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1、第39講基因工程考點(diǎn)一基因工程的原理及工具考點(diǎn)一基因工程的原理及工具1基因工程的基本原理和理論基礎(chǔ)概括基因工程的基本原理和理論基礎(chǔ)概括(如下圖如下圖)2限制酶選擇的注意事項(xiàng)限制酶選擇的注意事項(xiàng)(1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)確定限制酶的種類(lèi)。根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)確定限制酶的種類(lèi)。應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶,如圖甲可選如圖甲可選擇擇Pst。不能選擇切點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶不能選擇切點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶,如圖甲不如圖甲不能選擇能選擇Sma。為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接,也也可使用不同的
2、限制酶切割目的基因和質(zhì)??墒褂貌煌南拗泼盖懈钅康幕蚝唾|(zhì)粒,如圖甲也如圖甲也可選擇用可選擇用Pst 和和EcoR 兩種限制酶兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點(diǎn)上也有這兩種酶的切點(diǎn))。(2)根據(jù)質(zhì)粒的特點(diǎn)確定限制酶的種類(lèi)。根據(jù)質(zhì)粒的特點(diǎn)確定限制酶的種類(lèi)。所選限制酶要與切割目的基因的限制酶相一致所選限制酶要與切割目的基因的限制酶相一致,以以確保具有相同的黏性末端。確保具有相同的黏性末端。質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等,所以所選擇的所以所選擇的限制酶盡量不要?dú)倪@些結(jié)構(gòu)限制酶盡量不要?dú)倪@些結(jié)構(gòu),如圖乙中限制酶如圖乙中限制酶Sma 會(huì)毀壞標(biāo)記基因
3、;如果所選酶的切點(diǎn)不是一個(gè)會(huì)毀壞標(biāo)記基因;如果所選酶的切點(diǎn)不是一個(gè),則則切割重組后可能丟失某些片段切割重組后可能丟失某些片段,若丟失的片段含復(fù)制若丟失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū)起點(diǎn)區(qū),則切割重組后的片段進(jìn)入受體細(xì)胞后不能自則切割重組后的片段進(jìn)入受體細(xì)胞后不能自主復(fù)制。主復(fù)制。清錯(cuò)破疑清錯(cuò)破疑基因工程操作基本工具的基因工程操作基本工具的8個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)限制酶是一類(lèi)酶限制酶是一類(lèi)酶,而不是一種酶。而不是一種酶。(2)限制酶的成分為蛋白質(zhì)限制酶的成分為蛋白質(zhì),其作用的發(fā)揮需要適宜的理其作用的發(fā)揮需要適宜的理化條件化條件,高溫、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿均易使之變性失活。高溫、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿均易使之變性失活。(3)在切割
4、目的基因和載體時(shí)要求用同一種限制酶在切割目的基因和載體時(shí)要求用同一種限制酶,目的目的是產(chǎn)生相同的黏性末端。是產(chǎn)生相同的黏性末端。(4)將一個(gè)基因從將一個(gè)基因從DNA分子上切割下來(lái)分子上切割下來(lái),需要切兩處需要切兩處,同同時(shí)產(chǎn)生時(shí)產(chǎn)生4個(gè)黏性末端。個(gè)黏性末端。(5)不同不同DNA分子用同一種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端都分子用同一種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端都相同相同,同一個(gè)同一個(gè)DNA分子用不同的限制酶切割分子用不同的限制酶切割,產(chǎn)生的黏性產(chǎn)生的黏性末端一般不相同。末端一般不相同。(6)限制酶切割位點(diǎn)應(yīng)位于標(biāo)記基因之外限制酶切割位點(diǎn)應(yīng)位于標(biāo)記基因之外,不能毀壞標(biāo)記不能毀壞標(biāo)記基因基因,以便進(jìn)行檢測(cè)。
