畢業(yè)論文硝基苯甲酸異構(gòu)體文

1、畢業(yè)設(shè)計說明書設(shè)計題目：高效液相色譜法分析硝基苯甲酸異構(gòu)體班 級：姓 名：指導(dǎo)老師：完成時間：2011-06-10化學(xué)工程系畢業(yè)設(shè)計（論文）任務(wù)書設(shè)計題目：高效液相色譜法分析硝基苯甲酸異構(gòu)體一、設(shè)計學(xué)生姓名:崔春波 、題目說明 木題應(yīng)達到的基木要求（包括原始數(shù)據(jù)，計算，圖表）1. 學(xué)會利用互聯(lián)網(wǎng)搜集課題有關(guān)信息，查閱文獻2了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)和工作原理3掌握agilent 1100高效液相色譜儀及工作站的使用方法4優(yōu)化硝基苯甲酸異構(gòu)體分離條件5用不同方法對對硝基苯甲酸進行定量分析6.寫出完整論文三、題目進度安排1、3-4周：查閱文獻、設(shè)計實驗方案2、5-6周：實驗方案討論、準(zhǔn)備儀器藥品3、

2、7-15周：實驗階段4、16周：撰寫論文5、17周：畢業(yè)論文答辯交出任務(wù)日期：2011年3月9日；完成日期：2011年6刀10日學(xué)生簽名:學(xué)生交岀全部設(shè)計（論文）期限：2011年6月10日 指導(dǎo)教師:高效液相色譜法分析硝基苯甲酸異構(gòu)體摘要隨著高效液相色譜這一新型分離分析技術(shù)的廣泛應(yīng)用，現(xiàn)在每天都有 許多色譜工作者在研究使用高效液相色譜。特定樣品的最佳分離條件，只 有通過實驗才能得到。本文便是運用安捷倫1100高效液相色譜儀分析硝基 苯屮酸異構(gòu)體，探索分離硝基苯屮酸異構(gòu)體的最佳分離實驗條件。關(guān)鍵i司：高效液相色譜硝基苯甲酸分離條件hplc analysis nitro benzoic acid

3、isomersabstractwith the high performance liquid chromatography separation and analysis of this new technology widely used, and now every day, many workers in studies using high performance liquid chromatography chromatography. the optimal conditions for a particular sample, can be obtained only by e

4、xperiment. this article is based on the use of agilent 1100 hplc analysis of nitro-benzoic acid isomers, separation of nitrobenzoic acid isomers to explore the best separation conditionskey words： high performance liquid chromatography; nitro benzoic acid isomers; separation conditions1前言高效液相色譜自20世紀(jì)

5、70年代問世以來，經(jīng)過近30的發(fā)展，在基礎(chǔ)理論、儀器 裝置和色譜柱等方面的研究已趨于成熟，現(xiàn)在已成為化學(xué)學(xué)科中最有優(yōu)勢的分離分析方 法之一。高效液相色譜的應(yīng)用范圍十分廣泛，幾乎能夠分析所有的有機、高分子、生物 樣品。據(jù)估計，目前已知的化合物中，有80%的化合物需要用高效液相色譜法進行分離 分析。此外，對無機物的分析也有很好的效果，特別是對生命活性物質(zhì)的分離分析，有 著其它分析方法不可替代的作用，已廣泛應(yīng)用于石油化工，生物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、食品 衛(wèi)生、環(huán)境檢測、醫(yī)藥工業(yè)、商品檢驗、地質(zhì)勘探、油田開發(fā)等領(lǐng)域的分離分析。對硝基苯甲酸(p -nba )是一種重要的有機合成中間體，是合成許多藥物、染料 的

6、基礎(chǔ)原料。但在合成過程中，相應(yīng)產(chǎn)生鄰硝基苯甲酸(o-xba )與間硝基苯甲酸 (m-nba )。因此，探討它們混合物的分離分析對合成反應(yīng)過程分析及相關(guān)化合物異構(gòu) 體之間的分析具有重要意義。本文采用hplc法研究這類異構(gòu)體混合物的分離方法，可 為在合成p -xba過程中提供中控分析，也可為其他類似的同分異構(gòu)體之間的分離分析 探索一種方法。agilent 1100系列組件外形設(shè)計獨特、具有靈活多變的組合方式；卓越的系統(tǒng)性能 指標(biāo)；圖形化的工作站友好界面，完善色譜分析領(lǐng)域。在本文中詳細介紹了 agilenl 1100 高效液相色譜儀的操作規(guī)程和各種參數(shù)的設(shè)定。本文便是運用agilent 1100高效

7、液相 色譜儀來分析硝基苯甲酸異構(gòu)體，探索最佳分離條件。2高效液相色譜儀高效液相色譜(high performance liquid chromeitography, 1iplc)也叫高壓液相 色譜 (high pressure liquid chromatography)> 高速液相色譜 (high speed liquid chromatography) > 高分離度液相色譜 (high resolution liq uid chroma to graphy)等。 是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。 它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小

8、而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力, 需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜。高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法，高效液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體 瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但 是針對其流動相為液體的特點作出很多調(diào)整。hplc的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)；進樣 系統(tǒng)要求進樣便利切換嚴(yán)密；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓高效液 相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱°hplc應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及 定量定性分析的各個領(lǐng)域。使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力

