化學發(fā)光項目-SOP

1、一、人絨毛膜促性腺激素亞單位測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/01二、黃體生成素測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/02三、卵泡刺激素測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/03四、雌二醇測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/04五、非結合雌三醇測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/05六、催乳素測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/06七、孕酮測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/07八、睪酮測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/

2、08九、前列腺特異性抗原測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/09十、游離前列腺特異性抗原測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/10十一、癌胚抗原測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/11 十二、甲胎蛋白測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/12 十三、皮質醇測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/13十四、總IgE測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/14十五、胰島素測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/15十六、總甲狀腺素T4測定標準操作規(guī)程 SYXRC

3、YYLAB-MYSOP-02/16十七、游離甲狀腺素測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/17十八、總三碘甲狀腺氨酸測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/18十九、游離三碘甲狀腺氨酸測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/19二十、促甲狀腺素測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/20二十一、甲狀腺球蛋白測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/21二十二、鐵蛋白測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/22二十三、葉酸測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/23二十四

4、、維生素B12測定標準操作規(guī)程 SYXRCYYLAB-MYSOP-02/24沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 5 / 121生效日期： 2012-7-01一、人絨毛膜促性腺激素亞單位測定標準操作規(guī)程 第 1頁共 5 頁1 檢驗申請 單獨檢驗項目申請：人絨毛膜促性腺激素亞單位測定（縮寫hCG）；組合項目申請：腫瘤標志物檢查組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2 標本采集與處理2.1 標本采集2.1.1 常規(guī)靜脈采血約2 ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。也可用肝素或EDTA作抗凝劑采集血

5、漿標本。2.1.2 檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3 急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4 標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5 下列標本為不合格標本2.1.5.1 標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2 對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3 無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4 其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2 標本保存2.2.1 接收標本后在60min內將標本離心分離出血清或血

6、漿, 避免溶血。離心必須達到4000rpm×15min，離心后的血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。2.2.2 標本保存時間：室溫（1525）下可穩(wěn)定8h，普通冰箱中（28）穩(wěn)定3d，在-20最多可保存4周。避免反復凍融。為避免標本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過1d的標本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3 已完成測試的標本保持完整的識別號，置48冰箱內保存7d。2.3 標本采集的注意事項2.3.1 采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動，早上或上午采血。3 方法原理雙位點免疫酶夾心法。標本中HCG與試劑中兔抗hCG-ALP結合物和包被了羊抗鼠IgG-鼠抗hCG復合物的磁性微粒

7、子共同反應，血清hCG與固相化的抗hCG單克隆沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 6/ 121生效日期： 2012-7-01一、人絨毛膜促性腺激素亞單位測定標準操作規(guī)程 第 2 頁共 5 頁抗體結合，而兔抗hCG-ALP結合物與血清hCG不同的抗原位點起反應，最后形成微粒子-羊抗鼠IgG-鼠McAb-hCG-兔抗體-ALP夾心型免疫復合物。經(jīng)磁性分離，洗滌洗去未結合的物質，加入化學發(fā)光底物Lumi-Phos*530，測量反應產(chǎn)生的光，光子的量與標本中hCG的濃度成比例，由多點校準曲線求得標本中hCG的濃度。4

8、 試劑及其他用品4.1 試劑：Access-hCG測定試劑包，由美國BECKMAN COULTER公司出品，試劑盒產(chǎn)品號33500。未打開的試劑包保存于28在有效期內穩(wěn)定，不可凍存。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。4.2 試劑盒組分4.2.1 磁性微粒子：包被了羊抗鼠IgG-鼠抗hCG單克隆抗體復合物。4.2.2 液體試劑：堿性磷酸酶標記的兔抗-HCG抗體。4.2.3 試劑包即開即用，無須特殊準備。4.3 其他試劑與用品4.3.1 化學發(fā)光底物：ACCESS的通用發(fā)光劑底物液，Cat. No. 81906。4.3.2 清洗緩沖液、反應杯等。5 校準品與校準模式5.1 校準品: 采用美國BE