5、以便進(jìn)行檢測(cè)。(7)基因工程中的載體與細(xì)胞膜上物質(zhì)運(yùn)輸?shù)妮d體不同。基因工程中的載體與細(xì)胞膜上物質(zhì)運(yùn)輸?shù)妮d體不同。基因工程中的載體是基因工程中的載體是DNA分子分子,能將目的基因?qū)胧荏w能將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞內(nèi);膜載體是蛋白質(zhì)細(xì)胞內(nèi);膜載體是蛋白質(zhì),與細(xì)胞膜的通透性有關(guān)。與細(xì)胞膜的通透性有關(guān)。(8)基因工程中有基因工程中有3種工具種工具,但工具酶只有但工具酶只有2種。種。角度基因工程的操作工具角度基因工程的操作工具1根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí),回答下列問(wèn)題:回答下列問(wèn)題:(1)限制性核酸內(nèi)切酶切割限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段分子后產(chǎn)生的片段,其其末端類(lèi)型有末端類(lèi)
6、型有_和和_。(2)質(zhì)粒運(yùn)載體用質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoR切割后產(chǎn)生的片段如下:切割后產(chǎn)生的片段如下:為使運(yùn)載體與目的基因相連為使運(yùn)載體與目的基因相連,含有目的基因的含有目的基因的DNA除除可用可用EcoR 切割外切割外,還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶切割切割,該酶必須具有的特點(diǎn)是該酶必須具有的特點(diǎn)是_。(3)按其來(lái)源不同按其來(lái)源不同,基因工程中所使用的基因工程中所使用的DNA連接酶有連接酶有兩類(lèi)兩類(lèi),即即_DNA連接酶和連接酶和_DNA連接酶。連接酶。( 4 ) 反 轉(zhuǎn) 錄 作 用 的 模 板 是反 轉(zhuǎn) 錄 作 用 的 模 板 是 _ _ _ _ _ _ _ _ , 產(chǎn)
7、物 是產(chǎn) 物 是_。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,常采用常采用_技術(shù)。技術(shù)。(5)基因工程中除質(zhì)粒外基因工程中除質(zhì)粒外,_和和_也可作為也可作為運(yùn)載體。運(yùn)載體。(6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,一般情況下一般情況下,不能直接不能直接用 未 處 理 的 大 腸 桿 菌 作 為 受 體 細(xì) 胞用 未 處 理 的 大 腸 桿 菌 作 為 受 體 細(xì) 胞 , 原 因 是原 因 是_。解析:解析:此題考查基因工程應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)。此題考查基因工程應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)。(1)DNA分分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有黏性末端片段末端通常
8、有黏性末端和平末端兩種類(lèi)型。和平末端兩種類(lèi)型。(2)為使運(yùn)載體與目的基因相連為使運(yùn)載體與目的基因相連, ,應(yīng)使二者被切割后產(chǎn)生的末端相同應(yīng)使二者被切割后產(chǎn)生的末端相同, ,故用另一種限制故用另一種限制酶切割產(chǎn)生的末端必須與酶切割產(chǎn)生的末端必須與EcoR 切割產(chǎn)生的末端相切割產(chǎn)生的末端相同。同。(3)根據(jù)酶的來(lái)源不同根據(jù)酶的來(lái)源不同, ,DNA連接酶分為連接酶分為Ecoli DNA連接酶和連接酶和T4 DNA連接酶。連接酶。(4)以以RNA為模板為模板, ,合成合成DNA的過(guò)程稱(chēng)為逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程稱(chēng)為逆轉(zhuǎn)錄, ,若要體外獲得大量若要體外獲得大量DNA分子分子, ,可以使用可以使用PCR技術(shù)。技術(shù)。(
9、5)在基因工程中在基因工程中, ,通常利用質(zhì)粒作為運(yùn)載體通常利用質(zhì)粒作為運(yùn)載體, ,另外噬菌體和動(dòng)植物病毒另外噬菌體和動(dòng)植物病毒也可作為運(yùn)載體。也可作為運(yùn)載體。(6)大腸桿菌作為受體細(xì)胞時(shí)大腸桿菌作為受體細(xì)胞時(shí), ,常用常用Ca2處理處理, ,使之成為能吸收周?chē)h(huán)境中使之成為能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的感分子的感受態(tài)細(xì)胞。受態(tài)細(xì)胞。參考答案:參考答案:(1)平末端黏性末端平末端黏性末端(2)切割產(chǎn)生的切割產(chǎn)生的DNA片段末端與片段末端與EcoR切割產(chǎn)生的相同切割產(chǎn)生的相同(3)T4Ecoli(4)mRNA(或或RNA)cDNA(或或DNA)PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))(5)動(dòng)植物病毒
