973標(biāo)書黃芪對腹膜透析效能及腹膜間皮細(xì)胞與腹腔免

1、百度文庫 - 讓每個(gè)人公平地提升自我登記序號：方案類別：分類代碼：項(xiàng)目編號：科技項(xiàng)目方案設(shè)計(jì)任務(wù)書項(xiàng)目名稱：黃芪對腹膜透析效能及腹膜間皮細(xì)胞與腹腔免疫功能的影響擔(dān)當(dāng)單位：單位地址：郵編：項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：電話： 職務(wù)職稱：主管部門：南京市衛(wèi)生局填報(bào)日期： 2002 年 04 月 26 日江蘇省科學(xué)技術(shù)廳二 oo 一年制14一、立項(xiàng)依據(jù)：1、國內(nèi)外爭辯現(xiàn)狀、進(jìn)展趨勢及理論實(shí)踐依據(jù)：隨著腹膜透析（peritoneal dialysis，pd）技術(shù)的不斷提高和透析理論的日趨完善，尤其是 1976 年 popovich 提出的連續(xù)非臥床腹膜透析（continuous ambulatory peritonea

2、l dialysis，capd）治療方法帶來了腹膜透析的空前富強(qiáng)。近年來的流行病學(xué)資料表明接受腹膜透析治療的終末期腎功能不全（end-stage renal disease，esrd）患者正以每年%的比例快速增長，目前全球已有超過 120000的患者在接受腹膜透析治療。腹膜透析因其相對于血液透析更高的生活質(zhì)量、顯 著的殘余腎功能愛護(hù)、優(yōu)于或等于血液透析的生存率以及較少的資金花費(fèi)，故有 作者提出，腹膜透析應(yīng)當(dāng)是腎臟替代療法的首選1,2。然而，隨著腹膜透析患者壽命的延長，腹膜透析的遠(yuǎn)期并發(fā)癥腹膜功能衰竭 已成為 esrd 患者透析技術(shù)性失敗的最重要的緣由3，并成為制約腹膜透析進(jìn)展的“瓶頸”。 資料

3、顯示約 1/3 的腹膜透析患者 6 年后因腹膜功能衰竭而退出透析治療。腹膜功能衰竭與長期腹膜透析后腹膜結(jié)構(gòu)和功能破壞進(jìn)而導(dǎo)致腹膜超濾失 敗以及溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙親熱相關(guān)4。腹膜透析液的生物不相容性是導(dǎo)致腹膜功 能衰竭的首要緣由，腹膜間皮細(xì)胞作為腹膜組成部分在這一過程中扮演著重要角 色。近年來隨著人腹膜間皮細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)培育方法和腹膜透析動物模型的確立，腹膜 功能衰竭的機(jī)理得以初步闡明。腹膜間皮細(xì)胞在長期非生理性透析液刺激下，轉(zhuǎn) 移生長因子（tgf-）mrna 過度表達(dá)，tgf-作為細(xì)胞增殖與細(xì)胞外基質(zhì)合成的重要調(diào)整因子，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)合成增加和腹膜纖維化5，最終導(dǎo)致腹膜超 濾失敗和溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙。同

4、時(shí) tgf-也是調(diào)整細(xì)胞凋亡的重要細(xì)胞因子， 組織病理學(xué)證明腹膜功能衰竭的重要特征表現(xiàn)為腹膜間皮細(xì)胞的丟失，過多的tgf-表達(dá)將增加間皮細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致間皮細(xì)胞的完整性受到破壞，爭辯表明 完整的間皮細(xì)胞層可以顯著延緩腹膜纖維化的進(jìn)程。其次，腹膜透析的主要并發(fā) 癥腹膜感染也是導(dǎo)致腹膜功能衰竭的重要緣由,反復(fù)的炎癥刺激使腹膜局部高水 平 tgf-持續(xù)存在致使腹膜發(fā)生纖維化和硬化6。目前公認(rèn)長期腹膜透析時(shí)腹腔細(xì)胞免疫功能抑制是導(dǎo)致腹膜反復(fù)感染的主要緣由,尤其是被認(rèn)為是腹腔細(xì)胞免 疫功能最重要組成部分和腹膜抵制細(xì)菌感染第一道屏障的巨噬細(xì)胞功能的明顯 抑制。爭辯表明，腹膜在長期非生理性透析液的刺激下，巨