9、CKMAN COULTER公司Access專用配套hCG校準液，5個濃度。有校準卡片。5.2 校準類型和校準點數(shù)目：非線性模式，6個校準點。儀器根據(jù)校準曲線卡片數(shù)據(jù)(6參數(shù)對數(shù)擬合曲線)自動建立校準曲線。5.3 校準周期：在同一批號試劑使用期間校準曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準。另在：更換試劑批號或出現(xiàn)質控漂移時；儀器進行全面保養(yǎng)后；儀器的重要零件更換后，進行一次校準。5.4 校準液重建方法：液態(tài)校準液，即可使用。6 質控品與室內質控規(guī)則6.1 質控品采用hCG質控品或采用自備混合血清。6.2 質控液重建方法：液態(tài)質控液，即開即用，充分顛倒混勻，無需特殊準備。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實

10、驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 7 / 121生效日期： 2012-7-01一、人絨毛膜促性腺激素亞單位測定標準操作規(guī)程 第 3 頁共 5 頁6.3質控品測定：在每一批標本中測定質控血清一次。鼠IgG-鼠抗hCG復合物的磁性微粒子共同反應，血清hCG與固相化的抗hCG單克隆鼠IgG-鼠抗hCG復合物的磁性微粒子共同反應，血清hCG與固相化的抗hCG單克隆6.4 質控規(guī)則：采用L-J質控圖，以±3s為失控限。標準差由本室實驗數(shù)據(jù)得出。6.5 如出現(xiàn)失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新

11、回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7 適用儀器美國BECKMAN COULTER公司的DxI 800自動發(fā)光免疫分析儀。8 標本檢測步驟裝載試劑 進行校準 進行質控 輸入工作表 加載樣本 測定操作 結果復核 報告。 9 主要分析參數(shù)無須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預設的分析項目參數(shù)和試劑條碼的信息自動進行分析。標本25µl。10 結果計算儀器根據(jù)校準曲線自動給出每個標本測定結果。測定結果單位以mIU/mL或IU/L表示。11 檢驗結果的報告及范圍11.1 結果的報告11.1.1 結果經(jīng)審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2 報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審

12、核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3 如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2 報告范圍：0.5200000 mIU/mL。超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本重新稀釋后重復測定的結果。12 操作性能12.1 精密度：批內CV 3.5%4.4%；批間CV 1.34%2.15%。12.2 分析范圍：0.5200000mIU/mL沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 8 / 121生效日期： 2012-7-01一、人絨毛膜促性腺激素亞單位

13、測定標準操作規(guī)程 第 3 頁共 5 頁12.3 分析靈敏度：0.5mIU/mL。12.4 方法的有限性及干擾因素：TSH（250µIU/mL）、LH（400 mIU/mL），F(xiàn)SH（400 mIU/mL）時無交叉反應。甘油三脂（22.6mmol/L）、血紅蛋白（10g/L）或膽紅素（0.34mmol/L）時在檢測允許的精密度范圍內對結果沒有影響。13 參考范圍及醫(yī)學決定水平參考范圍：男性和未懷孕女性：<10mIu/mL滋養(yǎng)層相關疾病：>100000 mIu/mL孕期（受孕后） HCG濃度0.21week 550 mIu/mL12week 50500 mIu/mL23wee

14、k 1005000 mIu/mL34week 50010000 mIu/mL45week 100050000 mIu/mL56week 10000100000 mIu/mL68weekmIu/mL23months 10000100000 mIu/mL14 臨床意義14.1 hCG最初是由滋養(yǎng)層分泌，后來由絨毛和胎盤分泌。在妊娠頭三個月，hCG的濃度增加并達到高峰；在妊娠中、后期hCG形成平臺。14.2 在末次月經(jīng)后的3到4周內檢測尿液或血液中hCG的濃度是確定妊娠最可靠的指標。測定hCG可應用于對異位妊娠、先兆流產(chǎn)、多胎妊娠的診斷。hCG檢測濃度低并不能除外妊娠，如果

15、懷疑妊娠，應在48h以后再次采集標本進行檢測。14.3 hCG濃度升高還可見于滋養(yǎng)層細胞腫瘤和非滋養(yǎng)層細胞腫瘤，如：小腸癌、肺癌、睪丸癌、乳腺癌和前列腺癌、葡萄胎、絨毛膜癌及其腦轉移等；測定外周血循環(huán)中hCG的濃度對上述患者的療效監(jiān)測十分有意義。15 結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1 由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2 審核者認真審核每一個測定結果，對發(fā)出報告結果的可靠性負責，并在報告單的沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 9 / 121生效日期： 2012-7-01一、人絨毛膜促性腺激素亞單

