體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則(化學(xué)發(fā)光報(bào)批稿)-百(精)

1、體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則發(fā)光免疫分 析試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（報(bào)批稿）2009-05-15 09:00發(fā)光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應(yīng)等生物學(xué)原理，利用發(fā)光信號(hào)的強(qiáng)弱來判斷 樣本中相應(yīng)抗原或抗體是否存在來進(jìn)行檢測的一類試劑。主要包括化學(xué)發(fā)光（酶促、非酶 促），電化學(xué)發(fā)光和時(shí)間分辨熒光等法。該指導(dǎo)原則主要適用于利用發(fā)光分析技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)等被測物質(zhì)進(jìn)行檢測的第三類試劑生產(chǎn)及 質(zhì)量控制，第二類試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制可參考該指導(dǎo)原則執(zhí)行，國家食品藥品監(jiān)督管理部門 將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。一、基本原則（一） 研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，

2、并符合有關(guān)法規(guī)的要求。（二） 診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲 得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證；同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行） 的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng) 該通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）的考核。企業(yè)應(yīng)對(duì)試劑 的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。（三） 診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符 合基本的科學(xué)原理。（四） 研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。（五） 試劑生產(chǎn)和質(zhì)

3、量控制的總體目標(biāo)：保證產(chǎn)品使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝可控，使用有 效。二、原材料質(zhì)量控制（一）主要生物原料與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆 抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（辣根過 氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。一般按工藝 要求對(duì)這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自 己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果 主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。1

4、 / 9主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：1外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或 者為白色粉末，不含其他顏色雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。2純度和分子量主要經(jīng) SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相 法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般每個(gè)電泳道 加樣量為 5g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀 分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。3蛋白濃度蛋白濃度可通過 Lowry 法、280

5、nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測。4效價(jià)效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 5功能性實(shí)驗(yàn)功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈 敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。（二）生物輔料生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料、主要包括小牛血清、山 羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合 2000 年版的中國生物制品主要 原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn)：1. 牛血清或羊血清外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物無菌試

6、驗(yàn)：將血清直接 37度放置 7 天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀。 總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量不小于 32mg/ml。球蛋白含量：取待測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于 0.85%NaCl 溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測定，蛋白含量應(yīng)2mg/ml。2. 牛血清白蛋白：2 / 9外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆 粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18-26時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)不大于 15 分鐘。1%牛血 清白蛋白水溶液的 pH 值應(yīng)為 6.5?7.1。總蛋白含量：用雙縮脲方測定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為95?？偟?/p>

7、白中的 BSA 含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為95%。BSA 的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA 含量，其標(biāo)準(zhǔn)為90%。3. 酪蛋白：酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4標(biāo)記用酶應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶 等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度 RZ 值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于 3.0。對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原 料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行測定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。（三）

8、化學(xué)原材料化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液 pH 值、重金屬檢測、溶解情況、 干燥失重、熾灼殘?jiān)?，均?yīng)符合中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000 年版）分 析純級(jí)別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。1 無機(jī)類：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。2 有機(jī)類：主要包括有吐溫 20、三羥基氨基甲烷等。3. 特殊化學(xué)原料：Eu-DTTA，魯米諾等。Eu-DTTA 純度分析與鑒定：要求 Eu-DTTA 各功能團(tuán)符合分子結(jié)構(gòu)，純度在 96%以上。（四）其他原輔料1微孔板條外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與 微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)

9、配合合適。3 / 9材質(zhì)：微孔反應(yīng)板條每孔加 200?L 增強(qiáng)液，用發(fā)光免疫分析儀檢測其熒光值，平均本底熒光 值1500。吸附能力和精密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值，CV 值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān) 產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi) CV5,批間 CV10。2其他粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布 的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定建 立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。三、試劑盒各組分的生產(chǎn)發(fā)光免疫分析試劑主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標(biāo)記物制備、各種溶液的配置、凍干、 分包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)

10、質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。(一固相載體的制備（因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以標(biāo)準(zhǔn) 96 孔微孔反應(yīng)板 為例進(jìn)行描述）1包被板的準(zhǔn)備準(zhǔn)備經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被板，記錄批號(hào)、數(shù)目、狀態(tài)標(biāo)識(shí)。質(zhì)控項(xiàng)目：尺寸，外觀，包裝。2包被液的配制配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作 濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：包被緩沖液配方，pH 值，包被物成份。3包被板的包被包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。質(zhì)控項(xiàng)目：包被體積，溫度，時(shí)間，過程監(jiān)控。4洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）按配方配制洗板工作液。質(zhì)控項(xiàng)目：洗板工作液

11、配方，pH 值。5封閉液的配制按配方配制封閉液。4 / 9質(zhì)控項(xiàng)目：封閉液配方，pH 值。6洗板和封閉包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板）， 加入封閉液。質(zhì)控項(xiàng)目：封閉體積，溫度，時(shí)間，過程監(jiān)控。質(zhì)檢項(xiàng)目：封閉前檢驗(yàn)包被均一性。7抽干封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。質(zhì)控項(xiàng)目：過程監(jiān)控。8干燥反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進(jìn)行干燥。質(zhì)控項(xiàng)目：溫度，濕度，時(shí)間，過程監(jiān)控等。9密封包裝將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。 質(zhì)控項(xiàng)目：密封性能，標(biāo)示及效期等。10反應(yīng)板（半成品）檢驗(yàn)對(duì)裝袋密封后的反應(yīng)板進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、板內(nèi)變異、板

