免疫學(xué)第四章 免疫球蛋白

1、思考題抗原B細(xì)胞漿細(xì)胞識(shí)別抗原增殖、分化產(chǎn)生與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合抗體與與Ag特異性特異性 結(jié)合結(jié)合發(fā)揮相應(yīng)的作用發(fā)揮相應(yīng)的作用Ig（IgG、IgM、IgD、IgE/ IgA）AbAb=Ig,IgAb；Ab是功能描述，是功能描述，Ig是化學(xué)結(jié)構(gòu)描述；是化學(xué)結(jié)構(gòu)描述；IgAb 用電泳法分析血清時(shí)，有抗體活性的用電泳法分析血清時(shí)，有抗體活性的Ig部分地存在于部分地存在于 -區(qū)，區(qū)，因此常有將因此常有將Ig與與 -球蛋白等同看待的現(xiàn)象。球蛋白等同看待的現(xiàn)象?，F(xiàn)已證明，現(xiàn)已證明，抗體并不都在抗體并不都在 -區(qū)，而位于區(qū)，而位于 -區(qū)的也不是都具有區(qū)的也不是都具有抗體活性?？贵w活性。一、免疫球蛋白的基本結(jié)

2、構(gòu)免疫球蛋白分子是由兩條相同的免疫球蛋白分子是由兩條相同的重鏈重鏈和和兩條相同的兩條相同的輕鏈輕鏈通過(guò)通過(guò)鏈間二硫鍵鏈間二硫鍵連接而連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。CLCLCH1VLVLVHVHCH2CH3C端N端恒定區(qū)恒定區(qū)可變區(qū)可變區(qū)FC 段Fab段鉸鉸鏈鏈區(qū)區(qū)補(bǔ)體結(jié)合補(bǔ)體結(jié)合Fc受體結(jié)合受體結(jié)合抗原結(jié)合部位抗原結(jié)合部位2、各功能區(qū)的作用、各功能區(qū)的作用L鏈可分為：VL、CLH鏈可分為：VH、CH1、CH2、CH3、 （其中IgM、IgE還有CH4） VL與VH：是結(jié)合抗原的部位。 CL、CH1：具有部分同種異型的遺傳標(biāo)志。 IgG的CH2和IgM 的CH3區(qū)是補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)，可激活補(bǔ)體

3、經(jīng)典途經(jīng)。補(bǔ)體抗原 IgG的CH3和IgE的CH4區(qū)可與細(xì)胞膜表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合。 1. 裂解部位：鉸鏈區(qū)重鏈間二硫鍵近羧基端（裂解部位：鉸鏈區(qū)重鏈間二硫鍵近羧基端（C端）端） 1.類：類：在同一種屬所有個(gè)體內(nèi)，根據(jù)在同一種屬所有個(gè)體內(nèi)，根據(jù)重重鏈鏈C區(qū)抗原特區(qū)抗原特異性的差異，將重鏈分為異性的差異，將重鏈分為5類，即類，即-鏈、鏈、-鏈、鏈、-鏈、鏈、-鏈、鏈、-鏈，相應(yīng)的免疫球蛋白分別為鏈，相應(yīng)的免疫球蛋白分別為IgG、IgM、IgA、IgD 和和IgE。 IsotypeIgGIgMIgAIgDIgEH-chainIgG IgMIgAIgDIgE2.亞類：亞類：同一類同一類Ig，根據(jù)，

4、根據(jù)Ig重鏈重鏈抗原性以及抗原性以及二硫鍵的數(shù)二硫鍵的數(shù)目和位置不同目和位置不同，又可分為若干個(gè)亞類。，又可分為若干個(gè)亞類。IgG有有 G1, G2, G3, G4四個(gè)亞類；四個(gè)亞類；IgA 有有A1, A2兩個(gè)亞類；兩個(gè)亞類；IgM 有有 2 個(gè)亞類：個(gè)亞類： IgM1 和和 IgM2 3.型：型：在同一種屬所有個(gè)體內(nèi)，根據(jù)在同一種屬所有個(gè)體內(nèi)，根據(jù)Ig輕鏈輕鏈C區(qū)抗原表區(qū)抗原表位的差異，可將位的差異，可將Ig輕鏈分為輕鏈分為和和，與此對(duì)應(yīng)的，與此對(duì)應(yīng)的Ig分為分為和和型。型。4.亞型：亞型：同一型同一型Ig中，根據(jù)輕鏈中，根據(jù)輕鏈C區(qū)區(qū)N端氨基酸排列的端氨基酸排列的差異，又可將差異，又可將

