植物營養(yǎng)研究法章其它研究法實用教案

1、會計學1植物植物(zhw)營養(yǎng)研究法章其它研究法營養(yǎng)研究法章其它研究法第一頁，共24頁。（一）土壤酶的種類（一）土壤酶的種類目前已知的存在于生物體中的近目前已知的存在于生物體中的近2000種酶類中，種酶類中，約有約有50余處累積余處累積(lij)于土壤中。于土壤中。研究最多的是：氧化還原酶類、水解酶類研究最多的是：氧化還原酶類、水解酶類研究較少的是：轉移酶類、裂解酶類研究較少的是：轉移酶類、裂解酶類不曾涉及的是：異構酶、連接酶不曾涉及的是：異構酶、連接酶第1頁/共24頁第二頁，共24頁。微生物產(chǎn)生的胞外酶微生物產(chǎn)生的胞外酶植物根系溢泌的酶植物根系溢泌的酶土壤動物溢泌的酶土壤動物溢泌的酶 （三）

2、存在部位（三）存在部位(bwi) 胞外酶：土壤溶液、土壤固體、胞外酶：土壤溶液、土壤固體、 土土 壤有機壤有機體吸附體吸附 土壤胞內(nèi)酶：微生物、根、動物中土壤胞內(nèi)酶：微生物、根、動物中第2頁/共24頁第三頁，共24頁。1評價土壤肥力水平和供肥能力評價土壤肥力水平和供肥能力土壤潛在肥力土壤潛在肥力酶活性）酶活性）植物有效養(yǎng)分三者關系植物有效養(yǎng)分三者關系密切。密切。土壤肥力主要土壤肥力主要(zhyo)物質(zhì)基礎物質(zhì)基礎土壤有機質(zhì)，是土土壤有機質(zhì)，是土壤酶底物的主要壤酶底物的主要(zhyo)給源。給源。2診斷植物營養(yǎng)元素豐缺診斷植物營養(yǎng)元素豐缺土壤缺土壤缺P磷酸酶活性高磷酸酶活性高土壤施土壤施P磷酸酶

3、活性低磷酸酶活性低第3頁/共24頁第四頁，共24頁。3鑒別土壤類型鑒別土壤類型 1964年俄國科學家用脫氫酶鑒別鈣質(zhì)土，得出酶活年俄國科學家用脫氫酶鑒別鈣質(zhì)土，得出酶活性順序為：黑鈣土性順序為：黑鈣土栗鈣土栗鈣土棕鈣土。棕鈣土。4凈化土壤、減輕危害：氰氨化鈣形成凈化土壤、減輕危害：氰氨化鈣形成(xngchng)氰酸銨的分解氰酸銨的分解氰基酶；農(nóng)藥殘留物氰基酶；農(nóng)藥殘留物控制脲酶，減少控制脲酶，減少NO3、NO2積累。積累。5調(diào)控土壤酶活性，提高肥料利用率：脲酶活性調(diào)控土壤酶活性，提高肥料利用率：脲酶活性尿素分解快則氨揮發(fā)，慢則尿素淋失。尿素分解快則氨揮發(fā)，慢則尿素淋失。 第4頁/共24頁第五頁

4、，共24頁。1土樣采集：代表性，根際內(nèi)外土樣采集：代表性，根際內(nèi)外(niwi)酶活性不酶活性不同同2土樣貯藏：一般認為：新鮮土樣酶活性大于風干土樣貯藏：一般認為：新鮮土樣酶活性大于風干樣；土樣一經(jīng)風干，再延長存放時間，酶活性失活較樣；土樣一經(jīng)風干，再延長存放時間，酶活性失活較??；恒溫貯藏（小；恒溫貯藏（4度）或凍藏（度）或凍藏（-5度度-40度）酶活度）酶活性失活較小，冷凍最好；田間濕度條件下貯藏樣品，性失活較小，冷凍最好；田間濕度條件下貯藏樣品，酶活性更能反映實際。酶活性更能反映實際。3土樣稱量：一般土樣稱量：一般1-5克，酶活低的克，酶活低的10克。酶反應速克。酶反應速度隨土樣稱量呈現(xiàn)線性

