虎杖中白黎蘆醇提取工藝研究

1、虎杖中白黎蘆醇提取工藝研究虎杖(polygonum cuspidtum sieb)為蓼科葛屬多年 生草本植物的干燥根莖，主要含有恵釀類、罠類、水 溶性多糖和棘質(zhì)等成份【»白藜蘆醇在植物中分布廣, 目前至少己經(jīng)在21個科、31個屈、70余種植物中發(fā) 現(xiàn)了白藜蘆醇.足虎杖的主要功效成分。研究表明： 它對心肌細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、對改善微循環(huán)等有 顯苦作用；此外白藜蘆醇能減輕多種因素造成的組織 器官損傷，ji有保護(hù)胛臟、抑制血小板聚集、鎮(zhèn)咳平 喘、抗菌、抗病秦、降血脂及抗脂質(zhì)過氧化等作用hl 生物酶法越來越多的應(yīng)用于中藥有效成分提取.它具 有提取效率高，不易造成有限資源浪費和污染的特點,

2、成為現(xiàn)代提取方法的研究熱點叭冃前捉取白藜蘆醇主要以虎杖為原料，常用的捉 取方法是溶劑捉取法、堿提取法、酶提取法、微波提 取以及超聲波提取。本實驗通過比較酶法提取和溶劑 提取兩種方法，選出白藜蘆醇制備的最優(yōu)方法，提髙 白按蘆醉的得率，為白藜蘆酹的進(jìn)一步工業(yè)化生產(chǎn)提 供依據(jù)。1材料與方法1.1材料與儀器1.l1材料與試劑白藜蘆醇對照品純度99%,國家藥品生物制品鑒 定所；虎杖塊莖，湖南桑植縣八大公山，粉碎后過篩; 纖維素酶，上海們奧生物科技有限公司；乙醉為分析 純，廣州化學(xué)試劑廠。i.l2儀器與設(shè)備tu-180紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器 有限責(zé)任公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海虹析電了儀器儀表光度

3、注值,x為濃度mg/ml）, r2-0.9995,線性范倒:° °0204060fig.1 sundird cune of resveratrol 溶劑法提取工藝的優(yōu)化2.22.2?!0.50 r3025仃限公司；shz-i1i循環(huán)水真空泵，上海鈿華層析設(shè)笛 廠；便攜式ph計，phb-5上海偉業(yè)儀器廠；電熱恒 溫水浴鍋，北京ifj長風(fēng)儀器儀農(nóng)公司；分析天平，上 海天平儀器廠。1.2方法1.2.1原料處理將虎杖塊莖粉碎，并篩分為一定粒徑（60目）的 粉末。1.2.2溶劑法提取白鑿蘆醉準(zhǔn)確稱取粒徑60 h虎杖粉末l00 g,置尸100 ml 容雖瓶中，按一定的料液比加入60%乙

4、皤溶液，調(diào)節(jié) 樣品溶液ph后邂封，稱重。放到一定溫度水浴鍋中 水浴-定時間.放置冷卻、補車、過濾，柿釋后，以 提取溶劑為參比，在紫外分光光度計上測定濾液在波 長331 nm、333 nm的吸光度，計算提取得率。1.2.3酹解法提取白藜蘆醇準(zhǔn)確稱取粒徑60目虎杖粉末l.oog.g于100ml 容量瓶屮，按一定的料液比加入60%乙醉溶液.加入 不同蜀的纖維素購，調(diào)節(jié)樣品溶液ph后密封，稱瓦 放到一定溫度水浴鍋中酶解-定時間。放置冷卻、補 龜、過濾，稀釋后，以提取溶劑為參比，在紫外分光 光度計上測定濾液在波長331 nm. 333 nm的吸光度, 計算捉取得率。124白藜蘆醇的測定與含量計算1.2.