10、噬菌體動(dòng)植物病毒噬菌體(6)未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源外源DNA)的能力極弱的能力極弱2我們?nèi)粘3缘拇竺字需F含量極低我們?nèi)粘3缘拇竺字需F含量極低,科研人員通過(guò)基科研人員通過(guò)基因工程等技術(shù)因工程等技術(shù),培育出了鐵含量比普通大米高培育出了鐵含量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)基因水稻基因水稻,改良了稻米的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。如圖為培育轉(zhuǎn)基因改良了稻米的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。如圖為培育轉(zhuǎn)基因水稻過(guò)程示意圖水稻過(guò)程示意圖,請(qǐng)回答問(wèn)題。請(qǐng)回答問(wèn)題。(1)在上述工程中在上述工程中,鐵結(jié)合蛋白基因稱(chēng)為鐵結(jié)合蛋白基因稱(chēng)為_(kāi),獲取獲取該基因后常用該基因后常用_技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。(2)構(gòu)建重組構(gòu)建重組T
11、i質(zhì)粒時(shí)質(zhì)粒時(shí),通常要用同種限制酶分別切割通常要用同種限制酶分別切割_和和_。將重組。將重組Ti質(zhì)粒質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí)轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí),可以用可以用_處理農(nóng)桿菌處理農(nóng)桿菌,使重組使重組Ti質(zhì)粒易于導(dǎo)入。質(zhì)粒易于導(dǎo)入。(3)將含有重組將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與水稻愈傷組織配合培質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與水稻愈傷組織配合培養(yǎng) 時(shí)養(yǎng) 時(shí) , 通 過(guò) 培 養(yǎng) 基通 過(guò) 培 養(yǎng) 基 2 的 篩 選 培 養(yǎng)的 篩 選 培 養(yǎng) , 可 以 獲 得可 以 獲 得_;培養(yǎng)基;培養(yǎng)基3與與培養(yǎng)基培養(yǎng)基2的區(qū)別是的區(qū)別是_。(4)檢測(cè)培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是否達(dá)到檢測(cè)培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是否達(dá)到,需要檢測(cè)轉(zhuǎn)需要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻基因水稻
12、_。解析:解析:本題中培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是獲得鐵含量比本題中培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是獲得鐵含量比普通大米高的大米普通大米高的大米, ,因此目的基因?yàn)殍F結(jié)合蛋白基因因此目的基因?yàn)殍F結(jié)合蛋白基因, ,要大量獲得一般采用要大量獲得一般采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。構(gòu)建重組質(zhì)技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。構(gòu)建重組質(zhì)粒要用同種限制酶切割含目的基因的粒要用同種限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒。片段和質(zhì)粒。將外植體培養(yǎng)成試管苗的過(guò)程要用到不同的培養(yǎng)基將外植體培養(yǎng)成試管苗的過(guò)程要用到不同的培養(yǎng)基, ,各各培養(yǎng)基最明顯的差別在于所添加激素的比例不同。培養(yǎng)基最明顯的差別在于所添加激素的比例不同。參考答案:參考答案:(1)目的基因