5、增加，過少測定不準確。度隨土樣稱量呈現(xiàn)線性增加，過少測定不準確。 第5頁/共24頁第六頁，共24頁。使土壤酶活性與微生物活性區(qū)分開來。使土壤酶活性與微生物活性區(qū)分開來。理想方法是：有效理想方法是：有效(yuxio)抑制微生物增殖生長和生理過程，不破壞微生物的細胞，防止酶滲出，也不破壞土壤理化性質(zhì)，常用以下兩種途徑：抑制微生物增殖生長和生理過程，不破壞微生物的細胞，防止酶滲出，也不破壞土壤理化性質(zhì)，常用以下兩種途徑：1化學滅菌劑：常用適當濃度的甲苯，其作用為抑制微生物增殖，導致某些微生物質(zhì)壁分離或胞溶，也可能引起某些酶活性升高或降低?；瘜W滅菌劑：常用適當濃度的甲苯，其作用為抑制微生物增殖，導致某

6、些微生物質(zhì)壁分離或胞溶，也可能引起某些酶活性升高或降低。甲苯的適當濃度，土樣重的甲苯的適當濃度，土樣重的20%，土壤懸浮液體積的，土壤懸浮液體積的5-10%其它滅菌劑：乙烯氧化物、苯、丙酮、醚、氯仿等。其它滅菌劑：乙烯氧化物、苯、丙酮、醚、氯仿等。2高能電離輻射：高能電離輻射：X射線或射線或r射線，使微生物失去增殖能力，土壤理化性質(zhì)改變甚微，土壤酶活性影響較小，是一種較好的滅菌法，但需特殊設備，代價較高。射線，使微生物失去增殖能力，土壤理化性質(zhì)改變甚微，土壤酶活性影響較小，是一種較好的滅菌法，但需特殊設備，代價較高。第6頁/共24頁第七頁，共24頁。1基質(zhì)：酶活性是用酶促基質(zhì)轉化的數(shù)量或基質(zhì)：

7、酶活性是用酶促基質(zhì)轉化的數(shù)量或產(chǎn)物的數(shù)量來表示產(chǎn)物的數(shù)量來表示種類：選擇一種酶作用的底物，標準方法中種類：選擇一種酶作用的底物，標準方法中每次測定選用同一底物，以便比較。每次測定選用同一底物，以便比較。加入基質(zhì)以保證酶促反應期間基質(zhì)轉化速度加入基質(zhì)以保證酶促反應期間基質(zhì)轉化速度保持恒定為準，保持恒定為準，即反應結束即反應結束(jish)時基質(zhì)有一定剩余，但時基質(zhì)有一定剩余，但不能太多不能太多第7頁/共24頁第八頁，共24頁。2酶促反應環(huán)境酶促反應環(huán)境(hunjng)：環(huán)境：環(huán)境(hunjng)條件影響酶活性，為使測得酶活性最大，須使環(huán)境條件影響酶活性，為使測得酶活性最大，須使環(huán)境(hunjng

8、)條件最適。條件最適。（1）各種酶要求的）各種酶要求的pH條件不同，選擇適宜條件不同，選擇適宜pH緩沖體系。緩沖體系。（2）溫度：目前一般采用）溫度：目前一般采用30-37度。一定溫度范圍內(nèi)酶反應速度隨溫度升高而加快，超過一定溫度，酶活性減弱或變性。度。一定溫度范圍內(nèi)酶反應速度隨溫度升高而加快，超過一定溫度，酶活性減弱或變性。（3）培養(yǎng)時間：一般幾小時到幾晝夜。）培養(yǎng)時間：一般幾小時到幾晝夜。原則：反應時間內(nèi)酶種反應速度恒定原則：反應時間內(nèi)酶種反應速度恒定過長：基質(zhì)濃度下降，產(chǎn)物增加，酶本身變化過長：基質(zhì)濃度下降，產(chǎn)物增加，酶本身變化過短：基質(zhì)反應量少而無法測定。過短：基質(zhì)反應量少而無法測定。