12、間變異。(二滴配過程1酶結(jié)合物的制備（根據(jù)各產(chǎn)品實(shí)際情況，該步驟可不進(jìn)行）采用常規(guī)過碘酸鈉乙二醇法將相關(guān)的抗體（或抗原）標(biāo)記辣根過氧化物酶（或其他 酶），酶標(biāo)記后的抗體（或抗原）應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑保存于低溫。質(zhì)控項(xiàng)目：標(biāo)記方法，過程控制。2酶結(jié)合物的鑒定(1 功能性實(shí)驗(yàn)將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。5 / 9(2 穩(wěn)定性將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋，進(jìn)行 2-8，及熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，滴配結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3酶結(jié)合物稀釋液按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在 2-8保存，并于規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：酶結(jié)合物稀釋液配方，pH 值。4酶結(jié)合物工

13、作濃度的滴配取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應(yīng)板進(jìn)行滴配。測定系 列標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定使體系達(dá)到最優(yōu)的酶結(jié)合物工作濃度。5酶結(jié)合物工作液配制將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，用配套的反應(yīng)板進(jìn)行檢驗(yàn)，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測定值、定量產(chǎn) 品應(yīng)作校準(zhǔn)品線性檢測。6酶結(jié)合物工作液的分裝按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號(hào)、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。7酶結(jié)合物工作液（半成品）檢驗(yàn)對(duì)分裝后的酶結(jié)合物工作液進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、靈敏度、校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線 線性、質(zhì)控品測定值。(三 校準(zhǔn)品、陰/陽

14、性對(duì)照或質(zhì)控品的制備1稀釋液按稀釋液的配方配制，存放在 2?8或-20保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：稀釋液配方，pH 值。2校準(zhǔn)品、陰/陽性對(duì)照或質(zhì)控品的配制校準(zhǔn)品、陰/陽性對(duì)照或質(zhì)控品的配制應(yīng)具有量值溯源性，可參照國家標(biāo)準(zhǔn)品、WHO 標(biāo)準(zhǔn)品 或其他級(jí)別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行配制。6 / 9質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，準(zhǔn)確性、劑量反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。 3校準(zhǔn)品、陰/陽性對(duì)照或質(zhì)控品的分裝按工藝要求分裝校準(zhǔn)品、陰/陽性對(duì)照或質(zhì)控品。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號(hào)、數(shù)量，分裝量。4校準(zhǔn)品、陰/陽性對(duì)照或質(zhì)控品（半成品）檢驗(yàn)對(duì)分裝后的校準(zhǔn)品、陰/陽性對(duì)照或質(zhì)控品進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝

15、量、準(zhǔn)確性、劑量 反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。(四 化學(xué)發(fā)光底物的制備1底物緩沖液按底物緩沖液的配方配制，存放在 2-8保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：底物緩沖液配方，pH 值。2化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的配制分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑質(zhì)控項(xiàng)目：氧化劑和發(fā)光劑配方。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，本底、發(fā)光強(qiáng)度。3化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的分裝按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號(hào)、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。4化學(xué)發(fā)光底物（半成品）檢驗(yàn)對(duì)分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、本底、靈敏度

16、、發(fā)光強(qiáng)度。 （五）銪標(biāo)記物的制備針對(duì)不同的標(biāo)記生物原料，確定不同的標(biāo)記制備工藝，包括銪-DTTA 與標(biāo)記生物原料的比 例，標(biāo)記溫度和標(biāo)記時(shí)間、標(biāo)記得率的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)等。在實(shí)際操作過程中要求嚴(yán)格按照 SOP 進(jìn) 行操作（六）凍干各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體，具有一定的7 / 9形狀，復(fù)溶完全、迅速，呈澄清透明液體。（七）分裝、燈檢和貼簽分裝量用減重稱量法進(jìn)行測量，把質(zhì)量換算成體積后進(jìn)行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各 組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。（八）包裝根據(jù)試劑盒包裝 SOP 要求及說明書的要求，以流水線操作形式進(jìn)行包裝。包裝時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢查 品名

17、、批號(hào)、裝量，認(rèn)真核對(duì)各物料數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。四、質(zhì)量控制（一）半成品質(zhì)量控制1半成品抽樣檢驗(yàn)人員按試劑的批號(hào)，根據(jù)抽樣申請(qǐng)單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號(hào)標(biāo)記、待檢。 2質(zhì)控品的要求用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陰/陽性樣品符合率，靈敏度（最低檢出量），特異性， 檢測范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標(biāo)，如具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使 用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化的企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)。如無國家標(biāo) 準(zhǔn)品（參考品），可采用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn) 品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn) 品的質(zhì)量。3半成品檢驗(yàn)根據(jù)各個(gè)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括準(zhǔn)確性、靈 敏度、特異性、精密性、相關(guān)性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對(duì)每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8定期作穩(wěn)定性 考核，同時(shí)作 37熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（二）成品質(zhì)量控制1成品抽樣產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號(hào)、實(shí)際包裝量、抽樣申請(qǐng)單的要求進(jìn)行抽樣，同 時(shí)填寫抽