13、目的基因PCR(2)含目的基因的含目的基因的DNA片段質(zhì)粒片段質(zhì)粒CaCl2(3)含有重組質(zhì)粒的愈傷組織生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的含有重組質(zhì)粒的愈傷組織生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的濃度比例濃度比例 (4)種子中鐵含量種子中鐵含量1目的基因的獲取目的基因的獲取目前有兩種途徑:一是直接提取目的基因目前有兩種途徑:一是直接提取目的基因,如從基因如從基因文庫(kù)中獲取。二是人工合成目的基因文庫(kù)中獲取。二是人工合成目的基因,常用的方法有常用的方法有化學(xué)合成法和反轉(zhuǎn)錄法。化學(xué)合成法和反轉(zhuǎn)錄法。2基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建考點(diǎn)二基因工程的操作程序考點(diǎn)二基因工程的操作程序(1)基因表達(dá)載體的組成?;虮磉_(dá)載體的組成。
14、(2)構(gòu)建過(guò)程。構(gòu)建過(guò)程。3將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定5蛋白質(zhì)工程與基因工程的關(guān)系蛋白質(zhì)工程與基因工程的關(guān)系角度一基因工程的操作程序角度一基因工程的操作程序3請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題:請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題:(1)在培育轉(zhuǎn)基因牛過(guò)程中在培育轉(zhuǎn)基因牛過(guò)程中,過(guò)程常用的方法是過(guò)程常用的方法是_。轉(zhuǎn)基因牛可通過(guò)分泌乳汁來(lái)生產(chǎn)。轉(zhuǎn)基因??赏ㄟ^(guò)分泌乳汁來(lái)生產(chǎn)人類(lèi)生長(zhǎng)激素人類(lèi)生長(zhǎng)激素,在基因表達(dá)載體中在基因表達(dá)載體中,人生長(zhǎng)激素基因的人生長(zhǎng)激素基因的首 端 必 須 含 有首 端 必 須 含 有 _ _ _ _ _ _ _ _ , 其 作 用 是 能 夠
15、被其 作 用 是 能 夠 被_識(shí)別并結(jié)合識(shí)別并結(jié)合,從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。(2)prG能激發(fā)細(xì)胞不斷分裂能激發(fā)細(xì)胞不斷分裂,通過(guò)基因工程導(dǎo)入該調(diào)通過(guò)基因工程導(dǎo)入該調(diào)控基因來(lái)制備單克隆抗體控基因來(lái)制備單克隆抗體,最可能是最可能是_細(xì)細(xì)胞胞,代表的細(xì)胞具有代表的細(xì)胞具有_和和_的特點(diǎn)。的特點(diǎn)。(3)在抗蟲(chóng)棉培育過(guò)程中在抗蟲(chóng)棉培育過(guò)程中,需將抗蟲(chóng)基因需將抗蟲(chóng)基因(Bt毒蛋白基因毒蛋白基因)插入到插入到Ti質(zhì)粒的質(zhì)粒的_上上,通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用就可以使抗蟲(chóng)基因進(jìn)入棉花細(xì)胞。要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因是就可以使抗蟲(chóng)基因進(jìn)入棉花細(xì)胞。要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因是否翻譯成否翻譯成Bt毒蛋白毒蛋白
16、,應(yīng)從抗蟲(chóng)棉中提取蛋白質(zhì)應(yīng)從抗蟲(chóng)棉中提取蛋白質(zhì),并用并用_方法進(jìn)行檢測(cè)。方法進(jìn)行檢測(cè)。解析:解析:(1)過(guò)程是將重組基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)過(guò)程是將重組基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程胞的過(guò)程, ,將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法。在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中法。在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中, ,RNA聚合酶識(shí)別基因序列上首聚合酶識(shí)別基因序列上首端的啟動(dòng)子并與之結(jié)合后開(kāi)始轉(zhuǎn)錄端的啟動(dòng)子并與之結(jié)合后開(kāi)始轉(zhuǎn)錄, ,故基因的首端故基因的首端要有啟動(dòng)子。要有啟動(dòng)子。(2)漿細(xì)胞能分泌特異性抗體漿細(xì)胞能分泌特異性抗體, ,但不能但不能無(wú)限增殖無(wú)限增殖, ,故導(dǎo)入故導(dǎo)入prG的漿細(xì)胞既能分泌特異性抗體的