9、在固定相中移動，由 于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開色譜柱，通過檢測 器得到不同的峰信號，最后通過分析比對這些信號來判斷待側(cè)物所含有的物質(zhì)。高效液 相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。高效液相色譜從原 理上與經(jīng)典的液相色譜沒有木質(zhì)的差別，它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測 器和高效微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機化合物。2.1組成及工作原理高效液相色譜儀現(xiàn)在都是由一個個單元組件，然后根據(jù)分析要求將各所需要單元組 件組合起來，最基本的組件是高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器和工作站（數(shù)據(jù) 處理系統(tǒng)）。此外可根

10、據(jù)需要配置自動進樣器、預(yù)柱、流動相和在線脫氣裝置和自動控 制系統(tǒng)等裝置。圖2-1是普通配制的帶有預(yù)柱的iiplc的結(jié)構(gòu)圖。數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 帶有預(yù)柱的hplc儀器結(jié)構(gòu)圖高效液相色譜儀的工作流程：高壓輸液泵將貯液器屮的流動相以穩(wěn)定的流速（或壓 力）輸送至分析體系，在色譜柱z前通過進樣器將樣品導(dǎo)入流動相，流動相將樣品依次 帶入預(yù)柱、色譜柱，由于樣品溶液屮的各組分在兩相屮具有不同的分配系數(shù)，在兩相屮 作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較 大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電 信號傳送到工作站，檢測到到的信號在工作站記錄、處理和保

11、存，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印 出來。2. 2液相色譜儀的應(yīng)用高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的 范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以 及各種分子量范圍的物質(zhì)。iiplc能在短的分析時間內(nèi)獲得高柱效和高分離能力，與試樣 預(yù)處理技術(shù)相配合,iiplc所達到的高分辨率和高靈皺度，使分離和同時測定性質(zhì)上十 分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能 在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于iiplc具有高分辨率、高靈敬度、 速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到生

12、物化學(xué)、食 品分析、醫(yī)藥研究、壞境分析、無機分析等各種領(lǐng)域，成為解決生化分析問題最有前途 的方法。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技 術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳坯等；液相色譜-紅外光譜連用也 發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水屮的坯類，海水屮的不揮發(fā)怪類，使環(huán)境污染分析 得到新的發(fā)展。3安捷倫1100高效液相色譜儀操作方法3. 1開機（1）把用隔膜真空泵過濾的流動相放入溶劑瓶中，用專用注射器將溶劑瓶中的溶劑（己過濾的10%30%異丙醇水溶液）引流沖泵，帶有控制閥的管路（軟管）最后控制在 6-10 滴/mine（2）打開計算機，進入windo

13、ws nt （或windows 2000）畫面，并運行bootp server程序（自動運行）。（3）打開1100 lc各模塊電源，進行自檢。(4) bootp server中111現(xiàn)7行命令行后，雙擊instrument 1 online圖標(biāo)，化學(xué)工作 站自動與1100lc通訊，進入的工作站畫面。(5) 從“view”菜單中選擇"method and run controln畫面，單擊"view”菜單中 的"show top toolbar”，"show status toolbar", "system diagram使其命 令前有

14、“ v ”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。(6) 打開purge閥(泵上黑色旋鈕)。(7) 單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊setup pump選項，進入泵編輯畫面。(8) 設(shè) flow： 5ml/min,設(shè) a 通道 100%,單擊 0k。(9) 單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊pump control選項，選中on,單擊0k, 則系統(tǒng)開始purge,直到管線內(nèi)無氣泡從廢液管排出為止，切換通道繼續(xù)purge, 直到所有要用通道無氣泡為止。(10) 單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊pump control選項，選中off,單擊 ok關(guān)泵，關(guān)閉purge。(11) 單擊pump圖

15、標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊setup pump選項，進入pump編輯畫 面，設(shè) flow： 1. oml/mino(12) 單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積，一 般設(shè)為0. 1l停泵，單擊ok。3. 2數(shù)據(jù)采集方法編輯1、開始編輯完整方法：從"method”菜單屮選擇"edit entire methodv項，如上圖所示選屮除udata analysis外的三項，單擊ok,進入下一畫面。2、方法信息：在“method comment中加入方法的信息(如：方法的用途等)。單擊ok進入下一畫面。3、泵參數(shù)設(shè)定：(以二元泵為例)在 “flow”

16、處輸入流量，如 lml/min,在 “solvent b” 處輸入 70. 0, (a二 100-b), 也可 insert 一行"timetable”，編輯梯度。在 pressure limits max” 處輸入 柱子的最大耐高壓(330bai'),以保護柱 子。單擊0k進入下一畫面。4、vwd檢測器參數(shù)設(shè)定在” wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測波長，如254nm,在” peak width (response time) v下方點擊下拉式三角框，選擇合適的響應(yīng) 時 間，如>0. lmin (2s) o在timetable中可以“insert” 一彳

17、亍,輸入隨時間切換的波長,如lmin ,波長 =300nmo點擊ok進入下一畫面。5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定：在” temperaturev下面的方框內(nèi)輸入所需溫度，并選中它，點擊“more>>”鍵,如圖 所示,選中” same as left” -一使柱溫箱的溫度左右一致。點擊ok進入下一畫面。6、在 “ run time checklist ” 中選中"data acquisition 。單擊ok進入下一畫面。7、單擊"method”菜單，選中"save method as",輸入一方法名,如"test” , 單擊ok進入下一畫面。8、