5、噬細(xì)胞功能受到抑制， 當(dāng)腹膜發(fā)生感染時(shí)透析患者腹腔巨噬細(xì)胞功能指標(biāo)包括吞噬指數(shù)、白細(xì)胞介素 1（il-1）和腫瘤壞死因子（tnf-）水平顯著降低，假如改用更符合生理?xiàng)l件的透析液則可以使腹腔巨噬細(xì)胞功能得到明顯增加，從而增加腹膜對感染的抵制 力量，削減腹膜炎的發(fā)生7。最近，腹膜血管在腹膜功能衰竭中的作用也得到重視，充分的血流除了能有效增加腹膜的抵制力削減腹膜炎的發(fā)生外8，也是維持長期腹膜透析患者腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能的重要因素。腹膜血管血流量削減時(shí)腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和腹膜超濾率均顯著下降9，爭辯顯示長期腹膜透析患者腹膜血管內(nèi)皮細(xì)胞依靠的血管舒張因子顯著削減，從而影響腹膜透析的效能，而如在腹膜透析液中添 加擴(kuò)血管

6、物質(zhì)硝普納則能有效提高腹膜透析患者的透析效果?；谏鲜鰻庌q結(jié)果，近年來臨床醫(yī)師始終致力于兩方面的爭辯。一是爭辯更符合生理?xiàng)l件以及不影響腹膜免疫功能的全新的腹膜透析液。雖然已有諸如含多聚糖、含氨基酸、含碳酸氫根等多種透析液的體外試驗(yàn)的報(bào)道，但事實(shí)上全部這些透析液并不能完全替代葡萄糖作為滲透性物質(zhì)的作用，其臨床應(yīng)用前景尚不明確。另一方面，腎臟病醫(yī)師通過在現(xiàn)有的透析液中添加一些物質(zhì)來達(dá)到愛護(hù)和改善腹膜功能的目的。有爭辯表明在透析液中加入雙嘧莫達(dá)能顯著降低小鼠腹透液中 tgf-的含量，而加入透亮質(zhì)酸可以在愛護(hù)腹膜間皮細(xì)胞方面起到肯定的效果。中藥黃芪是一種含有多糖、甙、黃酮和微量元素等多種成分的物質(zhì)，其

7、具有多重藥理作用10。黃芪能顯著抑制炎癥因子 tgf-的表達(dá)，從而延緩肝臟、腎臟等多種臟器疾病時(shí)發(fā)生纖維化的進(jìn)程；能明顯減緩人胚二倍體細(xì)胞自然年輕過 程延長細(xì)胞壽命約 1/3 左右11；能有效地調(diào)整細(xì)胞免疫功能，通過向小鼠腹腔注射黃芪可以發(fā)覺腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能得到增加，從而增加腹膜抗菌力量；黃芪 還具有擴(kuò)血管的作用，爭辯顯示其能顯著抑制血管收縮物質(zhì)內(nèi)皮素的釋放，從而 可能起到擴(kuò)張血管增加血流量的作用12。依據(jù)黃芪的上述作用，可以推想，在腹膜透析液中加入黃芪可以起到延長腹膜間皮細(xì)胞的壽命、抑制間皮細(xì)胞 tgf- 的分泌、提高腹腔巨噬細(xì)胞功能、改善局部微循環(huán)，從而阻擋/延緩腹膜纖維化 和防止腹膜

8、感染的發(fā)生，達(dá)到阻擋/延緩腹膜功能衰竭的目的。然而關(guān)于黃芪在 腹膜透析中的應(yīng)用尚無相關(guān)報(bào)道。主要參考文獻(xiàn)：1. thodis e, passadakis p, vargemezis v, oreopoulosdialysis: better than, equal to, or worse than hemodialysis? data worth knowing before choosing a dialysis modality. perit dial int ,2001; 21:25-35.2. van biesen w,vanholder r, lameirerole of peri

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13、引起的 tgf-過度表達(dá)中的作用，通過動物試驗(yàn)從組織病理學(xué)角度觀看黃芪對腹膜間皮細(xì)胞完整性的維護(hù)和腹膜纖維化的抑制以及巨噬細(xì)胞功能調(diào)整等方面的作用，通過臨床觀看了解黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能和免疫功能的影響，從不同層面了解黃芪在阻擋/延緩腹膜功能衰竭中的作用及其機(jī)制，為臨床上改善長期腹膜透析患者透析療效供應(yīng)一種新的治療方法。爭辯意義：隨著臨床腹膜透析的廣泛應(yīng)用以及腹膜透析患者壽命的延長，臨床上因長期腹膜透析導(dǎo)致腹膜功能衰竭進(jìn)而透析失敗的患者越來越多。中藥黃芪在我國分布廣泛且有 2000 多年的應(yīng)用歷史。目前臨床上已有黃芪注射液制劑，并且由于黃芪可以直接注入腹腔，因此通過從不同層面了解黃芪在阻擋/延緩腹