17、漿細(xì)胞既能分泌特異性抗體, ,又能無(wú)限增殖。又能無(wú)限增殖。(3)農(nóng)桿菌中的農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的質(zhì)粒上的TDNA可可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中并整合到受體細(xì)胞的染轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中并整合到受體細(xì)胞的染色體色體DNA上上, ,故將抗蟲(chóng)基因插入到故將抗蟲(chóng)基因插入到Ti質(zhì)粒的質(zhì)粒的TDNA上上, ,通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用就可以使抗蟲(chóng)基因進(jìn)入棉花細(xì)通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用就可以使抗蟲(chóng)基因進(jìn)入棉花細(xì)胞??衫媚芘c抗蟲(chóng)基因表達(dá)的蛋白質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)胞??衫媚芘c抗蟲(chóng)基因表達(dá)的蛋白質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)合的抗體合的抗體, ,發(fā)生抗原發(fā)生抗原抗體反應(yīng)抗體反應(yīng), ,對(duì)目的基因表達(dá)的產(chǎn)對(duì)目的基因表達(dá)的產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。物進(jìn)行檢測(cè)。參考答案:參考
18、答案:(1)顯微注射法啟動(dòng)子顯微注射法啟動(dòng)子RNA聚合酶聚合酶(2)B(漿漿)無(wú)限增殖產(chǎn)生特異性抗體無(wú)限增殖產(chǎn)生特異性抗體(3)TDNA抗原抗原抗體雜交抗體雜交4質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體,質(zhì)粒上有標(biāo)記基質(zhì)粒上有標(biāo)記基因因,如圖所示如圖所示,通過(guò)標(biāo)記基因可推知外源基因插入的位通過(guò)標(biāo)記基因可推知外源基因插入的位置置,插入位置不同插入位置不同,細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況也不同。細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況也不同。如圖表示外源基因的插入位置如圖表示外源基因的插入位置(插入點(diǎn)有插入點(diǎn)有a、b、c)。.(1)質(zhì)粒的基本組成單位是質(zhì)粒的基本組成單位是_。(2)將細(xì)菌放在含有四環(huán)素、
19、氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培將細(xì)菌放在含有四環(huán)素、氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)養(yǎng),屬于基因工程操作中的屬于基因工程操作中的_步驟。步驟。.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究外源基因插入的位置。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究外源基因插入的位置。(3)步驟:步驟:將導(dǎo)入外源基因的細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)產(chǎn)生大量細(xì)菌。將導(dǎo)入外源基因的細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)產(chǎn)生大量細(xì)菌。分組:將細(xì)菌平均分成兩組并標(biāo)號(hào)為分組:將細(xì)菌平均分成兩組并標(biāo)號(hào)為1、2。培養(yǎng):將第培養(yǎng):將第1組細(xì)菌放入組細(xì)菌放入_中培養(yǎng)中培養(yǎng),將將第第2組細(xì)菌放入組細(xì)菌放入_中培養(yǎng)。中培養(yǎng)。觀察并記錄結(jié)果。觀察并記錄結(jié)果。(4)預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論:預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論:若若1組、組、2組均能正常生長(zhǎng)組均能正常生長(zhǎng),則外