18、從菜單 "view”中選中” online signaln，選中windows 1,然后單擊change鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點擊ok進入下一畫面.(如同時檢測 二個信號，則重復(fù)12,選中windows 2)。9、從“run control ”菜單中選擇usample info”選項，如上圖所示，輸入操作 者名稱,在“data f訂e ”中選擇“manual”或“prefix”。區(qū)別：manual-每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 prefix在prefix框中輸入前綴，在counter框中輸入計數(shù)器的起始位，儀器會 自動命名，如 vwdooo

19、l, vwd0002。10> 從 instrument 菜單選擇 system on。11、等儀器ready,基線平穩(wěn),從method菜單中選擇"run methodn (f5),進樣。 如果是手動進樣也可直接從load-1町ect,分析開始。3. 3手動進樣1、吸入樣品先把進樣針洗干凈，然后用樣品再潤洗5次，以確保進樣無雜質(zhì)并確 保針內(nèi)沒有吸進微小氣泡。2、進樣動作在load狀態(tài)推針(圖小，動作要平緩，以防樣品沖出，進樣后先切換到inject狀態(tài)(圖b),分析完后再切換到load狀態(tài)，再拔針，以防倒吸，產(chǎn)生 氣泡。定量管色譜柱(b)3、進樣量 進樣量要么小于定量環(huán)(毛細管，有

20、虹吸現(xiàn)象)體積的一半，要么滿刻 度進樣(需要推進35倍定量環(huán)體積的樣胡)否則進樣體積無重現(xiàn)性。4、清洗 在inject狀態(tài)下清洗進樣口。5、廢液口廢液管的出口末端應(yīng)與進針口水平，以防樣品倒流泄漏或產(chǎn)牛虹吸。3. 4數(shù)據(jù)分析方法編輯1、從“view”菜單中,單擊“data analysis”進入數(shù)據(jù)分析畫面。2、從"file”菜單選擇“l(fā)oad signal” ,選中您的數(shù)據(jù)文件名,單擊ok。3、做譜圖優(yōu)化，從"graphics”菜單中選擇"signal options”選項，。從ranges 屮選擇auto seale及合適的顯示時間，單擊ok,或選擇” use

21、ranges”調(diào)整。反 復(fù)進行，直到圖的比例合適為止。4、積分：(1) 、從“integration”中選擇“auto integrate”，如積分結(jié)果不理想，再從菜單屮選擇"integration events” 選項，選擇合適的 slope sensitivity,peak width, area reject, height rejecto(2) 、從“integration”菜單中選擇“integrate”選項，則數(shù)據(jù)被積分。(3) 、如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。(4) 、單擊左邊“v”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。5、打印報告：(1) 從“report

22、”菜單中選擇“specify reportv選項，進入如上畫面。（2）、單擊 quantitative results” 框中 calculate 右側(cè)的黑三角，選中 percent（面積百分比），其它選項不變。（3）、單擊 ok.（4）、從“report”菜單中選擇"print report",則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如 想輸出到打印機上，則單擊report底部的“print”鈕。3.5關(guān)機1關(guān)機前，用100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如acn）, 待基線平穩(wěn)，然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗2退出化學(xué)工作站，及其它窗

23、口，關(guān)閉計算機（用shut down關(guān)）。3關(guān)掉ag訂ent 1100電源開關(guān)。4藥品及實驗部分4.1藥品及儀器實驗儀器：1、agilentlloo高效液相色譜儀:可變波長檢測器（g1314a）c8 柱（4）4. 6x 150mm, sum）,四元泵（g1311a）真空在線脫氣機（g1319a ）。2、隔膜真空泵 型號：gm-0. 33津騰2003年3月3、真空干燥箱 型號：dzf-6050上海精宏實驗設(shè)備有限公司4、梅特勒-托利多b-s系列天平 型號：ab135-s梅特勒-托利多儀器（上海） 有限公司5、移液槍 型號：吉爾森p200北京吉爾森科技有限公司6、容量瓶（50ml） 燒杯 玻璃棒

24、膠頭吸管實驗藥品：鄰硝基苯甲酸：分析純天津市光復(fù)精細化工研究所2004年1月2日間硝基苯甲酸：化學(xué)純 天津市光復(fù)精細化工研究所2003年7月11日對硝基苯甲酸：分析純異丙醇：色譜純天津市佳興化工玻璃儀器工貿(mào)有限公司2003年10月23日甲醇：色譜純 天津市佳興化工玻璃儀器工貿(mào)有限公司2003年06月08 h 水：娃哈哈純凈水2011年02年07月乙酸：分析純天津市博迪化工有限公司2007年11月01日4.2實驗方法對硝基苯甲酸（p-nba）是很重要的藥物合成屮間體，如將p-nba還原，可以產(chǎn)生 對氨基苯甲酸。p-nba的純度對產(chǎn)品的產(chǎn)率影響很大，一般要求p-xba的純度要在99. 5% 以上。

25、然而，p-xba屮總是含有少量（約0. 5%）的異構(gòu)體雜質(zhì)領(lǐng)硝基苯甲酸（o-ba） 和間硝基苯甲酸（m-ba）。因此，要準(zhǔn)確定量p-xba,首先要將這幾種異構(gòu)體分離。本文采用反相iiplc分離這3種異構(gòu)體，分離的原理是基于異構(gòu)體z間極性的微小 差異，在甲醇（或異丙醇）和水屮的溶解度有微小的不同（分配系數(shù)不同），因而有可 能實現(xiàn)三者的分離。nba是有機酸，在水屮可部分離解成酸根陰離子，使z在流動相屮的分配系數(shù)變得 很大，在反相鍵和固定相c8屮的保留變小，異構(gòu)體相互z間可能完全不能分離。因此, 在流動相屮需加入有機酸以抑制ba的解離，這是實現(xiàn)分離的關(guān)鍵。本文在流動相屮加 入乙酸就是這個口的。1.溶