16、位測定標準操作規(guī)程 第 5 頁共 5 頁審核者處簽名。15.3 相關項目：審核與其他腫瘤標志物等的關系，或參考受檢者臨床資料，若發(fā)現(xiàn)與臨床相悖的情況，應分析與查找原因。16 有關引用程序與文件16.1 DxI 800自動發(fā)光分析儀儀器標準操作規(guī)程。16.2免疫檢驗室內質控標準操作程序。16.3檢驗結果審核程序。16.4標本送檢和接收程序。17 參考文獻17.1 陸永綏，張偉民主編. 臨床檢驗管理與技術規(guī)程. 杭州:浙江大學出版社, 2004.17.2 Access hCG測定試劑說明書。17.3 葉應嫵，王毓三，申子瑜主編. 全國臨床檢驗操作規(guī)程 (第三版). 東南大學出版社，2006. 18

17、 本SOP變動程序任何一位使用本SOP的工作人員如提出對本SOP改動意見，或本測定項目的方法、試劑有變動的情況，可以對本SOP作出改動，但必須先報經(jīng)專業(yè)主管和科主任批準。19 本SOP涉及的記錄與表單19.1 劑裝載記錄表19.2 質控記錄19.3 失控及失控處理記錄19.4 檢驗結果審校核記錄沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 10 / 121生效日期： 2012-7-01二、黃體生成素測定標準操作規(guī)程 第 1 頁共 5 頁1 檢驗申請 單獨檢驗項目申請：黃體生成素測定（縮寫LH）；組合項目申請：(女)性激

18、素檢查組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2 標本采集與處理2.1 標本采集2.1.1 常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿標本，用肝或EDTA抗凝。2.1.2 檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3 急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4 標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5 下列標本為不合格標本2.1.5.1 標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2 對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血

19、、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3 無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4 其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2 標本保存2.2.1 接收標本后在60min內將標本離心分離出血漿, 避免溶血。離心必須達到4000rpm×15min，離心后的血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。2.2.2 標本保存時間：室溫（1525）下可穩(wěn)定8h，普通冰箱中（28）穩(wěn)定2d，在-20最多可保存4周。避免反復凍融。2.2.3 已完成測試的標本保持完整的識別號，置48冰箱內保存7d。2.3 標本采集的注意事項2.3.1 采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動。3 方法原理采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫

20、發(fā)光分析原理。標本中LH與包被在磁性微粒子上的抗LH抗體結合，經(jīng)磁性分離，洗滌洗去未結合的物質，然后加入ALP標記的羊抗hLH，反沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 11 / 121生效日期： 2012-7-01二、黃體生成素測定標準操作規(guī)程 第 2 頁共 5 頁應后形成微粒子-羊抗鼠IgG-鼠抗hLH-hLH-羊抗體-ALP夾心型免疫復合物，再次離洗滌后，加入化學發(fā)光底物Lumi-Phos 530，經(jīng)堿性磷酸酶的作用產(chǎn)生光子，測量反應產(chǎn)生的光，光子的量與標本中hLH 的濃度成正比，由多點校準曲線求得標本中h

21、LH 的濃度。4 試劑及其他用品4.1 試劑：Access LH測定試劑包，由美國BECKMAN COULTER公司出品，試劑盒產(chǎn)品號33510。未打開的試劑包保存于28在效期內穩(wěn)定，不可凍存。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。4.2 試劑盒組分4.2.1 磁性微粒子：包被了羊抗鼠IgG-鼠抗hLH單克隆抗體復合物的磁性微粒子。4.2.2 液體試劑：堿性磷酸酶標記的羊抗人LH抗體。4.2.3 試劑包即開即用，無須特殊準備。4.3 其他試劑與用品4.3.1 化學發(fā)光底物：ACCESS的通用發(fā)光劑底物液，Cat. No. 81906。4.3.2 清洗緩沖液、反應杯等。5 校準品與校準模式5.1

