ELISA的原理及其在食品行業(yè)中的應(yīng)用

1、ELISA的原理及其在食品行業(yè)中的應(yīng)用ELISA的原理及其在食品行業(yè)中的應(yīng)用一 ELISA的基本原理有三條：  （1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性； （2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；  （3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。二 ELISA常用的四種方法1直接法測定抗原 將抗原吸附在載體表面

2、； 加酶標(biāo)抗體，形成抗原抗體復(fù)合物； 加底物。底物的降解量抗原量。 2間接法測定抗體 將抗原吸附于固相載體表面； 加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物； 加酶標(biāo)抗體； 加底物。 測定底物的降解量抗體量。 3雙抗體夾心法測定抗原 將抗原免疫第一種動物獲得的抗體吸附于固相表面; 加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物; 加抗原免疫第二種動物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物; 加酶標(biāo)抗抗體（第二種動物抗體的抗體）; 加底物。底物的降解量抗原量。 4. 競爭法測定抗原 將抗體吸附在固相載體表面; （1） 加入酶標(biāo)抗原； （2）,（3）加入酶標(biāo)抗原和待測抗原； 加底物。對照孔與樣品孔底物降解量的差未知抗原量。 三 E

3、LISA技術(shù)在食品安全性檢測中的應(yīng)用現(xiàn)狀1 食品中生物毒素檢測真菌毒素是真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，其中的一些對人類的危害較大，它們一般同時具有毒性強和污染頻率高的特點，其中毒性最大，致癌能力最強的是黃曲霉毒素（af），afbl具有強致癌性和強免疫抑制性。即使在含量極低是仍具有很大的毒性。自1977年抗黃曲霉素b1的單克隆問世以來，幾乎所有重要真菌毒素（如黃曲霉毒素，伏馬毒素，玉米赤霉烯酮，脫氧雪腐鐮刀菌烯酮，展青霉素等）的elisa檢查方法均已建立。在對黃曲霉素B1的檢測中，其檢測AFT B1的線性范圍0.255.0ng/ml，靈敏度為12.5 Pg，整個測定過程僅為4h。另外該方法也正在被廣泛

4、地應(yīng)用于各種藻類和貝類毒素的檢測。2農(nóng)2 藥殘留檢測ELISA已成為許多國際權(quán)威分析機構(gòu)(如AOAC)分析農(nóng)藥殘留的首選方法。迄今為止，應(yīng)用ELISA檢測食品中的殘留農(nóng)藥主要為除草劑、殺蟲劑和殺菌劑。草甘膦的ELISA 檢出下限為0.07g/ml。其它殘留農(nóng)藥(Metolsulan, Fluroxypyr,Triclopyr 和Benalaxyl等)的檢測結(jié)果均與色譜法測定的結(jié)果一致。從目前來看，盡管ELISA檢測限度還不能完全達到國外發(fā)達國家技術(shù)法規(guī)和限量標(biāo)準(zhǔn)的要求，而且抗體制備不易和不能同時完成多種農(nóng)藥殘留檢測等缺點，但是由于該技術(shù)具有樣本前處理簡單，純化步驟少，大量樣本分析時間短，適合于

5、做成試劑盒現(xiàn)場篩選等優(yōu)點，使其可在蔬菜產(chǎn)區(qū)、蔬菜批發(fā)市場和海關(guān)配備，工商人員可隨身攜帶或建立固定的農(nóng)藥殘留速測點，隨時把殘毒超標(biāo)的蔬菜、水果杜絕在食用之前。3 細(xì)菌污染檢測 食品中的有害細(xì)菌數(shù)量達到一定數(shù)目，食用后會引起各種疾病。為了有效地控制其傳播，就必須有快速和可靠的檢測方法。目前有許多種方法，其中通過制備單克隆抗體分析食品中細(xì)菌的ELISA技術(shù)研究最多，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。例如對沙門氏菌13最低檢測量可達500CFU/g，僅需22h，比常規(guī)方法縮短了34d，與金黃色葡萄球菌、大腸桿菌無交叉反應(yīng)。此外以ELISA技術(shù)為基礎(chǔ)的全自動沙門氏菌檢測系統(tǒng)，實現(xiàn)了整個過程的自動化，全程耗時僅為45mi

6、n。其原理是將捕捉抗體包被到凹形金屬片的內(nèi)面，可以從前增菌液中吸附被檢的沙門氏菌，對于該系統(tǒng)來說，需要做的只是加樣。4 肉類品質(zhì)檢測 ELISA在肉類食品品質(zhì)檢測中的應(yīng)用主要包括加熱終溫判定分析和摻入異種肉的檢測兩個方面。腸道疾病的爆發(fā)和動物性食品有很大關(guān)系，而肉食品加熱煮制不當(dāng)是引起該疾病爆發(fā)的一個主要原因。在加熱過程中一些成分的含量會降低，而一些產(chǎn)物的濃度會提高。當(dāng)用蛋白質(zhì)做指示劑時，可制備抗體，這種抗體對單一蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)或變性狀態(tài)均具有專一性，這樣它就可以指示蛋白質(zhì)在加熱過程中變化。因而ELISA作為商業(yè)上快速判定分析肉品終溫的一種方法。目前用的最多的是對乳酸脫氫酶(LDH)的免疫檢

7、測。其次是對摻入異種肉的檢測，利用多克隆抗體對血清白蛋白的ELISA 法，對鮮肉進行摻假檢測。幾種以單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA反應(yīng)已得到應(yīng)用。5 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測 基因技術(shù)發(fā)展迅速，轉(zhuǎn)基因生物及其產(chǎn)品（CMOs）的安全問題存在爭議，許多WTO成員對轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的進口做了一些限制，檢驗CMOs的方法，出來聚合酶連鎖反應(yīng)外，ELISA方法也比較常用，能滿足檢驗檢疫部門快速，準(zhǔn)確的工作要求。6 重金屬污染檢測金屬硫蛋白遍存于自然界，細(xì)菌、植物、動物以及人類機體中，是一類對重金屬離子有很強親和力含豐富的半胱氨酸(約1/3)，不含芳香族氨酸和組氨基酸的低分子量蛋白質(zhì)。金屬硫蛋白含有大量的巰基(-SH)

8、，能與Hg、Cd、Cu、Ag等重金屬離子結(jié)合掩蔽金屬的毒性，對細(xì)胞內(nèi)的金屬離子有重要的解毒作用。生物細(xì)胞，在環(huán)境受重金屬污染(Cu、Hg、Cd、Pb、Zn與金屬離子)的情況下，可被誘導(dǎo)合成出大量的金屬硫蛋白，且在一定范圍內(nèi)成正比，是一項對金屬污染具特異性的指標(biāo)。四 ELISA快速檢測技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用前景目前用于食品安全性檢測的方法有很多1417，多為ELISA檢測技術(shù)(ELISA檢測技術(shù)對試劑的選擇性高，很難同時分析多種成分；對結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)；分析低分子量或不穩(wěn)定的化合物有一定的困難等缺陷)、微生物學(xué)方法(Microbial assay：很難篩選到對同類抗生素的不同藥敏性的特異菌株，且只能定性不能準(zhǔn)確定量，易受其他抗菌藥物的影響)、薄層色譜法(TLC：必須進行較為復(fù)雜的樣品預(yù)處理和抽提，不能定量，靈敏度低)、氣相色譜法和高效液相色譜法(GC&HPLC：需復(fù)雜的樣品預(yù)處理，設(shè)備昂貴、檢測費用高，難以推廣使用)、PCR技術(shù)和核酸探針技術(shù)(在實驗過程中易受到污染