26、液的配制硝基苯甲酸（nba）標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000ug/ml）：準(zhǔn)確稱取分析純的0-、m-和p-nba各 50mg于不同的燒杯屮，用乙醇溶解并分別定容于50ml容量瓶，其濃度均為1000ug/mlo 使用時可用乙醇或流動相稀釋510倍，即濃度為100200ug/ml；樣品稱量:前/mg稱量后/mg樣品質(zhì)ft/mg領(lǐng)硝基苯甲酸13530. 9213480. 6350. 29間硝基苯甲酸12769. 4512719.2450.21對硝基苯甲酸13630.9113580. 5950. 32配制后的濃度:鄰硝基苯甲酸：1005. 8ug/ml間硝基苯甲酸：1004. 2ug/ml對硝基苯甲酸：1006.

27、4ug/ml混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別用 p200 移液槍取 p-nba（100ug/ml）, o-nba （100ug/ml）, m-xba（looug/ml）各o.lnil于lml小瓶中，用乙醇或流動相稀釋至刻度。此混合溶液含p-xbaloug/ml,含 o-xba 和 m-xba 各 loug/ml；注：所有樣品都要用0. 45um有機濾膜減壓過濾2分析（1）按儀器操作說明開機，使儀器處于工作狀態(tài)。（2）設(shè)置色譜參數(shù)：agilentc8色譜柱（©4. 6x 150mm, 5um）；流動相（a）為異 丙醇：水二20： 80 （體積比）；流動相（b）為異丙醇：水：乙酸二20： 80： 0.

28、4（體積比），ph值約為23；流速l.oml/min；色譜柱溫度為室溫；可變波長 檢測器檢測波長為254nmo（3）先用流動相（a）,待基線穩(wěn)定后，通過六通閥注入硝基苯甲酸異構(gòu)體各種樣品 標(biāo)樣，每次進35次，觀察樣品峰的重現(xiàn)性。（4）在步驟（3）的基礎(chǔ)上，改變進樣量和進樣濃度，分析出最佳進樣量和進樣濃 度。（5）根據(jù)步驟4結(jié)果配制相對應(yīng)的混合標(biāo)樣，通過六通閥注入混合標(biāo)樣，當(dāng)樣品中 所有色譜峰出完后，即可停止分析。（6）改用流動相（b）,待基線穩(wěn)定后，再次手動注入標(biāo)準(zhǔn)單樣。分析比較各單樣保 留時間。（7）用流動相b,待基線穩(wěn)定后，通過六通閥注入混合標(biāo)樣，分析譜圖。（8）比較兩種流動相的分離效果。

29、3注意事項：（1）按實驗室提供的儀器操作規(guī)程操作儀器。（2）流動相中ph值可按實際分離情況進行調(diào)節(jié)。4數(shù)據(jù)處理：將流動相中含有乙酸和不含乙酸時各異構(gòu)體的保留時間，峰高或峰面積整理成表，比較兩種情況下的分離效果。如下表：硝基苯甲酸異構(gòu)體單樣加酸不加酸比較次數(shù)保留時間/min123平均值鄰硝基苯甲酸不加酸1. 1411. 1161. 1351. 131加酸2. 7472. 7382. 7352. 740間硝基苯甲酸不加酸3. 0072. 9952. 9712.991加酸8. 2498.243& 2428.245對硝基苯甲酸不加酸3.23.2173.2033. 207加酸9. 5739. 4

30、879. 4089. 484硝基苯甲酸異構(gòu)體混樣加酸不加酸比較試樣次數(shù)保留時間/min123平均值混樣不加酸鄰硝基苯甲酸2. 0061.9051.9121.941間硝基苯甲酸3. 5603. 1173.0913.256對硝基苯甲酸4.0133.4743. 4313. 306混樣加酸鄰硝基苯甲酸2. 7162.7162. 7082.713間硝基苯甲酸8. 115& 0998. 054&089對硝基苯甲酸9. 3269. 3049.2539. 2945結(jié)果分析由以上表格內(nèi)容和譜圖（見附錄）分析結(jié)果可知，在用高效液相色譜法分析硝基苯 甲酸異構(gòu)體的過程中，實驗條件的改變對定性結(jié)果有非常

31、重要的影響。在不加酸的樣品 分析中，樣品峰的保留時間小，而h譜圖峰有雜峰，混樣分析中樣品峰不能很好的分離, 有拖尾的現(xiàn)象。而在加酸以后，樣品分析過程中可以看出，樣品峰的保留時間長，混樣 分析中樣品能夠很好的分離。這是因為硝基苯甲酸是有機酸，在水中可部分離解成酸根陰離子，使之在流動相中 的分配系數(shù)變得很大，在反相鍵和固定相c8中的保留系數(shù)變小，這樣會使硝基苯甲酸 異構(gòu)體相互之間可能完全不能分離。因此，在流動相中加入有機酸乙酸，就是是為了抑 制硝基苯甲酸的解離，這是實現(xiàn)硝基苯甲酸分離的關(guān)鍵。致謝本畢業(yè)論文是在我的指導(dǎo)老師牛老師的悉心指導(dǎo)下完成的。在本實驗完成之際，首 先要感謝我的指導(dǎo)老師牛老師，在