5、Ig分為亞型。分為亞型。1、 2 、 3、 4IgGIgMIgG1(品系品系A(chǔ)）IgG1 (品系品系B）IgG1(抗抗A抗原抗原）IgG1(抗抗B抗原抗原）第四節(jié)第四節(jié) 參與ADCCIgG是唯一能經(jīng)胎是唯一能經(jīng)胎盤輸給胎兒的抗體盤輸給胎兒的抗體通過(guò)胎盤特異性結(jié)合抗原中和作用激活補(bǔ)體溶解細(xì)胞聯(lián)合調(diào)理作用ADCC作用結(jié)合FcR通過(guò)胎盤和粘膜調(diào)理作用通過(guò)胎盤抗體的生物學(xué)作用抗體的生物學(xué)作用產(chǎn)生部位：淋巴結(jié)脾產(chǎn)生部位：淋巴結(jié)脾產(chǎn)生部位：粘膜淋巴組織產(chǎn)生部位：粘膜淋巴組織mIgMmIgMmIgDmIgD未成熟B細(xì)胞 僅表達(dá)mIgMmIgM成熟B細(xì)胞可同時(shí)表達(dá)mIgMmIgM與mIgDmIgD特性特性Ig

6、GIgMIgAIgDIgE重鏈重鏈主要存在形式主要存在形式單體單體五聚體五聚體單體、雙體單體、雙體單體單體單體單體分子量分子量(kD)150970160，400184188抗原結(jié)合價(jià)抗原結(jié)合價(jià)252,422血清含量血清含量(mg/ml)6161.50.530.03510-5占血清占血清Ig總量總量()758010102010.002血管內(nèi)分布血管內(nèi)分布()5080507550外分泌液中外分泌液中-+-+半衰期半衰期(日日)2021(IgG3為為7)10632開(kāi)始合成時(shí)間開(kāi)始合成時(shí)間生后生后3個(gè)月個(gè)月胚胎后期胚胎后期生后生后46個(gè)月個(gè)月任何時(shí)間任何時(shí)間較晚較晚血清含量達(dá)到正常成人水平的血清含量達(dá)

7、到正常成人水平的年齡年齡5歲歲6月月1歲歲412歲歲-通過(guò)胎盤通過(guò)胎盤+-經(jīng)典途徑活化補(bǔ)體經(jīng)典途徑活化補(bǔ)體+(IgG4除外除外)+-替代途徑活化補(bǔ)體替代途徑活化補(bǔ)體-+-結(jié)合吞噬細(xì)胞結(jié)合吞噬細(xì)胞+(IgG1，IgG3)+-+結(jié)合嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞結(jié)合嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞-+人各類人各類Ig的理化和免疫學(xué)性質(zhì)比較的理化和免疫學(xué)性質(zhì)比較 B細(xì)胞識(shí)別相應(yīng)抗原決定基活化增殖分化細(xì)胞克隆產(chǎn)生相應(yīng)抗體多克隆抗體的產(chǎn)生機(jī)理多克隆抗體的產(chǎn)生機(jī)理 （2）過(guò)程）過(guò)程免疫淋巴細(xì)胞制備：免疫淋巴細(xì)胞制備：用抗原免疫用抗原免疫8-12周齡周齡BALB/C小鼠，末次免疫后小鼠，末次免疫后2-4天取小鼠脾臟制備免疫淋

8、巴細(xì)天取小鼠脾臟制備免疫淋巴細(xì)胞。胞。細(xì)胞融合：細(xì)胞融合：一般選用一般選用BALB/C鼠的骨髓瘤細(xì)胞系鼠的骨髓瘤細(xì)胞系NS1、SP2/O等，以等，以1:2-1:10的比例將骨髓瘤細(xì)胞和的比例將骨髓瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞混合，以淋巴細(xì)胞混合，以50% PEG作融合劑融合兩種細(xì)胞，作融合劑融合兩種細(xì)胞，用用HAT培養(yǎng)基稀釋后分裝培養(yǎng)基稀釋后分裝96孔或孔或24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，孔細(xì)胞培養(yǎng)板，置置37溫箱培養(yǎng)。溫箱培養(yǎng)。篩選：篩選：吸取培養(yǎng)吸取培養(yǎng)10-15天培養(yǎng)細(xì)胞的上清，用事前天培養(yǎng)細(xì)胞的上清，用事前建立的抗體檢測(cè)方法檢測(cè)抗體。建立的抗體檢測(cè)方法檢測(cè)抗體?？寺』嚎寺』簩⒖贵w將抗體檢測(cè)陽(yáng)性培養(yǎng)孔檢測(cè)陽(yáng)性