22、校準品: 采用Access專用配套LH校準液，Cat. No. 33515，5個濃度。有校準卡片。5.2 校準類型和校準點數(shù)目：非線性模式，6個校準點。儀器根據(jù)校準曲線卡片數(shù)據(jù)(6參數(shù)對數(shù)擬合曲線)自動建立校準曲線。5.3 校準周期：在同一批號試劑使用期間校準曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準。每當：更換試劑批號或出現(xiàn)質控漂移時；儀器進行全面保養(yǎng)后；儀器的重要零件更換后，進行一次校準。5.4 校準液重建方法：液態(tài)校準液，即可使用。6 質控品與室內質控規(guī)則6.1 質控品采用LH質控品或采用自備混合血清。6.2 質控液重建方法：液態(tài)質控液，即開即用，充分顛倒混勻，無需特殊準備。6.3質控品測定

23、：在每一批標本中測定質控血清一次。6.4 質控規(guī)則：采用L-J質控圖，以±3s為失控限。標準差由本室實驗數(shù)據(jù)得出。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 9 / 121生效日期： 2012-7-01二、黃體生成素測定標準操作規(guī)程 第 3 頁共 5 頁6.5 如出現(xiàn)失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7 適用儀器美國BECKMAN COULTER公司的DxI 800自動發(fā)光免疫分析儀。8 標本檢測步驟裝載試劑 進行校準 進行質控 輸入工

24、作表 加載樣本 測定操作 結果復核 報告。9 主要分析參數(shù)無須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預設的分析項目參數(shù)和試劑條碼的信息自動進行分析。標本量50µl。10 結果計算儀器根據(jù)校準曲線自動給出每個標本測定結果。測定結果單位以mIU/mL或IU/L表示。系統(tǒng)可以利用所得到的FSH和LH結果自動進行LH/FSH比值（L/F）的計算。11 檢驗結果的報告及范圍11.1 結果的報告11.1.1 結果經(jīng)審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2 報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3 如收到標本的質量可能對測定結果有影響的

25、也在報告單上指出。11.2 報告范圍：0.2250IU/mL，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本重新稀釋后重復測定的結果。12 操作性能12.1 精密度：批內CV 3.6%5.4%；批間CV 4.3%6.4%。12.2 分析范圍：0.2250IU/mL。 12.3 分析靈敏度：0.2IU/ml。12.4 方法的有限性及干擾因素：FSH（400 mIU/mL）、TSH（200mIU/L）、hCG（1 IU/mL）；hCG（125 IU/mL）在檢測允許的精密度范圍內對結果沒有影響。甘油三脂（33.9mmol/L）、血紅蛋白（5g/L）或膽紅素（0.684

26、mmol/L）時對試驗的干擾少于10%。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 13 / 121生效日期： 2012-7-01二、黃體生成素測定標準操作規(guī)程 第 4 頁共 5 頁13 參考范圍及醫(yī)學決定水平參考范圍：男性：1.28.6 mIu/ ml女性: 卵泡期2.110.9mIu/ml排卵期19.2103.0mIu/mL黃體期1.212.8mIu/ml絕經(jīng)期10.958.6mIu/mL14 臨床意義14.1 黃體生成素（LH）是一種二聚體的糖蛋白，由腺垂體分泌，受下丘腦促性腺激素釋放激素的調節(jié)。其-亞單位與其

27、它的糖蛋白類激素相同，-亞單位具有生物學活性并與人絨毛膜促性腺激素有部分的同源性。14.2 在女性月經(jīng)周期中，卵泡刺激素（FSH）刺激卵泡的生長；當卵泡成熟時，LH分泌增強形成LH峰，F(xiàn)SH水平則有所下降，導致排卵。卵巢的類固醇激素是LH分泌的重要負反饋調節(jié)因素。當女性絕經(jīng)后，卵巢的負反饋作用減退，從而導致LH濃度升高。14.3 LH濃度升高還可見于卵巢功能衰退的絕經(jīng)前女性或青春期卵巢發(fā)育不成熟的女性。14.4 hLHh/hFSH的比值常有助于對多囊子宮的診斷。14.5 低濃度hLH和hFSH可提示垂體功能不足，而高濃度hLH和hFSH若伴有性激素濃度降低，則提示性功能不足如Turners綜合