9、中國農(nóng)科院：測定土壤蔗糖酶等一般以中國農(nóng)科院：測定土壤蔗糖酶等一般以24小時為宜小時為宜第8頁/共24頁第九頁，共24頁。1無酶對照：目的是校正土壤非酶促反應造成的影響，土壤中某些可變價無酶對照：目的是校正土壤非酶促反應造成的影響，土壤中某些可變價(binji)陽離子（陽離子（Fe、Cu、Mn）可能引起無機催化劑的作用，尤其是氧化還原酶測定中。）可能引起無機催化劑的作用，尤其是氧化還原酶測定中。方法：干熱處理：方法：干熱處理：180度度2-3小時小時濕熱處理：濕熱處理：2atm蒸煮蒸煮1小時小時化學處理：化學抑制劑如重金屬鹽、氰化物等。化學處理：化學抑制劑如重金屬鹽、氰化物等。2無基質(zhì)對照：消

10、除土壤中本來存在的與基質(zhì)或產(chǎn)物類似物質(zhì)的影響。無基質(zhì)對照：消除土壤中本來存在的與基質(zhì)或產(chǎn)物類似物質(zhì)的影響。3無土對照：消除基質(zhì)自身分解的影響。無土對照：消除基質(zhì)自身分解的影響。 第9頁/共24頁第十頁，共24頁。通常：單位時間單位土重，一定通常：單位時間單位土重，一定溫度溫度(wnd)下酶促反應產(chǎn)物數(shù)量。下酶促反應產(chǎn)物數(shù)量。第10頁/共24頁第十一頁，共24頁。一養(yǎng)分供應量與產(chǎn)量關系一養(yǎng)分供應量與產(chǎn)量關系(gun x)二植物營養(yǎng)診斷的主要方法二植物營養(yǎng)診斷的主要方法（一）形態(tài)診斷：缺素時，形態(tài)上：失綠、色（一）形態(tài)診斷：缺素時，形態(tài)上：失綠、色斑、壞死、畸形等。斑、壞死、畸形等。老葉、新葉、頂

11、葉老葉、新葉、頂葉葉緣、葉肉、葉脈葉緣、葉肉、葉脈株高、葉片大小、根系大小株高、葉片大小、根系大小第11頁/共24頁第十二頁，共24頁。分析植物、土壤的元素含量與事先經(jīng)過試驗研究擬定的臨界含量比較，或者以異常的與正常的直接進行比較而作出豐缺判斷。分析植物、土壤的元素含量與事先經(jīng)過試驗研究擬定的臨界含量比較，或者以異常的與正常的直接進行比較而作出豐缺判斷。比較：對植物而言，一般說，植物分析結果對作物營養(yǎng)狀況的反映是最直接的，所以是判斷營養(yǎng)豐缺的最可靠依據(jù)比較：對植物而言，一般說，植物分析結果對作物營養(yǎng)狀況的反映是最直接的，所以是判斷營養(yǎng)豐缺的最可靠依據(jù)(yj)。對土壤分析：土壤分析結果，一般與作

12、物營養(yǎng)狀況有密切關系，但其相關程度不如植株分析結果高對土壤分析：土壤分析結果，一般與作物營養(yǎng)狀況有密切關系，但其相關程度不如植株分析結果高原因：作物營養(yǎng)的缺乏受多種因素影響；土壤養(yǎng)分含量；根系吸收養(yǎng)分的環(huán)境條件原因：作物營養(yǎng)的缺乏受多種因素影響；土壤養(yǎng)分含量；根系吸收養(yǎng)分的環(huán)境條件第12頁/共24頁第十三頁，共24頁。采取對元素豐缺反應敏感的某種組織，利用化學的采取對元素豐缺反應敏感的某種組織，利用化學的呈色反應作快速測定，結果一般分級：極缺、缺、一般呈色反應作快速測定，結果一般分級：極缺、缺、一般、豐富、豐富應用：在生產(chǎn)者急于應用：在生產(chǎn)者急于(jy)知道答案以便迅速采取知道答案以便迅速采取