5、4.1白藜蘆卿標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取白藜蘆醇對照品5.0 mg,用乙醇溶解于 50汕 容量瓶中.稀釋刻度、搖勻.分別吸取此液0 ml、0.1 ml、0.3 ml、0.5 ml、0.7 ml 于 10 ml 容粗 瓶中，加乙醉稀釋到刻度、搖勻，所得濃度為0.0 hg/mlx 1.0 pg/mls 3.0 pg/'ml, 5.0 pg/mls 7.0 |ig/ml 的溶液，以乙醉為參比，在紫外分光光度計上測定各 溶液在波長331 nm、333 nm的吸光度.以 a（ as” am對濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程。1.2.4.2提取得率的計算在波長331 nnx 333 rnn處進(jìn)行比色測定其吸光

6、 度后作差值aa（awrab3）»由回歸方程計算口藜蘆醉 濃度，再由稀釋倍數(shù)計算出提取液中白藜蘆醇的含量。 白藜蘆醇的提取得率計算公式如下：門藜蘆醇得率/%2結(jié)果與分析2.1白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析，白藜蘆醇濃度和吸光 度差值的線性回歸方程為：y=0.0072x+0.0002（y為吸80 100料渡比圖2料液比對白葉蘆薛提取得軍的形響flgj influence of sottd-liquid ratio on the extraction yield ofresveratrolph圖3 ph對白燥蘆薛提取得率的影響fig3 influence of ph on

7、the extnetion yidd of resveratrol 準(zhǔn)確稱取粒徑60目虎杖粉末1.00 g,置干100 ml 容星瓶中，加入60%乙腫，提取溫度50匸、提取時 間2h,確定適宜的料液比（實驗設(shè)計料液比為1:20、 1:35、1:50、1:65、1:80進(jìn)行比較）.由圖2可確定料 液比為1:50,然后分別進(jìn)行ph、提取溫度、捉取時間 單因素試驗（圖3圖5）,試驗結(jié)果表明，料液比、 ph.提取溫度、提取時間對白藜蘆醇提取得率有顯苦影響，所以確定這四個因素進(jìn)行正交試驗。0 50ro.o.o.o.o.0 20 111'020406080100120wt/r圖4溫度対白魏蘆酹捉取

8、得率的影晌fig.4 influence of bath temperature on the extraction yield ofresveratrol0.30 r0 00.結(jié)合單因素的試驗結(jié)果，在單閔素的基礎(chǔ)上設(shè)計 了以ph、料液比、提取溫度、提取時間為因素，做四 因索三水平的正交試驗，正交試驗結(jié)果如表由表1可知提取虎杖中白藝蘆醇的最佳工藝參數(shù) 為:a2b3c2d）.即ph-5,料液比1:65,提取溫度是 60-c.提取時k2h是溶劑法提取的躍隹工藝條件。 四因素中料液比對白藜蘆醇扭取得率影響最顯苦，其 次為ph值，然后是提取溫度，提取時間影響最小。 2.3溶劑提取法優(yōu)化工藝的驗證準(zhǔn)確稱

9、取粒徑60冃虎杖粉末l.oog,各五份，分 別譽flooml容最瓶中，加入60%乙醇65ml,調(diào) 節(jié)ph為5,在60 *c水浴中提取2 ho放置冷卻、補重, 稀釋后，以60%乙醇為參比，在紫外分光光度計上測 定提取液在波長331 nm、333 nm的吸光度，計算平 均提取得率為0.496%rsd為3.3%。2.4酶解法提取】藝的優(yōu)化2.4.1單因素試驗0.80 r0.25時(bj/h圏5時間對白藝蘆ii提取礙率的影響flg5 influence of dme on the extraction yield of resveratrol 222正交試驗605040ao.o.0.30 0叫1020