20、源基因插入點(diǎn)是則外源基因插入點(diǎn)是_。若若1組能正常生長(zhǎng)組能正常生長(zhǎng),2組不能生長(zhǎng)組不能生長(zhǎng),則外源基因插入點(diǎn)是則外源基因插入點(diǎn)是_。若若1組不能生長(zhǎng)組不能生長(zhǎng),2組能正常生長(zhǎng)組能正常生長(zhǎng),則外源基因插入點(diǎn)是則外源基因插入點(diǎn)是_。解析:解析:(1)質(zhì)粒是小型環(huán)狀質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子分子, ,其基本組成單位其基本組成單位是脫氧核苷酸。是脫氧核苷酸。(2)抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因都屬于標(biāo)記基因都屬于標(biāo)記基因, ,其目的是便于目的基因的檢測(cè)與鑒其目的是便于目的基因的檢測(cè)與鑒定。定。(3)分別將導(dǎo)入外源基因的細(xì)菌放在含氨芐青霉素分別將導(dǎo)入外源基因的細(xì)菌放在含氨芐青
21、霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng), ,觀察能否觀察能否生長(zhǎng)。生長(zhǎng)。(4)若目的基因插入若目的基因插入a點(diǎn)點(diǎn), ,則受體細(xì)胞既具有抗四則受體細(xì)胞既具有抗四環(huán)素的能力環(huán)素的能力, ,又具有抗氨芐青霉素的能力;若目的基又具有抗氨芐青霉素的能力;若目的基因插入因插入b點(diǎn)點(diǎn), ,則受體細(xì)胞只具有抗四環(huán)素的能力;若目則受體細(xì)胞只具有抗四環(huán)素的能力;若目的基因插入的基因插入c點(diǎn)點(diǎn), ,則受體細(xì)胞只具有抗氨芐青霉素的能則受體細(xì)胞只具有抗氨芐青霉素的能力。以此可判斷目的基因插入的位置。力。以此可判斷目的基因插入的位置。參考答案:參考答案:(1)脫氧核苷酸脫氧核苷酸(2
22、)目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定(3)含氨芐青霉素的培養(yǎng)基含四環(huán)素的培養(yǎng)基含氨芐青霉素的培養(yǎng)基含四環(huán)素的培養(yǎng)基(4)acb角度二基因工程的應(yīng)用與蛋白質(zhì)工程角度二基因工程的應(yīng)用與蛋白質(zhì)工程5(2015課標(biāo)全國(guó)課標(biāo)全國(guó)卷卷)HIV屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒,是艾滋是艾滋病的病原體?;卮鹣铝袉?wèn)題:病的病原體。回答下列問(wèn)題:(1)用基因工程方法制備用基因工程方法制備HIV的某蛋白的某蛋白(目的蛋白目的蛋白)時(shí)時(shí),可可先提取先提取HIV中的中的_,以其作為模板以其作為模板,在在_的的作用下合成作用下合成_,獲取該目的蛋白的基因獲取該目的蛋白的基因,構(gòu)建重組構(gòu)建重組表達(dá)載體表達(dá)載體,隨后導(dǎo)入受
23、體細(xì)胞。隨后導(dǎo)入受體細(xì)胞。(2)從受體細(xì)胞中分離純化出目的蛋白從受體細(xì)胞中分離純化出目的蛋白,該蛋白作為抗原該蛋白作為抗原注入機(jī)體后注入機(jī)體后,刺激機(jī)體產(chǎn)生的可與此蛋白結(jié)合的相應(yīng)分泌刺激機(jī)體產(chǎn)生的可與此蛋白結(jié)合的相應(yīng)分泌蛋白是蛋白是_,該分泌蛋白可用于檢測(cè)受試者血清中的該分泌蛋白可用于檢測(cè)受試者血清中的HIV,檢測(cè)的原理是檢測(cè)的原理是_。(3)已知某種菌導(dǎo)致的肺炎在健康人群中罕見(jiàn)已知某種菌導(dǎo)致的肺炎在健康人群中罕見(jiàn),但是在艾但是在艾滋病患者中卻多發(fā)。引起這種現(xiàn)象的根本原因是滋病患者中卻多發(fā)。引起這種現(xiàn)象的根本原因是HIV主主要感染和毀壞了患者的部分要感染和毀壞了患者的部分_細(xì)胞細(xì)胞,降低了患者