28、征和絕經(jīng)期、子宮切除術后等。14.6 hLH測定還有助于分析下丘腦-垂體-性腺功能狀態(tài)，以便判斷卵巢和性腺發(fā)育不全或區(qū)別垂體性閉經(jīng)和下丘腦閉經(jīng)。15 結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1 由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2 審核者認真審核每一個測定結果，對發(fā)出報告結果的可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3 相關項目：審核與其他女性激素等的關系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。16 有關引用程序與文件16.1 DxI 800自動發(fā)光免疫分析儀儀器標準操作規(guī)程。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGM

29、Y 版本：A/0頁碼： 14 / 121生效日期： 2012-7-01二、黃體生成素測定標準操作規(guī)程 第 5 頁共 5 頁16.2免疫檢驗室內質控標準操作程序。16.3檢驗結果審核程序。16.4標本送檢和接收程序。17 參考文獻17.1 陸永綏，張偉民主編. 臨床檢驗管理與技術規(guī)程. 杭州:浙江大學出版社, 2004.17.2 Access LH測定試劑說明書。17.3 葉應嫵，王毓三，申子瑜主編. 全國臨床檢驗操作規(guī)程 (第三版). 東南大學出版社，2006. 18 本SOP變動程序任何一位使用本SOP的工作人員如提出對本SOP改動意見，或本測定項目的方法、試劑有變動的情況，可以對本SOP作

30、出改動，但必須先報經(jīng)專業(yè)主管和科主任批準。19 本SOP涉及的記錄與表單19.1 劑裝載記錄表19.2 質控記錄19.3 失控及失控處理記錄19.4 檢驗結果審校核記錄沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 15 / 121生效日期： 2012-7-01三、卵泡刺激素測定標準操作規(guī)程 第 1 頁共 5 頁1 檢驗申請 單獨檢驗項目申請：卵泡刺激素測定（縮寫FSH）；組合項目申請：女性激素檢查組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2 標本采集與處理2.1 標本采集2.1.1 常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中

31、。或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿標本，用肝或EDTA抗凝。2.1.2 檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3 急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4 標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5 下列標本為不合格標本2.1.5.1 標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2 對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3 無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4 其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2 標本保存

32、2.2.1 接收標本后在60min內將標本離心分離出血漿, 避免溶血。離心必須達到4000rpm×15min，離心后的血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。2.2.2 標本保存時間：室溫（1525）下可穩(wěn)定8h，普通冰箱中（28）穩(wěn)定2d，在-20最多可保存4周。避免反復凍融。2.2.3 已完成測試的標本保持完整的識別號，置48冰箱內保存7d。2.3 標本采集的注意事項2.3.1 采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動。3 方法原理 采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫發(fā)光分析原理。標本中FSH與包被在磁性微粒子上的鼠抗FSH單克隆抗體結合，再與液相試劑中堿性磷酸酶標記的抗FSH抗體結合，經(jīng)磁

33、性分沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼：16 / 121生效日期： 2012-7-01三、卵泡刺激素測定標準操作規(guī)程 第 2 頁共 5 頁離，洗滌洗去未結合的物質，然后加入ALP連結的羊抗hFSH，最后形成微粒子-羊抗鼠IgG-鼠抗hFSH-hFSH-羊抗體-ALP夾心型免疫復合物。再次分離洗滌后，加入化學發(fā)光底物Lumi-Phos 530，經(jīng)堿性磷酸酶的作用產(chǎn)生光子，測量反應產(chǎn)生的光，光子的量與標本中hFSH的濃度成正比，由多點校準曲線求得標本中hFSH的濃度。4 試劑及其他用品4.1 試劑：Access F

34、SH測定試劑包，由美國BECKMAN COULTER公司出品，試劑盒產(chǎn)品號33520。未打開的試劑包保存于28在有效期內穩(wěn)定，不可凍存。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。4.2 試劑盒組分4.2.1 磁性微粒子包被珠：包被了羊抗鼠IgG-鼠抗hFSH單克隆抗體復合物的磁性微粒子。4.2.2 液體試劑：堿性磷酸酶標記的羊抗hFSH抗體。含蛋白的Tris緩沖液。4.2.3 試劑包即開即用，無須特殊準備。4.3 其他試劑與用品4.3.1 化學發(fā)光底物：ACCESS的通用發(fā)光劑底物液，Cat. No. 81906。4.3.2 清洗緩沖液、反應杯等。5 校準品與校準模式5.1 校準品: 采用Acces