9、培養(yǎng)孔的雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)的雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，用軟瓊脂法或有限稀釋法進(jìn)行克隆化。檢大培養(yǎng)，用軟瓊脂法或有限稀釋法進(jìn)行克隆化。檢測(cè)單克隆細(xì)胞孔上清的抗體，篩選出陽(yáng)性克隆。測(cè)單克隆細(xì)胞孔上清的抗體，篩選出陽(yáng)性克隆。雜交瘤的保存和雜交瘤的保存和McAB鑒定鑒定: 單克隆雜交瘤細(xì)胞系單克隆雜交瘤細(xì)胞系用常規(guī)的凍存方法在液氮中保存。對(duì)用常規(guī)的凍存方法在液氮中保存。對(duì)McAb進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)行系統(tǒng)的免疫生物學(xué)和理化特性鑒定。的免疫生物學(xué)和理化特性鑒定。McAb的生產(chǎn)：的生產(chǎn)：采用雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)法和體內(nèi)采用雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)法和體內(nèi)生長(zhǎng)法生產(chǎn)單抗。生長(zhǎng)法生產(chǎn)單抗。單克隆抗體制備過(guò)程人工制備抗體的類型人工制備抗體的

10、類型2個(gè)個(gè)Fab段段1個(gè)個(gè)+ + Fc片段片段 胃蛋白酶：胃蛋白酶： 1 1個(gè)個(gè) F(ab)F(ab)2 2 段段+ Fc+ Fc片片段段IgM：五聚體，分子量最大，最先產(chǎn)生，：五聚體，分子量最大，最先產(chǎn)生，B細(xì)胞抗原受體細(xì)胞抗原受體IgD：血清型：血清型 含量低含量低 SmIgD： B細(xì)胞表面抗原識(shí)別受體細(xì)胞表面抗原識(shí)別受體IgE：最晚產(chǎn)生，含量極低，介導(dǎo)：最晚產(chǎn)生，含量極低，介導(dǎo)型超敏型超敏 反應(yīng)和抗寄生蟲(chóng)感染反應(yīng)和抗寄生蟲(chóng)感染IgGIgG功能功能AbAb結(jié)合結(jié)合AgAg后，后，F(xiàn)abFab打開(kāi)，暴露出補(bǔ)打開(kāi)，暴露出補(bǔ)體結(jié)合部位體結(jié)合部位IgG是唯一能經(jīng)胎是唯一能經(jīng)胎盤輸給胎兒的抗體盤輸給

11、胎兒的抗體調(diào)理作用參與ADCC激活補(bǔ)體通過(guò)胎盤 1.Ig 的基本結(jié)構(gòu)由的基本結(jié)構(gòu)由 _ 和和 _ 組成，根據(jù)組成，根據(jù) _ 不同，將其分為不同，將其分為 _ 五類。五類。 2 初次免疫應(yīng)答的主要抗體是初次免疫應(yīng)答的主要抗體是 _ ，再次免疫應(yīng)答的抗，再次免疫應(yīng)答的抗體是體是_。 3 用木瓜蛋白酶水解用木瓜蛋白酶水解 IgG 得到兩個(gè)相同的得到兩個(gè)相同的 _ 片段和片段和一個(gè)一個(gè) _ 片段。片段。 4 免疫球蛋白分子的抗原決定簇分為免疫球蛋白分子的抗原決定簇分為 _ 、 _ 和和 _ 三種。三種。 5抗體產(chǎn)生的規(guī)律是：最先出現(xiàn)抗體產(chǎn)生的規(guī)律是：最先出現(xiàn) _ ，胚胎晚期胎兒已，胚胎晚期胎兒已能合成。出生后能合成。出生后 3 個(gè)月開(kāi)始合成個(gè)月開(kāi)始合成 _ 出生后出生后4-6各月開(kāi)始合各月開(kāi)始合成成 。 6正常人血清中含量最高的正常人血清中含量最高的 Ig 類別是類別是 _ ，局部，局部抗感染的抗感染的 Ig 類別是類別是 _ 。 7 分子量最大的分子量最大的 Ig 類別是類別是 _ ，通過(guò)胎盤的，通過(guò)胎盤的 Ig 類別是類別是 _ ，天然，天然 ABO 血型抗