻嗪）、TRH和雌激素有關(guān)5,6,7。多巴胺、左

13、旋多巴和麥角胺抑制泌乳素的分泌。 許多研究報(bào)道女性內(nèi)分泌疾病患者或女性懷孕期間其血清中存在巨泌乳素1,8,9。同時(shí)也描述了使用不同免疫分析法測(cè)定的與單體泌乳素（22-23kD）對(duì)應(yīng)的血清巨泌乳素不同測(cè)定濃度。這樣可判定與所用免疫分析法有關(guān)的高泌乳素的測(cè)定8,13,17。 若懷疑測(cè)定的高泌乳素值，則推薦使用聚乙二醇（PEG）進(jìn)行沉淀預(yù)處理以判定有生物活性的單體泌乳素濃度10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19。詳細(xì)信息參見“使用聚乙二醇（PEG）沉淀作用對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理”部分。 必須結(jié)合患者病史，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查及其它臨床資料來(lái)綜合評(píng)估測(cè)定結(jié)果。臨床意義 泌乳素由垂體前葉合成和

14、分泌。此激素共有198 個(gè)氨基酸，分子量約為22-23kD。血清中有三種形式的泌乳素，其中具生物和免疫活性的單體（“小的”）形式泌乳素最多（約80%），5-20%為無(wú)生物學(xué)活性的二聚體（大的）形式，另0.5-5為較低生物學(xué)活性的四聚體（“大-大”）形式1。泌乳素的靶器官是乳腺，能促進(jìn)乳腺組織生長(zhǎng)發(fā)育和分化。高濃度的泌乳素會(huì)抑制卵巢類固醇激素合成和垂體促性腺激素合成和分泌。 在懷孕期間，受雌激素和黃體酮合成增加的影響泌乳素濃度升高。泌乳素刺激乳汁分泌，使產(chǎn)后期轉(zhuǎn)至泌乳期。高泌乳素血癥（男性和女性）主要原因是生育疾患。泌乳素測(cè)定可用于診斷經(jīng)期不排卵、高泌乳素性閉經(jīng)和乳漏、男子乳腺過度發(fā)育以及精子缺

15、乏。若懷疑乳腺癌和垂體腫瘤，也需測(cè)定泌乳素2,3。 Elecsys Prolactin II 試劑采用兩種人泌乳素特異單克隆抗體。這兩種抗體和多數(shù)巨泌乳素的反應(yīng)較弱。12參考文獻(xiàn)1. Johnson MR, Carter G, Grint C, Lightman SL. Relationship between ovarian steroids, gonadotrophins and relaxin during the menstrual cycle. Acta Endocrinol 1993;129:121-125. 2. Runnebaum B, Rabe T. Gynäkol

16、ogische Endokrinologie und Fortpflanzungsmedizin Springer Verlag 1994; Band 1:36-38,70,116 Band 2:137,360,398-399,408-409,422-423. ISBN 3-540-57345-3, ISBN 3-540-57347-x.3. Juhl UM, Rippegather G, Weller J, Zawta B. Important Facts on Reproduction Medicine/Fertility Diagnosis, Questions and Answers,

17、 1994. Boehringer Mannheim, Cat. No. 1322958.4. Guillaume J, Benjamin F, Sicuranza B, Wang CF, Garcia A, Friberg J. Maternal serum levels of estradiol, progesterone and h-Choriongonadotropin in ectopic pregnancy and their correlation with endometrial histologic findings. Surg Gynecol Obstet 1987;165:9-12.5. Thienpont LM, Verh