14、膜功能衰竭中的作用及其機(jī)制的爭辯，在臨床上推廣使用黃芪來阻擋/延緩腹膜功能衰竭從而延長 esrd 患者腹膜透析時(shí)間、提高透析質(zhì)量、削減透析失敗率，提高腹膜透析遠(yuǎn)期療效具有廣泛的應(yīng)用前景。3、技術(shù)查新：參見附頁。二、爭辯內(nèi)容：爭辯內(nèi)容：本課題接受體外細(xì)胞培育、動物試驗(yàn)、組織病理學(xué)與臨床相結(jié)合的系統(tǒng)爭辯方法，從多個(gè)方面爭辯中藥黃芪在防止/延緩腹膜功能衰竭中的作用，并從不同層面和角度解釋其作用機(jī)理。通過體外人腹膜間皮細(xì)胞培育了解黃芪在抑制間皮細(xì)胞 tgf-表達(dá)方面的作用；通過動物試驗(yàn)從組織病理學(xué)的角度直觀了解黃芪在間皮細(xì)胞愛護(hù)以及在阻擋/延緩腹膜纖維化中的作用；通過臨床應(yīng)用，了解黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能以

15、及免疫功能方面的影響。關(guān)鍵技術(shù)和技術(shù)難點(diǎn)：（1） 體外人腹膜間皮細(xì)胞培育及干預(yù)方法的建立；（2） 動物腹膜透析模型及干預(yù)方法的建立；（3） tgf-、tnf-免疫組化檢測；（4） 巨噬細(xì)胞吞噬功能的誘導(dǎo)及檢測；（5） 標(biāo)準(zhǔn)腹膜透析腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能轉(zhuǎn)變的爭辯。課題的特色和創(chuàng)新之處：（1） 腹膜功能衰竭是一多因素參與的病理過程，由于西藥作用較為單一，因此在如何有效阻擋/延緩腹膜功能衰竭的爭辯中顯得較為局限，而中藥黃芪具有多重藥理作用，在阻擋/延緩腹膜功能衰竭的爭辯中具有較大的優(yōu)勢。（2） 由于部分藥物無法進(jìn)行腹腔內(nèi)應(yīng)用，因此以往的爭辯大多停留在體外試驗(yàn)的水平，而黃芪可以平安地應(yīng)用于腹腔內(nèi)注射，本課題的

16、爭辯成果能夠直接應(yīng)用于臨床。（3） 通過從體外細(xì)胞培育、動物試驗(yàn)、組織病理學(xué)以及臨床全面地對黃芪在阻擋/延緩腹膜功能衰竭中的作用及機(jī)制進(jìn)行爭辯，至今尚未見類似的爭辯報(bào)道。主要技術(shù)指標(biāo)：（1） 黃芪抑制間皮細(xì)胞tgf-分泌的指標(biāo)；（2） 反映巨噬細(xì)胞免疫功能的tnf-分泌水平以及吞噬功能的指標(biāo)；（3） 黃芪對腹膜間皮細(xì)胞的維護(hù)和抑制纖維化的指標(biāo)；（3）黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響。三、爭辯方法及技術(shù)路線：爭辯工作總體思路：本爭辯首先通過人腹膜間皮細(xì)胞體外培育的方法在培育基中添加黃芪觀看 其抑制由高糖引起的間皮細(xì)胞 tgf-過度表達(dá)中的作用，了解黃芪與腹膜間皮細(xì)胞 tgf-表達(dá)之間的關(guān)系。然后通過腹膜

17、透析動物模型從組織病理學(xué)角度直觀了解黃芪對腹膜間皮細(xì)胞損傷的愛護(hù)以及抑制腹膜纖維化方面的作用。最終通過在臨床上的應(yīng)用了解黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能以及腹膜免疫功能的影響，并探討其作用機(jī)制。從而為臨床上阻擋/延緩長期腹膜透析患者因腹膜纖維化、腹膜反復(fù)感染導(dǎo)致的腹膜功能衰竭供應(yīng)新的治療方法。技術(shù)路線：（1） 體外細(xì)胞培育部分： 從擇期手術(shù)小網(wǎng)膜切除的標(biāo)本獲得人網(wǎng)膜組織，依據(jù)文獻(xiàn)方法培育間皮細(xì)胞，通過調(diào)整原代（1-9 代）人腹膜間皮細(xì)胞培育液中葡萄糖濃度，在%、%葡萄糖條件下觀看添加與不添加黃芪對腹膜間皮細(xì)胞 tgf- 表達(dá)的影響，tgf-用免疫組化方法檢測。（2） 動物模型部分： 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)腹膜透析小鼠動物