35、s專用配套FSH校準液，5個濃度。Cat. No. 33525。有校準卡片。5.2 校準類型和校準點數(shù)目：非線性模式，6個校準點。儀器根據(jù)校準曲線卡片數(shù)據(jù)(6參數(shù)對數(shù)擬合曲線)自動建立校準曲線。5.3 校準周期：在同一批號試劑使用期間校準曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準。每當：更換試劑批號或出現(xiàn)質控漂移時；儀器進行全面保養(yǎng)后；儀器的重要零件更換后，進行一次校準。5.4 校準液重建方法：液態(tài)校準液，即可使用。開封后于28保存最長不超過13周，或-20保存13周。避免反復凍融。6 質控品與室內質控規(guī)則6.1 質控品可購買FSH質控品或采用自備混合血清。6.2 質控液重建方法：液態(tài)質控液，即開

36、即用，充分顛倒混勻，無需特殊準備。6.3質控品測定：在每一批標本中測定質控血清一次。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼：17/ 121生效日期： 2012-7-01三、卵泡刺激素測定標準操作規(guī)程 第 3 頁共 5 頁6.4 質控規(guī)則：采用L-J質控圖，以±3s為失控限。標準差由本室實驗數(shù)據(jù)得出。6.5 如出現(xiàn)失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7 適用儀器美國BECKMAN COULTER公司的DxI 800自動發(fā)光免疫分析儀。8

37、標本檢測步驟 裝載試劑 進行校準 進行質控 輸入標本檢測項目 加載標本 標本測定 結果復核 報告。 9 主要分析參數(shù)無須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預設的分析項目參數(shù)和試劑條碼的信息自動進行分析。標本40µl。10 結果計算儀器根據(jù)校準曲線自動給出每個標本測定結果。測定結果單位以mIU/mL或IU/L表示。系統(tǒng)可以利用所得到的FSH和LH結果自動進行LH/FSH比值（L/F）的計算。11 檢驗結果的報告及范圍11.1 結果的報告11.1.1 結果經(jīng)審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2 報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信

38、息。11.1.3 如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2 報告范圍：0.2200 mIU/mL，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本重新稀釋后重復測定的結果。12 操作性能12.1 精密度：批內CV 1.9%2.4%；批間CV 5.0%7.3%。12.2 分析范圍：0.2200 mIU/mL。 12.3 分析靈敏度：0.2 IU/ml。12.4 準確性：回收試驗結果，回收率104.3。12.5 方法的有限性及干擾因素：LH（400 mIU/mL）、TSH（250µIU/L）、hCG（125IU/mL）沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗

39、科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 18/ 121生效日期： 2012-7-01三、卵泡刺激素測定標準操作規(guī)程 第 4 頁共 5 頁在檢測允許的精密度范圍內對結果沒有影響。甘油三脂（33.9mmol/L）、血紅蛋白（10g/L）或膽紅素（0.684mmol/L）時對試驗的干擾少于10%。13 參考范圍及醫(yī)學決定水平參考范圍：男性：1.319.3 mIU/ml 女性：卵泡期 3.98.8 mIU/ml 排卵期 4.522.5 mIU/ml 黃體期 1.85.1 mIU/ml絕經(jīng)期 16.7113.6 mIU/ml14 臨床意義1

40、4.1 卵泡刺激素（FSH）是由腺垂體分泌，并受下丘腦促性腺激素釋放激素的調節(jié)。FSH在男性和女性體內的功能主要是促進性腺組織的發(fā)育并維持其功能，同時，性腺組織合成和分泌的類固醇激素也可以負反饋調節(jié)FSH的分泌。14.2 FSH和黃體生成素（LH）共同控制性腺的生長與生殖作用。育齡婦女的FSH刺激子宮濾泡的發(fā)育。血液FSH水平在月經(jīng)周期中波動，受促性腺激素的負反饋調節(jié)。在女性絕經(jīng)期，卵巢的功能和類固醇激素的分泌停止，負反饋調節(jié)作用消失，從而導致FSH濃度的升高；此外，F(xiàn)SH濃度升高還可見于處于卵巢功能衰退的絕經(jīng)前期女性或青春期卵巢發(fā)育不成熟的女性。14.3 FSH與LH水平升高而性激素水平低下