13、補救措施情況下，可以避免大部分憑臆測行事，以致貽補救措施情況下，可以避免大部分憑臆測行事，以致貽誤生產(chǎn)。誤生產(chǎn)。對常規(guī)生產(chǎn)的細胞管理也有指導意義。對常規(guī)生產(chǎn)的細胞管理也有指導意義。第13頁/共24頁第十四頁，共24頁。以葉片常規(guī)分析結果與事先制訂的臨界作比較，來判斷營養(yǎng)元素豐缺。以葉片常規(guī)分析結果與事先制訂的臨界作比較，來判斷營養(yǎng)元素豐缺。優(yōu)點：比速測法精確可靠；測定范圍幾乎包括植物必需的全部元素；果樹上應用比農(nóng)作物更廣泛成功優(yōu)點：比速測法精確可靠；測定范圍幾乎包括植物必需的全部元素；果樹上應用比農(nóng)作物更廣泛成功3土壤分析診斷：土壤分析診斷：分為分為(fn wi)：速測、實驗室常規(guī)測定：速測、

14、實驗室常規(guī)測定一般測定其速效養(yǎng)分，而含量一般與作物產(chǎn)量無相關性，測定結果與事先擬定好的標準比較判斷其豐缺。一般測定其速效養(yǎng)分，而含量一般與作物產(chǎn)量無相關性，測定結果與事先擬定好的標準比較判斷其豐缺。 第14頁/共24頁第十五頁，共24頁。 以施肥方式提供擬試元素肥料進行檢驗以施肥方式提供擬試元素肥料進行檢驗1葉片噴、涂、葉脈注射試驗葉片噴、涂、葉脈注射試驗用于已生產(chǎn)癥狀時的應急診斷。用于已生產(chǎn)癥狀時的應急診斷。優(yōu)點：見效快（直接處理葉片）優(yōu)點：見效快（直接處理葉片）不與土壤接觸不與土壤接觸(jich)，避免養(yǎng)分被土壤固定而，避免養(yǎng)分被土壤固定而無效無效用料少，經(jīng)濟省事。用料少，經(jīng)濟省事。濃度范

15、圍一般濃度范圍一般0.1-0.5%.第15頁/共24頁第十六頁，共24頁。2.對比試驗：設施與不施兩個處理，也可結合進行肥料對比試驗：設施與不施兩個處理，也可結合進行肥料用量和形態(tài)試驗，用于事前預測或應急診斷。用量和形態(tài)試驗，用于事前預測或應急診斷。3抽樣試驗：為探測土壤可能缺乏某些可以抽樣試驗：為探測土壤可能缺乏某些可以(ky)采采用這一方法。用這一方法。 設置設置n+2處理，（處理，（n為待測元素數(shù)）為待測元素數(shù)） 空白，全營養(yǎng)、缺乏一個元素肥料的處理?？瞻?，全營養(yǎng)、缺乏一個元素肥料的處理。 第16頁/共24頁第十七頁，共24頁。原理：許多元素是酶的組分或活化劑，當其缺乏時，與該元素有關的

