CTC循環(huán)腫瘤細胞

1、1會計學(xué)CTC循環(huán)腫瘤細胞循環(huán)腫瘤細胞腫瘤循環(huán)細胞的特性腫瘤循環(huán)細胞的特性 稀有性稀有性：每ml血液約107個白細胞中僅有1個CTC 非典型形態(tài)非典型形態(tài)：比血液細胞、正常組織細胞的體積大、細胞核大，不規(guī)則，核質(zhì)比高、不容易發(fā)生形變 異質(zhì)性異質(zhì)性：細胞表面抗原標志物表達差異、攜帶不同的分子信息、轉(zhuǎn)移潛力差異 易聚集成團易聚集成團CTM：成瘤遷移能力是CTC的23-50倍外周血細胞的遮蔽阻礙了它們的分離與分子鑒定，因此的檢測是制約其臨床應(yīng)用的關(guān)鍵循環(huán)腫瘤細胞循環(huán)腫瘤細胞的概念與特性的概念與特性循環(huán)腫瘤細胞的特性循環(huán)腫瘤細胞的特性CTCs可以是間質(zhì)型、上皮型、上皮間質(zhì)混合型、成團的CTCs(CTM

2、)CTCs檢測的臨床可行性檢測的臨床可行性健康狀態(tài)癌前病變惡性腫瘤腫瘤轉(zhuǎn)移CTC檢測臨床意義臨床意義CTC監(jiān)測分析耐藥性檢測耐藥性檢測動態(tài)跟蹤CTC數(shù)目，判斷是否產(chǎn)生耐藥性腫瘤復(fù)發(fā)檢測腫瘤復(fù)發(fā)檢測CTC數(shù)目增多是腫瘤復(fù)發(fā)的前兆腫瘤新藥物的開發(fā)腫瘤新藥物的開發(fā)配合研制新的抗腫瘤藥物體外早期診斷體外早期診斷腫瘤在1mm時，血液中可檢測出CTC預(yù)后判斷預(yù)后判斷根據(jù)治療前后CTC個數(shù)判斷預(yù)后及存活時間化療藥物的療效評判化療藥物的療效評判根據(jù)化療前后CTC數(shù)目變化，確定藥物是否有效循環(huán)腫瘤細胞的檢測循環(huán)腫瘤細胞的檢測循環(huán)腫瘤細胞的循環(huán)腫瘤細胞的分析鑒定分析鑒定循環(huán)腫瘤細胞的分離富集循環(huán)腫瘤細胞的分離富集

3、CTCs分離分離、分型、分析、分型、分析原 理技術(shù)產(chǎn)品免疫捕獲法(根據(jù)細胞表面標志物)陽性富集法：CellsearchTM系統(tǒng)CTC芯片（CTC-chip）MACSCell Separation陰性篩選法：Easy SepCyttel過濾法(根據(jù)細胞大小)ISET膜過濾 密度梯度離心（根據(jù)細胞密度）OncoQuick分離體系CTCs的檢測方法及代表技術(shù)產(chǎn)品的檢測方法及代表技術(shù)產(chǎn)品magnet Anti-EpCAM Coated ferrofluids7.5mlAnti-CK (epithelial cells)Anti-CD45 (WBCs)DAPI (viable cells )Automa

4、ted fluorescence detection systemmagnet使用抗EpCAM抗體抗體包被磁微粒，使其與腫瘤細胞結(jié)合，在特定磁場作用下達到分離CTC的目的。陽性富集陽性富集-CellsearchTMCTCWBCCellsearchTM CTCs鑒定鑒定上皮來源的CTCs的判定：DAPI（細胞核）陽性、角蛋白CKs陽性、CD45陰性芯片的表層排布了78 000個包被抗 EpCAM抗體的微位點血液樣本流經(jīng)芯片時，抗體與腫瘤細胞結(jié)合粘附在芯片上制造相對困難，成本昂貴，顯微位點周圍的血流通暢性限制了與抗體覆蓋位點接觸的CTC數(shù)量陽性富集陽性富集- CTCs-Chip 原理原理：聯(lián)合上皮