41、時反映性腺功能失調，如發(fā)生在男性，提示睪丸功能發(fā)育不成熟或無睪癥；在女性則可能于絕經(jīng)期、早熟性子宮功能失調或子宮切除術后等情況中出現(xiàn)。14.4 異常的FSH濃度還提示下丘腦-垂體軸的功能失調。14.5 低濃度hLH和hFSH可提示垂體功能不足，而高濃度hLH和hFSH若伴有性激素濃度降低，則提示性功能不足如Turners綜合征和絕經(jīng)期、子宮切除術后等。服用口服避孕藥的婦女其促性腺激素水平常是低下的。15 結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1 由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2 審核者認真審核每一個測定結果，對發(fā)出報告結果的可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免

42、疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 19 / 121生效日期： 2012-7-01三、卵泡刺激素測定標準操作規(guī)程 第 5 頁共 5 頁15.3 相關項目：審核與其他女性激素等的關系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。16 有關引用程序與文件16.1 DxI 800自動發(fā)光免疫分析儀儀器標準操作規(guī)程。16.2免疫檢驗室內質控標準操作程序。16.3檢驗結果審核程序。16.4標本送檢和接收程序。17 參考文獻17.1 陸永綏，張偉民主編. 臨床檢驗管理與技術規(guī)程. 杭州:浙江大學出版社, 2004.17.2 Access

43、 FSH測定試劑說明書。17.3 葉應嫵，王毓三，申子瑜主編. 全國臨床檢驗操作規(guī)程 (第三版). 東南大學出版社，2006. 18 本SOP變動程序任何一位使用本SOP的工作人員如提出對本SOP改動意見，或本測定項目的方法、試劑有變動的情況，可以對本SOP作出改動，但必須先報經(jīng)專業(yè)主管和科主任批準。19 本SOP涉及的記錄與表單19.1 劑裝載記錄表19.2 質控記錄19.3 失控及失控處理記錄19.4 檢驗結果審校核記錄沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 20 / 121生效日期： 2012-7-01四、

44、雌二醇測定標準操作規(guī)程 第 1 頁共 5 頁1 檢驗申請 單獨檢驗項目申請：雌二醇測定（縮寫E2）；組合項目申請：女性激素檢查組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2 標本采集與處理2.1 標本采集2.1.1 常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。也可采集血漿標本，用肝或EDTA抗凝。2.1.2 檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3 急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4 標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5 下列標本為不合格標本2.1.5.1 標

45、本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2 對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3 無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4 其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2 標本保存2.2.1 接收標本后在60min內將標本離心分離出血漿, 避免溶血。離心必須達到4000rpm×15min，離心后的血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。2.2.2 標本保存時間：室溫（1525）下可穩(wěn)定8h，普通冰箱中（28）穩(wěn)定2d，在-20最多可保存4周。避免反復凍融。2.2.3 已完成測試的標本保持完整的識別號，置48冰箱內保存7

46、d。2.3 標本采集的注意事項2.3.1 采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動，早上或上午采血。3 方法原理采用競爭性酶聯(lián)免疫發(fā)光分析法。標本與包被了羊抗兔IgG-兔抗雌二醇復合物的磁性微粒子反應，20分鐘后，加入雌二醇-ALP結合物，標本中雌二醇與堿性磷酸酶標記沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 21/ 121生效日期： 2012-7-01四、雌二醇測定標準操作規(guī)程 第 2 頁共 5 頁的雌二醇競爭結合磁性微粒子上抗雌二醇抗體有限的結合位點，最后抗原抗體復合物與固相化的捕獲抗體結合形成微粒子-羊抗兔I

47、gG-兔抗體-（雌二醇或雌二醇-ALP）免疫復合物。經(jīng)磁性分離，洗滌洗去未結合的物質，加入化學發(fā)光底物Lumi-Phos 530，經(jīng)堿性磷酸酶的作用產(chǎn)生光子，光子的量與標本中雌二醇的量成反比，由多點校準曲線求得標本中雌二醇的濃度。4 試劑及其他用品4.1 試劑：Access雌二醇測定試劑包，由美國BECKMAN COULTER公司出品，試劑盒產(chǎn)品號33540。未打開的試劑包保存于28可穩(wěn)定至有效期，不可凍存。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用14d。4.2 試劑盒組分4.2.1 微粒子包被珠：包被了羊抗兔IgG-兔抗雌二醇抗體復合物的磁性微粒子、含BSA的Tris緩沖液。4.2.2 液體試劑：堿性磷