16、酶活性發(fā)生變化，兩者有明顯相關性原理：許多元素是酶的組分或活化劑，當其缺乏時，與該元素有關的酶活性發(fā)生變化，兩者有明顯相關性優(yōu)點：優(yōu)點：（1）靈敏度高：某些元素在植物體內(nèi)含量極微，如鉬）靈敏度高：某些元素在植物體內(nèi)含量極微，如鉬 酶測法可避免開這種困難酶測法可避免開這種困難 MoNR； Cu抗壞血酸酶抗壞血酸酶（2）相關性好：如）相關性好：如Zn含量與碳酸酐酶活性基本一致。含量與碳酸酐酶活性基本一致。（3）酶促反應變化遠遠早于形態(tài)變異，有利于早期診斷或潛在性缺乏的診斷。）酶促反應變化遠遠早于形態(tài)變異，有利于早期診斷或潛在性缺乏的診斷。不足不足(bz)：有關測試技術還未臻完善，實用的還不多。：有

17、關測試技術還未臻完善，實用的還不多。 第17頁/共24頁第十八頁，共24頁。1遙感：通過光譜分析獲得遙感：通過光譜分析獲得(hud)信息信息利用葉片對光波反射特性，測定其反射率來判斷營利用葉片對光波反射特性，測定其反射率來判斷營養(yǎng)豐缺。養(yǎng)豐缺。如：一般綠葉反射的可見光范圍為如：一般綠葉反射的可見光范圍為400-700nm，同時在近紅外波段同時在近紅外波段800-1200nm有高反射率。有高反射率。缺氮水稻，可見光域顯示高反射率；近紅外部分低反缺氮水稻，可見光域顯示高反射率；近紅外部分低反射率射率以群體為研究對象以群體為研究對象第18頁/共24頁第十九頁，共24頁。2電子探針電子探針x射線顯微分

18、析射線顯微分析植物體內(nèi)養(yǎng)分植物體內(nèi)養(yǎng)分(yngfn)分布分布細胞內(nèi)養(yǎng)分細胞內(nèi)養(yǎng)分(yngfn)分布分布根根土界面養(yǎng)分土界面養(yǎng)分(yngfn)分布分布植物營養(yǎng)元素作用機理植物營養(yǎng)元素作用機理3組織化學診斷：光學、電子顯微鏡判斷組織化學診斷：光學、電子顯微鏡判斷缺素與解剖結構關系。缺素與解剖結構關系。缺缺B：花粉、根尖、葉柄、細胞壁：花粉、根尖、葉柄、細胞壁第19頁/共24頁第二十頁，共24頁。（一）診斷的目的：（一）診斷的目的：1缺何種元素缺何種元素2是否存在潛在是否存在潛在(qinzi)缺乏缺乏3缺素原因：土壤、吸收缺素原因：土壤、吸收4確定某種作物缺某元素的臨界值確定某種作物缺某元素的臨界值

19、5擬定合理施肥方案擬定合理施肥方案（二）步驟（二）步驟1觀察：觀察：指標：生長速度、株型長相、色澤等指標：生長速度、株型長相、色澤等排除無營養(yǎng)元素以外的其它原因，如病蟲害、藥害、連作障礙、異常天氣（旱、澇、溫、冷、鹽、光）排除無營養(yǎng)元素以外的其它原因，如病蟲害、藥害、連作障礙、異常天氣（旱、澇、溫、冷、鹽、光）第20頁/共24頁第二十一頁，共24頁。2調(diào)查調(diào)查（1）癥狀類型及特點：色澤、斑點、形狀、長相、地下部、老葉、新葉）癥狀類型及特點：色澤、斑點、形狀、長相、地下部、老葉、新葉（2）環(huán)境條件：土壤）環(huán)境條件：土壤(trng)：類型、地形、母質(zhì)、質(zhì)地、水分條件：類型、地形、母質(zhì)、質(zhì)地、水分條件天氣：陰雨、干旱天氣：陰雨、干旱（3）發(fā)病經(jīng)過：向栽培管理人員詢問癥狀發(fā)生經(jīng)過，何時發(fā)病、最初癥狀、發(fā)展變化。）發(fā)病經(jīng)過：向栽培管理人員詢問癥狀發(fā)生經(jīng)過，何時發(fā)病、最初癥狀、