32、實驗過程中，牛老師嚴(yán)肅的科學(xué)態(tài)度，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)精 神，精益求精的工作作風(fēng)，深深地感染和激勵著我。從課題的選擇到實驗的最終完成， 牛老師都始終給予我們細心的指導(dǎo)和不懈的支持。一直以來，在牛老師的指導(dǎo)下，我們 不僅學(xué)會了相關(guān)的專業(yè)知識，更懂得在以后的工作中要有良好的職業(yè)素質(zhì)，并不斷的提 升自己的道德修養(yǎng)。其次我要感謝在實驗過程中給予我們幫助的老師和同學(xué)。正因為有 了他們無私的幫助，我們的實驗才可以順利完成。在這里我要向老師們致以我最真摯的 謝意。經(jīng)過三個多月的長時間的努力，我的畢業(yè)設(shè)計終于完成了。這是一次綜合學(xué)習(xí)化學(xué) 儀器分析的過程。在此期間我了解和掌握了一些化學(xué)儀器的使用方法，例如高效液相色 譜儀

33、、隔膜真空泵、真空干燥箱等。同時培養(yǎng)了動手能力和分析問題解決問題的能力， 特別是在使用高效液相色譜儀的過程中，學(xué)到了很多知識。這為我們將來的發(fā)展提供了 很多機會。經(jīng)過這次畢業(yè)設(shè)計，我深深的體會到嚴(yán)謹(jǐn)、認(rèn)真、仔細、有耐心是一個化學(xué) 分析工作人員必須具備的素質(zhì)。在這次設(shè)計過程中，我也發(fā)現(xiàn)了自己的許多不足。首先是對安捷倫1100高效液相 色譜儀英文化學(xué)工作站的了解還不夠全面，不能夠熟練的運用工作站進行譜圖分析，其 次是對本次設(shè)計沒有一個清晰的思路，考慮問題不是很全面，在遇到問題時不能迅速解 決。再次，我應(yīng)該提高查閱英文文獻的能力，不斷提高自己的專業(yè)能力。我要感謝我的母校承德石油高等?？茖W(xué)校，在這個良

34、好的學(xué)習(xí)環(huán)境里，給了我展現(xiàn) 自己的舞臺，是母校，為我們提供了優(yōu)越的學(xué)習(xí)環(huán)境，使我們順利完成學(xué)業(yè)；是母校， 使我們完成人生最美的蛻變。是母校，讓我在生活、學(xué)習(xí)、思想道德，文化修養(yǎng)等方面 都有了不同層次的提高，再次感謝我的母校。另外，感謝三年來傳授我知識與智慧的老師們。正是由于他們的傳道、授業(yè)、解惑, 讓我學(xué)到了專業(yè)知識，并從他們身上學(xué)到了如何求知，如何為人。悠悠三載，轉(zhuǎn)眼而逝。 這3年，我們得到了老師們的諄諄教導(dǎo)，學(xué)會勇敢堅強與如何追求自己的人生價值。這 3年，我們受到老師為人師表與純正校風(fēng)的熏陶，懂得了為人處事的道理。這3年，我 們更從天真爛漫的無知少年逐漸成長為一個全面發(fā)展的有理想青年。最后

35、，再次向我最敬愛的老師們致以最深深的敬意參考文獻1 陳培榕，李景虹，鄧勃主編，現(xiàn)代儀器分析實驗與技術(shù)，清華大學(xué)出版社，20062 張慶合，高效液相色譜實用手冊，化學(xué)工業(yè)出版社，2008.13 黃一石，吳朝華，楊小林主編，儀器分析，化學(xué)工業(yè)出版社，2008.14 梁奕昌，義志忠，蔡志紅，朱廣一，硝基甲苯與硝基苯甲酸異構(gòu)體的高效液相色譜 法分析，色譜，1997.17 (4)； 3973985 蔡志紅，硝基甲苯與硝基苯甲酸混合物的高效液相色譜分析研究，分析實驗室， 1997.16 (6)； 5053 趙軼男，高效液相色譜技術(shù)(hplc)影響因素的選擇，分析實驗室，2007.12； 3403417 韓

36、錦屏，王愛華，朱文彬，關(guān)于液相色譜儀的日常使用注意事項，江蘇現(xiàn)代計量， 2008.3； 39408 劉萍，侯西成，郝滿良，高效液相色譜儀使用中常見的問題及解決方法，飼料博覽, 20079 于世林，高效液相色譜方法及應(yīng)用，化學(xué)工業(yè)岀版社，200110 陳康，高效液相色譜儀基本結(jié)構(gòu)及使用，儀器原理與使用，2009.24 (01), 373911 高向陽，新編儀器分析試驗，科學(xué)出版社，2009.112 宋虎躍，徐國棟，吳勇民，高效液相色譜技術(shù)的應(yīng)用，內(nèi)蒙古石油化工，2007.6,1718附錄附錄1液相色譜儀維護保養(yǎng)及使用注意事項1、保持貯液瓶清潔，對專用貯液瓶應(yīng)定期清洗；用試劑瓶作貯液瓶時，要經(jīng)常更