48、酸酶標記的雌二醇抗體。4.2.4 試劑包即開即用，無須特殊準備。4.3 其他試劑與用品4.3.1 化學發(fā)光底物：ACCESS的通用發(fā)光劑底物液，Cat. No. 81906。4.3.2 清洗緩沖液、反應杯等。5 校準品與校準模式5.1 校準品：采用Access專用配套雌二醇校準液，Cat. No. 33545，5個濃度。有校準卡片。雌二醇校準可溯源至同位素稀釋-氣相色譜分析/質譜分析。5.2 校準類型和校準點數(shù)目：非線性模式，6個校準點。儀器根據(jù)校準曲線卡片數(shù)據(jù)(6參數(shù)對數(shù)擬合曲線)自動建立校準曲線。5.3 校準周期：在同一批號試劑使用期間校準曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準。每次完成維

49、修保養(yǎng)程序后或質控失控時，也要重新校準。5.4 校準液重建方法：液態(tài)校準液，即開即用。校準液開啟后于28保存最長不超過13周，或于-20保存13周。避免反復凍融。6 質控品與室內質控規(guī)則6.1 質控品采用E2質控品或采用自備混合血清。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 22/ 121生效日期： 2012-7-01四、雌二醇測定標準操作規(guī)程 第 3 頁共 5 頁6.2 質控液重建方法：液態(tài)質控液，即開即用，充分顛倒混勻，無需特殊準備。6.3質控品測定：在每一批標本中測定質控血清一次。6.4 質控規(guī)則：采用L-J

50、質控圖，以±3s為失控限。標準差由本室實驗數(shù)據(jù)得出。6.5 如出現(xiàn)失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7 適用儀器：美國BECKMAN COULTER公司的DxI 800自動發(fā)光免疫分析儀。8 標本檢測步驟裝載試劑 進行校準 進行質控 輸入標本檢測項目 加載標本 標本測定 結果復核 報告。 9 主要分析參數(shù)無須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預設的分析項目參數(shù)和試劑條碼的信息自動進行分析。標本25µl。10 結果計算儀器根據(jù)校準曲線自動給出每個標本測定結果。測定結果單位以pmol/L或pg/mL表示。換算公式：pg

51、/mLpmol/L×0.272411 檢驗結果的報告及范圍11.1 結果的報告11.1.1 結果經(jīng)審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2 報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3 如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2 報告范圍：7313216 pmo/L，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本重新稀釋后重復測定的結果。12 操作性能12.1 精密度：批內CV 1.4%6.1%；批間CV 3.2%7.7%。12.2 分析范圍：7313216

52、pmo/L 。 12.3 分析靈敏度：73 pmo/L。沭陽縣仁慈醫(yī)院檢驗科免疫實驗室SOP化學發(fā)光測定標準操作程序文件編號：SYXRCYYLAB-FGMY 版本：A/0頁碼： 23/ 121生效日期： 2012-7-01四、雌二醇測定標準操作規(guī)程 第 4 頁共 5 頁12.4 方法的有限性及干擾因素：與雌三醇、雌激素酮、葡萄糖苷-雌二醇、5-二氫-睪酮和睪酮等無明顯交叉反應性。甘油三脂（36.1mmol/L）、血紅蛋白（1.3g/L）或膽紅素（0.17mmol/L）時對試驗的干擾少于5%。13 參考范圍及醫(yī)學決定水平參考范圍：男性：73275 pmo/L女性：卵泡期 88418 pmo/L 排卵期 2271959 pmo/L 黃體期 2931002 pmo/L 絕經(jīng)期 73322 pmo/L14 臨床意義14.1 雌二醇是卵巢分泌的重要雌性激素，也可由腎上腺、胎盤和睪丸產(chǎn)生。外周血循環(huán)中有超98%的雌二醇是與血清蛋白質相結合，其中主要是與性激素結合球蛋白（