18、模型建立方法建立小鼠腹膜透析模型，分別接受添加和不添加黃芪的葡萄糖濃度為%、%的透析液進(jìn)行腹膜透析， 8 周后取小鼠腹膜組織，10%甲醛溶液固定、脫水、 石蠟包埋后 he、pas、pasm 染色，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。（3） 臨床部分： 在臨床上選擇長期腹膜透析患者，接受自身對比的方法觀看添加黃芪前后患者腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能和患者透析液中 tnf-濃度以及巨噬細(xì)胞吞噬功能的變化。（4） 總結(jié)資料，分析結(jié)果。爭辯方法：（1） 組織細(xì)胞培育方法。（2） 動物試驗(yàn)學(xué)爭辯方法。（3） 組織病理學(xué)方法。（4） 生化分析方法。四、現(xiàn)有爭辯條件和工作基礎(chǔ)：1、現(xiàn)有工作基礎(chǔ)：-臨床上有大量的長期腹膜透析的

19、隨訪病人。爭辯者已成功把握了人腹膜間皮細(xì)胞培育方法和腹膜透析小鼠動物模型建立方法，具備了 tgf-、tnf- 的檢測力量，以及本爭辯所需的組織病理學(xué)檢查條件。同時(shí)在預(yù)試驗(yàn)中已經(jīng)得出黃芪能有效抑制體外培育人腹膜間皮細(xì)胞 tgf-的表達(dá)。因此，本爭辯具有很強(qiáng)的可行性和較高的成功率。2、項(xiàng)目負(fù)責(zé)人近年來爭辯成果簡介近年發(fā)表相關(guān)論文： 近年?duì)庌q成果：3、爭辯隊(duì)伍：4、支撐條件：五、方案進(jìn)度：1、總進(jìn)度和年度進(jìn)度：課題預(yù)備，訂購動物與試劑。細(xì)胞培育爭辯部分。動物試驗(yàn)部分。臨床部分?？偨Y(jié)資料，分析結(jié)果，科研鑒定。2、項(xiàng)目完成形式：（1） 項(xiàng)目完成可通過論文形式考察，估量可在核心期刊發(fā)表論文4-6 篇。（2

20、） 細(xì)胞培育爭辯部分通過對 tgf-表達(dá)的檢測可以了解高糖在腹膜間皮細(xì)胞 tgf-表達(dá)中作用，了解黃芪在拮抗tgf-過度表達(dá)中的作用。（3） 動物試驗(yàn)部分通過腹膜組織病理學(xué)檢查了解黃芪對腹膜間皮細(xì)胞損傷的愛護(hù)以及抑制腹膜纖維化方面的作用，可通過病理切片形式表達(dá)。（4） 臨床爭辯部分可通過治療前后患者tgf-、tnf-水平以及巨噬細(xì)胞吞噬功能了解腹膜功能的轉(zhuǎn)變，用差異性來表示。（5） 通過成果考核。（6） 成果可達(dá)到國際先進(jìn)水平。六、項(xiàng)目爭辯預(yù)期成果及效益：預(yù)期達(dá)到的主要技術(shù)指標(biāo)：（1） 黃芪有效抑制體外培育人腹膜間皮細(xì)胞的tgf-的分泌。（2） 應(yīng)用黃芪后在腹膜透析動物模型腹膜組織病理檢查中發(fā)覺黃芪能維護(hù)腹膜間皮細(xì)胞的完整性和抑制腹膜纖維化的發(fā)生。（3） 黃芪能改善腹膜透析病人的腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能和增加巨噬細(xì)胞的免疫功能。（4） 該爭辯成果預(yù)期達(dá)到國際領(lǐng)先水平，為臨床上阻擋/延緩腹膜功能衰竭提 供新的治療方法。經(jīng)濟(jì)效益和社會效益：通過本課題的系列爭辯，預(yù)期可以明確黃芪有效阻擋/延緩長期腹膜透析病 人腹膜功能衰竭的進(jìn)程，從而延長腹膜透析時(shí)間、提高腹膜透析質(zhì)量。從經(jīng)濟(jì)效 益來講，腹膜透析是一種價(jià)格低廉的腎臟替代療法，長期的腹膜透析必將大大減 輕社會及其個(gè)人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。從社會效益來講，腹膜