37、換。2、色譜柱長時間不用，存放時，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死（如acn適于反相色譜 柱，正相色譜柱用相應(yīng)的有機相）3、對于手動進樣器，當(dāng)使用緩沖溶液吋，要用水沖洗進樣口，同時搬動進樣閥數(shù)次, 每次數(shù)毫升。4、流動相使用前都必須過濾，不要使用多日存放的蒸憾水（易長菌）。5、帶seal-wash的1100,要配制90%水+10%異丙醇,以每分23滴的速度虹吸排出, 溶劑不能干涸。6、每天開始使用儀器，注意放空排氣，確保泵頭、流動池以及其它流路系統(tǒng)中無氣 泡存在。7、避免泵啟動過速、升壓過快、樣品閥搬動過慢所造成的柱壓大的波動。8、做完試驗，及時用適當(dāng)溶劑沖洗柱子和進樣閥，尤其是對過夜的柱子和進樣閥，

38、 一定要用足量的水徹底洗凈其屮的鹽類、緩沖液，再用甲醇或乙睛沖洗。9、g1379a型號真空在線脫氣機切記不能用5ml/min流速排空氣泡，而且進樣分析流 速設(shè)置不宜超過1. 5ml/mino10、口常分析基線平穩(wěn)的標(biāo)準(zhǔn)為：常量分析為12mau,痕量分析為0. 5mau附錄2液相色譜儀常見問題處理一壓力波動大，流量不穩(wěn)定原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能 密封。處理工作中注意觀察流動相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸 入空氣，流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛 有丙酮的燒杯用超聲波清洗。二出峰不佳,峰分叉色譜柱被污染，處理

39、這種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接 著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗吋間的長短由樣品污染的情況而定），再換成 甲醇沖洗，然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依 然出峰不佳，可能是柱頭填料塌陷。三峰面積重復(fù)性不佳原因：（1）進樣閥漏液；（2）加樣針不到位。（3）液量不足.處理對于第一種情況更換進樣閥墊圈；對于第二種情況保證加樣針插到底，注 射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從load狀態(tài)轉(zhuǎn)換到inject狀態(tài)，以保證進樣量的準(zhǔn) 確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng) 和高壓泵中，儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并

40、更換溶液，每次用完色 譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要, 任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染，以延長色 譜柱的使用壽命，同時避免注射過濃的樣品溶液，以免殘留液在進樣閥內(nèi)析出固體 引起堵塞;色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。四壓力波動大，基線不穩(wěn)定（1）問題現(xiàn)象：排完氣泡，用b、d通道進80%水，20%異丙醇流動相一段時間時， 基線一直不穩(wěn)，壓力波動很大。（2）潛在原因：1：系統(tǒng)中有空氣，真空脫氣機出現(xiàn)問題；2：泵中單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封；3：比例閥可能損壞；4：流動相經(jīng)0. 45u

41、m濾膜過濾后一段時間又存在雜質(zhì)。（3）解決方案：1. 將流量設(shè)為oml/min,將c8柱頭卸下，流動相不通過檢測器；2將流量設(shè)為lml/min,壓力由26bar下降至13bar,但有波動；3. 用d通道異丙醇做流動相，流量設(shè)為3ml/min,壓力最后穩(wěn)定在8788bar4. 用d通道異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在29bar；5. 用b通道80%水、d通道20%異丙醇做流動相，流量為lml/min,壓力在2619bar間波動；6. 用b通道100%水做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在13bar；7. 再次用b通道80%水、d通道20%異丙醇做流動相，流量為l

42、ml/min,壓力在269b吐間波動，時間越長，波動越大；8. 用a通道100%甲醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在9bar；9. 用a通道20%甲醇、b通道80%水做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在18bar；10. 用新過濾的異丙醇做流動相，放到c通道溶劑瓶；11. 分別用c、d通道流動相，觀察壓力穩(wěn)定在29bar左右；12. 用b通道80%水、c通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后 穩(wěn)定在25bar；13. 用b通道80%水、d通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后 穩(wěn)定在2524bar；14. 將c8柱頭安裝好，接

43、通檢測器，觀察基線狀況；15. 用a通道100%甲醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在44bar, 基線最后穩(wěn)定在-17mau；16. 用b通道100%水做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在67bar；基 線最后穩(wěn)定在-48mau；17. 用c通道100%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在162bar； 基線最后穩(wěn)定在67mau；18. 用d通道100%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在162bar； 基線最后穩(wěn)定在67niau,與c通道沒有太大差異；19. 用b通道80%水、c通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,

44、壓力最 后穩(wěn)定在133134bar,基線最后穩(wěn)定在-54mau；20. 用b通道80%水、d通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力波 動很大，波動上下lobar,基線一直有波動，不穩(wěn)定；21. 再次用0. 45um濾膜過濾d流動相，加入試劑瓶；22. 用b通道80%水、d通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最 后穩(wěn)定在126bar,基線最后穩(wěn)定在30mau23. 用b通道80%水、d通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為0. 5ml/min,壓力 波動很大，波動上下lobar,基線一直有波動，不穩(wěn)定；24. 再次用b通道80%水、d通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)