10、3040506070礎(chǔ)- 號a(ph)因素d（提取葉r/b）提取卑/%b （料凌 比）c (捉取混</v)11(3)1(1:35)1(40)10391212(1:50)2(60)2(3)0.482313(1:65)3(80)3<4)0.45542(5)1230.436522310.464623120.46«73(7)1320.357832130361933210.46213281.184l2201.3171368l3071.3801.3071.1801.385l2761.2520.44303950.4070.4390.4560.4360.4600.4370 3930.46

11、10.4250.4170.0630.0660.0530.022表1溶劑提取法正交試驗結(jié)果table 1 results of the orthogonal experiment for solvent extraction optimizetioaresveratrolq.3q 卜0.80 r料液比0b 6料液比對白藜蘆酵提取得率的影響hg.6 influence of solid-liquid ratio on the extraction yield ofph圖7 ph對白專蘆酢提取得率的影響fig.7 influence of ph on the extnetion yieki of r

12、esveratrol 準(zhǔn)確稱取粒徑60目虎杖粉末1.00 g,宜于100ml 容量瓶中.加入60%乙醇，加入10 mg的纖維素酶， 提取溫度50 0提取時間2 h,確定適宜的料液比（實 駿設(shè)計料液比為1:20、1:30、1:40、1:50、1:60進(jìn)行比 較人由圖6可確定料裁比為1:40,然后分別進(jìn)行ph.80.70.60.50406o.o.o.c0.30號因素提取犁/%a(ph)b溝解 時剛h)c (群解aji/xj)d (著液比)!h5)10)1(40)1(1:30)0.496212(1.5)2(50)2(1:40)0.662313(2)3(60)3(1:50)0.61942(6)1230

13、.654522310.680623120.77373(7)1320.801832130.619933210.676k.1.7771.9511.8881.852k：2j071.9611.9922.236k)2.0962.0682.1001.892h0.5920.6500.6290.6170.7020.6540.6640.745kj0.6990.6890.7000.631r0.1100.0390.0710.128«2曲解法正交試驗結(jié)果table 2 hesuks of the orthogonal experiment for enzy maticextraction酚解溫度、酶解時間用

14、因素試驗.試驗結(jié)果表明.料 液比、ph、瞬解溫度、悔解時間對白藜蘆醇提取紂率 有顯著彫響，所以確定這四個因素進(jìn)行正交試驗。0.90 r0300.20*111'1'10203040506070 m濕度,p圖8図解溫度對白蔡蘆舒提取得軍的影響fi斗8 influence of enzymatic temperature on the extractionyield of resveratrol0.90 r°叫.00.51.01.52.02-53.03.5時樹/hffl8酶解時間對白娶蘆醇提取得率的影響eig.8 influence of enzymatic time on

15、 the extraction yield ofresvcmtrol2.4.2正交試驗結(jié)合單因素的試驗結(jié)果，金單因素的基礎(chǔ)上設(shè)計 了以ph、料液比、酶解溫度、酶解時間為因素，做四 因素二水平的正交試驗，正交試驗結(jié)果如表2。由表2可知提取虎杖中白藜蘆醇的最佳工藝參數(shù) 為：a2b3cq2,即ph=6,料液比1:40,晦解溫度足 60酶解時間2 h足酶解法提取的最佳工藝條件.四因素中料液比對白藜蘆醇提取得率影響是顯若.其 次為ph ffb然后是齡解溫度，酶解時間影響垠小。 2.5酶解法優(yōu)化工藝的驗證準(zhǔn)確稱取粒徑60目虎杖粉末.00g,各五份，分 別置于100 ml容量瓶中，加入50%乙醇40 ml,調(diào) 節(jié)ph為6,在60 *0水浴中酶解2爪 放迸冷卻、補稀釋后.以50%乙醉為參比.在葉外分光光度計 上測定提取液在波長331 rnn、333 run的吸光度，計 算平均捉取樹率為0.942%, rsd為25%°3結(jié)論 3.1在單因素試驗的基礎(chǔ)上，通過正交試驗，確定了 溶劑袪提取口藜蘆