5、細胞標志及腫瘤特異性標志通過免疫磁珠分選特異性腫瘤的CTCs聯(lián)合抗MUC1和EpCAM抗體檢測乳腺癌和直腸癌通過RT-PCR擴增腫瘤標志物來鑒定CTCs特點特點：較單一使用EpCAM抗體更特異不適用于EpCAM和CK陰性或弱化的CTCsPCR鑒定敏感性高，但易造成假陽性陽性富集- Adna Test 檢測系統(tǒng) Cyttel/Cytelligen 檢測系統(tǒng) 原理原理: 利用CD45磁珠抗體吸附白細胞，在磁場作用 下去除白細胞，CTCs被富集沉淀 特點：特點： 可檢出EpCAM、CK陰性的間質(zhì)型CTCs 樣本處理步驟多，CTCs易丟失步驟較多，CTCs容易丟失鑒定不穩(wěn)定 判定標準：DAPI陽性、C

6、D45陰性，8號染色體擴增；特異性不足HepG2 cells stained with anti-KL1濾膜法濾膜法 原理： 根據(jù)腫瘤細胞與白細胞密度不同，通過梯度離心分離CTCs OncoQuick分離體系 方法： 密度梯度離心后，白細胞通過多孔濾膜被濾除，而CTCs被富集在介 質(zhì)層中，洗脫后得到CTCs. 特點：可分離CK陽性和陰性細胞 局限性：CTCs遷移可能至血漿層、紅細胞層和粒細胞層而丟失；CTCs微栓子可能沉入紅細胞層而丟失；與腫瘤細胞特性、離心時間和溫度等有關(guān)；用血量多15-30ml技術(shù)技術(shù)優(yōu)勢優(yōu)勢局限性局限性陽性率陽性率樣本量樣本量CellsearchTM特異性好、重復(fù)性好、可

7、自動化不能分型、漏檢轉(zhuǎn)移侵襲能力較強的間質(zhì)型CTCs及CTM71%（MBC）47%（MCRC）78%（AIPC）7.5mLCTCs-chip(HB-chip)特異性好、靈敏度高、HB芯片可富集到CTM不能分型、漏檢轉(zhuǎn)移侵襲能力較強的間質(zhì)型CTCs93%(MPC )0.9-5mlCyttel可檢測出EpCAM、CK陰性的CTC、未對CTC進行任何標記不能分型、鑒定不穩(wěn)定、鑒定時易發(fā)生CTCs丟失64.5%(NSCLC)5mLISET膜過濾CTC丟失少、適用于CK陰性腫瘤、適用于形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)和基因特異性分析不適合小神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細胞、特異性低、殘留大的白細胞80%（BC）1-15ml腫瘤循環(huán)細胞

8、的特性腫瘤循環(huán)細胞的特性 稀有性稀有性：每ml血液約107個白細胞中僅有1個CTC 非典型形態(tài)非典型形態(tài)：比血液細胞、正常組織細胞的體積大、細胞核大，不規(guī)則，核質(zhì)比高、不容易發(fā)生形變 異質(zhì)性異質(zhì)性：細胞表面抗原標志物表達差異、攜帶不同的分子信息、轉(zhuǎn)移潛力差異 易聚集成團易聚集成團CTM：成瘤遷移能力是CTC的23-50倍外周血細胞的遮蔽阻礙了它們的分離與分子鑒定，因此的檢測是制約其臨床應(yīng)用的關(guān)鍵循環(huán)腫瘤細胞循環(huán)腫瘤細胞的概念與特性的概念與特性magnet Anti-EpCAM Coated ferrofluids7.5mlAnti-CK (epithelial cells)Anti-CD45 (WBCs)DAPI (viable cells )Automated fluorescence detection systemmagnet使用抗EpCAM抗體抗體包被磁微粒，使其與腫瘤細胞結(jié)合，在特定磁場作用下達到分離CTC的目的。陽性富集陽性富集-CellsearchTMCTCWBC芯片的表層排布了78 000個包被抗 EpCAM抗體的微位點血液樣本流經(jīng)芯片時，抗體與腫瘤細胞結(jié)合粘附在芯片上制造相對困難，成本昂貴，顯微位點周圍的血流通暢性限制了與抗體覆蓋位點接觸的CTC數(shù)量陽性富集陽性富集- CTCs-Chip 原理原理：聯(lián)合上皮細胞標志及腫瘤特異性標志通過