45、為lml/min,壓 力波動又變大，波動上下在10890bar,基線再次有波動，不穩(wěn)定；25. 用b通道80%水、c通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最 后穩(wěn)定在128bar,基線最后穩(wěn)定在4. 5mau26. 用b通道80%水、c通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為0. 5ml/min,壓力 最后穩(wěn)定在6465bar,基線最后穩(wěn)定在9mau；27. 再次用b通道80%水、c通道20%異丙醇做流動相，流量設(shè)為lml/min,壓力最后穩(wěn)定在127bar,基線最后穩(wěn)定在lomau；（4）實驗結(jié)論：用d通道做流動相不如用c通道做流動相相對穩(wěn)定，先前d流動相可能混有雜質(zhì)，泵中單向閥的

46、寶石球和閥座之間夾有異物的可能性較小，系統(tǒng)中有空氣，真空脫氣機出現(xiàn)問題和比例閥可能損壞的情況不能確定，次實驗前都要嚴(yán)格過濾各通道流動相，盡量不用d通道。需工程師檢修。因此每附錄3隔膜真空泵的使用方法及注意事項隔膜真空泵的使用方法1：旋轉(zhuǎn)出真空泵藍色出氣口堵塞。2：檢查調(diào)壓旋轉(zhuǎn)是否處于旋緊狀態(tài)（與真空壓力表相連處）。3：連接減壓器，安裝濾膜（注意選擇有機系與水系），用鐵夾固定好。4：接通電源，啟動本機電源開關(guān)。5：待泵體平穩(wěn)，用橡膠管銜接好真空泵及減壓器，即開始工作。6：停止工作時，關(guān)掉真空泵電源，松動調(diào)壓旋鈕至壓力為零。7：待減壓器內(nèi)恢復(fù)為常壓時，再將泵與減壓器分離。8：切斷電源。注意事項1：

47、本機必須放在干燥、清潔、平整的工作臺上且通風(fēng)良好的地方。2：本機嚴(yán)禁進入任何液體。3：不使用時，應(yīng)把電線盤繞于機身上并存放于干燥處。4：在通常情況下，真空泵運轉(zhuǎn)工作時，調(diào)壓旋轉(zhuǎn)應(yīng)保持處于旋緊狀態(tài)。減壓運轉(zhuǎn)只在 特定情況下（如固相萃?。┦褂谩?：在電壓不穩(wěn)時，連續(xù)減壓，應(yīng)隨時注意觀察壓力變化。6：工作結(jié)束時，將裝置置于干燥無塵處。附錄4真空干燥箱操作步驟及注意事項真空干燥箱操作步驟1、將真空泵兩個黑帽旋出打開，安裝好連接橡膠管的管件；2、將真空干燥箱側(cè)面的導(dǎo)氣管用真空橡膠管與真空泵連接；3、將需干燥處理的物品放入真空干燥箱內(nèi)，箱門關(guān)上并將拉手旋緊4、關(guān)閉放氣閥，開啟真空閥。5、接通真空泵電源開始

48、抽氣，使箱內(nèi)真空度達到-0. 090.1 mpa吋，關(guān)閉真空閥，再 關(guān)閉真空泵電源。6、把真空干燥箱電源開關(guān)撥至“1”處7、設(shè)定溫度 按功能鍵“set”，配合移位鍵，加鍵,減鍵,設(shè)定結(jié)束按“set”結(jié) 束，長期保持各項數(shù)據(jù)至恒溫狀態(tài)。8、根據(jù)不同物品潮濕程度，選擇不同的干燥時間，如干燥時間較長，真空度下降，需 再次抽氣恢復(fù)真空度，應(yīng)先開真空泵電源，再開啟真空閥。9、干燥結(jié)束后應(yīng)先關(guān)閉干燥箱電源，開啟放氣閥，解除箱內(nèi)真空狀態(tài)，再打開箱門取 出物品。（解除真空后，如密封圈與玻璃門吸緊變形不易立即打開箱門，經(jīng)過一段時 間后，等密封圈恢復(fù)原形后，才能方便開啟箱門）注意事項1、真空箱外殼必須有效接地，以

49、確保使用安全。2、真空箱不需連續(xù)抽氣使用時，應(yīng)先關(guān)閉真空閥，再關(guān)閉真空泵電源，否則真空泵油 要倒灌至箱內(nèi)。3、取出被處理物品時，如處理的是易燃物品，必須待溫度冷卻到低于燃點后，才能放 入空氣，以免發(fā)生氧化反應(yīng)引起燃燒。4、真空箱無防爆裝置，不得放入易爆物品干燥。5、真空箱與真空泵之間最好跨過濾器，以防止潮濕體進入真空泵。6、非必要時，請勿隨意拆開邊門，以免損壞電器系統(tǒng)。附錄5梅特勒托利多bs系列天平一水平調(diào)節(jié)b-s/a系列天平有一水平泡及兩只水平調(diào)節(jié)腳以彌補稱量操作臺面細微不平整對稱量結(jié)果的影響。當(dāng)水平泡調(diào)節(jié)至指示器玻璃屮央時，天平處于水平位置。方法步驟:調(diào)節(jié)兩只水平調(diào)節(jié)腳直到水平泡至屮央位置