24、免降低了患者免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)效用。疫系統(tǒng)的防衛(wèi)效用。(4)人的免疫系統(tǒng)有人的免疫系統(tǒng)有_癌細(xì)胞的效用。艾癌細(xì)胞的效用。艾滋病患者由于免疫效用缺陷滋病患者由于免疫效用缺陷,易發(fā)生惡性腫瘤。易發(fā)生惡性腫瘤。解析:解析:(1)提取提取HIV中的中的RNA, ,為了獲得目的基因?yàn)榱双@得目的基因, ,以以RNA作為模板作為模板, ,逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成DNA獲取該目獲取該目的基因。的基因。(2)抗原注入機(jī)體后抗原注入機(jī)體后, ,會(huì)產(chǎn)生抗體會(huì)產(chǎn)生抗體, ,抗體會(huì)和抗體會(huì)和抗原發(fā)生特異性結(jié)合??乖l(fā)生特異性結(jié)合。HIV和抗體能特異性結(jié)合和抗體能特異性結(jié)合, ,因因此可以用于檢測(cè)受試者血清中
25、的此可以用于檢測(cè)受試者血清中的HIV。(3)HIV主要感主要感染和毀壞了患者的部分免疫細(xì)胞染和毀壞了患者的部分免疫細(xì)胞(主要是主要是T細(xì)胞、細(xì)胞、B細(xì)細(xì)胞胞), ,降低了患者免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)效用。降低了患者免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)效用。(4)人的免疫系人的免疫系統(tǒng)有監(jiān)控和清除癌細(xì)胞的效用。統(tǒng)有監(jiān)控和清除癌細(xì)胞的效用。參考答案:參考答案:(1)RNA逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶cDNA(或或DNA)(2)抗體抗原抗體特異性結(jié)合抗體抗原抗體特異性結(jié)合(其他合理參考答案也其他合理參考答案也可可)(3)T(或或T淋巴淋巴)(4)監(jiān)控和清除監(jiān)控和清除6(2015課標(biāo)全國(guó)課標(biāo)全國(guó)卷卷)已知生物體內(nèi)用一種蛋白質(zhì)已知生物體內(nèi)用一種蛋
26、白質(zhì)(P),該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,由由305個(gè)氨基酸組成。個(gè)氨基酸組成。如果將如果將P分子中分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸位的絲氨酸變成亮氨酸,240位的谷位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸氨酰胺變成苯丙氨酸,改變后的蛋白質(zhì)改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留不但保留P的效用的效用,而且具有了酶的催化活性。回答下列問(wèn)題:而且具有了酶的催化活性?;卮鹣铝袉?wèn)題:(1)從上述資料可知從上述資料可知,若要改變蛋白質(zhì)的效用若要改變蛋白質(zhì)的效用,可以考慮可以考慮對(duì)蛋白質(zhì)的對(duì)蛋白質(zhì)的_進(jìn)行改造。進(jìn)行改造。(2)以以P基因序列為基礎(chǔ)基因序列為基礎(chǔ),獲得獲得P1基因的途徑有修飾基因的途徑有修飾_基因或
27、合成基因或合成_基因。所獲得的基因基因。所獲得的基因表達(dá)時(shí)是遵照中心法則的表達(dá)時(shí)是遵照中心法則的,中心法則的全部?jī)?nèi)容包括中心法則的全部?jī)?nèi)容包括_的復(fù)制;以及遺傳信息在不同分子之間的復(fù)制;以及遺傳信息在不同分子之間的流動(dòng)的流動(dòng),即:即:_。(3)蛋白質(zhì)工程也被稱(chēng)為第二代基因工程蛋白質(zhì)工程也被稱(chēng)為第二代基因工程,其基本途徑是其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)效用出發(fā)從預(yù)期蛋白質(zhì)效用出發(fā),通過(guò)通過(guò)_和和_進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核酸序列進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核酸序列,據(jù)此獲據(jù)此獲得基因得基因,再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì),之后還需要對(duì)蛋白之后還需要對(duì)蛋白質(zhì)的生物質(zhì)的生物_進(jìn)行鑒定。進(jìn)行鑒定。解析:解析:(1)由題干信息可知改造蛋白質(zhì)的效用由題干信息可知改造蛋白質(zhì)的效用, ,可通過(guò)可通過(guò)改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)。改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)。(2)依據(jù)蛋白質(zhì)工程的定義
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