50、1、水平泡在“12 占”h j 八、逆時針調(diào)節(jié)兩只調(diào)節(jié)腳2、水平泡在“3占”o 八、順時針調(diào)節(jié)左調(diào)節(jié)腳，逆時針調(diào)節(jié)右調(diào)節(jié)腳3、水平泡在“6占”2八、順時針調(diào)節(jié)兩只水平調(diào)節(jié)腳4、水平泡在“9占”v八、逆時針調(diào)節(jié)左調(diào)節(jié)腳，順時針調(diào)節(jié)右調(diào)節(jié)腳開機/關(guān)機開機讓秤盤空載并單擊on（開機）鍵。天平顯示自檢過程（包括閃現(xiàn)所有字段等）o當(dāng)天平回零時，天平就可以稱量了。關(guān)機 按住off （關(guān)機）鍵直到出現(xiàn)“off”字樣，松開該鍵。注：為了獲得準(zhǔn)確的稱量結(jié)果，天平必須通電30分鐘（ab-s/a分析天平 需要60分鐘）以獲得穩(wěn)定的工作溫度簡單稱量將樣品放在秤盤上，等待直到穩(wěn)定指示符，消失讀取稱量結(jié)果去皮1、將空容器

51、放在天平秤盤上顯示其重量值2、去皮單擊«->0/t-»鍵。3、在空容器屮加料，顯示凈重值。如果將容器從天平上移去去皮重量值會以負值顯示。去皮重量值一直保留到您再次按«->0/t»鍵或天平關(guān)機 五注意事項1 b-s/a天平僅可在干燥的室內(nèi)環(huán)境中使用2確保穩(wěn)定無振動的安放位置并h越水平越好3避免陽光直射、 強烈的溫度變化、空氣對流。最佳的擺放位置：避風(fēng)的角落、穩(wěn) 定的桌子，盡可能遠離房門，窗，散熱器以及空調(diào)裝置的出風(fēng)口。附錄6吉爾森移液槍移液槍一個完整的移液循環(huán)，包括吸頭安裝一一容量設(shè)定一一預(yù)洗吸頭一一吸液 放液一一卸去吸頭等六個步驟。每一個步驟

52、都有需要遵循的操作規(guī)范。一、吸頭安裝：正確的安裝方法叫旋轉(zhuǎn)安裝法，具體的做法是，把口套筒頂端插入 吸頭（無論是散裝吸頭還是盒裝吸頭都一樣），在輕輕用力下壓的同時，把手屮的移液 器按逆時針方向旋轉(zhuǎn)180度。切記用力不能過猛，更不能采取剁吸頭的方法來進行安裝, 因為那樣做會對您手屮的移液器造成不必要的損傷。二、容量設(shè)定：正確的容量設(shè)定分為兩個步驟，一是粗調(diào)，即通過排放按鈕將容量 值迅速調(diào)整至接近自己的預(yù)想值；二是細調(diào)，當(dāng)容量值接近自己的預(yù)想值以后，應(yīng)將移 液器橫置，水平放至自己的眼前，通過調(diào)節(jié)輪慢慢地將容量值調(diào)至預(yù)想值，從而避免視 覺誤差所造成的影響。在容量設(shè)定時，還有一個需要特別注意的地方。當(dāng)我

53、們從大值調(diào)整到小值時，剛 好就行；但從小值調(diào)整到大值時，就需要調(diào)超三分之一圈后再返回，這是因為計數(shù)器里 面有一定的空隙，需要彌補。三、預(yù)洗吸頭：在我們安裝了新的吸頭或增大了容量值以后，應(yīng)該把需要轉(zhuǎn)移的液 體吸取、排放兩到三次，這樣做是為了讓吸頭內(nèi)壁形成一道同質(zhì)液膜，確保移液工作的 精度和準(zhǔn)度，使整個移液過程具有極高的重現(xiàn)性。其次，在吸取有機溶劑或高揮發(fā)液體 時，揮發(fā)性氣體會在口套筒室內(nèi)形成負壓，從而產(chǎn)生漏液的情況，這時就需要我們預(yù)洗 四到六次，讓口套筒室內(nèi)的氣體達到飽和，負壓就會自動消失。四、吸液：先將移液器排放按鈕按至第一停點，再將吸頭垂直浸入液面，浸入的深 度為：p2、p10小于或等于1毫

54、米，p20、p100、p200小于或等于2毫米，p1000小于或 等于3毫米，p5ml、p10ml小于或等于4毫米（浸入過深的話，液壓會對吸液的精確度 產(chǎn)生一定的影響，當(dāng)然，具體的浸入深度還應(yīng)根據(jù)盛放液體的容器大小靈活掌握），平 穩(wěn)松開按鈕，切記不能過快。五、放液：放液時，吸頭緊貼容器壁，先將排放按鈕按至第一停點，略作停頓以后， 再按至第二停點，這樣做可以確保吸頭內(nèi)無殘留液體。如果這樣操作還有殘留液體存在 的話，您就應(yīng)該考慮更換吸頭了。六、卸去吸頭：卸掉的吸頭一定不能和新吸頭混放，以免產(chǎn)生交叉污染。英文材料原文hplc quantitation (including trace analysi

55、s)one of the strengths of hplc is that it is an excellent quantitative analytical technique hplc can be used for the quantitation of the primary or a sample (including pure samples),for mixtures of many compounds at intermediate concentrations , and for the assessment of trace impurity concentration

56、s(parts per billion or lower) in a matrix. properly designed, validated, and executed analytical methods should show high levels of both accuracy and precision for a main component analysis(±l to 2% precision and accuracies within 2% of actual values).trace-level quantitation often is not as go

57、od; however, accuracy within 10% of the tme value and precision of ±10 to 20% at the lowest levels of quantitation are still achievablea critical requirement for a quantitative method is an ability to measure a wide range of sample concentrations with a(preferably) linear response for each analyte. the uv detector is the most widely used for accurate and precise quantitation in hplc, and m